近海岸大肠杆菌检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及常见菌检测技术领域，特别涉及近海岸大肠杆菌检测方法。
【背景技术】
[0002]大肠杆菌(Escherichia coli),分类于肠杆菌科,归属于埃希氏菌属，与人类疾病有关的大肠杆菌一般包括五种，即肠毒素性大肠杆菌(ETEC)，致病性大肠杆菌(SPEC)、出血性大肠杆菌(EHEC)，侵袭性大肠杆菌(EIEC)和粘附性大肠杆菌(EAEC)。大肠杆菌常随粪便从人及动物体排出，广泛散播于自然界中。所以一旦检出大肠杆菌，即意味着直接或间接地被粪便污染，在卫生学上被用于饮水，牛奶或食品等的粪源性污染卫生细菌学指标；并且由于大肠杆菌在外界存活时间与一些主要肠道病原菌相近，它的出现也可能预示着某些肠道病原菌的存在，因此该细菌是国际上公认的卫生监测指示菌。现有技术，一般采用无菌操作，将食品检样经过相应的处理后，做一定的倍比稀释，然后在一定条件下培养(如培养基成分、培养温度和时间、PH值、需氧性质等)，最后在电镜、显微镜下观察，根据菌落的颜色、形态等生化指标进行分辨，并计算平板的菌落数。该方法成本低，特别是对检测实验室的硬件设备要求低，曾一度被认为是微生物检测的经典方法，也是后来各种检测方法的基础平台，在各个国家都被认可，该标准在我国一直沿续至今，特别是一些病原细菌的检测。但是，该方法非常繁琐，需要耗费大量的人力物力，而且检测周期长、灵敏度低，难以满足目前国内外对食品安全检测的要求。
【发明内容】
[0003]本发明的提供一种近海岸灵敏度高的大肠杆菌检测方法，技术方案为近海岸大肠杆菌检测方法，采用抽滤系统将海水中大肠杆菌截留在滤膜上，再将滤膜放置培养基中培养，所述滤膜为孔径0.45 μ m的微孔滤膜，检测溶液中加入胆盐乳糖增菌液中进行增菌操作，增菌30-48h,浑池、产气判定为检出大肠杆菌。
[0004]所述培养基为伊红美蓝琼脂平板，所述培养时间10?12d，培养后观察大肠杆菌的菌落生长情况，当如果伊红美蓝琼脂平板分离有典型大肠杆菌菌落长出判定为检出。
[0005]所述滤膜过滤使用离心双重滤膜法进行过滤。
[0006]所述方法过滤离心半径为20cm,转速为4000转/min。
[0007]本发明近海岸大肠杆菌检测方法与传统的微生物检测方法相比，成本低、简便快速、敏感性高。
【具体实施方式】
[0008]下述非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
[0009]实施例1
[0010]近海岸大肠杆菌检测方法，采用抽滤系统将海水中大肠杆菌截留在滤膜上，再将滤膜放置培养基中培养，所述滤膜为孔径0.45 μ m的微孔滤膜，检测溶液中加入胆盐乳糖增菌液中进行增菌操作，增菌30-48h，浑浊、产气判定为检出大肠杆菌。所述培养基为伊红美蓝琼脂平板，所述培养时间10?12d，培养后观察大肠杆菌的菌落生长情况，当如果伊红美蓝琼脂平板分离有典型大肠杆菌菌落长出判定为检出。所述滤膜过滤使用离心双重滤膜法进行过滤。所述方法过滤离心半径为20cm,转速为4000转/min。
【主权项】
1.近海岸大肠杆菌检测方法，其特征在于，采用抽滤系统将海水中大肠杆菌截留在滤膜上，再将滤膜放置培养基中培养，所述滤膜为孔径0.45 μ m的微孔滤膜，检测溶液中加入胆盐乳糖增菌液中进行增菌操作，增菌30-48h，浑浊、产气判定为检出大肠杆菌。
2.根据权利要求1所述的近海岸大肠杆菌检测方法，其特征在于，所述培养基为伊红美蓝琼脂平板，所述培养时间10?12d，培养后观察大肠杆菌的菌落生长情况，当如果伊红美蓝琼脂平板分离有典型大肠杆菌菌落长出判定为检出。
3.根据权利要求1所述的近海岸大肠杆菌检测方法，其特征在于，所述滤膜过滤使用离心双重滤膜法进行过滤。
4.根据权利要求1所述的所述的近海岸大肠杆菌检测方法，其特征在于，所述方法过滤离心半径为20cm,转速为4000转/min。
【专利摘要】近海岸大肠杆菌检测方法，采用抽滤系统将海水中大肠杆菌截留在滤膜上，再将滤膜放置培养基中培养，所述滤膜为孔径0.45μm的微孔滤膜，检测溶液中加入胆盐乳糖增菌液中进行增菌操作，增菌30-48h，浑浊、产气判定为检出大肠杆菌。所述培养基为伊红美蓝琼脂平板，所述培养时间10～12d，培养后观察大肠杆菌的菌落生长情况，当如果伊红美蓝琼脂平板分离有典型大肠杆菌菌落长出判定为检出。本发明近海岸大肠杆菌检测方法与传统的微生物检测方法相比，成本低、简便快速、敏感性高。
【IPC分类】C12Q1-10
【公开号】CN104593476
【申请号】CN201310533214
【发明人】关杰, 关宇, 江美玲, 曹卉, 王清
【申请人】大连大公环境检测有限公司
【公开日】2015年5月6日
【申请日】2013年10月31日