一种尿苷二磷酸葡萄糖醛酸的分离纯化方法与流程

本发明涉及药物纯化，特别涉及一种尿苷二磷酸葡萄糖醛酸的分离纯化方法。

背景技术：

1、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸(uridine diphosphate glucuronic acid，简称udpga或udp-glca)是一种糖核苷酸，是细胞内重要的糖基供体，参与多种代谢途径，也是体外进行糖基化反应的重要糖基供体。研究表明，存在两条合成尿苷二磷酸葡萄糖醛酸的途径：一种途径为1-磷酸-葡萄糖醛酸通过udp-葡萄糖焦磷酸化酶直接催化生成udp-葡萄糖醛酸；另一条途径在动物和细菌中较为常见，以烟酰胺腺嘌呤二核苷酸为辅因子、udp-葡萄糖为底物，通过udp-葡萄糖6-脱氢酶氧化udp-葡萄糖合成udp-葡萄糖醛酸。

2、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸的结构式如下：

3、

4、udpga的主要合成工艺是利用微生物细胞酶系合成，目前，国内外专利、文献等鲜有公开对尿苷二磷酸葡萄糖醛酸纯化工艺的报道。

5、因此，为了得到高纯度、高收率的尿苷二磷酸葡萄糖醛酸且纯化周期短、稳定性高的分离纯化工艺，有必要对尿苷二磷酸葡萄糖醛酸的精细纯化工艺做更进一步的研究。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种尿苷二磷酸葡萄糖醛酸的分离纯化方法，仅需一步层析纯化即可满足尿苷二磷酸葡萄糖醛酸高纯度的要求，纯化收率高而且稳定，纯度达99％以上，收率为85％～95％。

2、为达此目的，本发明采用以下技术方案：

3、一种尿苷二磷酸葡萄糖醛酸的分离纯化方法，所述分离纯化方法包括如下步骤：

4、s1、上样：将尿苷二磷酸葡萄糖醛酸粗品过滤后上样到层析柱中，所述层析柱填料是基质为聚丙烯酸酯或聚苯乙烯-二乙烯基苯的单分散微球；

5、s2、洗脱：对吸附在层析柱中的尿苷二磷酸葡萄糖醛酸用洗脱液进行洗脱；

6、s3、收集汇总：对洗脱后的尿苷二磷酸葡萄糖醛酸溶液进行分段收集，对符合目的峰值要求的组份液进行汇总。

7、本发明的分离纯化方法，仅需一步层析纯化即可满足尿苷二磷酸葡萄糖醛酸高纯度的要求，纯化收率高而稳定，纯度达99％以上，纯化收率高而且稳定，同时本发明分离方法简单方便，纯化周期短，且整个纯化过程中无需使用任何有机溶剂，可用于规模化生产，大大降低了生产成本。

8、步骤s1中，所述单分散微球为粒径呈单分散的、具有孔道结构的微球。

9、优选的，步骤s1中，所述单分散微球的粒径为20～40μm，例如单分散微球的粒径为20μm、21μm、22μm、23μm、24μm、25μm、26μm、27μm、28μm、29μm、30μm、31μm、32μm、33μm、34μm、35μm、36μm、37μm、38μm、39μm、40μm；孔径为例如孔径为

10、优选的，步骤s1中，所述单分散微球的型号为nanoq-30l，粒径为30μm，孔径为

11、本发明中，纯化过程中所使用的层析介质uniq-30s/nanoq-30l，是键合季胺基的基质为聚丙烯酸酯或聚苯乙烯-二乙烯基苯的单分散微球。尿苷二磷酸葡萄糖醛酸分子式中含有两个磷酸根和一个羧基，优选的，在选定的洗脱条件下，使用nanoq-30l用于udpga纯化取得了非常好的效果。同时，聚苯乙烯-二乙烯基苯的骨架结构可耐受全ph范围，并可在后期对层析柱进行高ph下的彻底清洗，便于工业上的反复利用，填料寿命长，降低了成本。

12、更优选的，步骤s1中，所述单分散微球的粒径为30μm，孔径为

13、步骤s1中，所述尿苷二磷酸葡萄糖醛酸粗品的hplc纯度为21.12～28.42％，例如粗品的hplc纯度为21％、21.5％、22％、22.5％、23％、23.5％、24％、24.5％、25％、25.5％、26％、26.5％、27％、27.5％、28％、28.5％。

14、步骤s1中，所述层析柱的装柱体积为4～20ml，例如装柱体积为4.15ml、4.65ml、5ml、6ml、7ml、8ml、9ml、10ml、11ml、12ml、13ml、14ml、15ml、15.5ml、15.7ml、16ml、17ml、18ml、19ml、20ml；上样载量为5-10g/l，例如上样载量为5g/l、6g/l、7g/l、8g/l、9g/l、10g/l。

15、步骤s2中，所述洗脱液含0.5～2mol的盐溶液，例如盐溶液的摩尔数为0.5mol、0.6mol、0.7mol、0.8mol、0.9mol、1mol、1.1mol、1.2mol、1.3mol、1.4mol、1.5mol、1.6mol、1.7mol、1.8mol、1.9mol、2mol，且不含有机溶剂，安全、无污染且成本很低。

16、优选的，所述盐溶液为氯化钠和氯化铵中的一种。

17、步骤s2中，所述洗脱液的流速为120～360cm/h，例如洗脱液的流速为120cm/h、140cm/h、160cm/h、180cm/h、200cm/h、220cm/h、240cm/h、260cm/h、280cm/h、300cm/h、320cm/h、340cm/h、360cm/h。

18、步骤s2中，所述洗脱液的洗脱量为40～50cv，例如所述洗脱液的洗脱量为40cv、41cv、42cv、43cv、44cv、45cv、46cv、47cv、48cv、49cv、50cv。

19、作为本发明的优选方案，尿苷二磷酸葡萄糖醛酸的分离纯化方法，包括如下步骤：

20、a、上样：将纯度为21.12～28.42％的尿苷二磷酸葡萄糖醛酸粗品过滤后上样到层析柱中，其中，所述层析柱的装柱体积为4～20ml，上样载量为5～10g/l，所述层析柱填料是基质为聚苯乙烯-二乙烯基苯的单分散微球nanoq-30l；

21、b、洗脱：对吸附在层析柱中的udpga用洗脱液进行洗脱，其中，所述洗脱液含0.5～2mol的盐溶液，且不含有机溶剂，所述洗脱液的流速为120～360cm/h，所述洗脱液的洗脱量为40～50cv；

22、c、收集汇总：对洗脱后的尿苷二磷酸葡萄糖醛酸溶液进行分段收集，对符合目的峰值要求的组份液进行汇总。

23、与现有技术相比，本发明的有益效果为：

24、1、本发明的尿苷二磷酸葡萄糖醛酸的分离纯化方法，仅需一步层析纯化即可满足尿苷二磷酸葡萄糖醛酸高纯度的要求，纯化收率高而且稳定，纯度达99％以上，收率为88.45～94.58％。

25、2、本发明的尿苷二磷酸葡萄糖醛酸的分离纯化方法，简单方便，纯化周期短，且整个纯化过程中仅用盐溶液作为流动相，无需使用任何有机溶剂，安全、无污染且成本很低，所用固定相可重复利用，可用于规模化生产，大大降低了环保压力和生产成本。

技术特征：

1.一种尿苷二磷酸葡萄糖醛酸的分离纯化方法，其特征在于，所述分离纯化方法包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种尿苷二磷酸葡萄糖醛酸的分离纯化方法，其特征在于，步骤s1中，所述单分散微球为粒径呈单分散的、具有孔道结构的微球。

3.根据权利要求1或2所述的一种尿苷二磷酸葡萄糖醛酸的分离纯化方法，其特征在于，步骤s1中，所述单分散微球的粒径为20～40μm，孔径为

4.根据权利要求3所述的一种尿苷二磷酸葡萄糖醛酸的分离纯化方法，其特征在于，步骤s1中，所述单分散微球的型号为uniq-30s或nanoq-30l。

5.根据权利要求4所述的一种尿苷二磷酸葡萄糖醛酸的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤s1中，所述尿苷二磷酸葡萄糖醛酸粗品的hplc纯度为21.12～28.42％。

6.根据权利要求5所述的一种尿苷二磷酸葡萄糖醛酸的分离纯化方法，其特征在于，步骤s1中，所述层析柱的装柱体积为4～20ml，上样载量为5～10g/l。

7.根据权利要求6所述的一种尿苷二磷酸葡萄糖醛酸的分离纯化方法，其特征在于，步骤s2中，所述洗脱液含0.5～2mol的盐溶液，且不含有机溶剂。

8.根据权利要求7所述的一种尿苷二磷酸葡萄糖醛酸的分离纯化方法，其特征在于，步骤s2中，所述洗脱液的流速为120～360cm/h。

9.根据权利要求8所述的一种尿苷二磷酸葡萄糖醛酸的分离纯化方法，其特征在于，步骤s2中，所述洗脱液的洗脱量为30～60cv。

10.根据权利要求9所述的一种尿苷二磷酸葡萄糖醛酸的分离纯化方法，其特征在于，所述分离纯化方法包括如下步骤：

技术总结
本发明涉及药物纯化技术领域，且公开了一种尿苷二磷酸葡萄糖醛酸的分离纯化方法，包括步骤S1、上样：将尿苷二磷酸葡萄糖醛酸粗品过滤后上样到层析柱中，所述层析柱填料是基质为聚丙烯酸酯或聚苯乙烯‑二乙烯基苯的单分散微球；S2、洗脱：对吸附在层析柱中的尿苷二磷酸葡萄糖醛酸用洗脱液进行洗脱；S3、收集汇总：洗脱后进行分段收集，对符合目的峰值要求的组份液进行汇总本发明所述的尿苷二磷酸葡萄糖醛酸的分离纯化方法，简单方便，纯化周期短，且整个纯化过程中仅用盐溶液作为流动相，无需使用任何有机溶剂，安全、无污染且成本很低，所用固定相可重复利用，可用于规模化生产，大大降低了环保压力和生产成本，带来更好的使用前景。

技术研发人员：朱亮,文良柱,郝杰,闫娜,梅丽
受保护的技术使用者：安徽合城生物医药科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2025/3/20