一种草莓花色苷的酶法酰基化方法
【专利说明】
一、技术领域
[0001]本发明为一种草莓花色苷的酶法酰基化方法，属于农产品深加工技术领域。
二、【背景技术】
[0002]国内外关于草莓的研究表明，草莓色素属于花色苷色素，主要成分为天竺葵素-3-葡萄糖苷。花色苷类物质，具有较强的降血压、降血脂、抗突变、抗氧化、抗肿瘤等生理活性和功能。花色苷作为一种安全无毒的天然食用色素在食品、保健品、医药、化妆品等方面具有很大的开发潜力，但是天然色素易受各种条件的影响而变得不稳定，这就限制了其在加工和储藏过程中的广泛应用。影响其不稳定的主要内部因素是分子结构，酰基化可提高花色苷稳定性和呈色效果已得到学术界公认，双酰化花色苷比单酰化花色苷更稳定。利用脂肪酶在有机相中的酰基化活性，将草莓花色苷的葡萄糖苷进行定向酰基化，获得酰基化花色苷，可以制备高稳定性的天然色素原料，并根据需要进行应用，因此，这一方法具有重要的理论价值和现实意义。
三、
【发明内容】
[0003]技术问题非酰基化天然花色苷存在的主要问题是稳定性差，造成草莓加工品易退色，色泽不稳定。也使天然花色苷作为食用色素受到限制。本发明主要针对草莓花色苷稳定性差的技术难题，通过将初步纯化的草莓花色苷进行有机相中的酶法酰基化，获得稳定性提高的酰基花色苷。
[0004]技术方案本发明提供一种草莓花色苷的酶法酰基化方法，包括:
[0005]I)草莓花色苷粗提物的制备:将草莓中加入2倍重量的95%食用酒精，进行高速打浆，60°C保温I小时，冷却，离心。滤液真空浓缩至原重量的十分之一。
[0006]2)草莓花色苷的纯化:将粗提液上大孔树脂柱，树脂型号为AB-8，上样液量为I倍树脂柱体积，上样流速为I倍柱体积/小时，然后用去离子水冲柱，当流出液澄清后，以体积比70%的乙醇水溶液为洗脱剂洗脱树脂柱，洗脱液为2?2.5倍树脂柱体积，流速为I倍柱体积/小时。将洗脱液真空浓缩至原体积的的五分之一，加入2倍体积的乙酸乙酯萃取脂溶性杂质，收集水相既为纯化后的紫薯花色苷。将萃取后的水相立刻上聚酰胺树脂柱，上样量为0.5倍树脂柱体积，上样流速为I倍柱体积/小时，然后用去离子水冲柱。再用以体积比30%的乙醇水溶液为洗脱剂洗脱树脂柱，洗脱液为2?2.5倍树脂柱体积，流速为I倍柱体积/小时，收集洗脱液。
[0007]3)酶法酰基化:将洗脱液60°C真空浓缩至干，再放入40°C真空干燥箱干燥6小时，加入分子筛干燥过的叔戊醇作为溶剂，加热使花色苷溶解，倒入其他可密闭容器中。分别加入干燥处理过的肉桂酸，Novozmy固定化脂肪酶，4A分子筛。在40°C震荡反应72小时后，过滤取出酶和分子筛，干燥后以备再次使用，滤液减压浓缩至干，即为酰基化草莓花色苷，回收溶剂以备再次使用。
[0008]有益效果
[0009]1.获得了酰基化草莓花色苷，稳定性得到提高，可作为花色苷理论研究的材料，也可作为天然食品色素。
[0010]2.采用固定化脂肪酶，可多次使用，降低成本，适合大量生产，工业化前景好。
[0011 ] 3.使用叔戊醇为溶剂，毒性弱且为非管制化学品，安全可靠，可重复多次利用。
四、【具体实施方式】
[0012]将草莓中加入2倍重量的95 %食用酒精，进行高速打浆，60°C保温I小时，冷却，离心。滤液真空浓缩至原重量的十分之一。将粗提液上大孔树脂柱，树脂型号为AB-8，上样液量为I倍树脂柱体积，上样流速为I倍柱体积/小时，然后用去离子水冲柱，当流出液澄清后，以体积比70%的乙醇水溶液为洗脱剂洗脱树脂柱，洗脱液为2?2.5倍树脂柱体积，流速为I倍柱体积/小时。将洗脱液真空浓缩至原体积的的五分之一，加入2倍体积的乙酸乙酯萃取脂溶性杂质，收集水相既为纯化后的紫薯花色苷。将萃取后的水相立刻上聚酰胺树脂柱，上样量为0.5倍树脂柱体积，上样流速为I倍柱体积/小时,然后用去离子水冲柱。再用体积比30 %的乙醇水溶液为洗脱剂洗脱树脂柱，洗脱液为2?2.5倍树脂柱体积，流速为I倍柱体积/小时，收集洗脱液。将洗脱液60°C真空浓缩至干，再放入40°C真空干燥箱干燥6小时，加入叔戊醇作为溶剂，加热使花色苷溶解，倒入其他可密闭容器中。分别加入干燥处理过的肉桂酸，NOVOzmy435固定化脂肪酶，4A分子筛。在40°C震荡反应72小时后，过滤取出酶和分子筛，干燥后以备再次使用，滤液减压浓缩至干，回收溶剂以备再次使用。
[0013]实施例
[0014]将I千克草莓中加入2升95 %食用酒精，进行高速打浆，60 V保温I小时，冷却，离心。滤液真空浓缩至约300毫升既为粗提液，将粗提液上500mmX 50mm大孔树脂柱，树脂型号为AB-8，上样流速为300毫升/小时，然后用去离子水冲柱，当流出液澄清后，以750毫升70%的乙醇水溶液为洗脱剂洗脱树脂柱，流速为300毫升/小时。将洗脱液真空浓缩至150毫升，加入300毫升乙酸乙酯萃取脂溶性杂质，收集水相既为纯化后的紫薯花色苷。将萃取后的水相150毫升立刻上500mmX 50mm聚酰胺树脂柱，上样流速为300毫升/小时，然后用500毫升去离子水冲柱，再用750毫升体积比30%的乙醇水溶液为洗脱剂洗脱树脂柱，流速为300毫升/小时，收集洗脱液。将洗脱液60°C真空浓缩至干，再放入40°C真空干燥箱干燥6小时，加入10ml用10克4A分子筛干燥过的叔戊醇作为溶剂，加热使花色苷溶解，倒入具塞三角瓶中。分别加入干燥处理过的0.1克肉桂酸，I克NOVOzmy435固定化脂肪酶，5克4A分子筛，密闭三角瓶。在40°C震荡反应72小时后，过滤取出酶和分子筛，干燥后以备再次使用，滤液减压浓缩至干，回收溶剂以备再次使用。
【主权项】
1.一种草莓花色苷的酶法酰基化方法，包括: 1)草莓花色苷粗提物的制备:将草莓中加入2倍重量的95%食用酒精，进行高速打浆，60°C保温I小时，冷却，离心。滤液真空浓缩至原重量的十分之一。 2)草莓花色苷的纯化:将粗提液上大孔树脂柱，树脂型号为AB-8，上样液量为I倍树脂柱体积，上样流速为I倍柱体积/小时，然后用去离子水冲柱，当流出液澄清后，以体积比70%的乙醇水溶液为洗脱剂洗脱树脂柱，洗脱液为2?2.5倍树脂柱体积，流速为I倍柱体积/小时。将洗脱液真空浓缩至原体积的的五分之一，加入2倍体积的乙酸乙酯萃取脂溶性杂质，收集水相既为纯化后的紫薯花色苷。将萃取后的水相立刻上聚酰胺树脂柱，上样量为0.5倍树脂柱体积，上样流速为I倍柱体积/小时,然后用去离子水冲柱。再用以体积比30%的乙醇水溶液为洗脱剂洗脱树脂柱，洗脱液为2?2.5倍树脂柱体积，流速为I倍柱体积/小时，收集洗脱液。 3)酶法酰基化:将洗脱液60°C真空浓缩至干，再放入40°C真空干燥箱干燥6小时，力口入叔戊醇作为溶剂，加热使花色苷溶解，倒入其他可密闭容器中。分别加入干燥处理过的肉桂酸，Novozmy435固定化脂肪酶，4A分子筛。40°C震荡反应72小时后，过滤分离出酶和分子筛，干燥后以备再次使用，滤液减压浓缩至干，即为酰基化草莓花色苷，回收溶剂以备再次使用。
2.根据权利要求1所述一种草莓花色苷的酶法酰基化方法，其特征在于:所用固定化脂肪酶型号为NOVOzmy435，诺维信有限公司生产。
3.根据权利要求1或2所述一种草莓花色苷的酶法酰基化方法，其特征在于:使用溶剂为干燥处理过的叔戊醇。
4.根据权利要求1或2所述一种草莓花色苷的酶法酰基化方法，其特征在于:使用酰基供体为干燥处理过的肉桂酸。
5.权利要求1-5之一所述一种草莓花色苷的酶法酰基化方法所获得的产品。
【专利摘要】本发明提供了一种草莓花色苷的酶法酰基化方法，属于农产品深加工技术领域。包括用食用酒精提取草莓花色苷，将粗提液上AB-8大孔树脂柱初步纯化，用乙酸乙酯萃取脂溶性杂质，立刻上聚酰胺树脂柱，去离子水冲柱后用30％的乙醇水溶液洗脱，洗脱液减压蒸干后溶解到叔戊醇中，加入肉桂酸，Novozmy固定化脂肪酶，4A分子筛40℃震荡反应72小时，过滤取出酶和分子筛。此法溶剂、酶可多次使用，成本低适合大量生产，工业化前景好。获得的酰基化草莓花色苷可作为花色苷理论研究材料，也可作为天然食品色素，应用于不同领域。
【IPC分类】C12P17-06
【公开号】CN104630302
【申请号】CN201310547489
【发明人】黄午阳, 王兴娜, 李春阳, 闫征, 王帆
【申请人】江苏省农业科学院
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2013年11月6日