一种链格孢菌j1311-1及其应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种链格孢菌J1311-1及其应用。
【背景技术】
[0002]生物合成纳米金方法具有原料来源广泛、成本低廉、工艺简单、反应条件温和及产量高等特点，是一种清洁无毒的绿色合成方法。微生物是强大的绿色生物工厂，其合成的金纳米颗粒具有尺寸可控、菌体产量高、不产生有毒副产物、室温下高度稳定、生物相容性好等优点。
【发明内容】
[0003]发明目的:针对现有技术存在的不足，本发明的目的是提供一种链格孢菌J1311-1及其应用。该制备方法条件温和，无需使用多种化学试剂，反应成本低，并具有环境友好性。本发明提供的链格孢菌可快速积聚金纳米颗粒，其反应条件温和，菌体收集方便，制备过程易于放大。
[0004]技术方案:为实现上述发明的目的，本发明采用的技术方案是:一种链格孢菌J1311-1，其特征在于，其分类命名为链格孢菌sp.J1311-1A该菌株已于2014年7月3号保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No:M 2014310 ；保藏地址:湖北省武汉市武昌区武汉大学保藏中心(武汉大学第一附属小学对面)。
[0005]该链格孢菌菌落初白色，渐变为灰褐色，菌丝稀疏，基质黑褐色。分生孢子梗单枝，长短不一，顶生不分枝，分生孢子有纵横隔膜，倒棍棒形、卵形。
[0006]上述链格孢菌J1311-1的筛选方法如下:
[0007]I)取实验室保藏的分离自东南大学校园土壤的35株真菌，分别在PDA固体培养基上于28°C培养3-5天；
[0008]2)将35株菌种分别接种于10mL马铃薯葡萄糖液体培养基，于28°C、150rpm培养2天得到菌体；
[0009]3)收集菌体并用无菌水洗涤，将20g湿菌体加入10ml无菌去离子水中，于28°C、pH 7、150rpm 培养 48h ；
[0010]4)离心除去步骤3)中的菌体，收集上清液。将终浓度0.5-2.0 mmol/L的氯金酸溶液加入步骤4)的上清液中，于28°C、150rpm反应3_48h，根据反应后溶液的颜色判断是否生成纳米金(生成纳米金的溶液为紫色至深紫色)，对发生反应的体系重复筛选实验并对生成的纳米金进行确证；
[0011]5)收集步骤3)中的菌体，经无菌水洗涤后，将20g湿菌体加入10ml终浓度0.5-2.0 mmol/L的无菌氯金酸溶液中，于28°C、pH 7、150rpm反应3_48h，根据反应后菌体的颜色判断其胞内是否生成纳米金(生成纳米金的细胞为紫色至深紫色)，对发生反应的体系重复筛选实验并对生成的纳米金进行确证；将筛选得到的能够生成纳米金的菌株选取一株保藏，并命名为链格孢菌J1311-1。
[0012]上述的链格孢菌J1311-1在制备金属纳米材料方面的应用。
[0013]上述的链格孢菌J1311-1在制备纳米金方面的应用。
[0014]上述链格孢菌J1311-1制备纳米金的具体步骤如下:将链格孢菌J1311-1在PDA固体培养基上于28°C培养4天后，接种于10mL马铃薯葡萄糖液体培养基，于28°C、pH7、150rpm培养2天得到菌体；收集菌体，经无菌水洗涤后，将20g湿菌体加入10ml浓度0.5-2.0 mmol/L的无菌氯金酸溶液中，于28°C、pH 7、150rpm反应6h后，破碎菌体，收获纳米金颗粒。
[0015]上述纳米金颗粒粒径为30~40nm。
[0016]对于微生物合成纳米材料的机制，一般认为是微生物产生的生物活性物质包括蛋白质、还原糖、还原性谷胱甘肽等可对金属离子如金、银、镉、钯、钼等进行富集还原成纳米材料，或将体系内的两种金属离子还原成纳米合金，且生物分子对纳米金属的稳定起着重要作用。因此，本发明中的链格孢菌也可以具有将金、银、铬、钯、钼等离子还原组装为纳米粒子或合金的能力。
[0017]有益效果:与现有技术相比具有以下优点:本发明采用链格孢菌J1311-1制备纳米金的方法，反应于常温常压进行，不使用多种化学试剂，反应成本低。制得的金纳米颗粒可以在水中自主分散，常温下稳定。本发明产生的金纳米对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有一定的抑制活性。本发明可对相关行业的含金废液及土壤作无害化处理并再生利用。
【附图说明】
[0018]图1为实施例1的链格孢菌J1311-1制备的金纳米颗粒的效果图；
图2为实施例1的链格孢菌制备的金纳米颗粒的扫描电镜照片；
图3为实施例1的链格孢菌制备的金纳米颗粒的EDS谱图；
图4为实施例2的抑制大肠杆菌的效果图；
图5为实施例2的抑制金黄色葡萄菌的效果图。
【具体实施方式】
[0019]以下结合附图与具体实施进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。
[0020]实施例1:链格孢菌J1311-1的培养条件
链格孢菌J1311-1在PDA固体培养基(马铃薯20%，葡萄糖2%，去离子水lOOOmL，pH自然，121°C灭菌30min待用)上于28°C培养，在液体培养基(PDA固体培养基:马铃薯20%，葡萄糖2%，琼脂1.5%，去离子水100mL,pH自然，121°C灭菌30min待用)中于28°C、150rpm培养。
[0021]实施例2链格孢菌J1311-1制备纳米金的具体步骤
将链格孢菌J1311-1在PDA固体培养基上于28°C培养4天后，接种于10mL马铃薯葡萄糖液体培养基，于28 °C、pH7、150rpm培养2天；收集菌体，经无菌水洗涤后，将20g湿菌体加入10ml无菌氯金酸溶液(浓度0.5-2.0 mmol/L)中，于28°C、pH 7、150rpm反应5h后，破碎菌体，收获纳米金颗粒。 附图1左为加氯金酸之前的菌体，右为加入氯金酸反应5h后的包裹了纳米金的深紫色菌体，说明链格孢菌可在胞内快速合成纳米金。
附图2和附图3分别为链格孢菌胞内制备的纳米金的透射电镜照片和EDS图谱，可以清晰的显示胞内生成的纳米金颗粒。
[0022]实施例3本发明所合成的金纳米对细菌的抑菌作用
步骤I将大肠杆菌和金黄色葡萄球菌涂布于固体培养基(牛肉膏0.5%，NaCl 0.5%，蛋白胨 1%，pH 7.6-7.8)；
步骤2在固体培养基上放置一张已灭菌滤纸，其上添加实施例2所制备的金纳米颗粒溶液5μ1 ；
步骤3将大肠杆菌和金黄色葡萄球菌于37°C培养24h，分别测量其抑菌圈直径并取平均值，确定大肠杆菌在纳米金作用下的抑菌圈直径为1.21cm,金黄色葡萄球菌在纳米金作用下的抑菌圈直径为1.27cm。
附图4和附图5是实施例2所合成的纳米金对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抑菌圈大小，说明链格孢菌制备的纳米金对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌都具有抑制作用。
【主权项】
1.一种链格孢菌J1311-1，其特征在于，其分类命名为链格孢菌J1311-1 ( Alternariasp.J1311-1A该菌株已于2014年7月3号保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No:M 2014310。
2.权利要求1所述的链格孢菌J1311-1在制备金属纳米材料方面的应用。
3.权利要求1所述的链格孢菌J1311-1在制备纳米金方面的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述链格孢菌J1311-1制备纳米金的具体步骤如下:将链格孢菌J1311-1在PDA固体培养基上于28°C培养4天后，接种于10mL马铃薯葡萄糖液体培养基，于28°C、pH7U50rpm培养2天得到菌体；收集菌体，经无菌水洗涤后，将20g湿菌体加入10ml浓度0.5-2.0 mmol/L的无菌氯金酸溶液中，于28°C、pH 7、150rpm反应6h后,破碎菌体,收获纳米金颗粒。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述纳米金颗粒粒径为30~40nm。
【专利摘要】本发明公开了一种链格孢菌J1311-1。本发明还公开了链格孢菌J1311-1在制备金属纳米材料方面的应用。本发明还公开了链格孢菌J1311-1在制备纳米金方面的应用。本发明采用链格孢菌J1311-1制备的纳米金颗粒的方法，反应于常温常压进行，不使用多种化学试剂，反应成本低。制得的金纳米颗粒可以在水中自主分散，常温下稳定。本发明产生的金纳米颗粒对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有一定的抑制活性。本发明可对相关行业的含金废液及土壤作无害化处理并再生利用。CCTCC No：M 201431020140703
【IPC分类】C12N1-14, C12R1-645, C12P3-00
【公开号】CN104593268
【申请号】CN201410819820
【发明人】陈峻青, 戚文秀, 吉民, 李黎
【申请人】东南大学
【公开日】2015年5月6日
【申请日】2014年12月25日