一株茄科青枯菌广谱噬菌体及其应用的制作方法

本发明涉及青枯病防治，特别涉及一株广谱、强裂解活性的青枯菌噬菌体yl3及其应用。

背景技术：

1、青枯雷尔氏菌（以下简称青枯菌）在世界范围内引起严重的细菌性萎蔫病。青枯菌的寄主范围广，可侵染包括烟草、番茄、马铃薯和辣椒在内的50个科200多种植物。茄科雷尔氏菌是典型的复合种（species complex），具有高度的可变性和复杂的遗传多样性。根据不同的地理起源和系统进化分析可将青枯菌划分为 ralstonia.pseudosolanacearum（原亚洲一型、非洲三型） 、r.solanacearum（原美洲二型）和 r.syzygii subsp.indonesiensis（原印度尼西亚群岛）3个种。

2、统计表明，世界范围内青枯病每年造成的经济损失约20亿美元，是全球第二大细菌性病害。因其造成巨大的经济损失，青枯病已经成为噬菌体疗法的重要靶标病害。目前已发现的青枯菌噬菌体可分为4类：单链rna噬菌体、双链rna噬菌体、单链dna噬菌体和双链dna噬菌体，其中以双链dna噬菌体为主。用于防控青枯病的噬菌体都是烈性噬菌体，烈性噬菌体可在更短的时间内裂解青枯菌菌体，达到快速降低其种群数量的目的。噬菌体对病原细菌数量削减是噬菌体疗法发挥作用的基础，这对病原细菌数量依赖型的致病系统有重要意义。一些病原细菌致病特征的表达取决于种群数量，即只有种群数量达到一定的阈值才启动致病系统、分泌毒力因子并引起病症。因此，噬菌体迅速侵染并裂解宿主细胞，不仅直接降低了病原细菌入侵宿主的可能性，还间接降低其致病能力，从而有效控制青枯病的发生，减少因病损失。

3、然而目前的青枯菌噬菌体寄主范围窄、裂解能力不强，因此提供一种广谱、强裂解活性的青枯菌噬菌体具有重要的现实意义。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明提供了一株广谱、强裂解活性的青枯菌噬菌体yl3及其应用，其防治青枯病效果好，解决青枯菌噬菌体寄主范围窄、裂解能力不强的不足的技术问题。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供了噬菌体，是广谱型青枯菌噬菌体（ ralstonia phage），名称为yl3，保藏编号为cctcc no: m 20242306。

4、上述噬菌体yl3为双链dna病毒，尾噬菌体纲（ caudoviricetes），短尾噬菌体属（ gervaiseviru），具有多面体头部和短的尾部。

5、本发明还提供了上述噬菌体的培养方法，包括以moi=2为条件培养。

6、本发明还提供了上述噬菌体在裂解茄科雷尔氏菌中的应用。

7、本发明还提供了上述噬菌体在防治青枯病中的应用。

8、本发明还提供了上述噬菌体在制备防治青枯病的生防制剂中的应用。

9、本发明还提供了生防制剂，包括上述噬菌体，以及可接受的辅料或助剂。

10、在本发明的一些具体实施方案中，上述生防制剂所述噬菌体的效价为0.5×108pfu/ml~1.5×108 pfu/ml，可以是0.6×108 pfu/ml、0.7×108 pfu/ml、0.8×108 pfu/ml、0.9×108 pfu/ml、1×108 pfu/ml、1.1×108 pfu/ml、1.2×108 pfu/ml、1.3×108 pfu/ml或1.4×108 pfu/ml。

11、本发明还提供了上述生防制剂在裂解茄科雷尔氏菌中的应用。

12、本发明还提供了上述生防制剂在防治青枯病中的应用。

13、在本发明的一些具体实施方案中，上述应用所述青枯病为烟草青枯病、马铃薯青枯病、辣椒青枯病、花生青枯病中的至少一种。

14、本发明还提供了防治青枯病的方法，包括：向作物根部施用上述噬菌体或上述生防制剂。

15、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

16、本发明提供的广谱型青枯菌噬菌体yl3寄主范围广，能裂解38株不同来源的青枯菌中的34株，可裂解包括烟草、马铃薯、辣椒和花生等作物来源的青枯菌，且裂解能力强，防治范围广，能更有效地解决作物种植过程中出现的青枯病侵染，可用于防治作物青枯病。

17、生物保藏说明

18、生物材料：青枯菌噬菌体yl3，分类命名： ralstonia phage yl3，于2024年10月23日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏中心地址为：中国.武汉.武汉大学；保藏编号为cctcc no: m 20242306。

技术特征：

1.噬菌体，其特征在于，保藏编号为cctcc no: m 20242306。

2.如权利要求1所述的噬菌体在裂解茄科雷尔氏菌中的应用。

3.如权利要求1所述的噬菌体在防治青枯病中的应用。

4.如权利要求1所述的噬菌体在制备防治青枯病的生防制剂中的应用。

5.生防制剂，其特征在于，包括权利要求1所述的噬菌体，以及可接受的辅料或助剂。

6.如权利要求5所述的生防制剂，其特征在于，所述噬菌体的效价为0.5×108 pfu/ml~1.5×108 pfu/ml。

7.如权利要求5或6所述的生防制剂在裂解茄科雷尔氏菌中的应用。

8.如权利要求5或6所述的生防制剂在防治青枯病中的应用。

9.如权利要求3、4或8所述的应用，其特征在于，所述青枯病为烟草青枯病、马铃薯青枯病、辣椒青枯病、花生青枯病中的至少一种。

10.防治青枯病的方法，其特征在于，包括：向作物根部施用权利要求1所述的噬菌体或权利要求5或6所述的生防制剂。

技术总结
本发明涉及青枯病防治技术领域，特别涉及一株茄科青枯菌广谱噬菌体及其应用。本发明公开了一株茄科青枯菌广谱烈性噬菌体YL3，分类命名为Ralstonia phage，保藏编号为：CCTCC NO:M 20242306。所述噬菌体YL3属于双链DNA病毒，尾噬菌体纲（Caudoviricetes），短尾噬菌体属（Gervaiseviru），具有多面体头部和短的尾部。本发明提供的青枯菌烈性噬菌体YL3寄主范围广，能侵染来自烟草、辣椒、马铃薯和花生等不同寄主来源的38株青枯菌中的34株，且裂解能力强，可用于作物青枯病的生物防治。

技术研发人员：易克,段志超,邢云飞,黄弘毅,何昊欣,付品山,钱华,向东,杨磊,张惠林,陈武
受保护的技术使用者：湖南中烟工业有限责任公司
技术研发日：
技术公布日：2025/2/10