一种低聚古罗糖醛酸磷酸酯及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于海洋药物和免疫增强剂领域，具体地说，涉及一种低聚古罗糖醛酸磷 酸酯及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 多糖是一类天然的生物应答调节剂（Biological response modifier, BRM)，它对 机体的特异性和非特异性免疫功能均具有增强作用，例如，香菇多糖和黄芪多糖因显著的 免疫增强作用而作为免疫增强剂应用于药品或功能制品中。然而，这些多糖的分离、纯化工 艺大都较为繁琐，产业化成本较高。
[0003] 近年来，多糖磷酸酯作为一类具有特殊结构的多糖衍生物，被报道具有免疫调节、 抗肿瘤、抗氧化等生物活性。1998年，日本东北大学的Kitazawa小组从德氏乳杆菌保加利 亚亚种（Lactobacillus delbrueckii ssp. Bulgaricus)中分离得到一种胞外磷酸化多糖 (APS)，研宄表明APS可以明显促进C57BL/6小鼠脾脏淋巴细胞的增殖，同时还可以激活巨 噬细胞而抑制S180和P388肿瘤细胞的增殖；然而将APS水解掉磷酸基之后，其活性明显下 降甚至消失，证明磷酸基在该多糖的免疫增强作用中发挥重要的作用（Kitazawa H，Harata T，Uemura J，et al.Int J Food Microbiol, 1998, 40 (3): 169 ~175)。基于以上发现， 2004年日本东北大学的Sato等发现通过化学的手段将右旋糖酐上共价接入磷酸基之后， 可以显著促进小鼠脾脏B淋巴细胞的增殖，促进B淋巴细胞表面CD分子的表达，以及促进 IL_10、IFN-y 等细胞因子 mRNA 的表达（Sato T，Nishimura_Uemura J，Shimosato T，et al.J Food Protect, 2004, 67 (8): 1719~1724)。这些发现初步揭示了多糖磷酸酯具备开 发成为多糖类免疫增强剂的潜力。
[0004] 低聚古罗糖醛酸是一种由海洋褐藻中提取、分离、纯化的均聚酸性多糖，是由 L-古罗糖醛酸通过a_(l，4)-糖苷键连接形成的线性聚合物。目前，文献报道了低聚古罗 糖醛酸及其衍生物具有抗凝血、抗病毒、抗炎、免疫调节等多种生物活性，然而关于低聚古 罗糖醛酸磷酸酯及其在免疫增强剂中的应用未见文献报道。
【发明内容】
[0005] 针对目前多糖类免疫调节剂的产业化成本高，以及多糖磷酸酯和低聚古罗糖醛酸 免疫调节作用的研宄现状，本发明提供了一种低聚古罗糖醛酸磷酸酯及其制备方法和应 用。本发明方法制备得到的低聚古罗糖醛酸磷酸酯能够用于多糖类免疫调节剂药品、食品 或功能制品中，具有原料易得、工艺简单、成本低等特点。
[0006] 为实现上述发明目的，本发明采用下述技术方案予以实现：
[0007] -种低聚古罗糖醛酸磷酸酯，它的结构式如下：
[0008]
【主权项】
1. 一种低聚古罗糖醛酸磷酸酯，其特征在于它的结构式如下：
其分子骨架为L-古罗糖醛酸通过α -(1，4)-糖苷键连接形成的线性聚合物，式中R1=H 或Li、Na、K、Ca、Mg药用盐，R2=H或Ρ032-，1? 2取代基为-PO 32-时的成盐形式与1^取代基为 药用盐时一致，η彡20。
2. 根据权利要求1所述的低聚古罗糖醛酸磷酸酯，其特征在于：所述低聚古罗糖醛酸 磷酸酯的有机磷质量百分比>2%。
3. 权利要求1所述的低聚古罗糖醛酸磷酸酯的制备方法，其特征在于它包括以下步 骤：将低聚古罗糖醛酸加入到反应器中，然后加入尿素，低聚古罗糖醛酸与尿素的质量比为 1 :5~25 ;接着加入N，N-二甲基甲酰胺，低聚古罗糖醛酸与N，N-二甲基甲酰胺的质量体积 比为1 :50~100 ;再加入质量体积比为85%的磷酸，低聚古罗糖醛酸与磷酸的质量体积比为 1 :1~10 ;上述组分混合形成的混合物在110°C~150°C搅拌反应0. 5~6小时；反应结束后，收 集反应沉淀，用95%乙醇反复洗涤后，溶于水中，调节溶液的pH至8~9 ;除去反应过程中残 留的尿素以及磷酸盐后，喷雾干燥，得到低聚古罗糖醛酸磷酸酯。
4. 根据权利要求3所述的低聚古罗糖醛酸磷酸酯的制备方法，其特征在于：所述低聚 古罗糖醛酸的重均分子量〈20 kDa，纯度> 80%。
5. 权利要求1所述的低聚古罗糖醛酸磷酸酯在制备具有免疫增强作用的药品、食品或 功能制品中的应用。
6. 根据权利要求5所述的低聚古罗糖醛酸磷酸酯在制备具有免疫增强作用的药品、食 品或功能制品中的应用，其特征在于：所述低聚古罗糖醛酸磷酸酯能显著提高免疫功能低 下小鼠的脾脏/体重比值和胸腺/体重比值，能够抑制环磷酰胺引起的小鼠免疫器官的萎 缩。
7. 根据权利要求5所述的低聚古罗糖醛酸磷酸酯在制备具有免疫增强作用的药品、食 品或功能制品中的应用，其特征在于：所述低聚古罗糖醛酸磷酸酯能显著增加免疫功能低 下小鼠血清溶血素的释放，能够改善因环磷酰胺而引起的小鼠体液免疫功能的下降。
8. 根据权利要求5所述的低聚古罗糖醛酸磷酸酯在制备具有免疫增强作用的药品、食 品或功能制品中的应用，其特征在于：所述低聚古罗糖醛酸磷酸酯能显著增强免疫功能低 下小鼠的迟发型变态反应，具有恢复因环磷酰胺所致的小鼠细胞免疫低下的作用。
9. 根据权利要求5所述的低聚古罗糖醛酸磷酸酯在制备具有免疫增强作用的药品、食 品或功能制品中的应用，其特征在于：所述低聚古罗糖醛酸磷酸酯能显著增加免疫功能低 下小鼠的廓清指数和吞噬指数，具有增强小鼠单核-巨噬细胞功能，恢复因环磷酰胺导致 的单核-巨噬细胞功能低下的作用。
10. 根据权利要求5所述的低聚古罗糖醛酸磷酸酯在制备具有免疫增强作用的药品、 食品或功能制品中的应用，其特征在于：所述低聚古罗糖醛酸磷酸酯能显著增加免疫功能 低下小鼠外周血象中白细胞、淋巴细胞和红细胞的数量，对环磷酰胺所致的外周血中白细 胞、淋巴细胞、红细胞数量下降具有恢复作用。
【专利摘要】本发明公开了一种低聚古罗糖醛酸磷酸酯及其制备方法和应用，低聚古罗糖醛酸磷酸酯的分子骨架为L-古罗糖醛酸通过α-（1,4）-糖苷键连接形成的线性聚合物，式中R1=H或Li、Na、K、Ca、Mg药用盐，R2=H或PO32-，-PO32-的成盐形式与R1取代基为药用盐时一致，n≤20。本发明提供的低聚古罗糖醛酸磷酸酯能改善小鼠因环磷酰胺所致的免疫功能低下，主要表现在升高免疫脏器/体重比值，增强体液免疫和细胞免疫能力，增强单核-巨噬细胞的吞噬能力，对外周血象中白细胞和淋巴细胞的数量也有明显的升高作用。药理实验结果证明，本发明提供的低聚古罗糖醛酸磷酸酯可以用于制备具有免疫增强作用的药品、食品或功能制品。
【IPC分类】C08B37-00, A23L1-09, C07H1-00, C07H11-04, A61P37-04
【公开号】CN104650253
【申请号】CN201510102665
【发明人】李春霞, 管华诗, 李全才, 辛萌, 李海花, 于广利
【申请人】中国海洋大学
【公开日】2015年5月27日
【申请日】2015年3月9日