专利名称:调节tau水平的方法和组合物的制作方法
调节TAU水平的方法和组合物
交叉引用
本申请要求2009年11月6日申请的美国临时专利申请No. 61/258，822的优先权，此申请在此全文参考并入。
背景技术：
神经退行性疾病表示患有遗传性和获得性神经疾病的异质性群体,其导致生命的中期至后期出现严重的和进行性的认知和运动损伤。导致痴呆的最常见原因为阿尔茨海默 氏症。仅有5%以下阿尔茨海默氏症的致病原因涉及遗传因素,其余病例为散发性的。
Tau蛋白在中枢神经系统中表达，其通过稳定细胞内微观网络而在神经结构中起关键作用。截断、高度磷酸化或扰乱六种天然存在的Tau亚型之间的平衡会使Tau蛋白的生理功能受损，导致神经纤维缠结(NFT)、营养障碍性神经炎和神经毡细丝的形成。这些结构代表了阿尔茨海默氏症(AD)超微结构的标志。这些结构的主要蛋白亚基为与蛋白Tau相关的微管。在AD患者尸体解tfij中发现,NfT的量与包括智力减退在内的临床症状相关。因此,Tau蛋白在AD病理学过程中起着关键作用。与额颞痴呆疾病相关的Tau基因和与染色体17 (FTDP-17)相关的帕金森氏病的特定突变共分离的最新发现确证了 Tau蛋白的某些异常可能是导致受累个体出现神经退行性病变和痴呆的主要原因。
本领域需要治疗Tau病变的方法。
文献
U. S.专利公开号 2009/0117543 ；U. S.专利公开号 2008/0194803 ；U. S.专利公开号 2006/0025337。
发明概述
提供了一种降低细胞内乙酰化Tau多肽水平的方法和试剂。还提供了一种治疗个体Tau病变的方法。还提供了一种诊断个体认知损伤性疾病的方法。还提供了一种鉴定适于治疗Tau病变的试剂的方法。
附图的简要说明
图IA-G描述了 Tau体外和体内的乙酰化。图IB描述了 SEQ ID NO: I。
图2A-E描述了利用p300乙酰转移酶进行的Tau乙酰化。
图3A-1描述了在体外细胞培养中利用SIRTUSIRT2、和IIDAC6进行的Tau脱乙酰化。
图4A-F描述了在体外神经元和体内内SIRTl介导的Tau乙酰化的降低。图4D描述了 SEQ ID NO:52。
图5A-C描述了 SIRTl与Tau的相互作用。
图6A-K描述了 Tau更新和Tau泛素化对乙酰化的影响。
图7A-D描述了在病理条件下Tau乙酰化升高。
图8A-D描述了降低Tau乙酰化对p_Tau的影响。
图9A-D描述了人Tau亚型氨基酸序列的氨基酸序列比对。[0016]
图10展示了大鼠、小鼠、和人Tau (亚型2)氨基酸序列的氨基酸序列比对。
定义
本文所用术语“治疗”、“治疗的”及类似术语是指获得目标药理学和/或生理学作用。从完全或部分预防疾病或其症状方面来说,这种作用可以是预防性的,和/或从部分或完全治愈疾病和/或由该疾病产生的不良影响来说,这种作用可以是治疗性的。本文所用术语“治疗”包括在哺乳动物，例如人中进行的任何疾病治疗，包括 Ca)在可能易患该疾病但尚未诊断患有该疾病的对象中防止该疾病的发生；(b)抑制疾病，即阻滞其发展；以及(C)缓解疾病,例如使疾病消退,例如完全或部分消除疾病的症状。
术语“有效量”或“治疗有效量”是指足以提供治疗所需治疗疾病状态或提供目标效应(例如，诱导有效的免疫应答、降低慢性免疫活动过度等)的剂量。准确剂量随多种因素而改变，如对象相关变量(例如，体重、年龄等)、疾病、和进行的治疗。
术语“个体”、“宿主”、“对象”、和“患者”在本文中可互换使用，是指哺乳动物,包括但不限于，鼠类、兔类、非人灵长类动物、人等。在某些实施方式中，个体是人。在某些实施方式中，个体是啮齿类动物(例如，小鼠、大鼠等)或兔类。
“药学上可接受的赋形剂”、“药学上可接受的稀释剂”、“药学上可接受的载体”、和“药学上可接受的辅助剂”是指用于制备药物组合物的通常安全、无毒且无生物学上或其它方面不期望作用的赋形剂、稀释剂、载体、和辅助剂,包括兽用药物及人用药物可接受的赋形剂、稀释剂、载体、和辅助剂。在说明书和权利要求
书中使用的“药学上可接受的赋形剂、稀释剂、载体和辅助剂”包括一种及一种以上所述赋形剂、稀释剂、载体、和辅助剂。
如本文所使用的，“药物组合物”是指包括适于给予对象,如哺乳动物,例如人，的组合物。一般情况下药物组合物”是无菌的,且不含可在对象中诱发令人不适应答的污染物(例如,药物组合物中的化合物为药用级)。可以将药物组合物设计为通过包括口服、含月艮、直肠、胃肠外、腹膜内、皮内、气道内等多种不同给药途径给药至需要的对象或患者。在某些实施方式中，组合物适于使用二甲亚砜(DMS0)以外的渗透增强剂通过透皮途径给药。在其它实施方式中，药物组合物适于通过透皮给药以外的其它途径给药。在某些实施方式中，药物组合物包括化合物和药学上可接受的赋形剂。在某些实施方式中，药学上可接受的赋形剂不是DMS0。
如本文所使用的,本发明化合物的“药学上可接受的衍生物”包括盐、酯、烯醇醚、烯醇酯、缩醛、缩酮、原酸酯、半缩醛、半缩酮、酸、碱、溶剂化物、水合物或其前药。本领域技术人员采用制备此类衍生物的已知方法就可以很容易地制备此类衍生物。可以将制备的化合物给予动物或人，其不具有实质性的毒性作用，且具有药物活性或是前药。
化合物的“药学上可接受的盐”指母体化合物药学上可接受的并具有目标药理学活性的盐。所述盐包括(1)酸加成盐,与无机酸形成如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等；或与有机酸形成如乙酸、丙酸、己酸、环戊基丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、3- (4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、I，2-二乙磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘酚磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸、葡萄糖庚酸、4，4’ -亚甲基-(3-羟基-2-烯-I-羧酸)、3_苯基丙酸、叔戊酸、叔丁基乙酸、十二烷基硫酸、葡萄糖酸、谷氨酸、羟基萘酸、水杨酸、硬脂酸、粘康酸或类似物；或(2)母体化合物中存在的酸质子被金属离子所取代形成的盐，金属离子例如碱金属离子、碱土金属离子、或铝离子；或与有机碱配位形成的盐,有机碱如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、N-甲基葡糖胺等。
在进一步描述本发明之前,应理解,本发明不限于本文所述的具体实施方式
，因为它们当然可能变化。还应理解，本文所用术语的目的只是描述具体实施方式
,不应为限制性，因为本发明范围仅受所附权利要求
书的限制。
给出数值范围时，应理解该范围上下限之间、以下限单位的十分之一为间隔的各间插数值，以及所述范围的任何其它标成或间插数值均包括在本发明范围内，除非文中另有明确说明。所述较小范围内可独立地包含这些较小范围的上下限，它们也属于本发明范围，除非明确地排除所述范围的上下限。所述范围包含一个或两个限值时,除去这^-个或两个限值以外的范围也包括在本发明范围内。
除非另有说明，否则本文所用的所有科技术语具有本发明所属领域普通技术人员所理解的通常含义。虽然也可采用与本文所述相似或等同的任何方法和材料实施或测试本 发明,但下面描述了优选的方法和材料。本文所述的所有发表物通过引用纳入本文,从而公开或描述与所引用发表物有关联的方法和/或材料。
应注意到,本文和所附权利要求
书所用的单数形式“一个”、“一种”和“这种”包括复数含义，除非另有明确说明。因此，例如,提到“一种Tau多肽”包括多种这类Tau多肽，提至r这种试剂”包括本领域技术人员已知的一种或多种试剂和其等同物,等等。还注意到，可将权利要求
书撰写为排除任何可选元素。如果这样，该声明应作为使用这类排除性术语，如“只有”、“仅仅”等以及引用权利要求
元素，或使用“负”限制的前提基础。
本文讨论的发表物仅仅是为了提供早于本申请申请日的公开内容。本文中的讨论不可被解释为承认本发明不能凭借先有发明而享受早于这些发表物的发明日。另外，所提供发表物的日期可能与实际
公开日期不同，可能需要单独验证。
发明详述
提供了一种降低细胞内乙酰化Tau多肽水平的方法和试剂。还提供了一种治疗个体Tau病变的方法。还提供了--种诊断个体认知损伤性疾病的方法。还提供了一种鉴定适于治疗Tau病变的试剂的方法。
进行了以下观察l)Tau乙酰化；2)在早期阿尔茨海默氏症(例如,轻度认知损伤)患者中Tau乙酰化增加；3)在疾病过程中Tau乙酰化先于Tau磷酸化；4)组蛋白脱乙酰基酶(例如,SIRT1、SIRT2、HDAC6))可以使Tau脱乙酰化；以及5)组蛋白乙酰基转移酶(例如，p300)可以使Tau乙酰化。抑制Tau乙酰化的试剂和使乙酰化的Tau脱乙酰化的试剂适于降低细胞中乙酰化Tau的水平，例如,神经元或神经胶质细胞,所述细胞可产生Tau。所述试剂可用于治疗个体的Tau病变。
乙酰化Tau的水平可以作为认知损伤性疾病的诊断指标,可以作为Tau病变治疗应答的标记物。因而，提供了可用于多种诊断检测的乙酰化Tau特异性抗体。
可以通过鉴别提高乙酰化Tau脱乙酰化的试剂,或通过鉴别抑制Tau乙酰化的试剂来鉴定用于治疗Tau病变的候选试剂。因而,本发明公开了鉴定适于治疗Tau病变的试剂的方法。
在神经元细胞中降低乙酰化TAU多肽水平的方法
本发明公开了一种在细胞中(例如，正常产生Tau的细胞,例如，神经元或神经胶质细胞)降低乙酰化Tau(Ac-Tau)多肽水平的方法。该方法通常涉及使细胞(例如,神经元或神经胶质细胞)与在细胞内降低Ac-Tau多肽水平的试剂接触，例如，在细胞内提高Ac-Tau多肽脱乙酰化的多肽活性的试剂；在细胞内降低Tau多肽乙酰化的多肽活性的试剂；等等。本发明公开了一种治疗个体Tau病变的方法。所述方法包括给予所需个体治疗有效量的降低个体细胞(例如,神经元或神经胶质细胞)内Ac-Tau水平的试剂。
Tau氨基酸序列是本领域已知的。参见，例如下列氨基酸序列(括号内为GenBank登录号)人Tau转录变体ImRNA (NM^O 16835. 3)和亚型I蛋白(NP_058519. 2);人Tau转录变体2mRNA (NM—005910. 4)和亚型2蛋白(NP—005901. 2);人Tau转录变体3mRNA(NM_016834. 3)和亚型 3 蛋白(NP_058518. I);人 Tau 转录变体 4mRNA (NMJ)16841. 3)和亚型4蛋白(NP_058525. I)；人Tau转录变体5mRNA (NM_001123067. 2)和亚型5蛋白(NPJ)01116539. I);以及人 Tau 转录变体 6mRNA (NM_001123066. 2)和亚型 6 蛋白(NPJ)01116538. I)。
图9A-D(分别为SEQ ID NOs: 1_6)中描述了示例性的Tau氨基酸序列,其中图9A-D 的序列为智人Tau亚型2 (GenBank登录号NP_005901 ；SEQ ID NO: I);智人Tau亚型3(GenBank 登录号 NP—058518 ；SEQ ID NO: 2);智人 Tau 亚型 4 (GenBank 登录号 NP—058525 ；SEQ ID NO:3);智人 Tau 亚型 5 (GenBank 登录号 NP—001116539 ；SEQ ID NO:4);智人 Tau亚型I (GenBank登录号NP_058519 ;SEQ ID NO: 5);以及智人Tau亚型6 (GenBank登录号NP_001116538 ；SEQ ID N0:6)。在图9A_D中对SEQ ID NOs: 1_6所示的氨基酸序列进行了比对.。
图10 描述了对人 Tau 亚型 I (SEQ ID NO: I)、大鼠 Tau (SEQ ID N():7)、和小鼠Tau (SEQ ID N0:8)氨基酸序列的比对。
Tau多肽可以包含与SEQ ID NOs: 1-6所示任一氨基酸序列中约350个连接的氨基酸组成的氨基酸序列具有至少约75%、至少约80%、至少约85%、至少约90%、至少约95%、至少约98%、至少约99%、或100%同一性的氨基酸序列。Tau多肽可以包含与SEQ ID N0:2(智人Tau亚型3)所示氨基酸序列中约350个至383个连接的氨基酸组成的氨基酸序列具有至少约75%、至少约80%、至少约85%、至少约90%、至少约95%、至少约98%、至少约99%、或100%同一性的氨基酸序列。Tau多肽可以包含与SEQ ID NO:4 (智人Tau亚型5)所不氨基酸序列中约350个至约412个连接的氨基酸组成的氨基酸序列具有至少约75%、至少约80%、至少约85%、至少约90%、至少约95%、至少约98%、至少约99%、或100%同一性的氨基酸序列。Tau多肽可以包含与SEQ ID NO: I (智人Tau亚型2)所示氨基酸序列中约350个至约400个或约400个至约441个连接的氨基酸组成的氨基酸序列具有至少约75%、至少约80%、至少约85%、至少约90%、至少约95%、至少约98%、至少约99%、或100%同一性的氨基酸序列。Tau多肽可以包含与SEQ ID NO:5 (智人Tau亚型I)所示氨基酸序列中约350个至约400个、约400个至约500个、约500个至约600个、约600个至约700个、或约700个至约758个连接的氨基酸组成的氨基酸序列具有至少约75%、至少约80%、至少约85%、至少约90%、至少约95%、至少约98%、至少约99%、或100%同一性的氨基酸序列。Tau多肽可以包含与SEQID NO:6 (智人Tau亚型6)所示氨基酸序列中约350个至约400个、约400个至约500个、约500个至约600个、约600个至约700个、或约700个至约776个连接的氨基酸组成的氨基酸序列具有至少约75%、至少约80%、至少约85%、至少约90%、至少约95%、至少约98%、至少约99%、或100%同一性的氨基酸序列。
图IB提供了 Tau 型2多肽(SEQ ID NO: I)的氨基酸序列。SEQ IDNO: I所示以及图IB中显示的氨基酸序列的微管蛋白结合区域包括氨基酸243-274、氨基酸275-305、和氨基酸337-368。其它Tau多肽的相应微管蛋白结合区域可以很容易地通过实验确定,或利用图12A-D所示的氨基酸序列比对检验。
Tau亚型2多肽(例如,如图IB所述和SEQ ID NO: I所示)的可能磷酸化位点包括下述氨基酸46、50、69、111、123、153、175、181、195、198、199、202、205、208、210、212、214、217、231、235、237、238、258、262、293、305、320、324、352、356、373、394、396、400、404、409、412、413、416、和422。例如，Tau多肽的…一个或多个丝氨酸残基46、199、202、235、262、396、404、和422和/或一个或多个苏氨酸残基50、69、111、153、175、181、205、212、217、和231可以被磷酸化。其它Tm多肽的相应磷酸化位点可以很容易地通过实验确定，或利用图9A-D和图10所示的氨基酸序列比对检验。
Tau多肽的长度可以为约350个氨基酸至约780个氨基酸,例如,约350个氨基酸至约385个氨基酸，约385个氨基酸至约415个氨基酸，约415个氨基酸至约445个氨基酸，约445个氨基酸至约760个氨基酸，或约760个氨基酸至约780个氨基酸。在某些实施方式中，Tau多肽的长度为352个氨基酸、383个氨基酸、412个氨基酸、441个氨基酸、758个氨基酸、或776个氨基酸。
Tau多肽中的一些赖氨酸(Lys)残基可以被乙酰化。例如，Tau亚型2的一个或多个氨基酸可以被乙酰化，包括但不限于，Lys-163、Lys-174、Lys-180、Lys-190、Lys-267、Lys-274、Lys-281、Lys-369、和 Lys-385 (例如，图 IB 中所述的和 SEQID NO: I 所示的氨基酸序列)。其它Tau多肽的相应乙酰化位点可以很容易地通过实验确定(例如,实施例中所描述的)，或利用图9A-D所示的氨基酸序列比对检验。例如，如图9A-D所示，Tau亚型2中的Lys-163与Tau亚型3中的氨基酸105、Tau亚型4中的氨基酸105、Tau亚型5中的氨基酸134、Tau亚型6中的氨基酸480、和Tau亚型I中的氨基酸580对应。
在某些实施方式中，乙酰化Tau多肽为Tau亚型2多肽的Lys-163, Lys-174,Lys-180、Lys-190、Lys-267、Lys-274、Lys-281、Lys-369、和 Lys-385 的两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、或九个残基或不同Tau亚型相应赖氨酸残基乙酰化。在某些实施方式中，乙酰化Tau多肽包括Tau亚型2多肽的乙酰化的Lys-1.63、乙酰化的Lys-174、和乙酰化的Lys-190或不同Tau亚型的相应的乙酰化的赖氨酸残基。在某些实施方式中，乙酰化Tau多肽包括Tau亚型2多肽的乙酰化的Lys-163、乙酰化的Lys-174、乙酰化的Lys-180、乙酰化的Lys-190、乙酰化的Lys-267、乙酰化的Lys274、乙酰化的Lys-281、乙酰化的Lys-369、和乙酰化的Lys-385或不同Tau亚型的相应的乙酰化的赖氨酸残基。
在正常产生Tau的细胞(例如,神经元细胞；神经胶质细胞)内降低乙酰化Tau多肽水平的试剂包括与不存在该试剂时细胞内乙酰化Tau多肽的水平相比使细胞内乙酰化Tau多肽的水平降低至少约10%、至少约15%、至少约20%、至少约25%、至少约30%、至少约35%、至少约40%、至少约45%、至少约50%、至少约60%、至少约70%、至少约80%、或80%以上的试剂。
细胞内(例如,在正常产生Tau的细胞内，如神经元或神经胶质细胞)乙酰化Tau多肽的水平降低可以导致磷酸化Tau水平降低和/或总Tau水平降低。因此，在某些实施方式中，降低细胞内(例如,在正常产生Tau的细胞内，如神经元或神经胶质细胞)乙酰化Tau多肽水平的试剂也可以降低细胞内磷酸化Tau多肽的水平。在某些实施方式中，在正常产生Tau的细胞内(例如，神经元细胞；神经胶质细胞)降低乙酰化Tau多肽水平的试剂使细胞内磷酸化Tau的水平与不存在该试剂时细胞内磷酸化Tau的水平相比降低至少约10%、至少约15%、至少约20%、至少约25%、至少约30%、至少约35%、至少约40%、至少约45%、至少约50%、至少约60%、至少约70%、至少约80%、或80%以上。
细胞内(例如，在正常产生Tau的细胞内，如神经元或神经胶质细胞)乙酰化Tau多肽的水平降低可以导致总Tau水平降低。这样,在某些实施方式中，降低细胞内(例如，在正常产生Tau的细胞内，如神经元或神经胶质细胞)乙酰化Tau多肽水平的试剂也可以降低细胞内总Tau多肽的水平。在某些实施方式中，在正常产生Tau的细胞内(例如，神经元细胞；神经胶质细胞)降低乙酰化Tau多肽水平的试剂使细胞内总Tau的水平与不存在该试剂时细胞内总Tau的水平相比降低至少约10%、至少约1.5%、至少约20%、至少约25%、至少约30%、至少约35%、至少约40%、至少约45%、至少约50%、至少约60%、至少约70%、至少约80%、或80%以上。
细胞内(例如，在正常产生Tau的细胞内，如神经元或神经胶质细胞)乙酰化Tau多肽水平的降低可以导致Tau多肽生物学活性的增加。这样,在某些实施方式中，降低细胞内(例如,在正常产生Tau的细胞内，如神经元或神经胶质细胞)乙酰化Tau多肽水平的试剂也可以增加细胞内Tau多肽的生物学活性。在某些实施方式中，在正常产生Tau的细胞内(例如,神经元细胞；神经胶质细胞)降低乙酰化Tau多肽水平的试剂使细胞内Tau多肽的活性水平与不存在该试剂时细胞内Tau多肽的活性水平相比增加至少约10%、至少约15%、至少约20%、至少约25%、至少约30%、至少约35%、至少约40%、至少约45%、至少约50%、至少约60%、至少约70%、至少约80%、至少约2倍、至少约2. 5倍、至少约3倍、至少约5倍、至少约7倍、至少约10倍、或10倍以上。Tm生物学活性包括例如微管的稳定化作用。
增加Tau脱乙酰化的试剂
增加Tau脱乙酰化的试剂包括使乙酰化的Tau多肽脱乙酰化的多肽活性增加的试剂。使乙酰化的Tau多肽脱乙酰化的多肽包括,例如组蛋白脱乙酰基酶、SIRTU SIRT2、IIDAC6等。使乙酰化的Tau多肽脱乙酰化的多肽活性增加的试剂包括,例如使SIRTUSIRT2、和HDAC6中的一种或多种活性增加的试剂。使乙酰化的Tau多肽脱乙酰化的多肽活性增加的试剂还包括使此类多肽蛋白水平增加的试剂,例如包含编码SIRT1、SIRT2、HDAC6等核苷酸序列的核酸。
SIRTl
SIRTl (也称为(沉默交配型信息调节因子2同源体)I (啤酒酵母))基因编码去乙酰化酶蛋白家族成员，其与酵母Sir2蛋白同源。去乙酰化酶家族成员特征为，具有去乙酰化酶核心结构域，共分为四类。该基因编码的蛋白属于去乙酰化酶家族中的第I类。选择性剪接产生多个转录变体。转录变体I (NM—012238.4)代表较长的转录,其编码较长的亚型 a (NP—()36370. 2)。转录变体 2 (NMJ)Ol 142498. I)编码亚型 b (KPJ)01135970. 1)0
SIRTl多肽包括在产生Tau的细胞中(例如,神经元细胞和/或神经胶质细胞)使乙酰化Tau多肽脱乙酰化的多肽，其包含与SEQ ID NO:9(GenBank AAHl2499 ;智人SIRTl)所不氨基酸序列中约400个至约450个、或约450个至约555个连接的氨基酸组成的氨基酸序列具有至少约75%、至少约80%、至少约85%、至少约90%、至少约95%、至少约98%、至少约99%、或100%同一性的氨基酸序列。SIRTl多肽包括在产生Tau的细胞中(例如,神经元细胞和/或神经胶质细胞)使乙酰化Tau多肽脱乙酰化的多肽,其包含与SEQ ID NO: 10(GenBankNP—036370 ;智人SIRTl亚型a)所示氨基酸序列中约500个至约600个、约600个至约700个、或约700个至约747个连接的氨基酸组成的氨基酸序列具有至少约75%、至少约80%、至少约85%、至少约90%、至少约95%、至少约98%、至少约99%、或100%同一性的氨基酸序列。SIRTl多肽包括在产生Tau的细胞中(例如,神经元细胞和/或神经胶质细胞)使乙酰化Tau多肽脱乙酰化的多肽,其包含与SEQ ID NO: 11 (GenBank NP—OOl 135970 ;智人SIRTl亚型b)所示氨基酸序列中约300个至约400个、或约400个至约452个连接的氨基酸组成的氨基酸序列具有至少约75%、至少约80%、至少约85%、至少约90%、至少约95%、至少约98%、至少约99%、或100%同一性的氨基酸序列。
SIRTl活化剂
很多SIRTl活化剂均是本领域已知的。适宜的SIRTl活化剂可以使SIRTl多肽的酶活性(例如，在神经元或神经胶质细胞中SIRTl多肽使乙酰化Tau多肽脱乙酰化的酶活性)增强至少约25%、至少约50%、至少约75%、至少约2倍、至少约2. 5倍、至少约5倍、至少约10倍、至少约20倍、或20倍以上。在某些实施方式中，SIRTl活化剂是SIRTl-选择性活化剂。
适宜的SIRTl活化剂可以增加SIRTl的酶活性,其EC5ci (半数最高有效浓度)为约InM至约ImM，例如,约InM至约10nM、约IOnM至约15nM、约ISnM至约25nM、约25nM至约50nM、约 50nM 至约 75nM、约 75n:M:至约 lOOnM、约 IOOnM 至约 150nM、约 15()n:M:至约 200nM、约 200nM 至约 250nM、约 250nM 至约 300nM、约 300nM 至约 350nM、约 350nM 至约 400nM、约400nM 至约 450nM、约 450nM 至约 500nM、约 500nM 至约 750nM、约 750nM 至约 I u M、约 I u M至约10 y M、约10 y M至约25 u M、约25 u M至约50 y M、约50 y M至约75 y M、约75 u M至约100 u M、约 100 U M 至约 250 u M、约 250 u M 至约 500 u M、或约 500 u M 至约 ImM0
适用于主题方法的SIRTl活化剂的例子包括,但不限于，白藜芦醇((E)-5- (p-羟基苯乙烯基)间苯二酚(E) -5- (4-羟基苯乙烯基)苯-1，3- 二醇);或3，5，4’ -三羟基-反式-二苯乙烯)；紫铆因(3，4，2’，4’ -四羟基查尔酮)；白皮杉醇(3，5，3’，4’ -四羟基-反式-二苯乙烯)；异甘草素(4，2’，4’ -三羟基查尔酮)；非瑟酮(3，7，3’，4’ -四羟基黄酮)；鲸蜡素(3，5，7, 3，，4，-五羟基黄酮)；美国专利号7，345，178描述的SIRTl活化剂；美国专利公开号2008/02555382描述的SIRTl活化剂；以及美国专利公开号2009/0012080描述的SIRTl活化剂。上述SIRTl活化剂的任意药学上可接受的盐也适用于本主题方法。
例如,适宜的SIRTl活化剂是美国专利号7，345，178中所描述的式I-XXVIII中的任意一个化合物，其取代基如美国专利号7，345，178中所描述,或如美国专利号7，345，178中所描述的式I-XXVIII中的任意一个化合物的药学上可接受的盐，其均提供了具有SIRTl活性的化合物。例如，适宜的SIRTl活化剂包括美国专利号7，345，178表4中所示的化合物。
例如,适宜的SIRTl活化剂如下表I所示。
表I
权利要求
1.一种在细胞内降低乙酰化Tau多肽水平的方法，所述方法包括将所述细胞与使细胞内Tau多肽脱乙酰化的多肽活性增加的试剂和/或使所述细胞内Tau多肽乙酰化的多肽活性降低的试剂接触。
2.根据权利要求
I所述的方法，其中所述方法包括将所述细胞与使所述细胞内Tau多肽脱乙酰化的多肽活性增加的试剂和使所述细胞内Tau多肽乙酰化的多肽活性降低的试剂接触。
3.根据权利要求
I所述的方法，其中所述细胞为神经元。
4.根据权利要求
I所述的方法,其中所述细胞为神经胶质细胞。
5.根据权利要求
I所述的方法，其中所述试剂不是去乙酰化酶活化剂。
6.根据权利要求
I所述的方法,其中所述试剂是P300抑制剂或CBP抑制剂。
7.根据权利要求
I所述的方法，其中所述试剂是SIRT1、SIRT2、或HDAC6的活化剂。
8.根据权利要求
I所述的方法，其中所述接触降低所述细胞内磷酸化Tau多肽的水平。
9.根据权利要求
I所述的方法，其中所述接触增加细胞内活性Tau多肽的水平。
10.一种治疗个体Tau病变的方法,所述方法包括给药所述个体有效量的降低所述个体神经元或神经胶质细胞中乙酰化Tau水平的试剂。
11.根据权利要求
10所述的方法，其中所述给药包括将组合有效量的使神经元细胞或神经胶质细胞中Tau多肽脱乙酰化的多肽活性增加的试剂和使神经元细胞或神经胶质细胞中Tau多肽乙酰化的多肽活性降低的试剂给药所述个体以治疗所述Tau病变。
12.根据权利要求
10所述的方法，其中所述Tau病变是额颢叶痴呆、阿尔茨海默氏症、进行性核上性麻痹、皮层基底节变性、唐氏综合征、拳击手痴呆、内涵体肌炎、或颞叶性病变。
13.根据权利要求
10所述的方法,其中降低乙酰化Tau水平的所述试剂是p300/CBP抑制剂。
14.根据权利要求
10所述的方法,其中降低乙酰化Tau水平的所述试剂是SIRTl活化剂。
15.根据权利要求
10所述的方法,其中所述给药降低所述个体神经元或神经胶质细胞中磷酸化Tau的水平。
16.根据权利要求
10所述的方法,其中所述给药增加所述个体神经元或神经胶质细胞中活性Tau的水平。
17.一种诊断个体认知损伤性疾病的方法,所述方法包括检测所述个体生物样品中乙酰化Tau多肽的水平,其中乙酰化Tau多肽的水平高于正常对照水平表示所述个体有认知损伤性疾病。
18.根据权利要求
17所述的方法，其中所述生物样品是脑脊液、血液、血浆、或血清。
19.^-种鉴别治疗Tau病变的候选试剂的方法,所述方法包括: a)将包含乙酰基转移酶和Tau多肽的样品与待测试剂接触；和 b)确定所述待测试剂对所述Tau多肽乙酰化的作用,其中降低所述Tau多肽乙酰化的待测试剂是治疗Tau病变的候选试剂。
20.一种鉴别治疗Tau病变的候选试剂的方法,该方法包括: a)将包含脱乙酰基酶和Tau多肽的样品与待测试剂接触；和b)确定所述待测试剂对所述Tau多肽乙酰化的作用,其中增加所述Tau多肽脱乙酰化 的待测试剂是治疗Tau病变的候选试剂。
专利摘要
本发明提供了一种降低细胞内乙酰化Tau多肽水平的方法和试剂。还提供了一种治疗个体Tau病变的方法。还提供了一种诊断个体认知损伤性疾病的方法。也提供了一种鉴定适于治疗Tau病变的试剂的方法。
文档编号C12N15/11GKCN102791725SQ201080060917
公开日2012年11月21日 申请日期2010年9月15日
发明者李赣 申请人:J.大卫格莱斯顿学会导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan