一种心肌细胞来源的限定尺寸的细胞外囊泡及其制备方法与应用

本发明涉及生物医药，具体涉及一种心肌细胞来源的限定尺寸的细胞外囊泡及其制备方法与应用。

背景技术：

1、公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

2、细胞外囊泡（ev）是由绝大多数细胞生成的脂质膜封闭的囊泡。细胞外囊泡含有蛋白质、核酸和脂质并且充当重要的细胞间通讯器（由囊泡的膜上的受体促进）。外泌体、微泡和凋亡小体代表了细胞外囊泡的主要亚型。外泌体在细胞内部产生，经由核内体途径释放，并且直径范围为约30至100nm。微泡从细胞质膜中出芽，范围为约50至1000nm。凋亡小体在细胞死亡过程中释放，包含细胞的各个部分，范围为约50至5000nm。

3、由于细胞外囊泡能够在正常和病理条件下将各种分子递送到细胞中，它们对医学而言是一种有前途的工具。心肌炎是由多种病因引起的可危及生命的心肌炎症，可导致心功能障碍以及心律失常等严重后果。目前，对症治疗心肌炎仍是主要的治疗方法，缺乏特异性的治疗方法。心肌细胞是构成心脏的主要细胞，而巨噬细胞是心肌炎中浸润的主要免疫细胞。然而，心肌细胞与巨噬细胞的串扰交流机制尚未阐明。细胞外囊泡是细胞间通讯的重要途径，在心肌炎中，心肌细胞是否能通过细胞外囊泡与巨噬细胞进行通讯交流尚不明确。

技术实现思路

1、为了克服上述问题，本发明提供了一种心肌细胞来源的限定尺寸的细胞外囊泡及其制备方法与应用。

2、为实现上述技术目的，本发明采用如下技术方案：

3、本发明的第一个方面，提供了一种心肌细胞来源的限定尺寸的细胞外囊泡的制备方法，包括如下步骤：

4、（1）培养心肌细胞，并诱导其产生心肌炎症细胞；

5、（2）继续培养诱导产生的心肌炎症细胞，后吸取培养基中的上清液；

6、（3）将上清液进行差速离心，收集限定尺寸的细胞外囊泡；

7、其中，步骤（1）中所述心肌细胞为h9c2。

8、限定尺寸的细胞外囊泡的粒径为100~600 nm，峰值约为175 nm。

9、本发明的第二个方面，提供一种心肌细胞来源的限定尺寸的细胞外囊泡，由第一方面所述的制备方法制备而成。

10、本发明的第三个方面，提供第二方面所述的心肌细胞来源的限定尺寸的细胞外囊泡在制备治疗心肌炎药物中的应用。

11、本发明的第四个方面，提供一种药物制剂，包括第二方面所述的心肌细胞来源的限定尺寸的细胞外囊泡。

12、本发明的第五个方面，提供一种药物组合物，包括第二方面所述的心肌细胞来源的限定尺寸的细胞外囊泡。

13、本发明的有益效果在于：

14、本发明中通过采用脂多糖（lps）刺激心肌细胞h9c2，诱导其产生心肌炎症细胞，并使用差速离心法从诱导产生的心肌炎症细胞中分离出限定尺寸的细胞外囊泡，研究发现该限定尺寸的细胞外囊泡可以抑制炎症状态下的巨噬细胞分泌炎症因子，使巨噬细胞向抗炎修复表型（m2）转化。同时，在心肌炎小鼠中，大细胞外囊泡可以减轻心肌炎症状态，有缓解心肌炎的效果。

技术特征：

1.一种心肌细胞来源的限定尺寸的细胞外囊泡的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中具体的方法包括：

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中差速离心的方式包括：

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，采用pbs缓冲溶液洗涤沉淀。

5.一种心肌细胞来源的限定尺寸的细胞外囊泡，其特征在于，由权利要求1~4任一项所述的制备方法制备而成。

6.权利要求5所述的心肌细胞来源的限定尺寸的细胞外囊泡在制备治疗心肌炎药物中的应用。

7.一种药物制剂，其特征在于，包括权利要求5所述的心肌细胞来源的限定尺寸的细胞外囊泡。

8.一种药物组合物，其特征在于，包括权利要求5所述的心肌细胞来源的限定尺寸的细胞外囊泡。

9.如权利要求8所述的药物组合物，其特征在于，药物组合物的剂型包括胃肠道给药剂型以及非经胃肠道给药剂型。

技术总结
本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种心肌细胞来源的限定尺寸的细胞外囊泡及其制备方法与应用。本发明中通过采用脂多糖（LPS）刺激心肌细胞H9C2，诱导其产生心肌炎症细胞，并使用差速离心法从诱导产生的心肌炎症细胞中分离出限定尺寸的细胞外囊泡，研究发现该限定尺寸的细胞外囊泡可以抑制炎症状态下的巨噬细胞分泌炎症因子，使巨噬细胞向抗炎修复表型（M2）转化。同时，在心肌炎小鼠中，大细胞外囊泡可以减轻心肌炎症状态，有缓解心肌炎的效果。

技术研发人员：韩波,由颖男,姜艳杰
受保护的技术使用者：山东第一医科大学附属省立医院（山东省立医院）
技术研发日：
技术公布日：2025/2/20