一种橄榄苦苷对照品的制备方法
【专利说明】
(—)
技术领域
[0001]本发明属化工技术领域，特别涉及一种橄榄苦苷对照品的制备方法。
(二)
【背景技术】
[0002]橄榄苦苷存在于植物油橄榄中，具有良好的降血脂、抗氧化、抗菌作用。我国目前已大量引种栽培油橄榄，盛产含橄榄苦苷的原料，以油橄榄为原料的各种保健品、化妆品、药品纷纷面市。但目前制备橄榄苦苷的方法为用50%的甲醇提取粉碎的橄榄叶，然后挥去溶剂。其水溶液用氯仿萃取，水层经氯化钠饱和后过滤，再用乙酸乙酯萃取。
[0003]分离:利用低压柱用10%、20%、35%、40%、70%、100%不同浓度乙醇洗脱；橄榄苦苷在35%左右得到。
[0004]现有技术中存在的不足如下:
[0005]1.分离步骤较多且较为繁琐，低压柱分离效果不佳，所得到的产品纯度低，且严重影响收率。
[0006]2.在分离过程中，使用了毒性较强的氯仿等溶剂，易造成环境污染，且不利于操作人员的健康。
[0007]3.在分离过程中，由于没有采取保护措施，因橄榄苦苷极不稳定，影响取得高纯度的对照品。
[0008]目前尚无有效监测橄榄苦苷含量的方法，一般只能以油橄榄含量来评价橄榄苦苷含量，由于不同产地、不同条件生产的油橄榄，其橄榄苦苷含量是有很大差别的，故而这种评价也是不准确的。
(三)
【发明内容】
[0009]本发明的目的在于制备一种橄榄苦苷对照品的制备方法，
[0010]已知有关橄榄苦苷的提取工艺流程如下:
[0011]经查询，尚未有与本发明近似的橄榄苦苷提取、纯化工艺。
[0012]本发明的目的在于提供一种橄榄苦苷对照品的制备方法，填补国内未有此对照品生产的空白，并且工艺比较简单，可以从含橄榄苦苷的原料中提取得到含量为98%以上的橄榄苦苷，可作为含橄榄苦苷的植物原料及成品中定性定量的对照品。
[0013]将含橄榄苦苷的干燥橄榄叶置于容器中，加入甲醇，经过适当提取方法提取后，减压浓缩挥去甲醇，沉淀加水溶解，其水溶液经氯化钠饱和后，滤过，滤液经乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯再饱和氯化钠溶液洗涤；提取物上于中压柱分离，用不同浓度的乙醇(水:乙醇，1:0-100)洗脱，分部收集，结合TLC检测，减压浓缩，即得橄榄苦苷粗品；将从中压柱洗脱下来的橄榄苦苷经葡聚糖柱进一步分离纯化得到橄榄苦苷晶体(纯度> 98% )。
[0014]本发明的优点是:整个工艺简单流程短，易于掌握，且收率高，所用的溶剂毒性很小，对生产操作及环境保护都有利。(四)
【附图说明】
[0015]图1为本发明橄榄苦苷(Oleuropein) HPLC色谱图
(五)
【具体实施方式】
[0016]试验例:
[0017]取干燥橄榄叶10g,分别3次加80%甲醇500、300、300ml，超声提取30分钟，过滤，滤液在50度减压浓缩；沉淀加水溶解，其水溶液经氯化钠饱和后，滤过，滤液经乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯再饱和氯化钠溶液洗涤；提取物上于ODS中压柱分离，用25%、30%、40%、45%、50%、100%不同浓度乙醇洗脱；分部收集，结合TLC检测，将25%乙醇洗脱部分，减压浓缩，即得橄榄苦苷粗品；将从中压柱洗脱下来的橄榄苦苷经葡聚糖柱进一步分离纯化得到橄榄苦苷晶体(纯度> 98% )。
[0018]结构鉴定:
[0019]1.物理形状:
[0020]橄榄苦苷(Oleuropein)为米白色粉末，易溶于乙醇、甲醇、丙酮、吡啶、冰醋酸和50%的氢氧化钠溶液，溶于水、醋酸乙酯，几乎不溶于乙醚、石油醚、氯仿和苯。
[0021]2.波谱鉴定:
[0022]2.1质谱鉴定:由谱图得出，该化合物分子量为540左右，与文献值相符。
[0023]2.2NMR 鉴定:
[0024]2.2.11HNMR 分析:HNMR(DMS0,400ΜΗζ): δ Η5.88 (1Η, s’ H_l)，7.53 (1H, s’ H_3)，
3.86(1H, dd, J=9，4Hz，H-5),2.41(1H, dd, J=9.2Hz,14.4，H-6a),2.634(1H, dd, J=14.0，
4.0Hz, H26b), 5.98 (1H, q, J=7.2Hz, H_8)，1.65 (1H, d, J=12Hz, H—10)，3.52 (3H, s’ OM e)，4.67(1H，d，J=8Hz，H-1' ),3.07-3.13(311,111,11-2'，4' ,5' ), 3.23 (1H, t, J=8.8Hz,H-3 ' ) ,3.46 (1H, dd, J=Il.6,6.4Hz, H-6 ; a)，4.03 (1H，dt，J=1.8，7.2Hz，H_1 " a)，4.12 (1H, dt, J=1.8，7.2Hz，H_1" b)，2.69 (1H, t, J=7.2Hz，H_2" )，6.625 (1H, d, J=L 6Hz,H-4" )，6.66(1H，d，J=8.4，H-7" )，6.492 (1H，dd，J=8.0，1.6Hz，H_8")。
[0025]2.2.213C匪R 分析(DMSO，200MHz):93.3 (C_l)，153.8 (C_3)，108.1 (C_4)，30.5 (C-5)，40.4 (C-6), 171.1 (C_7)，123.4 (C_8)，128.9 (C_9)，13.3 (C— 10)，166.6 (C—11) ,51.6 (0M e) ,99.3(c—r ) ,73.5(C-2/ ),76.7(03' ),70.1(04' ) ,77.6 (C-5;)，61.3 (C-6' )，65.4(C-1" )，34.0(C_2" )，129.5(C_3" )，116.4(C_4" )，145.2(C_5")，143.9(C-6" )，115.6(C-7" )，119.9(C_8")。以上数据与文献中 oleuropein 的数据比较对照，鉴定为Oleuropein。
[0026]2.3 紫外光谱鉴定:λ max (CH3OH) =233nm, 283nm,与文献相符。
[0027]纯度检查
[0028]HPLC法:岛津高效液相色谱仪[岛津LC一1ATvp高效液相色谱仪，岛津LC-lOAvp自动进样器，岛津Sro-1OAvp紫外检测器，岛津HW-2000色谱工作站，紫外可见光分光光度计，超声清洗(BRANSONIC, 240W, 50Hz)，CH-920 旋转蒸发仪(BUCHI)。乙腈(FisherScientific)为色谱纯,水为重蒸懼水,其它试剂为分析纯。
[0029]橄榄苦苷对照品自制。
[0030]色谱条件:流动相:乙腈?水(22% );流速lml/min ;检测波长282nm ;柱温:30度；进样量10yL。进行测定，记录色谱图，对照品的保留时间约为lOmin，见图。
[0031]其HPLC图谱显示主峰为峰型较好的单一峰(tK = 11.lmin)，无其他明显杂质，按峰面积归一法计算样品的UV、IR、E1-MS、1H-NMR的谱图数据与橄榄苦苷文献值一致，含量为
98.7% (n=3)。
【主权项】
1.一种橄榄苦苷对照品的制备方法，其特征在于:使用干燥或新鲜的橄榄叶。
2.根据权利要求1所述的橄榄苦苷对照品的制备方法，其特征在于:含橄榄苦苷的植物原料的提取方法为回流、超声、冷浸、渗滤中的一种。
3.根据权利要求2所述的橄榄苦苷对照品的制备方法，其特征在于:，提取方法为超声、冷浸、渗滤中的一种。
4.根据权利要求2、3所述的橄榄苦苷对照品的制备方法,其特征在于:橄榄苦苷的中压柱洗脱液水:乙醇的比例为1:0 —100。
5.根据权利要求4所述的橄榄苦苷对照品的制备方法，其特征在于:水:乙醇的比例为1:0.05—100。
6.根据权利要求5所述的橄榄苦苷对照品的制备方法，其特征在于水:乙醇的比例为1:0.1-05。
【专利摘要】本发明涉及橄榄苦苷对照品的制备方法，它具有工艺流程短，收率高的特点。将含橄榄苦苷的干燥橄榄叶置于容器中，加入甲醇，经过适当提取方法提取后，减压浓缩挥去甲醇，沉淀加水溶解，水层经氯化钠饱和后，滤过，滤液经乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯再用饱和氯化钠溶液洗涤；提取物上于ODS中压柱分离，用不同浓度的乙醇(水：乙醇，1：0-100)洗脱，分部收集，结合TLC检测，减压浓缩，即得橄榄苦苷粗品；将从中压柱洗脱下来的橄榄苦苷经葡聚糖柱进一步分离纯化得到橄榄苦苷晶体(纯度＞98％)。本发明为我国自行生产橄榄苦苷对照品提供了一条途径。
【IPC分类】C07H1-08, C07H17-04
【公开号】CN104650163
【申请号】CN201310618221
【发明人】夏凯特
【申请人】夏凯特
【公开日】2015年5月27日
【申请日】2013年11月25日