专利名称:光合细菌制剂的制备方法
技术领域：
本发明提供一种光合细菌制剂的制备方法。
技术背景目前，光合细菌制剂的制备方法种类繁多、互不相同。其中，有代表性的一种制备方法为在菌种培养液中接种30％以上的浑球红假单胞菌(Rhodopseudomonas Sphaeroides)P4株和沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas Palustris)1号株的混合菌群，接种后的培养液在温度为26～32℃、光照强度为3000～5000LX、PH为6～8的厌氧条件下培养48～72小时，然后将培养出的菌液在敞开体系中、自然光照下，根据菌液中的碳源残存量适时添加一次以上的碳源，在温度为20～35℃、好氧充气条件下培养72～120小时后，收集菌液分装，制成液体微生物混合制剂。众所周知，菌液中的菌体存在遮光效应和贴壁性。因上述制备方法中混合菌群接种于菌种培养液中时未经过搅拌，且接种后培养液的厌氧培养过程为一种静置培养方式，换言之，所述培养液在厌氧培养过程中始终处于静止、不流动状态，故在接种及厌氧培养过程中，菌体的遮光效应和贴壁性相当显著，从而使该方法制备的液体微生物混合制剂，菌体得率低、品质不稳定。
发明内容
本发明的目的在于提供一种菌体得率高、品质稳定的光合细菌制剂的制备方法。
本发明所提供的光合细菌制剂的制备方法依次包括以下工艺步骤光合细菌与菌种培养液按容积比为(0.6～1)∶(1～1.4)的比例混合并搅拌，得混合液；混合液在温度为25～32℃、光照强度为1000～2500LX、PH为7～7.5的厌氧条件下并经定时搅拌，培养73～99小时将培养出的菌液在光照强度低于50LX、敞开体系中，适时添加碳源，以保证菌液中的碳源含量始终维持在1600ppm以上，在温度为22～32℃、好氧充气条件下培养121～143小时，当菌液的活菌浓度达到2.8×109个/ml以上时，制成光合细菌制剂。
所述光合细菌至少为CGMCC № 0192混合菌群中任意一属的菌株，所述混合菌群中含有9株光合细菌，分别为红螺菌属(Rhodospirillium)1株，红假单胞菌属(Rhodopseudomonas)2株，红细菌属(Rodobacter)2株，着色菌属(Chromatium)1株，绿杆菌属(Chlorobium)1株，红硫细菌2株。在公开号为CN1108944A、CN1101498A的两份中国发明专利申请公开说明书中对上述混合菌群的菌种保藏情况进行了披露，上述两项专利申请的申请人—太原康强生物技术开发公司已于1993年2月 22日将上述混合菌群在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)进行了保藏，保藏编号为№0192。
所述菌种培养液的组成为乙酸钠4～4.8kg，乙酸铵0.4～0.48kg，磷酸二氢钾0.5～1kg，氯化铵1～1.5kg，氯化镁0.4～0.8kg，氯化钙0.2～0.4kg，三氯化铁0.01～0.02kg，氯化钠0.6～1.2kg，酵母浸膏0.6～0.8kg，生物素2～4kg，维生素B10.02kg，水1000升。
所述光合细菌与菌种培养液混合时的搅拌时间为20～30分钟。
所述混合液定时搅拌的方式为每隔20～30分钟搅拌一次，每次搅拌的时间为5～7分钟。
每次在每升菌液中按乙酸钠与丙酸钠的重量为10∶2的比例添加碳源。
所述好氧充气的条件为每升菌液中每分钟的充气量为0.04～0.06升。
以上所说的敞开体系是指敞口的培养容器。
以上所说的菌种培养液，其组成成分之一的水采用净清河水、井水、自来水中任意一种均可，但净清河水、井水中诸如悬浮物含量、BOD值、大肠杆菌数等各项指标，均需符合出厂自来水的标准。
采用以上的方法后，因光合细菌与菌种培养液混合并搅拌而得混合液，即光合细菌接种于菌种培养液中时经过搅拌，故在厌氧培养过程前，混合液中菌体的遮光效应和贴壁性相当轻微；又因所述混合液是在厌氧条件下并经定时搅拌进行培养，这样混合液在厌氧培养过程中经常处于流动状态，故在厌氧培养过程中，混合液中菌体的遮光效应和贴壁性也相当轻微。从而使本发明所述方法制备的光合细菌制剂，菌体得率高、品质稳定。
具体实施方式
下面通过实施例更好地说明本发明，但它们不是对本发明的限定。
实施例一光合细菌采用CGMCC №0192混合菌群。
配制菌种培养液，其组成为乙酸钠4.8kg，乙酸铵0.48kg，磷酸二氢钾1kg，氯化铵1.5kg，氯化镁0.8kg，氯化钙0.4kg，三氯化铁0.02kg，氯化钠1.2kg，酵母浸膏0.8kg，生物素4kg，维生素B10.002kg，净清河水1000升。
将上述的光合细菌与菌种培养液按容积比为0.6∶1.4的比例混合并置于洁净的带盖搅拌桶中，搅拌30分钟得混合液，带盖搅拌桶可外购(以下实施例同此)；混合液在温度为25℃、光照强度为1000LX、PH为7的厌氧条件(即盖紧所述搅拌桶的桶盖，以下实施例同此)下并经定时搅拌，培养73小时，所述混合液定时搅拌的方式为每隔20分钟搅拌一次，每次搅拌的时间为7分钟(需要说明的是，每次搅拌的时间-7分钟是计算在每次间隔的时间-20分钟之内的，以下实施例同此)将培养出的菌液在光照强度为20LX、敞开体系(即掀开所述搅拌桶的桶盖，以下实施例同此)中，每次在每升菌液中按乙酸钠与丙酸钠的重量为10∶2的比例添加碳源，以保证菌液中的碳源含量始终维持在1900ppm，在温度为22℃、好氧充气(每升菌液中每分钟的充气量为0.06升)条件下培养121小时，当菌液的活菌浓度达到5×109个/ml时，制成光合细菌制剂。
实施例二光合细菌采用CGMCC №0192混合菌群中红螺菌属(Rhodospirillium)的1株菌株、红细菌属(Rodobacter)的2株菌株。
配制菌种培养液，其组成为乙酸钠4.4kg，乙酸铵0.44kg，磷酸二氢钾0.8kg，氯化铵1.3kg，氯化镁0.6kg，氯化钙0.3kg，三氯化铁0.015kg，氯化钠0.9kg，酵母浸膏0.7kg，生物素3kg，维生素B10.02kg，自来水1000升。
将上述的光合细菌与菌种培养液按容积比为0.8∶1.2的比例混合并置于洁净的带盖搅拌桶中，搅拌25分钟得混合液；混合液在温度为28℃、光照强度为1750LX、PH为7.3的厌氧条件下并经定时搅拌，培养86小时15分钟，所述混合液定时搅拌的方式为每隔25分钟搅拌一次，每次搅拌的时间为6分钟；将培养出的菌液在光照强度为30LX、敞开体系中，每次在每升菌液中按乙酸钠与丙酸钠的重量为10∶2的比例添加碳源，以保证菌液中的碳源含量始终维持在1800ppm，在温度为27℃、好氧克气(每升菌液中每分钟的充气量为0.05升)条件下培养132小时，当菌液的活菌浓度达到3.5×109个/ml时，制成光合细菌制剂。
实施例三光合细菌采用CGMCC №0192混合菌群中红螺菌属(Rhodospirillium)的1株菌株。
配制菌种培养液，其组成为乙酸钠4kg，乙酸铵0.4kg，磷酸二氯钾0.5kg，氯化铵1kg，氯化镁0.4kg，氯化钙0.2kg，三氯化铁0.01kg，氯化钠0.6kg，酵母浸膏0.6kg，生物素2kg，维生素B10.02kg，井水1000升。
将上述的光合细菌与菌种培养液按容积比为1∶1的比例混合并置于洁净的带盖搅拌桶中，搅拌20分钟得混合液；混合液在温度为32℃、光照强度为2500LX、PH为7.5的厌氧条件下并经定时搅拌，培养99小时，所述混合液定时搅拌的方式为每隔30分钟搅拌一次，每次搅拌的时间为5分钟；将培养出的菌液在光照强度为40LX、敞开体系中，每次在每升菌液中按乙酸钠与丙酸钠的重量为10∶2的比例添加碳源，以保证菌液中的碳源含量始终维持在1700ppm，在温度为32℃、好氧充气(每升菌液中每分钟的充气量为0.04升)条件下培养143小时，当菌液的活菌浓度达到2.9×109个/ml时，制成光合细菌制剂。
权利要求
1.光合细菌制剂的制备方法，它依次包括以下工艺步骤(1)光合细菌与菌种培养液按容积比为(0.6～1)∶(1～1.4)的比例混合并搅拌，得混合液；(2)混合液在温度为25～32℃、光照强度为1000～2500LX、PH为7～7.5的厌氧条件下并经定时搅拌，培养73～99小时；(3)将(2)中培养出的菌液在光照强度低于50LX、敞开体系中，适时添加碳源，以保证菌液中的碳源含量始终维持在1600ppm以上，在温度为22～32℃、好氧充气条件下培养121～143小时，当菌液的活菌浓度达到2.8×109个/ml以上时，制成光合细菌制剂。
2.根据权利要求
1所述的光合细菌制剂的制备方法，其特征在于所述光合细菌至少为CGMCC № 0192混合菌群中任意一属的菌株，所述混合菌群中含有9株光合细菌，分别为红螺菌属(Rhodospirillium)1株，红假单胞菌属(Rhodopseudomonas)2株，红细菌属(Rodobacter)2株，着色菌属(Chromatium)1株，绿杆菌属(Chlorobium)1株，红硫细菌2株。
3.根据权利要求
1所述的光合细菌制剂的制备方法，其特征在于所述菌种培养液的组成为乙酸钠4～4.8kg，乙酸铵0.4～0.48kg，磷酸二氢钾0.5～1kg，氯化铵1～1.5kg，氯化镁0.4～0.8kg，氯化钙0.2～0.4kg，三氯化铁0.01～0.02kg，氯化钠0.6～1.2kg，酵母浸膏0.6～0.8kg，生物素2～4kg，维生素B10.02kg，水1000升。
4.根据权利要求
1所述的光合细菌制剂的制备方法，其特征在于所述光合细菌与菌种培养液混合时的搅拌时间为20～30分钟。
5.根据权利要求
1所述的光合细菌制剂的制备方法，其特征在于所述混合液定时搅拌的方式为每隔20～30分钟搅拌一次，每次搅拌的时间为5～7分钟。
6.根据权利要求
1所述的光合细菌制剂的制备方法，其特征在于每次在每升菌液中按乙酸钠与丙酸钠的重量为10∶2的比例添加碳源。
7.根据权利要求
1所述的光合细菌制剂的制备方法，其特征在于所述好氧充气的条件为每升菌液中每分钟的充气量为0.04～0.06升。
专利摘要
本发明提供一种光合细菌制剂的制备方法，即光合细菌与菌种培养液按容积比为(0.6～1)∶(1～1.4)的比例混合并搅拌，得混合液；混合液在温度为25～32℃、光照强度为1000～2500LX、PH为7～7.5的厌氧条件下并经定时搅拌，培养73～99小时；将培养出的菌液在光照强度低于50LX、敞开体系中，适时添加碳源，以保证菌液中的碳源含量始终维持在1600ppm以上，在温度为22～32℃、好氧充气条件下培养121～143小时，使菌液的活菌浓度达到2.8×10
文档编号C12N1/20GKCN1400303SQ02135435
公开日2003年3月5日 申请日期2002年8月25日
发明者常军 申请人:常军导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan