一种重组大肠杆菌利用甘油生产1,2-丙二醇的方法
【技术领域】：
[0001] 本发明属于微生物基因工程领域，具体地说将参与1，2-丙二醇生物合成的三个 基因克隆并与大肠杆菌高拷贝载体PUC19连接，将重组质粒转入大肠杆菌中，使用氨苄青 霉素作为筛选标记，以加强这三个基因在大肠杆菌中的表达量，使1，2-丙二醇可以在大肠 杆菌中大量合成。
【背景技术】：
[0002] 1，2-丙二醇（1，2-propanediol)是一种无色粘稠的吸水性液体，与水、乙醇及多 种有机溶剂混溶。沸点187. 3°C。熔点_60°C。分子式为：C3H8O2，结构式如下所示。1，2-丙 二醇是重要的化工原料和中间体，广泛应用于化工、食品、燃料等领域，可用作不饱和聚酯 树脂的原料，也可用于生产增塑剂、表面活性剂、乳化剂和破乳剂，其本身可以用作防霉剂、 水果催熟剂、防腐剂、防冻剂及烟草保湿剂。
【主权项】
1. 一株可利用甘油生产1，2-丙二醇的大肠杆菌BW25141，质粒pPPO,基因工程菌 PP016178和1，2-丙二醇合成相关酶的基因 mgsA，gldA和fucO。
2. 根据权利要求1中，利用甘油发酵生产大肠杆菌的方法，包括培养所需条件和培养 基配方。
3. 根据权利要求1中利用甘油发酵生产1，2-丙二醇的大肠杆菌基因工程菌的制备方 法，包括： a. 利用设计的引物扩增得到三个相关合成酶的基因片段 b. 利用热击法将构建质粒转化入大肠杆菌的方法 c. 用氨苄青霉素筛选阳性克隆并用于生产的方法。
4. 根据权利要求1中三个1，2-丙二醇合成酶的相关基因设计的引物为：引物序列1， 2, 3,4, 5,6
5. 根据权利要求1中利用基因工程菌生产1，2-丙二醇的发酵方法及培养基： LB 培养基（IL) :Tryptone (胰蛋白胨）：10g，Yeast Extract (酵母提取物）：5g， NaCl (氯化钠）：10g。若配制固体培养基，则再加入15g Agar (琼脂）。 M9培养基（IL) :Na2HP04,7H20(七水合磷酸氢二钠）：12.8g，KH 2P04(磷酸二氢钾）：3g， NaCl (氯化钠）：0.5g，NH4Cl (氯化铵）：lg，Glycerol (甘油）：20g。Yeast Extract (酵母 提取物）：5g，IM MgSO4 · 7H20(七水合硫酸镁）1ML，0. IM CaCl (氯化钙）：1ML。 将所得基因工程菌在3ML含有氨苄青霉素的LB培养基中37°C，250rpm培养12小时， 转入M9培养基，M9培养基在使用前加入氨苄青霉素，37°C培养3小时，加入4 μ L浓度为 0. 5mM的IPTG诱导，并转入30°C，250rpm培养24-48小时。
6. 根据权利要求5中，利用基因工程菌大量发酵生产1，2-丙二醇的扩大培养方法，包 括分批补料，流加等发酵方法。
【专利摘要】本发明涉及一种使用重组大肠杆菌利用甘油生产1，2-丙二醇的方法。具有如下步骤：1)克隆参与1，2-丙二醇生物合成的基因mgsA，gldA和fucO，2)将这些基因与大肠杆菌高拷贝载体pUC19连接以构建含有1，2-丙二醇生物合成所需蛋白的编码基因的重组载体，3)将重组质粒转入大肠杆菌BW25141中，通过氨苄青霉素的筛选标记，从而获得了大肠杆菌高产1，2-丙二醇的菌株，4)通过发酵生产1，2-丙二醇，并从发酵液中回收1，2-丙二醇。该方法具有环保，高效，稳定，价格低廉等优点。
【IPC分类】C12R1-19, C12P7-18, C12N15-70, C12N1-21
【公开号】CN104560842
【申请号】CN201310488513
【发明人】刘立栋
【申请人】常州邱鸿生物技术有限公司
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2013年10月18日