专利名称:抗il-12/il-23抗体的制作方法
技术领域：
本发明涉及结合人IL-12和IL-23的抗体。
技术背景
本说明书中作者参考的出版物的书目详细内容在描述结束时按字母顺序归总。
本说明书中对任何现有技术的参考不是并且不应当被认为是承认或任何形式的暗示该现有技术形成任何国家中公知常识的一部分。
白细胞介素-12(也称为细胞毒性淋巴细胞成熟因子或自然杀伤细胞刺激因子) 是75-kDa的异二聚体蛋白。其由p35亚基构成，所述亚基由一束类似I类细胞因子的四个 α螺旋组成。Ρ35中C-端至C63的11个氨基酸称为二硫键环，因为该区域含有许多接触 p40(IL-12的另一个亚基)的残基，包括p40中与C177的链间二硫键。p40亚基折叠类似其他I类受体(如，生长激素受体(GHIO)的细胞外结构域。
p40亚基具有标为D1、D2和D3的三个结构域。每个结构域是β折叠结构，D2结构域含有C177链间二硫键。D2上还存在N-连接的糖基化位点(GlcNAc-GlcNAc-甘露糖， 其中 GlcNAc 是 N-乙酰葡糖胺)(Yoon 等人，2000 Embo J 19 3530-41)。
白细胞介素-23是最近(2000年)通过搜索序列数据库发现的，该数据库具有白细胞介素-6螺旋细胞因子家族成员的计算衍生图谱。该搜索引起称为IL-23pl9(pl9)的新细胞因子亚基的发现。该亚基与IL_12p40共表达，引起称为白细胞介素-23(IL-23)的异二聚体蛋白的分泌。认为IL-23pl9类似IL-12p35，因为其含有四个螺旋束(Oppmarm等人，2000，Immunity 13 715-25)。
IL-12对其靶细胞类型的特异性作用是通过IL-12R复合物来介导的，该复合物由 IL-URP 1 (Chua 等人，1994 J Immunol 153 1沘_36)和 IL-12R β 2 (Presky 等人，1996 Proc Natl Acad Sci U S A 93 14002-7)构成。IL-23对其靶细胞类型的特异性作用是通过IL-23R复合物来介导的，该复合物由IL-12R0 1和IL-23R构成(Parham等人，2002 J Immunol 168 5699-708)
通过共同的p40亚基来介导IL-12Ri3 1与IL-12和IL-23的结合。这使用竞争试验得到了证明，在该实验中P40亚基的同二聚体(p80)与IL-12竞争与IL_12Ri3 1的结合。 然而，p80 对 IL-12 与 IL-12R0 2 的结合不起作用(Presky 等人，1996 Ann N Y Acad Sci 795 390-3)。
接着是IL-12的p35亚基或异二聚体接触面负责结合IL_12Ri3 2，由此给予了 IL-12 对 IL-12R 复合物的选择性(Trinchieri 等人，2003 Immunity 19 641-4)。同样，IL-23的pl9或异二聚体接触面负责结合IL-23R，由此给予了 IL-23对IL-23R复合物的选择性。
已经阐明了 IL-12R和IL-23R复合物的信号传导。IL-12R激活Janus激酶 (JAK)-这是信号传导的转录途径的信号传导子和激活子(STAT)。IL-12的实际细胞效应主要是由于STAiM激活引起的(Kaplan等人1996 Nature 382 174-7)。在IL-12R3 2上存在STAT4结合位点，表明该受体对于信号传导是至关重要的(Yao等人，1999Arch Biochem Biophys 368 147-55)。在IL-URβ 2的表达与THl细胞对IL-12应答的相互关系中也证明了这一情况(Rogge 等人，1997 J Exp Med 185 825-31)。IL-23R 激活与 IL-23R 相似的复合物，如JAK-STAT途径。通过IL-23与IL-23R的结合，STAT3得到比STAT4更明显的诱导，并且其他所得到的结合DNA的STAT转录因子复合物是不同的(Parham、Chirica等人 2002 J Immunol 168 5699-708)。
IL-12和IL-23的生物效应彼此不同。IL-12是由激活的炎性细胞(单核细胞、 巨噬细胞、嗜中性粒细胞、小胶质细胞、树突细胞)分泌的。主要研究了 IL-12对淋巴细胞的效应，尽管它也影响其他类型的细胞。在炎症过程中，IL-12诱导NK细胞和T细胞产生干扰素-Y (IFN- Y )。然后IL-12可能与IFN- γ联合，诱导T细胞分化成ThI细胞。 这种应答刺激了细胞免疫系统并最大化了巨噬细胞对病原体的杀灭效应和CD8+T细胞的增殖(Trinchieri 2003 Nat Rev Immunol 3 133-46)。IL-2 的过度产生与提高的促炎症反应活性和自体免疫典型的组织损伤相关(Leonard等人，1997 Crit Rev Immunol 17 545-53) ο失调的IL-12产生涉及以下疾病牛皮癣(Yawalkar等人，1998 J Invest Dermatol 111 1053-7 ；de Rie 1999 Dermatology 199101 ；Shaker φ A,2006 Clin Biochem 39 119-25)、克隆氏病(Neurath 等人，1995J Exp Med 182 1281-90 ;Simpson 等 A, 1998 J Exp Med 187 1225-34 ;Camoglio等人，2002 Eur J Immunol 32 261-9)、多发性硬化(Fassbender 等人，1998 Neurology51 753-8 ;Laman 等人，1998 J Neuroimmunol 86 30-45)、类风湿性关节炎(Kim等人，2000 Clin Exp Immunol 119 175-81 ;Leung等人，2000 J Immunol 1646495-502)，此外还有其他的自体免疫疾病。IL-12在这些疾病中的作用尚不清楚，但认为可能涉及ThI应答的过度极化(Gordon等人，2005 Curr Opin Gastroenterol 21431-7)。
IL-23通过激活的人巨噬细胞以及树突细胞来分泌(Verreck等人，2004 ProcNatl Acad Sci U S A 101 4560-5)。IL-23主要作用于记忆T-细胞，并且认为通过IL-17A和 IL-17F的调节来促进自体免疫疾病，如通过鼠脾细胞对IL-23应答而分泌IL-17的能力所证明的。在人存在IL-23/IL-17途径，并且已经显示出IL-23是IL-21、IL-22、IFN- γ , TNF-α和IL-17的同等良好诱导剂，这些全部是促炎症反应细胞因子。在体外，IL-6和 TGF-βΙ促进天然T-细胞沿着新发现的T-细胞途径往下(TH17) (Zhou等人，2007 Nat Immunol 8 967-74)。这些细胞进一步通过IL-21的分泌以自分泌的方式得到驱动。最后， 认为IL-23和/或IL-I β在这种Τη17应答中维持了细胞(对于综述，参见Dong 2008 Nat Rev Immunol 8337-48)。还感兴趣的是转录因子ROR γ t，已经显示出其在TH17应答中得到上调(Chen 等人，2007Arthritis Rheum 56 2936-46)
由于IL-12和IL-23都含有共同的亚基，因此难以将疾病状态仅仅归因于一种白细胞介素或另一种的过度产生。然而，研究表明IL-23失调涉及以下疾病牛皮癣(Lee等人，2004 J Exp Med 199 125-30 ;Torti 等人，2007 J Am Acad Dermatol 571059-68)、 克隆氏病(Neurath 2007 Nat Med 13 26-8)和多发性硬化(Cua 等人，2003 Nature 421 744-8)，此外还有其他自体免疫疾病。
IL-12p40可以作为单体(IL_12p40)或作为同二聚体(IL_12p80)得到分泌，IL-12p80是通过二硫键连接在一起的两个p40亚基(Gillessen等人，1995 Eur J Immunol 25 200-6)。与IL-12相比，在鼠休克模型中，这些p40物质超过50倍地得到分泌 (Gillessen等人，1995 Eur J Immunol 25 200-6)，在人外周血单核细胞(PBMC)中，超过 10-20倍(D' Andrea等人，1992 J Exp Med 176 1387-98)。IL_12p80可以以高于 IL_12p40 20 倍地在体外对抗 IL-12 的活性(Gillessen，Carvajal 等人，1995 Eur J Immunol 25 200-6)。已经显示重组 IL-12p80 结合 IL-12 β 1 (Wang 等人，1999 Eur J Immunol 29 2007-13)。
认为IL_12p40/p80是IL-12/23受体复合物的拮抗剂，因为重组鼠 IL-12p80 (rmIL-12p80)显示出在体内和体外与IL-12/23竞争对IL-12R β 1的结合 (Mattner 等人，1993 Eur J Immunol 23 2202-8 ；Gillessen, Carvajal 等人，1995 Eur J Immuno 125 200-6 ；Gately 等人，1996 Ann N Y Acad Sci 795 1-12)。同二聚体也显示出防止鼠模型中IL-12介导的休克(Mattner等人，1997 Infect Immun 65 4734-7) 在 IL-23介导的免疫功能的研究中，IL-12p40通过竞争性地结合IL_12Ri3 1破坏了 IL-23诱导的细胞因子产生(Shimozato 等人，2006 Immunology 117 22-8) 最近，IL_12p40 或 IL-12p80涉及其他生物学作用。最早确定的IL-12p80活性之一是作为巨噬细胞的化学引诱剂。IL-12R0 1缺陷型巨噬细胞而不是IL-12R0 2或IL_12p35缺陷型巨噬细胞，降低了对rmIL-12p80的化学引诱性应答，表明IL_12R0 1可以在IL-12Rβ 2的不存在下介导对 IL-12p80 的应答，并且 IL-12p80 的活性与 IL-12 无关(Russell 等人，2003 J Immunol 171 6866-74)。IL-12p80还可以作为树突细胞(DC)迁移的诱导剂。IL_12p40缺陷型DC不能对分枝杆菌应答而从肺迁移至淋巴结。同时失去IL-12p35和IL-23pl9没有影响分支杆菌激活的DC对趋化因子应答而迁移以及驱动T-细胞扩增的能力的事实强调了 IL-12p40这种独特的作用(Khader 等人，2006J Exp Med 203 1805-15)。IL_12p40 和 IL_12p80 还显示出介导肺部的炎症应答并且显示出通过⑶8+T细胞诱导IFN-Y产生(Cooper等人，2007 Trends Immunol 2833-8)。
由于IL-12和IL-23涉及各种病症，已经设计了几种治疗策略来抑制IL-12和/ 或IL-23活性。一些最早描述的抗体是由用IL-12免疫的小鼠杂交瘤分泌的鼠单克隆抗体(Strober 等人，PCT 公开号 WO 97/15327 ；Gately 等人，W099/37682A2, Neurath, Fuss 等人，1995 J Exp Med 182 1281-90)。由于将鼠免疫球蛋白给予人引起的问题，使用这些鼠抗体来治疗人受到限制。这些问题包括产生抗鼠免疫球蛋白的自体抗体，由此除去其在血清中的存在并使得没有任何治疗效果。随着将鼠序列仅限于抗体可变区的嵌合抗体的出现，这种称为人抗鼠抗体(HAMA)的效应得到了部分克服(Jimghans等人，1990 Cancer Res 50 1495-502 ;Brown 等人，1991 Proc Natl Acad Sci U S A 88 2663-7)。已经描述了嵌合抗体结合IL-12 (Perritt等人，PCT公开号WO 02/097048A2)。甚至更多的人-样抗体是“人源化抗体”，其含有供体鼠抗体的互补决定区，但具有源自人受体抗体的可变框架(framework)区(Jones 等人，1986 Nature 321 522-5, Winter U. S. Pat. No. 5，225，539，Queen 等人，U. S. Pat. No. 5，693，761)。Lacy 等人在 W007/005608 中描述了这些抗 IL-12 和 IL-23的“人源化”抗体。最近，已经描述了源自展示文库的完全人抗体，该展示文库源自人来源(Winter等人，美国专利号7，306，907 ；MacCafferty等人，美国专利号5，969，108)或具有人免疫球蛋白转基因的小鼠(Tomizuka等人，美国专利号7，041，870 ；Kucherlapati等人，美国专利号5，939，598)。Salfeld等人(美国专利号6，914，128)描述了抗IL-12的完全人抗体。
基于与IL-12、IL-23、IL_12p40和IL_12p80的相互作用，可以预见五大类抗体 (图1)。第一类抗体是与存在于IL-12和IL-23中的IL_12p40，以及与IL_12p40单体和 IL-12p80同二聚体特异性相互作用的那些抗体(图1. 1)。第二类抗体是与IL-12p35特异性相互作用的那些抗体(通过Devergne等人，2001 Am J Pathol 1591763-76中的抗体G161-566来举例说明；图1.2)。第三类抗体是与IL-12，而不与IL-23、IL_12P;35和 IL-12p40特异性相互作用的那些抗体(通过D' Andrea，Rengaraju等人，1992 J Exp Med 176 1387-98中的抗体20C2来举例说明；图1. 3)。第四类抗体是与IL_23pl9特异性相互作用的那些抗体(通过I^resta等人的W02007/027714来举例说明；图1. 4)。第五类抗体是与IL-23p40，而不与IL-12p40特异性相互作用的那些抗体，开发了 IL-23上暴露的但通过IL-12中的IL-12p35亚基遮蔽的IL_12p40亚基上的序列(通过Benson等人，美国专利号7，M7，711来举例说明；图1.5)。本发明描述了新形式的与IL-12p40、IL-12p80、IL-12 和IL-23特异性相互作用的第一类抗体(图1. 1)。
了解了一些关于方法的信息，通过所述方法这第一类抗体抑制IL-12/23受体-配体复合物并因此发挥其拮抗效应。Giles-Komar等人(W02006/069036)描述了对IL_12p40 的氨基酸残基1-88特异的抗-IL-12p40抗体。该抗体进一步的特征在于特异性地抑制 IL-12 和 IL-23 与 IL-12R0 1 的相互作用(Papp 等人，2008 Lancet 3711675-84)。同样，在文献中已经描述了另一种抗体抑制IL-12/23与IL-12 R β 1的相互作用(Ding等人，2008 Curr Opin Investig Drugs 9 515-22)。本发明描述了通过新的作用机理抑制IL-12/23 受体-配体复合物的抗体(图2. 3)。这些新的作用机理包括IL-12/IL-12Ri3 2相互作用和 IL-23/IL-23R相互作用的选择性中和。它们不同于之前所述的抗体(参见上文)，因为它们不中和IL-12/23与IL-12Ri3 1的结合。这些抗体也是新的，因为它们不抑制IL_12p40/ p80结合IL-12Ri3 1，因此不抑制IL_12p40/p80在宿主防御中的作用，由此潜在地提高了这些抗体相对于其他IL-12/23抗体的安全性特征。这些具有新作用机制的抗体可以引起与 IL-12/23相关疾病治疗的改进，但具有降低的安全性问题。此外，这些抗体具有提高的功效，因为它们不抑制IL-12和IL-23、IL-12p40或IL_12p80的天然拮抗剂。这将使得抗体和IL-12p40或IL-12p80都作为拮抗剂发挥作用，由此提高抑制的水平，超过了单独给予抗体的水平。
发明内容
本发明提供了一种抗体，其包含结合人IL-12和人IL-23的抗原结合结构域，其中该抗体结合作为单体(人IL-12p40)和作为同二聚体(人IL-12p80)存在的人IL_12p40， 并且其中该抗体抑制人IL-12与人IL-12Ri3 2的结合以及人IL-23与人IL-23R的结合，但不抑制人IL-12或人IL-23或人IL-12p40或人IL_12p80与人IL-12R^ 1的结合。
16[0022]本发明进一步提供了治疗或降低细胞、组织、器官、动物或患者中至少一种IL-12 和/或IL-23疾病的症状的方法，包括使用本发明的抗体或其特定的部分或变体。
本发明的抗体还可以用于检测或测定样品中IL-12、IL-23、IL-12p40或IL_12p80 的存在。该方法包括将抗体加入样品中，测定抗体与样品中存在的IL-12、IL-23、IL-12p40 或IL-12p80的结合。
为了可以更全面地理解本发明的性质，现在将参考以下的附图和实施例来描述其各种形式。
图1 不同类别的抗 IL-12/23 抗体。图 1. 1)结合 IL-12、IL-23、IL_12p40 禾口 IL-12p80的p40亚基的抗体；图1. 2)结合IL-12的p35亚基的抗体；图1. 3)结合作为异二聚体的IL-12的p35和p40亚基的抗体；图1. 4)结合IL-23的pl9亚基的抗体；图1. 5) 结合IL-23、IL-12p40和IL_12p80中存在的而不在IL-12中存在的p40的抗体。
图 2 :IL-12/23 受体相互作用。IL-12 结合 IL-12R3 1 禾口 IL-12R3 2。IL-23 结合 IL-Ia^ 1 和 IL-23R。IL_12p40 结合 IL-12R0 1。IL_12p80 结合 IL-12R0 1。图 2. 1) IL-12和IL-23的亚基。图2. 2)抑制IL-12与IL-UR^ 2结合的抗体。图2. 3)抑制IL-12 与IL-12R0 2结合和IL-23与IL-23R结合的抗体。
图3 如通过ELISA测定的，PMA204和抗体1以剂量依赖性方式结合IL_12(A)、 IL-23(B)、IL-12p40(C)和 IL_12p80(D)。
图 4 :PMA204 和抗体 1 中和 IL-12 与 IL-12R3 2 的结合(A)和 IL-23 与 IL-23R 的结合⑶。
图 5 :PMA204 和抗体 1 不抑制 IL-12 与 IL-12R3 1 的结合(A)禾Π IL_12p80 与 IL-12R^ 1 的结合(B)。
图6 :PMA204和抗体1不抑制IL_12p40与IL-12R3 1的结合(A)和IL-23与 IL-12R^ 1 的结合(B)。
图7 抗体 1 不抑制 IL-p40(A)、IL-12 (B), IL-23 (C)与 IL_12R0 1 稳定转染的 Jurkat细胞系的结合。阳性对照抗体202. 1以剂量依赖性方式抑制了 IL_12p40、IL-12和 IL-23与该细胞系的结合。
图8 抗体1结合与IL-12R β 1稳定转染的Jurkat细胞系结合的IL_p40 (A)、 IL-12 (B)和IL-23 (C)，形成复合物。阳性对照抗体202. 1不能够形成这样的复合物。
图9 显示了各种抗体与IL-12和IL-23结合的ELISA数据。
图10 抗体1、3、4、7和比较抗体的SDS-PAGE凝胶，证明了不同的条带模式。
图11 展示了抑制IL-12诱导的NK-92细胞IFN-γ释放的ΡΜΑ204、抗体1、抗体 50、抗体68和抗体80。
图12 显示了各种抗体与IL-12和IL-23结合的ELISA数据。
图13 显示了各种抗体与IL-12和IL-23结合的ELISA数据。
图14 抗体80和抗体136展示了对IL-23诱导的鼠脾细胞IL-17分泌的抑制。
图15 显示了各种抗体与IL-12和IL-23结合的ELISA数据。
图16 显示了各种抗体与IL-12和IL-23结合的ELISA数据。[0041]图17 抗体80和抗体136展示了对IL-12诱导的人PBMC IFN- γ释放的抑制。
图18 显示了各种抗体与IL-12和IL-23结合的ELISA数据。
图19 显示了各种抗体与IL-12和IL-23结合的ELISA数据。
图20 显示了各种抗体与IL-12和IL-23结合的ELISA数据。
图21 证明了抗体136和ΡΜΑ204竞争与IL-12 (A)和IL-23 (B)结合的竞争SI3R实验。
图22 证明了抗体136和ΡΜΑ202不竞争与IL-12 (A)和IL-23 (B)结合的竞争SPR实验。
图23 证明了 ΡΜΑ204和抗体202. 1不竞争与IL-12或IL-23结合以及抗体136竞争与IL-12和IL-23结合的竞争ELISA实验。
图24 与抗体202. 1相比，抗体80和抗体136中和IL-12与IL-12R3 2的结合(A) 以及IL-23与IL-23R的结合(B)，这证明了在测试抗体的最高浓度下没有抑制。
图25 :ΡΜΑ204和抗体1不中和IL-12与IL-12R β 1的结合(A)以及IL-23与 IL-12R^ 1的结合(B)。抗体202. 1展示出IL-12结合IL-12R3 1 (A)禾Π IL-23结合 IL-12Ri3 1(B)的剂量依赖性抑制。
图沈各种人源化和亲和力成熟的抗体抑制了 IL-23诱导的鼠脾细胞的IL-17释放。显示了两组亲和力成熟的人源化前导抗体(lead antibody)，基于抗体80的那些人源化前导抗体(A)和基于抗体136的那些人源化前导抗体(B)。
图27 :IL_23皮内给药于小鼠6天后，它们产生了类似牛皮癣的皮肤炎症。A)同种型对照的给予没有防止皮肤炎症，然而，抗体80和抗体136降低了该模型中的炎症，如通过较低的临床分数所证实的。B)在组织学水平，在IL-23皮内给药超过6天后产生了表皮增厚。用抗体80和抗体136治疗改善了这种表皮增厚，但用同种型对照抗体治疗没有改善。
图洲各种人源化和亲和力成熟抗体抑制了嵌合IL-12诱导的鼠脾细胞的IFN- γ 释放。显示了两组亲和力成熟的人源化前导抗体，基于抗体80的那些人源化前导抗体(A) 和基于抗体136的那些人源化前导抗体(B)。
图四给予嵌合IL-12重复注射的小鼠具有升高的IFN- γ血清水平。用抗体80 或抗体136治疗时，相对于用同种型对照抗体的治疗，血清IFN-Y的水平降低。
图30 (A)抗体80能够在三明治ELISA中检测重组IL-23。(B)抗体80能够在三明治ELISA中检测由SAC刺激的PBMC产生的天然产生的IL-23。
图31 通过ELISA，抗体80强烈地结合IL-23WT蛋白，但与IL-23突变体D265A和 R266A的结合降低。
具体实施方式
本发明产生了一组抗IL-12的抗体。在筛选这些抗体中，令人惊讶地发现了一个特别亚组的结合人IL-12和IL-23并抑制IL-12与IL-UR β 2的结合以及IL-23与IL-23R 的结合，但不抑制IL-12或IL-23或IL-12p40或IL-12p80与IL-12R0 1的结合的抗体。因此，能够以先前不可完成的方式来改变IL-12和IL-23的活性。
因此，本发明提供了一种抗体，其包含结合人IL-12和人IL-23的抗原结合结构域，其中该抗体结合作为单体(人IL-12p40)和作为同二聚体(人IL-12p80)存在的人IL-12p40，并且其中该抗体抑制人IL-12与人IL_12Ri3 2的结合以及人IL-23与人IL-23R 的结合，但不抑制人IL-12或人IL-23或人IL-12p40或人IL_12p80与人IL-12R^ 1的结
口 O
在优选的具体实施方案中，抗体与包含具有PMA204的序列(SEQ ID NO. 6)的重链可变区的抗体和/或包含具有PMA204序列(SEQ ID NO. 7)的轻链可变区的抗体竞争与人 IL-12和/或人IL-23的结合。
如本文所用的，“竞争”意思是测试抗体与PMA204以相同的浓度使用时，将PMA204 与IL-12、IL-23或IL-12p40的结合降低了至少10% (通过ELISA测试)。
本发明提供了一种抗体及其变体，其结合存在于IL-12和IL-23中的IL_12p40， IL-12p40具有SEQ ID No. 1所示的序列，并在以下给出
IWELKKDVYWELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQS SEVLGSGKTLTIQVKEF⑶AGQYTC HKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIffSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCffffLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQG VTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLK PLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSE WASVPCS
在优选的具体实施方案中，由该抗体结合的表位在序列VQVQGKSKREKKDRVFTDKTS ATVICRKNASISV(SEQ ID NO :65)内。特别地，该抗体在 Asp265 上结合人 IL_12p40 (SEQ ID No. 1)。
在另一个方面中，本发明提供了一种抗体，其包含结合人IL-23 (SEQ ID NO :66)的抗原结合结构域，其中该抗体结合人IL-23 (SEQ ID NO :66)的水平高于该抗体结合突变体 IL-23 D265A(SEQ ID NO :75)的水平。
该抗体还结合作为单体(人IL_12p40)和作为同二聚体(人IL_12p80)存在的人 IL-12p40并抑制人IL-12与人IL_12Ri3 2的结合以及人IL-23与人IL-23R的结合，但不抑制人IL-12或人IL-23或人IL-12p40或人IL_12p80与人IL_12R3 1的结合。
本发明提供了可以用于通过选择性地中和IL-12与IL_12Ri3 2的结合以及IL-23 与IL-23R的结合，治疗至少一种IL-12和/或一种IL-23相关病症的抗体。
本发明提供了一种抗体，其包含3个选自以下的重链⑶R序列
CDRHCl DYYX1H,其中
& = M 或 L ；
CDRHC2 WIDPENGDTEXAI^KFQG，其中
& = Y、H 或 S ；
CDRHC3 X3KELRYFDV，其中
X3 = C、A、N、D、E、Q、G、H、I、L、P 或 V。
本发明提供了一种抗体，其包含3个选自以下的轻链⑶R序列
CDRLCl RM4)(5SISINLH，其中
& = S 或 P ；
& = Q 或 R ；
CDRLC2 FAX6QSX7S,其中
& = S 或 R ；[0079]X7 = I 或 T ；
CDRLC3 QQSNSX8PLTjJt^
)(8 = W或F。
本发明提供了一种抗体，其包含3个选自以下的重链⑶R序列
CDRHCl DYYX1H,其中
& = M 或 L ；
CDRHC2 WIDPENGDTEXAI^KFQG，其中
& = Y、H 或 S ；
CDRHC3 X3KELRYFDV，其中
X3 = C、A、N、D、E、Q、G、H、I、L、P 或 V。
和3个选自以下的轻链⑶R序列
CDRLCl RM4)(5SISINLH，其中
)(4 = S 或P;
& = Q 或 R ；
CDRLC2 FAX6QSX7S,其中
& = S 或 R ；
X7 = I 或 T ；
CDRLC3 QQSNSX8PLTjJt^
)(8 = W或F。
本发明提供了一种抗体，其由免疫球蛋白重链可变区组成，该免疫球蛋白重链可变区由以下序列之一组成
SEQ ID NO :6，SEQ ID NO :62，SEQ ID NO :114，SEQ ID NO :142，SEQ ID NO :28， SEQ ID NO 87,SEQ ID NO 115,SEQ ID NO 143,SEQ ID NO 29,SEQ ID NO 88,SEQ ID NO: 116，SEQ ID NO :144，SEQ ID NO :30，SEQ ID NO :90，SEQ ID NO :117，SEQ ID NO :145，SEQ ID NO 31,SEQ ID N0:91，SEQ ID NO 118,SEQ ID NO 146,SEQ ID NO 33,SEQ ID NO :92， SEQ ID NO :119, SEQ ID NO :147，SEQ ID NO :34，SEQ ID NO :93，SEQ ID NO :120，SEQ ID NO :148, SEQ ID NO :35，SEQ ID NO :94，SEQ ID NO :122，SEQ ID NO :149，SEQ ID NO :36， SEQ ID NO 95,SEQ ID NO 124,SEQ ID NO 150,SEQ ID NO 38,SEQ ID NO 96,SEQ ID NO: 125，SEQ ID NO :151，SEQ ID NO :39，SEQ ID NO :97，SEQ ID NO :126，SEQ ID NO :152，SEQ ID NO 40, SEQ ID NO 99, SEQ ID NO 127, SEQ ID NO 153, SEQ ID NO :41,SEQ ID NO 100, SEQ ID NO :128, SEQ ID NO :154，SEQ ID NO :42，SEQ ID NO :101，SEQ ID NO :129，SEQ ID NO :155, SEQ ID NO :43，SEQ ID NO :102，SEQ ID NO :130，SEQ ID NO :156，SEQ ID NO :44， SEQ ID NO :103, SEQ ID NO :131，SEQ ID NO :157，SEQ ID NO :45，SEQ ID NO :104，SEQ ID NO :132, SEQ ID NO 158, SEQ ID NO 53, SEQ ID NO 105, SEQ ID NO 133, SEQ ID NO :159， SEQ ID NO 54, SEQ ID NO :106，SEQ ID NO :134，SEQ ID NO :160，SEQ ID NO :55，SEQ ID NO :107, SEQ ID NO 135, SEQ ID NO 161, SEQ ID NO 56, SEQ ID NO 108, SEQ ID NO :136， SEQ ID NO :162, SEQ ID NO :57，SEQ ID NO :109，SEQ ID NO :137，SEQ ID NO :163，SEQ ID NO 58, SEQ ID NO :110, SEQ ID NO 138，SEQ ID NO :164, SEQ ID NO 59，SEQ ID NO 111, SEQ ID NO :139, SEQ ID NO :165，SEQ ID NO :60，SEQ ID NO :112，SEQ ID NO :140，SEQ IDNO :166, SEQ ID NO :61，SEQ ID NO :113，SEQ ID NO :141 和 SEQ ID NO :167。
本发明提供了一种抗体，其由免疫球蛋白轻链可变区组成，该免疫球蛋白轻链可变区由以下序列之一组成
SEQ ID NO :7，SEQ ID NO :169，SEQ ID NO :181，SEQ ID NO :193，SEQ ID NO :32， SEQ ID NO :170, SEQ ID NO :182，SEQ ID NO :194，SEQ ID NO :37，SEQ ID NO :171，SEQ ID NO :183, SEQ ID NO 195, SEQ ID NO 42, SEQ ID NO 172, SEQ ID NO 184, SEQ ID NO :196， SEQ ID NO 46, SEQ ID NO :173，SEQ ID NO :185，SEQ ID NO :197，SEQ ID NO :47，SEQ ID NO :174, SEQ ID NO 186, SEQ ID NO 198, SEQ ID NO 48, SEQ ID NO 175, SEQ ID NO :187， SEQ ID NO :199, SEQ ID NO :49，SEQ ID NO :176, SEQ ID NO :188, SEQ ID NO :200, SEQ ID NO 50, SEQ ID NO :177, SEQ ID NO :189, SEQ ID NO :201，SEQ ID NO :51，SEQ ID NO 178, SEQ ID NO :190, SEQ ID NO :52，SEQ ID NO :179 和 SEQ ID NO :192。
本发明提供了一种抗体，其进一步包含人重链受体框架。特别地，是其中所述受体框架包含选自 SEQ ID NO :202, SEQ ID NO :205、SEQ ID NO :208、SEQ ID NO :203、SEQ ID NO: 206、SEQ ID NO: 209、SEQ ID NO :204 或 SEQ ID NO :207 的氨基酸序列的抗体。
本发明提供了一种抗体，其进一步包含人轻链受体框架。特别地，是其中所述受体框架包含选自 SEQ ID NO :210, SEQ ID NO :213、SEQ ID NO :216、SEQ ID NO :211、SEQ ID NO :214, SEQ ID NO :212或SEQ ID NO :215的氨基酸序列的抗体。
本发明提供了一种抗体，其包含两个免疫球蛋白可变区，其中所述两个免疫球蛋白可变区选自
SEQ ID NO:6&SEQ ID NO:7SEQ ID NO:115&SEQ ID NO:190SEQ ID NO:6&SEQ ID NO:169SEQ ID NO:115&SEQ ID NO:192SEQ ID NO:28&SEQ ID NO:179SEQ ID NO:115&SEQ ID NO:193SEQ ID NO:29&SEQ ID NO:179SEQ ID NO:115&SEQ ID NO:194
权利要求
1.一种包含抗原结合结构域的抗体，该抗原结合结构域结合人IL-12和人IL-23，其中抗体结合作为单体(人IL-12p40)和作为同二聚体(人IL-12p80)存在的人IL_12p40，并且其中抗体抑制人IL-12与人IL-12Ri3 2的结合和人IL-23与人IL-23R的结合，但不抑制人IL-12或人IL-23或人IL-12p40或人IL_12p80与人IL_12R3 1的结合。
2.如权利要求
1中所述的抗体，其中抗体与包含具有SEQID NO :6序列的重链可变区的抗体竞争与人IL-12和/或人IL-23的结合。
3.如权利要求
1中所述的抗体，其中抗体与包含具有SEQID NO :7序列的轻链可变区的抗体竞争与人IL-12和/或人IL-23的结合。
4.如权利要求
1中所述的抗体，其中抗体结合具有序列VQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVIC RKNASISV(SEQ ID NO 65)的人 IL_12p40 的一部分。
5.如权利要求
1中所述的抗体，其中抗体在Asp265上特异性地结合人IL-12p40(SEQ ID NO :1)。
6.一种包含抗原结合结构域的抗体，该抗原结合结构域结合人IL-23 (SEQ ID NO 66), 其中抗体与人IL_23(SEQ ID NO :66)的结合水平高于抗体与突变IL-23拟65A (SEQ ID NO: 75)的结合水平。
7.如权利要求
6中所述的抗体，其中抗体结合作为单体(人IL-12p40)和作为同二聚体(人IL-12p80)存在的人IL-12p40，并且其中抗体抑制人IL-12与人IL-12R β 2的结合和人IL-23与人IL-23R的结合，但不抑制人IL-12或人IL-23或人IL_12p40或人IL_12p80 与人IL-12Ri3 1的结合。
8.一种抗体，其包含3个选自以下的重链⑶R序列 HCDRl DYY&H，其中& = M 或 L ；hcdr2 widpengdtex2ah(fqg，其中& = Y、η 或 s ； hcdr3 x3kelryfdv，其中 X3 = C、A、N、D、E、Q、G、H、I、L、P 或 V。
9.一种抗体，其包含3个选自以下的轻链⑶R序列 LCDRl RM4)(5SISINLH，其中& = S 或 P ； A = Q 或 R ； LCDR2 FA)(6QSX7S，其中 & = S 或 R ； X7 = I 或 T ； LCDR3 QQSNSX8PLTjJt^ & = W 或 F。
10.一种抗体，其包含3个选自以下的重链⑶R序列 HCDRl DYY&H，其中& = M 或 L ；hcdr2 widpengdtex2ah(fqg，其中& = y、h 或 s ； hcdr3 x3kelryfdv，其中x3 = c、a、n、d、e、q、g、h、i、l、p 或 v， 和3个选自以下的轻链cdr序列 LCDRl RM4)(5SISINLH，其中 & = s 或 p ； a = q 或 r ； lcdr2 fa)(6qsx7s，其中 & = s 或 r ； x7 = i 或 t ； lcdr3 QQSNSX8pltjJt^ & = w 或 f。
11.如权利要求
8或权利要求
10中所述的抗体，其中抗体进一步包含选自seqid no 202、seq id no :205、seq id no :208、seq id no :203、seq id no :206、seq id no :209、 seq id no 204或seq id no :207的人重链受体框架序列。
12.如权利要求
9或权利要求
10中所述的抗体，其中抗体进一步包含选自seqid no 210,seq id n0:213、seq id no :216,seq id no :211,seq id no :214,seq id no :212 或 seq id no 215的人轻链受体框架序列。
13.如权利要求
8或权利要求
9中所述的抗体，其中抗体进一步包含抗体人受体框架， 该框架在关键残基处包含至少一个框架区氨基酸置换，所述关键残基选自邻近⑶r的残基、糖基化位点残基、罕见的残基、能够与人il-12的p40亚基相互作用的残基、能够与cdr 相互作用的残基、规范的残基、重链可变区和轻链可变区之间的接触残基；Veriner区内的残基和Chothia限定的VH结构域⑶Rl与Kabat限定的第一重链框架之间重叠区域中的残基。
14.如权利要求
8或权利要求
9中所述的抗体，其中抗体进一步包含抗体人受体框架， 该框架包含至少一个框架区氨基酸置换，其中框架的氨基酸序列与所述人受体框架的序列为至少65%相同，并包含至少70个与所述人受体框架相同的氨基酸残基。
15.如权利要求
8或权利要求
10中所述的抗体，其中抗体包含选自以下的免疫球蛋白重可变区seq id no :6, seq id no 62, seq id no 114, seq id no 142, seq id no :28、 seq id no 87,seq id no 115、seq id no 143,seq id no 29、seq id no 88、seq id n0: 116、seq id no: 144、seq id no 30,seq id no :90,seq id no :117、seq id no: 145、seq id no :3useq id no :91、seq id no :118,seq id no :146、seq id no :33、seq id no :92, seq id no :119、seq id no :147, seq id no :34、seq id no :93、seq id no :120, seq id no :148, seq id no :35、seq id no :94、seq id no :122, seq id no :149, seq id no :36、 seq id no :95,seq id no :124,seq id no :150,seq id no :38、seq id no :96、seq id no: 125、seq id no: 151、seq id no :39, seq id no :97, seq id no: 126、seq id no: 152、seq id no :40,seq id no :99、seq id no :127,seq id no : 153、seq id no :41、seq id no :100, seq id no :128, seq id no :154, seq id no :42, seq id no =iouseq id no :129, seq id no: 155、seq id no :43, seq id no: 102、seq id no: 130、seq id no: 156、seq id no :44,SEQ ID NO: 103、SEQ ID NO: 131、SEQ ID NO: 157、SEQ ID NO :45, SEQ ID NO: 104、SEQ ID NO :132,SEQ ID NO :158,SEQ ID NO :53,SEQ ID NO :105,SEQ ID NO :133,SEQ ID NO :159, SEQ ID NO :54, SEQ ID NO :106, SEQ ID NO :134, SEQ ID NO :160, SEQ ID NO :55、SEQ ID NO :107,SEQ ID NO :135,SEQ ID NO :161、SEQ ID NO :56、SEQ ID NO :108,SEQ ID NO :136, SEQ ID NO :162, SEQ ID NO :57, SEQ ID NO :109, SEQ ID NO :137, SEQ ID NO :163, SEQ ID NO :58, SEQ ID NO :110、SEQ ID NO: 138、SEQ ID NO: 164、SEQ ID NO :59, SEQ ID NO: 111、 SEQ ID NO: 139、SEQ ID NO: 165、SEQ ID NO :60, SEQ ID NO :112、SEQ ID NO: 140、SEQ ID NO :166, SEQ ID N0:61、SEQ ID NO :113, SEQ ID NO :141 或 SEQ ID N0:167。
16.如权利要求
9或权利要求
10中所述的抗体，其中抗体包含选自以下的免疫球蛋白轻可变区SEQ ID NO 7,SEQ ID NO :169、SEQ ID NO :181、SEQ ID NO 193,SEQ ID NO :32、 SEQ ID NO :170,SEQ ID NO 182,SEQ ID NO 194,SEQ ID N0:37、SEQ ID NO 171,SEQ ID NO :183,SEQ ID NO 195,SEQ ID NO 42、SEQ ID NO 172,SEQ ID NO 184,SEQ ID NO :196、 SEQ ID NO :46、SEQ ID NO :173、SEQ ID NO :185、SEQ ID NO :197、SEQ ID NO :47、SEQ ID NO :174,SEQ ID NO 186,SEQ ID NO :198、SEQ ID NO 48、SEQ ID NO 175,SEQ ID NO :187、 SEQ ID NO :199, SEQ ID NO 49, SEQ ID NO 176, SEQ ID NO 188, SEQ ID NO 200, SEQ ID NO 50, SEQ ID NO: 177、SEQ ID NO: 189、SEQ ID NO :201、SEQ ID NO :51、SEQ ID NO: 178、 SEQ ID NO: 190、SEQ ID NO :52, SEQ ID NO :179 或 SEQ ID NO :192。
17.如权利要求
10中所述的抗体，其中抗体包含两个免疫球蛋白可变区，其中所述两个免疫球蛋白可变区选自SEQ ID NO:6&SEQ ID NO:7SEQ ID NO:6&SEQ ID NO:169SEQ ID NO:28&SEQ ID NO:179SEQ ID NO:29&SEQ ID NO:179SEQ ID NO:30&SEQ ID NO:179SEQ ID NO:31&SEQ ID NO:32SEQ ID NO:33&SEQ ID NO:179SEQ ID NO:34&SEQ ID NO:51SEQ ID NO:34&SEQ ID NO:47SEQ ID NO:35&SEQ ID NO:179SEQ ID NO:36&SEQ ID NO:37SEQ ID NO:38&SEQ ID NO:179SEQ ID NO:38&SEQ ID NO:51SEQ ID NO:38&SEQ ID NO:32SEQ ID NO:38&SEQ ID NO:47SEQ ID NO:38&SEQ ID NO:52SEQ ID NO:39&SEQ ID NO:179SEQ ID NO:40&SEQ ID NO:179SEQ ID NO:41&SEQ ID NO:42SEQ ID NO115&SEQ ID NO:190SEQ ID NO115&SEQ ID NO:192SEQ ID NO115&SEQ ID NO:193SEQ ID NO115&SEQ ID NO:194SEQ ID NO115&SEQ ID NO:195SEQ ID NO115&SEQ ID NO:196SEQ ID NO115&SEQ ID NO:197SEQ ID NO115&SEQ ID NO:198SEQ ID NO115&SEQ ID NO:199SEQ ID NO115&SEQ ID NO:200SEQ ID NO115&SEQ ID NO:201SEQ ID NO116&SEQ ID NO:173SEQ ID NO116&SEQ ID NO:174SEQ ID NO116&SEQ ID NO:175SEQ ID NO116&SEQ ID NO:176SEQ ID NO116&SEQ ID NO:177SEQ ID NO117&SEQ ID NO:173SEQ ID NO117&SEQ ID NO:174SEQ ID NO:117&SEQ ID NO:175SEQ ID NO: 43&SEQ ID NO179SEQ ID NO:117&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO: 44&SEQ ID NO179SEQ ID NO:117&SEQ ID NO: 177SEQ ID NO: 44&SEQ ID NO51SEQ ID NO:118&SEQ ID NO: 178SEQ ID NO: 44&SEQ ID NO32SEQ ID NO: 118&SEQ ID NO: 179SEQ ID NO: 44&SEQ ID NO47SEQ ID NO119&SEQ ID NO: 178SEQ ID NO: 44&SEQ ID NO52SEQ ID NO119&SEQ ID NO: 179SEQ ID NO: 45&SEQ ID NO179SEQ ID NO: 119&SEQ ID NO: 51SEQ ID NO: 45&SEQ ID NO179SEQ ID NO119&SEQ ID NO: 189SEQ ID NO: 53&SEQ ID NO41SEQ ID NO119&SEQ ID NO: 46SEQ ID NO: 54&SEQ ID NO179SEQ ID NO119&SEQ ID NO: 47SEQ ID NO55&SEQ ID NO179SEQ ID NO119&SEQ ID NO: 48SEQ ID NO56&SEQ ID NO179SEQ ID NO.119&SEQ ID NO: 49SEQ ID NO57&SEQ ID NO179SEQ ID NO:119&SEQ ID NO: 50SEQ ID NO58&SEQ ID NO42SEQ ID NO:119&SEQ ID NO: 51SEQ ID NO59&SEQ ID NO179SEQ ID NO:119&SEQ ID NO: 52SEQ ID NO:60&SEQ ID NO179SEQ ID NO:120&SEQ ID NO: 178SEQ ID NO:61&SEQ ID NO42SEQ ID NO:120&SEQ ID NO: 179SEQ ID NO:62&SEQ ID NO42SEQ ID NO:122&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO:87&SEQ ID NO7SEQ TD NO:124&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO:88&SRQ ID NO7SEQ ID NO: 125&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO:90&SEQ ID NO7SEQ ID NO:126&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO:91&SEQ ID NO7SEQ ID NO:127&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO:92&SEQ ID NO7SEQ ID NO:128&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO:93&SEQ ID NO7SEQ ID NO:129&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO:94&SEQ ID NO7SEQ ID NO:130&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO:95&SEQ ID NO7SEQ ID NO:131&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO:96&SEQ ID NO7SEQ ID NO:132&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO:97&SEQ ID NO7SEQ ID NO:133&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO:99&SEQ ID NO7SEQ ID NO:134&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO:100&SEQ ID NO7SEQ ID NO:135&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO:101&SEQ ID NO7SEQ ID NO:136&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO:102&SEQ ID NO7SEQ ID NO:137&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO:103&SEQ ID NOSEQ ID NO:138&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO:104&SEQ ID NOSEQ ID NO:139&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO:105&SEQ ID NOSEQ ID NO:140&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO:106&SEQ ID NO:171SEQ ID NO:141&SEQ ID NO: 176SEQ ID NO:106&SEQ ID NO:172SEQ ID NO:142&SEQ ID NO:176SEQ ID NO:107&SEQ ID NO:171SEQ ID NO:143&SEQ ID NO:176SEQ ID NO::107&SEQ ID NO::172SEQ ID NO:144&SEQ ID NO:176SEQ ID NO::108&SEQ ID NO::171SEQ ID NO::145&SEQ ID NO:176SEQ ID NO::108&SEQ ID NO::172SEQ ID NO::146&SEQ ID NO::176SEQ ID NO:109&SEQ ID NO::170SEQ ID NO::147&SEQ ID NO::176SEQ ID NO:110&SEQ ID NO:171SEQ ID NO:148&SEQ ID NO:176SEQ ID NO:111&SEQ ID NO:172SEQ ID NO:149&SEQ ID NO:176SEQ ID NO:112&SEQ ID NO:169SEQ ID NO:150&SEQ ID NO:176SEQ ID NO:113&SEQ ID NO:173SEQ ID NO:151&SEQ ID NO:176SEQ ID NO:113&SEQ ID NO:174SEQ ID NO:152&SEQ ID NO:176SEQ ID NO:113&SEQ ID NO:175SEQ ID NO:153&SEQ ID NO:189SEQ ID NO:113&SEQ ID NO:176SEQ ID NO:154&SEQ ID NO:189SEQ ID NO:113&SEQ ID NO:177SEQ ID NO:155&SEQ ID NO:189SEQ ID NO:113&SEQ ID NO:176SEQ ID NO:156&SEQ ID NO:189SEQ ID NO:114&SEQ ID NO:173SEQ ID NO:157&SEQ ID NO:189SEQ ID NO:114&SEQ ID NO:174SEQ ID NO:158&SEQ ID NO:189SEQ ID NO:114&SEQ ID NO:175SEQ ID NO:159&SEQ ID NO:189SEQ ID NO:114&SEQ ID NO:176SEQ ID NO:160&SEQ ID NO:189SEQ ID NO:114&SEQ ID NO:177SEQ ID NO:161&SEQ ID NO:189SEQ ID NO:115&SEQ ID NO:173SEQ ID NO:161&SEQ ID NO:179SEQ ID NO:115&SEQ ID NO:174SEQ ID NO:162&SEQ ID NO:189SEQ ID NO:115&SEQ ID NO:175SEQ ID NO:162&SEQ ID NO:179SEQ ID NO:115&SEQ ID NO:176SEQ ID NO:163&SEQ ID NO:189SEQ ID NO:115&SEQ ID NO:177SEQ ID NO:163&SEQ ID NO:179SEQ ID NO:115&SEQ ID NO:181SEQ ID NO:164&SEQ ID NO:189SEQ ID NO:115&SEQ ID NO:182SEQ ID NO:164&SEQ ID NO:179SEQ ID NO:115&SEQ ID NO:183SEQ ID NO:165&SEQ ID NO:189SEQ ID NO:115&SEQ ID NO:184SEQ ID NO:165&SEQ ID NO:179SEQ ID NO:115&SEQ ID NO:185SEQ ID NO:166&SEQ ID NO:189SEQ ID NO:115&SEQ ID NO:186SEQ ID NO:166&SEQ ID NO:179SEQ ID NO:115&SEQ ID NO:187SEQ ID NO:167&SEQ ID NO:189SEQ ID NO:115&SEQ ID NO:188SEQ ID NO:167&SEQ ID NO:179SEQ ID NO:115&SEQ ID NO:189SEQ ID NO:168&SEQ ID NO:189。
18.如权利要求
1至17任一项中所述的抗体，其中抗体包含选自IgGl、IgG2、IgG3、 IgG4、IgM、IgE或IgA的人或非人灵长类重链免疫球蛋白恒定区。
19.如权利要求
1至17任一项中所述的抗体，其中抗体包含选自κ或λ的人或非人灵长类轻链免疫球蛋白恒定区。
20.如权利要求
1至19任一项中所述的抗体，其中通过有机部分的共价连接来修饰抗体。
21.如权利要求
20中所述的抗体，其中有机部分是直链或支链亲水性聚合基团、脂肪酸基团或脂肪酸酯基团。
22.如权利要求
1至19任一项中所述的抗体，其中将抗体修饰来调节选自抗体依赖性细胞毒性、补体依赖性细胞毒性、血清半衰期、生物分布和结合Fc受体的功能性特征。
23.如权利要求
22中所述的抗体，其中通过蛋白质工程、糖工程或化学方法来进行修饰。
24.一种生产如权利要求
1中所述的抗体的方法，该方法包括I.用人IL-12p40或人IL-12p40的片段来免疫动物，以获得第一组抗体；II.从第一组结合人IL-12和人IL-23的抗体中进行选择，以形成第二组抗体；和III.从第二组抗体中进行选择，所述抗体结合作为单体(人IL_12p40)和作为同二聚体(人IL-12p80)存在的p40并且抑制人IL-12与人IL_12Ri3 2的结合和人IL-23与人 IL-23R的结合但不抑制人IL-12或人IL-23或人IL_12p40或人IL_12p80与人IL-12R3 1结合。
25.如权利要求
M中所述的方法，其中该方法的步骤(II)进一步包括选择还结合具有序列 VQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISV(SEQ ID NO 65)的肽的抗体。
26.生产如权利要求
1中所述的抗体的方法，该方法包括I.用具有序列VQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISV(SEQ ID NO. 65)的肽免疫动物，以获得第一组抗体；II.从第一组结合人IL-12和人IL-23的抗体中进行选择，以形成第二组抗体；和III.从第二组抗体中进行选择，所述抗体结合作为单体(人IL_12p40)和作为同二聚体(人IL-12p80)存在的p40并且抑制人IL-12与人IL_12Ri3 2的结合和人IL-23与人 IL-23R的结合但不抑制人IL-12或人IL-23或人IL_12p40或人IL_12p80与人IL-12R3 1结合。
27.—种生产如权利要求
1中所述的抗体的方法，该方法包括I.筛选人抗体展示文库来选择结合人IL-12和人IL-23的抗体，以形成第一组抗体；和II.从第一组抗体中进行选择，所述抗体结合作为单体(人IL-12P40)和作为同二聚体(人IL-12p80)存在的p40并且抑制人IL-12与人IL_12Ri3 2的结合和人IL-23与人 IL-23R的结合但不抑制人IL-12或人IL-23或人IL_12p40或人IL_12p80与人IL-12R3 1结合。
28.一种核酸分子，其中核酸编码如权利要求
8、10、11、15或17任一项中所述的VH结构域。
29.如权利要求
观中所述的核酸分子，其中核酸分子具有选自以下的序列SEQ ID NO:217SEQ ID NO:254SEQ ID NO:282SEQ ID NO:310SEQ ID NO:218SEQ ID NO:255SEQ ID NO:283SEQ ID NO:311SEQ ID NO:219SEQ ID NO:257SEQ ID NO:284SEQ ID NO:312SEQ ID NO:220SEQ ID NO:258SEQ ID NO:285SEQ ID NO:313SEQ ID NO:222SEQ ID NO:259SEQ ID NO:286SEQ ID NO:314SEQ ID NO:223SEQ ID NO:260SEQ ID NO:287SEQ ID NO:315SEQ ID NO:224SEQ ID NO:261SEQ ID NO:289SEQ ID NO:316SEQ ID NO:225SEQ ID NO:262SEQ ID NO:291SEQ ID NO:317SEQ ID NO:227SEQ ID NO:263SEQ ID NO:292SEQ ID NO:318SEQ ID NO:228SEQ ID NO:264SEQ ID NO:293SEQ ID NO:319SEQ ID NO:229SEQ ID NO:266SEQ ID NO:294SEQ ID NO:320SEQ ID NO:230SEQ ID NO:267SEQ ID NO:295SEQ ID NO:321SEQ ID NO:232SEQ ID NO:268SEQ ID NO:296SEQ ID NO:322SEQ ID NO:233SEQ ID NO:269SEQ ID NO:297SEQ ID NO:323SEQ ID NO:234SEQ ID NO:270SEQ ID NO:298SEQ ID NO:324SEQ ID NO:242SEQ ID NO:271SEQ ID NO:299SEQ ID NO:325SEQ ID NO:243SEQ ID NO:272SEQ ID NO:300SEQ ID NO:326SEQ ID NO:244SEQ ID NO:273SEQ ID NO:301SEQ ID NO:327SEQ ID NO:245SEQ ID NO:274SEQ ID NO:302SEQ ID NO:328SEQ ID NO:246SEQ ID NO: 275SEQ ID NO: 303SEQ ID NO: 329SEQ ID NO:247SEQ ID NO: 276SEQ ID NO: 304SEQ ID NO: 330SEQ ID NO:248SEQ ID NO: 277SEQ ID NO: 305SEQ ID NO: 331SEQ ID NO:249SEQ ID NO: 278SEQ ID NO: 306SEQ ID NO: 332SEQ ID NO:250SEQ ID NO: 279SEQ ID NO: 307SEQ ID NO: 333SEQ ID NO:251SEQ ID NO: 280SEQ ID NO: 308SEQ ID NO: 334SEQ ID NO:252SEQ ID NO: 281SEQ ID NO: 309SEQ ID NO: 335。
30.一种核酸分子，其中核酸编码如权利要求
9、10、12、16或17任一项中所述的VL结构域。
31.如权利要求
30中所述的核酸分子，其中核酸具有选自以下的序列SEQ ID NO:221SEQ ID NO:338SEQ ID NO:350SEQ ID NO:362SEQ ID NO:226SEQ ID NO:339SEQ ID NO:351SEQ ID NO:363SEQ ID NO:231SEQ ID NO:340SEQ ID NO:352SEQ ID NO:364SEQ ID NO:235SEQ ID NO:341SEQ ID NO:353SEQ ID NO:365SEQ ID NO:236SEQ ID NO:342SEQ ID NO:354SEQ ID NO:366SEQ ID NO:237SEQ ID NO:343SEQ ID NO:355SEQ ID NO:367SEQ ID NO:238SEQ ID NO:344SEQ ID NO:356SEQ ID NO:368SEQ ID NO:239SEQ ID NO:345SEQ ID NO:357SEQ ID NO:369SEQ ID NO:240SEQ ID NO:346SEQ ID NO:358SEQ ID NO:370SEQ ID NO:241SEQ ID NO:347SEQ ID NO:359SEQ ID NO:336SEQ ID NO:348SEQ ID NO:361c
32.—种治疗受试者疾病的方法，包括将如权利要求
1至23任一项中所述的抗体给予受试者，其中疾病选自类风湿性关节炎、骨关节炎、反应性关节炎、牛皮癣关节炎、骨质丢失、气道超敏反应、慢性阻塞性肺病、脱髓鞘病症、牛皮癣、多发性硬化、皮肤超敏反应、急性和慢性移植排斥、同种异体移植排斥、移植物抗宿主病、系统性硬化、系统性红斑狼疮、自体免疫炎性肠病、泌尿系炎性病症、心血管疾病、血管炎、周期性发热、葡萄糖代谢障碍、肺病、 癌症、牙周炎、肝基质角膜炎、过敏症、炎性疼痛、脊柱关节病、败血症、脓毒性或内毒素性休克、脑膜炎、外科创伤、自体免疫血液病、阿尔茨海默病、肉状瘤病、硬化、肝炎(包括自体免疫肝炎)、原发性胆汁性肝硬化、葡萄膜炎、甲状腺炎、动脉粥样硬化、脱发、威尔逊氏病、肾小球性肾炎或血脂异常。
33.如权利要求
1至23任一项中所述的抗体在治疗疾病中的用途，其中疾病选自类风湿性关节炎、骨关节炎、反应性关节炎、牛皮癣关节炎、骨质丢失、气道超敏反应、慢性阻塞性肺病、脱髓鞘病症、牛皮癣、多发性硬化、皮肤超敏反应、急性和慢性移植排斥、同种异体移植排斥、移植物抗宿主病、系统性硬化、系统性红斑狼疮、自体免疫炎性肠病、泌尿系炎性病症、心血管疾病、血管炎、周期性发热、葡萄糖代谢障碍、肺病、癌症、牙周炎、肝基质角膜炎、过敏症、炎性疼痛、脊柱关节病、败血症、脓毒性或内毒素性休克、脑膜炎、外科创伤、自体免疫血液病、阿尔茨海默病、肉状瘤病、硬化、肝炎(包括自体免疫肝炎)、原发性胆汁性肝硬化、葡萄膜炎、甲状腺炎、动脉粥样硬化、脱发、威尔逊氏病、肾小球性肾炎或血脂异常。
34.如权利要求
1至23任一项中所述的抗体在制备用于治疗疾病的药物中的用途， 其中疾病选自类风湿性关节炎、骨关节炎、反应性关节炎、牛皮癣关节炎、骨质丢失、气道超敏反应、慢性阻塞性肺病、脱髓鞘病症、牛皮癣、多发性硬化、皮肤超敏反应、急性和慢性移植排斥、同种异体移植排斥、移植物抗宿主病、系统性硬化、系统性红斑狼疮、自体免疫炎性肠病、泌尿系炎性病症、心血管疾病、血管炎、周期性发热、葡萄糖代谢障碍、肺病、癌症、牙周炎、肝基质角膜炎、过敏症、炎性疼痛、脊柱关节病、败血症、脓毒性或内毒素性休克、脑膜炎、外科创伤、自体免疫血液病、阿尔茨海默病、肉状瘤病、硬化、肝炎(包括自体免疫肝炎)、原发性胆汁性肝硬化、葡萄膜炎、甲状腺炎、动脉粥样硬化、脱发、威尔逊氏病、肾小球性肾炎或血脂异常。
35.生产结合人IL-12p40的抗原结合结构域的方法，该方法包括I.通过在包含HCDR1、HCDR2和HCDR3的亲本VH结构域的氨基酸序列中添加、删除、置换或插入一个或多个氨基酸来提供是亲本VH结构域的氨基酸序列变体的VH结构域，其中亲本VH结构域HCDRl、HCDR2和HCDR3是根据权利要求
8的一组⑶R，并任选将由此提供的 VH结构域与一个或多个VL结构域结合，以提供一个或多个VH/VL组合；和II.测试所述为亲本VH结构域的氨基酸序列变体的VH结构域或一个或多个VH/VL组合，来鉴定人IL-12p40的抗体抗原结合结构域。
36.根据权利要求
35所述的方法，其中亲本VH结构域具有权利要求
15中所示的VH结构域氨基酸序列。
37.根据权利要求
35所述的方法，其中通过CDR诱变提供所述VH结构域，其是亲本VH 结构域的氨基酸序列变体。
38.根据权利要求
35或权利要求
36所述的方法，其中通过在包含IXDRl、IXDR2和 LCDR3的亲本VL结构域的氨基酸序列中添加、删除、置换或插入一个或多个氨基酸来提供所述一个或多个VL结构域，产生了每个为亲本VL结构域的氨基酸序列变体的一个或多个 VL结构域，其中亲本VL结构域IXDRl、IXDR2和IXDR3是根据权利要求
9的VL组的⑶R。
39.根据权利要求
38所述的方法，其中亲本VL结构域具有权利要求
16中所示的VL结构域氨基酸序列。
40.根据权利要求
38所述的方法，其中通过CDR诱变提供所述VL结构域，其是亲本VL 结构域的氨基酸序列变体。
41.根据权利要求
35至40任一项所述的方法，进一步包括产生作为IgG、scFv或Fab 抗体分子成分的抗体抗原结合结构域。
42.生产结合人IL-12p40的抗原结合结构域的方法，该方法包括I.提供编码VH结构域的起始核酸或各自编码VH结构域的核酸起始库，其中VH结构域选自权利要求
15，II.将所述起始核酸或起始库与一个或多个编码氨基酸序列突变或通过氨基酸序列突变产生的供体核酸结合，使得所述一个或多个供体核酸插入起始核酸或起始库的VH结构域中，以提供编码VH结构域的核酸产物库；表达所述产物库的核酸，以产生产物VH结构域；III.任选将所述产物VH结构域与一个或多个VL结构域结合；IV.选择人IL-12p40的抗原结合结构域，V.回收所述抗原结合结构域或编码其的核酸，其中，抗原结合结构域包含产物VH结构域和任选的VL结构域。
43.一种生产结合人IL-12p40的抗原结合结构域的方法，该方法包括I.提供编码VL结构域的起始核酸或各自编码VL结构域的核酸起始库，其中VL结构域选自权利要求
16，II.将所述起始核酸或起始库与一个或多个编码氨基酸序列突变或通过氨基酸序列突变产生的供体核酸结合，使得所述一个或多个供体核酸插入起始核酸或起始库的VL结构域中，以提供编码VL结构域的核酸产物库；表达所述产物库的核酸，以产生产物VL结构域；III.任选将所述产物VL结构域与一个或多个VH结构域结合；IV.选择人IL-12P40的抗原结合结构域，V.回收所述抗原结合结构域或编码其的核酸，其中抗原结合结构域包含产物VH结构域和任选的VL结构域。
44.根据权利要求
42或43所述的方法，其中通过所述HCDRl和/或HCDR2和/或HCDR3 的突变来产生供体核酸。
45.根据权利要求
42或43所述的方法，包括通过核酸的随机突变来提供供体核酸。
专利摘要
本发明提供了包含抗原结合结构域的抗体，该抗原结合结构域结合人IL-12和人IL-23。抗体结合作为单体(人IL-12p40)和作为同二聚体(人IL-12p80)存在的人IL-12p40，并且抗体抑制人IL-12与人IL-12Rβ2的结合和人IL-23与人IL-23R的结合，但不抑制人IL-12或人IL-23或人IL-12p40或人IL-12p80与人IL-12Rβ1的结合。
文档编号A61P19/04GKCN102177178SQ200980140286
公开日2011年9月7日 申请日期2009年8月14日
发明者A·G·多伊尔, A·J·波, A·W·克拉克, B·瓦伊, L·D·普尔东, P·A·詹宁森 申请人:赛福伦澳大利亚私人有限公司导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan