一株假微型海链藻及其作为美洲帘蛤育苗饵料的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于水产养殖饵料培养和投喂技术领域，具体涉及一株假微型海链藻及其 作为美洲帘蛤育苗饵料的应用。
【背景技术】
[0002]美洲帘蛤（Mercenaria mercenaria)，又称硬壳蛤、小圆蛤、北方帘蛤，隶属于瓣鲍 纲（Lamillibranchia)、帘始目（Venus clam)、帘始科（Veneridae)、帘始属（Venus)，是一 种较大型的经济双壳类，最大个体壳长超过100mm.原产地为美国东西沿岸，适应于不同底 质养殖，生长速度较快，抗病力强，是美国消费市场最受欢迎的经济贝类。上世纪末已经引 入到我国，目前在中国沿海养殖规模日益增加。目前苗种繁育大多集中在东南沿海，其育苗 的主要季节在每年的3-5月，此时大多育苗地区阴雨天气较多，我国贝类苗种繁育常用的 饵料微藻在这种天气下繁殖速度很慢，远远不能满足该品种苗种迅速生长需要的饵料。这 就需要找到一种在生产季节阴雨天气下生物量繁殖速度很快的微藻品种。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的是提供一株假微型海链藻及其作为美洲帘蛤育苗饵料的应 用，即从海洋水域中分离筛选到低光照强度下能够迅速繁殖的一株假微型海链藻 Guh005(Thalassiosira pseudonana Guh005)，并作为美洲帘蛤育苗馆料的应用，从而弥补 现有技术的不足。
[0004] 本发明一个方面涉及一株假微型海链藻Guh005 (Thalassiosira pseudonana Guh005)，已于2015年1月18日保藏于位于武汉市武汉大学的中国典型培养物保藏中心， 保藏编号：CCTCC NO :M2015044。
[0005] 本发明另一方面提供该株假微型海链藻作为美洲帘蛤苗种繁育中苗种饵料的应 用；
[0006] 本发明还提供上述假微型海链藻的培养方法，是进行三级培养制备；其中在一级 培养阶段采用培养液配方如下：
[0007]每升海水中加有100mg KN03、20mg KH2P04、10mg Na2Si03、0. 20mg MnS04 .H20、5. Omg FeS04?7H20、20mg EDTA-Na2、6 y gVBJP0? 05 y gVB 12;
[0008] 在二级培养阶段，采用培养液配方为每升海水中加有50mg KN03、15mg KH2P04、10mg Na2Si03、2. 50mg FeS04 ? 7H20、10mg EDTA-Na2、6 y g VBJP 0? 05 y g VB 12;
[0009] 在三级培养阶段，采用培养液配方为每升海水中加有20mg尿素、20mg KH2P04、10mg Na2Si03；
[0010] 本发明的假微型海链藻，其培养光照强度为2000-8000LUX。
[0011] 本发明从自然海区筛选出低光照强度下能够迅速繁殖的一株假微型海链藻 Guh005,在本发明提供的培养条件下，跟其他微藻饵料效果比较，在阴雨天繁殖速度要远远 超过其他常规的饵料微藻，从美洲帘蛤孵化二天后即可投喂，饵料效果跟其他常规饵料微 藻相比没有明显差异，可以满足阴雨季节美洲帘蛤苗种规模化繁育的饵料需求，提高了该 贝类生产的稳定性。
【具体实施方式】
[0012] 对于本发明培养基所用的各种组分，均为微藻培养中常用的药品，本发明在于使 用药品之间的互配作用。而且，假微型海链藻培养中，除了培养基的选择外，其它的培养方 法均可采用已公开的海洋微藻的培养方法。对于美洲帘蛤幼苗的培养，也选用公开的方法。
[0013] 以下结合实施案例对本发明进行详细的描述。
[0014] 实施例1 :假微型海链藻Guh005的分离纯化
[0015] 将2010年5月取自浙江乐清市翁洋镇山屿村对虾养殖池塘的海水样品，在倒置显 微镜下用毛细管挑离单个藻细胞后，放于96孔板中培养，培养所用到的培养基为f/2培养 基（Guillard and Ryther 1962，Guillard 1975)，培养温度25±1°C，光暗比 12h:12h，每天 定时摇动两次。在不同光照强度（l〇〇-l〇〇〇〇LuX)下，筛选到1株光照强度2000-8000Lux范 围内均可正常繁殖的海洋微藻一一假微型海链藻Guh005藻株，并已于2015年1月18日保 藏于位于武汉市武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC N0.M2015044。本 发明筛选的藻株可在盐度5-30、温度10-30°C范围内生长，是一个广盐、广温性品种，尤其 在低光照强度下具备明显优于其他微藻的繁殖速度。
[0016] 实施例2 :假微型海链藻Guh005的扩大培养
[0017] 将假微型海链藻Guh005藻种接种到2500mL的玻璃锥形瓶中，锥形瓶中装有进 行一级培养所用的培养液，培养液配方为每升海水中加有l〇〇mg KN03、20mg KH2P04、10mg Na2Si03、0.20mg MnS04*H20、5.0mg FeS04*7H20、20mg EDTA-Na2、6yg VBjPl0.05iig VB12，海 水盐度为20. 5,但海水的盐度可以在5-30范围内变化。培养时每天摇瓶3-6次，（20±2) °C 下自然光培养1周密度达到5000cell?yL4左右后接入50L的白色塑料桶中连续充空气进 行二级培养（接种密度40-50cell?UI71)，二级培养的培养液配方为每升海水中加有50mg KN03、15mg KH2P04、10mg Na2Si03、2.50mg FeS04*7H20、10mg EDTA-Na2、6yg VBjP0.05yg VB12，在自然光、温度（20~25°C)下再培养5d左右，密度达到2000~3000cell?yL-1后 接入15-30m2水泥池（接种密度20-30cell ? y L_〇，沙滤海水的水位lm，连续充空气培养， 三级培养液配方为每升海水中加有20mg尿素、20mg KH2P04、10mg Na2Si03，在自然光、温度 (20~25°C)下培养3-5d后密度达到1000-1200cell ? y I71后进行投喂。
[0018] 表1不同光照条件下三株藻的扩繁倍数比较
[0019]
【主权项】
1. 一株拟微型海链藻，其特征在于，所述的拟微型海链藻的保藏编号为CCTCC NO. M2015044。
2. 权利要求1所述的拟微型海链藻作为贝类饵料的应用。
3. 如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的贝类为美洲帘蛤。
4. 一种培养权利要求1所述的拟微型海链藻的方法，其特征在于，所述的方法是通过 三级培养制备；其中在一级培养阶段采用培养液配方如下： 每升海水中加有 IOOmg KN03、20mg KH2P04、10mg Na2Si03、0.20mg MnSO4 ·Η20、5· Omg FeSO4 · 7H20、20mg EDTA-Na2、6 μ g VBjP 0· 05 μ g VB 12; 在二级培养阶段，采用培养液配方为每升海水中加有50mg KN03、15mg KH2PO4UOmg Na2Si03、2. 50mg FeSO4 · 7H20、10mg EDTA-Na2、6 μ g VBjP 0· 05 μ g VB 12; 在三级培养阶段，采用培养液配方为每升海水中加有20mg尿素、20mg KH2PO4UOmg Na2SiO30
5. 如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的培养阶段，其光照强度为低光照强 度。
6. 如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的低光照强度为2000Lux。
【专利摘要】本发明提供一株拟微型海链藻Guh005，其保藏编号为CCTCC NO.M2015044。分别采用特定的培养液配方对该藻类进行三级扩大培养，并在美洲帘蛤(Mercenaria mercenaria)D形浮浪幼虫变态36h后进行投喂，饵料效果跟常规贝类饵料没有差别。在本发明提供的培养液配方培养下，该海洋硅藻在光照强度2000-8000Lux范围内均可进行露天快速三级扩繁，尤其可作为阴雨天美洲帘蛤苗种培育饵料的优先选择。CCTCC NO：M201504420150118
【IPC分类】A23K1-18, C12R1-89, A23K1-14, C12N1-12
【公开号】CN104651235
【申请号】CN201510092775
【发明人】饶志鹏, 徐继林, 周成旭, 吴旻, 马斌, 严小军
【申请人】宁波大学
【公开日】2015年5月27日
【申请日】2015年3月2日