一种构巢曲霉AclxA基因的用图
【技术领域】
[0001] 本发明设及基因工程领域，具体设及一种构巢曲霉AclxA基因的功能和用途。 技术背景
[0002] 由于广谱抗生素的广泛应用、器官移植的不断应用和艾滋病等免疫缺陷型病人的 增多，侵袭性真菌感染的发生呈上升趋势。在免疫受抑制或缺陷的病人群体中，患有侵袭 性曲霉病的人群占2-10%。全球有300-400万人患有慢性肺曲霉病和过敏性肺支气管曲 霉病。曲霉属中烟曲霉、±曲霉和构巢曲霉等都可W引发曲霉病。由于构巢曲霉是曲霉属 的模式物种，通过研究构巢曲霉中基因功能和用途可W为其它曲霉基因功能和应用提供借 鉴。曲霉之所W能够成功侵染人类宿主的一个重要原因是其高温适应能力（很多真菌在体 温37°C不能生长）
[0003] 巧离子信号通路在真核生物中广泛存在，并且构成一个复杂的网络体系。在真菌 细胞中，有一套依赖于巧离子的逆境胁迫应答信号通路，其中研究较为清楚的一条途径为 CCS (Cell Calcium Survival)途径。巧离子作为第二信使，是调节细胞功能的重要引发因 子，参与多种生理、生化反应，使得细胞能够得W在逆境下存活下来。巧连接蛋白作为一种 分子伴侣定位在内质网（endoplasmic reticulum),对分泌蛋白质的正确折叠起着一定作 用。作为CCS(Cell Calcium Survival)途径中的一员，巧连接蛋白广泛的存在于真核生物 中，在构巢曲霉中巧连接蛋白基因为AclxA，其功能未知。因此，通过对丝状真菌逆境响应过 程中巧信号系统的调控作用进行研究，可W更进一步了解真菌应对外界环境包括热适应能 力的分子调控机制。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供构巢曲霉AclxA基因，W及该基因在构巢曲霉对高温适应 性响应的影响，并构建获得了一种构巢曲霉高温敏感菌株。
[0005] 本发明研究发现，AclxA在构巢曲霉的热适应性机制上发挥重要作用，AclxA缺失 菌株在高温下生长和产抱受到抑制。AclxA缺失菌株在高温下生长和产抱受到抑制是巧浓 度依赖性的。通过控制巧离子的浓度可W改变AclxA缺失菌株对热的耐受性。
[0006] 本发明公开了构巢曲霉AclxA基因，其序列如SEQ ID NO ;1所示。该基因编码的 蛋白序列如SEQ ID NO ;2所示
[0007] 本发明公开了构巢曲霉AclxA基因的用途，用于构建AclxA基因缺失菌株，或用于 制备、筛选曲霉病的治疗药物。
[000引本发明所述构巢曲霉AclxA缺失菌株中，AclxA基因通过同源重组的方法敲除。与 野生型构巢曲霉相比，所述缺失菌株在高温下的生长和繁殖都受到抑制。
[0009] AclxA缺失菌株为高温敏感性菌株，其中AclxA基因不表达。
[0010] 本发明所述曲霉病治疗药物W AclxA基因为治疗祀基因，使AclxA基因不表达的 药物可W抑制曲霉在人体内的增殖。或者W AclxA基因为祀点筛选制备使该基因不表达的 药物，用于曲霉病的治疗。
[0011] 本发明还公开了前述构巢曲霉高温敏感性菌株在研究构巢曲霉巧信号通路中的 功能，W及在制备和筛选曲霉病治疗药物中的作用。
【附图说明】
[0012] 图1 ;构巢曲霉AclxA基因的敲除策略。
[001引图2 ;高温下，构巢曲霉AclxA基因的敲除对菌落生长和产抱的影响。
[0014] 图3 ;高温下，外加化化时构巢曲霉AclxA基因缺失株菌落生长表型。
【具体实施方式】
[0015] 在进一步描述本发明【具体实施方式】之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下 述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施案例中使用的术语是为了描述特定的具 体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围。
[0016] 1、测试菌株
[0017] 表1使用菌株情况列表 [001 引
【主权项】
1. 构巢曲霉AclxA基因的用途，用于构建构巢曲霉AclxA基因敲除菌株，或者用于研宄 其与钙离子信号通路之间的关系。
2. -种构巢曲霉AclxA缺失菌株，其特征在于，构巢曲霉中AclxA基因通过同源重组的 方法敲除。
3. 构巢曲霉AclxA基因作为靶点在筛选、制备使该基因不表达的药物中的应用。
4. 构巢曲霉AclxA基因作为靶点在筛选、制备治疗曲霉病药物中的应用。
【专利摘要】本发明涉及基因工程领域，公开了一种构巢曲霉AclxA基因的用途。通过构建AclxA基因缺失菌株发现AclxA在构巢曲霉适应高温环境中发挥重要作用。本发明还公开了AclxA基因缺失菌株的制备过程与钙离子可以恢复AclxA缺失菌高温下的生长表型。
【IPC分类】C12N1-15, C12N15-31, C12Q1-02, C07K14-38, C12Q1-68, C12R1-66
【公开号】CN104630239
【申请号】CN201510076485
【发明人】张石柱, 张升华, 陆玲
【申请人】南京师范大学
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2015年2月12日