融合蛋白、先导编辑系统、基因编辑试剂盒、基因编辑的方法和细胞

本发明涉及基因编辑，尤其涉及融合蛋白、先导编辑系统、基因编辑试剂盒、基因编辑的方法和细胞。

背景技术：

1、目前，基因编辑技术的应用广泛，通过基因编辑技术在基因组中引入遗传修饰，例如替换、插入和缺失，可以改善农业性状，加速动植物的改良和育种；构建疾病模型，探索疾病的发生和进展以及进行药物筛选；修复或修饰内源致病突变，从而实现基因治疗的目的。其中，先导编辑（prime editing，pe）是一种精确的基因编辑技术，能够在细胞和动物中以编程方式安装替换、插入和缺失，而无需双链dna断裂。与基于同源定向修复的方法相比，先导编辑的机制使其对细胞复制和内源性dna修复的依赖性更小，并且它能够在不创建双链dna断裂的情况下精确安装编辑，从而最大限度地减少插入缺失和其他不良结果。但在哺乳动物中，先导编辑的基因编辑效率仍然比较低。

2、因此，现有技术还有待于改进和发展。

技术实现思路

1、基于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供融合蛋白、先导编辑系统、基因编辑试剂盒、基因编辑的方法和细胞，旨在解决先导编辑的基因编辑效率仍然比较低的问题。

2、本发明的技术方案如下：

3、本发明的第一方面，提供一种融合蛋白，其中，所述融合蛋白的氨基酸序列如seqid no：1所示。

4、本发明的第二方面，提供一种先导编辑系统，其中，所述先导编辑系统包括pegrna和本发明如上所述的融合蛋白。

5、可选地，所述pegrna的核苷酸序列如seq id no：2所示。

6、本发明的第三方面，提供一种基因编辑试剂盒，其中，所述基因编辑试剂盒包括用于表达pegrna的表达载体和用于表达本发明如上所述的融合蛋白的表达载体。

7、本发明的第四方面，提供一种基因编辑的方法，其中，包括步骤：

8、将本发明如上所述的先导编辑系统导入到宿主细胞中进行基因编辑。

9、可选地，将先导编辑系统导入到牛胎儿成纤维细胞中进行基因编辑。

10、可选地，将先导编辑系统导入到牛胎儿成纤维细胞中进行基因编辑的步骤具体包括：

11、提供融合蛋白表达载体，所述融合蛋白表达载体的核苷酸序列如seq id no：3所示；

12、将pegrna的核苷酸序列插入到pu6-pegrna-gg-acceptor质粒中，得到pegrna表达载体，所述pegrna表达载体的核苷酸序列如seq id no：4所示；

13、将所述融合蛋白表达载体和所述pegrna表达载体转染至牛胎儿成纤维细胞中进行基因编辑。

14、可选地，将所述融合蛋白表达载体和所述pegrna表达载体转染至牛胎儿成纤维细胞中进行基因编辑的步骤具体包括：

15、将无血清培养基和转染试剂进行混合，得到第一混合物；

16、将无血清培养基、融合蛋白表达载体和pegrna表达载体进行混合，得到第二混合物；

17、将所述第一混合物滴加到所述第二混合物中，混匀后，静置15~20min，得到第三混合物；

18、将所述第三混合物加入到含有牛胎儿成纤维细胞的孔板中，使得所述融合蛋白表达载体和所述pegrna表达载体转染至牛胎儿成纤维细胞中，进行基因编辑。

19、可选地，所述基因编辑为将 igf2基因内含子3上的g突变为a。

20、本发明的第五方面，提供一种细胞，其中，所述细胞通过采用本发明如上所述的方法进行基因编辑获得。

21、有益效果：本发明提供的融合蛋白可以定点提高组蛋白巴豆酰化，提高染色质的开放性，促进其与定点的染色质结合，用于基因编辑时，该融合蛋白能够在不影响细胞状态的情况下具有较高的作用效率，提升基因编辑效率。

技术特征：

1.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的氨基酸序列如seq id no：1所示。

2.一种先导编辑系统，其特征在于，所述先导编辑系统包括pegrna和权利要求1所述的融合蛋白。

3.根据权利要求2所述的先导编辑系统，其特征在于，所述pegrna的核苷酸序列如seqid no：2所示。

4.一种基因编辑试剂盒，其特征在于，所述基因编辑试剂盒包括用于表达pegrna的表达载体和用于表达权利要求1所述的融合蛋白的表达载体。

5.一种基因编辑的方法，其特征在于，包括步骤：

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，将先导编辑系统导入到牛胎儿成纤维细胞中进行基因编辑。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，将先导编辑系统导入到牛胎儿成纤维细胞中进行基因编辑的步骤具体包括：

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，将所述融合蛋白表达载体和所述pegrna表达载体转染至牛胎儿成纤维细胞中进行基因编辑的步骤具体包括：

9.根据权利要求7-8任一项所述的方法，其特征在于，所述基因编辑为将igf2基因内含子3上的g突变为a。

10.一种细胞，其特征在于，所述细胞通过采用权利要求5-9任一项所述的方法进行基因编辑获得。

技术总结
本发明公开融合蛋白、先导编辑系统、基因编辑试剂盒、基因编辑的方法和细胞，涉及基因编辑技术领域。所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明提供的融合蛋白可以定点提高组蛋白巴豆酰化，提高染色质的开放性，促进融合蛋白与定点的染色质结合，用于基因编辑时，该融合蛋白能够在不影响细胞状态的情况下具有较高的作用效率，提升基因编辑效率。

技术研发人员：杨磊,李光鹏,思梦,郝振廷,苏广华,刘雪霏,宋丽爽
受保护的技术使用者：内蒙古大学
技术研发日：
技术公布日：2025/2/10