一种花生复合根瘤菌剂及其制备方法和应用与流程

本发明涉及微生物菌剂，尤其涉及一种花生复合根瘤菌剂及其制备方法和应用。

背景技术：

1、

2、根瘤菌(rhizobium)是能与豆科植物共生形成根瘤，并将空气中的氮还原成氨提供植物营养的一类革兰氏阴性菌。根瘤菌细胞呈杆状，有鞭毛和荚膜，不生芽孢。革兰氏染色阴性。在根瘤中生活的菌体呈梨形、棍棒形或“t”“x”“y”等形状，这种变形的菌体称类菌体。每种根瘤菌都只能在一种或几种豆科生物上形成根瘤，建立共生关系，表现出各自的专一性。根瘤菌侵入寄主根内，刺激根部皮层和中柱鞘的某些细胞，引起这些细胞的强烈生长，使根的局部膨大形成根瘤；根瘤菌在根内定居，植物供给根瘤菌以矿物养料和能源，根瘤菌固定大气中游离氮气，为植物提供氮素养料，两者在拮抗寄生关系中处于均衡状态而表现共生现象。

3、根瘤菌菌剂的制备一般包括原种活化→试管固体培养→三角瓶液体振荡培养→发酵培养几个阶段，但花生根瘤菌具有生长速度慢的缺陷，例如，申请号为“201310643826.5”发明名称为“一种花生慢生根瘤菌及其用途”公开了一种慢生根瘤菌wd-1，斜面培养的时间为5～7d，种子培养的时间为4～5d，发酵培养的时间为4～5d，共用时9～17d，培养周期较长。并且，根瘤菌虽有固氮促生作用，却无防治作物病害的能力，制约了根瘤菌的推广应用。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种花生复合根瘤菌剂及其制备方法和应用，解决花生根瘤菌培养周期长、作用单一的问题。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供了一种花生复合根瘤菌剂，包含以下重量份数的组分：混合菌液90～95份，k2hpo40.6～1.2份，nacl 0.1～0.5份，蔗糖0.5～1.0份；所述混合菌液包括慢生型根瘤菌wd-1菌液和枯草芽孢杆菌lx13菌液，所述慢生型根瘤菌wd-1菌液和枯草芽孢杆菌lx13菌液中的活菌数为4～6×109cfu/ml。

4、优选的，所述慢生型大豆根瘤菌wd-1菌液和枯草芽孢杆菌lx13菌液的体积比为1:5～5:1。

5、本发明还提供了所述花生复合根瘤菌剂的制备方法，包括以下步骤：

6、s1.分别将慢生根瘤菌wd-1和枯草芽孢杆菌lx13接种于斜面培养基，于28～30℃的条件下斜面培养24～48h，得到斜面培养物；

7、s2.分别将所述斜面培养物接种到种子培养基中，于28～30℃，150～200rpm培养48～72h，得到种子液；

8、s3.分别将种子液按照6～12％的接种量接种至发酵培养基中，于28～30℃，150～200rpm，通气量0.2～0.3m3/h的条件下培养60～80h，获得慢生型根瘤菌wd-1菌液和枯草芽孢杆菌lx13菌液；

9、s4.将慢生型根瘤菌wd-1菌液、枯草芽孢杆菌lx13菌液、k2hpo4、nacl和蔗糖混合，即得所述的花生复合根瘤菌剂。

10、优选的，慢生型根瘤菌wd-1的种子培养基和发酵培养基包括以下成分：果糖8～12g，酵母膏0.8～1.2g，γ-聚谷氨酸1～2g，mgso4·7h2o 0.1～0.3g，k2hpo40.4～0.6g，nacl 0.08～0.12g，cacl20.04～0.06g，0.5％钼酸钠溶液3～5ml，0.5％硼酸溶液3～5ml，蒸馏水1000ml，ph 6.8～7.0。

11、优选的，枯草芽孢杆菌lx13菌液的种子培养基和发酵培养基为lb培养基，包括以下成分：胰蛋白胨8～12g，酵母粉4～6g，nacl 8～12g，蒸馏水1000ml，ph 7.0～7.2。

12、本发明还提供了所述的花生复合根瘤菌剂在促进花生生长和/或提高花生产量中的应用。

13、本发明还提供了所述的花生复合根瘤菌剂在防治花生根腐病中的应用。

14、本发明还提供了所述花生复合根瘤菌剂的使用方法，将根瘤菌剂与花生种子一起拌种，阴干后于12h内播种。

15、优选的，所述花生复合根瘤菌剂的使用量为20～30ml/kg花生种子。

16、通过采用上述技术方案，本发明具有如下有益效果：本发明通过对慢生型根瘤菌wd-1的培养基进行优化，缩短了花生复合根瘤菌剂的制备周期，并且慢生型根瘤菌wd-1和枯草芽孢杆菌lx13在防治花生根腐病和增加花生根瘤数方面具有显著的协同作用，可广泛应用于花生栽培领域。

技术特征：

1.一种花生复合根瘤菌剂，其特征在于，包含以下重量份数的组分：混合菌液90～95份，k2hpo40.6～1.2份，nacl 0.1～0.5份，蔗糖0.5～1.0份；所述混合菌液包括慢生型根瘤菌wd-1菌液和枯草芽孢杆菌lx13菌液，所述慢生型根瘤菌wd-1菌液和枯草芽孢杆菌lx13菌液中的活菌数为4～6×109cfu/ml。

2.根据权利要求1所述的花生复合根瘤菌剂，其特征在于，所述慢生型大豆根瘤菌wd-1菌液和枯草芽孢杆菌lx13菌液的体积比为1:5～5:1。

3.权利要求1或2所述花生复合根瘤菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，慢生型根瘤菌wd-1的种子培养基和发酵培养基包括以下成分：果糖8～12g，酵母膏0.8～1.2g，γ-聚谷氨酸1～2g，mgso4·7h2o0.1～0.3g，k2hpo40.4～0.6g，nacl 0.08～0.12g，cacl20.04～0.06g，0.5％钼酸钠溶液3～5ml，0.5％硼酸溶液3～5ml，蒸馏水1000ml，ph 6.8～7.0。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，枯草芽孢杆菌lx13菌液的种子培养基和发酵培养基为lb培养基，包括以下成分：胰蛋白胨8～12g，酵母粉4～6g，nacl 8～12g，蒸馏水1000ml，ph 7.0～7.2。

6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，慢生型根瘤菌wd-1菌液和枯草芽孢杆菌lx13菌液中的活菌数分别为为4～6×109cfu/ml。

7.权利要求1或2所述的花生复合根瘤菌剂在促进花生生长和/或提高花生产量中的应用。

8.权利要求1或2所述的花生复合根瘤菌剂在防治花生根腐病中的应用。

9.权利要求1或2所述花生复合根瘤菌剂的使用方法，其特征在于，将根瘤菌剂与花生种子一起拌种，阴干后于12h内播种。

10.根据权利要求9所述的使用方法，其特征在于，所述花生复合根瘤菌剂的使用量为20～30ml/kg花生种子。

技术总结
本发明提供了一种花生复合根瘤菌剂及其制备方法和应用，属于微生物菌剂技术领域。本发明的花生复合根瘤菌剂包括以下组分：混合菌液，K2HPO4，NaCl，蔗糖；所述混合菌液包括慢生型根瘤菌WD‑1菌液和枯草芽孢杆菌LX13菌液，所述慢生型根瘤菌WD‑1菌液和枯草芽孢杆菌LX13菌液中的活菌数为4～6×109cfu/mL。本发明通过对慢生型根瘤菌WD‑1的培养基进行优化，缩短了花生复合根瘤菌剂的制备周期，并且慢生型根瘤菌WD‑1和枯草芽孢杆菌LX13在防治花生根腐病和增加花生根瘤数方面具有显著的协同作用，可广泛应用于花生栽培领域。

技术研发人员：李佳佳,付娆,梁晓艳
受保护的技术使用者：山东省蚕业研究所
技术研发日：
技术公布日：2025/4/6