一种核酸适配体bc15的核心序列及其类似物和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种核酸适配体BC15的核心序列及其类似物和应用，具体涉及一种 特异性识别肿瘤组织切片的核酸适配体BC15核心序列及其类似物，属于生物医药领域。
【背景技术】
[0002] 目前，肿瘤已经成为威胁人类健康的头号疾病，肿瘤的诊断和治疗一直是人们致 力于研究的方向。由于在临床应用上，肿瘤标志物普遍特异性差，绝大多数不仅存在于恶性 肿瘤中，也存在于良性肿瘤、胚胎组织、甚至正常组织中，因此获得高度特异性的肿瘤生物 标志物则是研究的重点和难点之一。
[0003] SELEX筛选技术的出现为肿瘤标志物的寻找带来新的思路。通过体外SELEX筛选 而得到的单链寡核苷酸片段能形成灵活多变的空间三维结构，理论上可以同各种靶分子结 合。与蛋白质类抗体相比，核酸适配体具有更多的优势，如不受免疫条件限制、无免疫原性、 识别能力精确、分子小易渗透、可体外人工合成修饰、变性与复性可逆、有利于长期保存和 室温运输等，为其在肿瘤疾病的诊断和治疗领域发展提供了良好的基础。
[0004] 适配体BC15是一条通过临床肿瘤组织切片采用SELEX技术筛选得到的DNA寡核 苷酸。经鉴定，BC15能识别多种癌症组织切片，包括乳腺癌、肝癌、肺癌等等，而与癌旁组织 无结合。实验证明BC15识别的靶蛋白是hnRNPA1，对于hnRNPA1，目前已有报道证实可 在多种肿瘤组织，如肝癌、乳腺癌、肺癌等肿瘤中高表达，有望成为新的肿瘤标志物。而且 hnRNPA1通过参与RNA转录前和转录后水平的调节，促进端粒延长、抑制细胞凋亡和促进 细胞凋亡增殖，是潜在的抗癌作用靶点。因此BC15在临床肿瘤的诊断和治疗方面上具有广 阔的应用前景，适用于临床肿瘤的辅助诊断和筛查。但由于天然寡核酸的缺陷性，目前利用 SELEX技术筛选到的核酸适配体，无论是用于临床诊断还是疾病治疗，要对它们进行改造才 能应用。通常改造的第一步多是尽量减少有效碱基数量，在尽可能保留其生物功能的同时 缩短配基长度。这样既可以降低合成寡核苷酸配基的成本，同时也提高合成的质量，更重要 的是利于化学修饰。由文献调研的结果发现：BC15的靶标蛋白hnRNPA1能够与具有G4结 构的端粒DNA结合。而从随机文库中筛选出来的长度为74nt的BC15配基的中间有一段富 含G的序列，推测此段为BC15识别靶蛋白的关键位点。
[0005] 由于体内代谢和性质多变不可控，体内半衰期短，易渗漏，核酶降解等问题使得天 然的核酸适配体在临床应用中受到很大的局限。因此，本发明在确定BC15核心序列的基础 上，采用异核苷作为化学修饰策略，通过被修饰部位局部构象的改变，来改变核酸适配体与 靶标的空间位置，提高其亲和能力，进而提高生物活性。这样进行结构优化后的核酸适配体 作为分子探针能够直接应用于临床肿瘤检测和治疗，具有重要的临床应用价值。
【发明内容】
[0006] 本发明的目是一种核酸适配体BC15的核心序列及其类似物和应用，具体涉及一 种特异性识别肿瘤组织切片的核酸适配体BC15核心序列及其类似物。
[0007] 通过对BC15进行一系列不同长度截短序列和碱基相似的端粒序列的考察和比 较，确定BC15-31和BC15-27序列是BC15的核心序列，BC15-31和BC15-27序列的核苷酸 序列分别为SEQNo. 1和SEQNo. 2。
[0008] 本发明利用异核苷对BC15的核心序列BC15-31进行化学修饰，在BC15-31序列5' 端的3位、15位、22位、24位、26位、28位或30位，其中一位或者多位上掺入化学式I或化 学式II所示的异核苷化合物以代替天然核苷化合物在相应位置进行偶联。
[0009]
【主权项】
1. 一种核酸适配体BC15的核心序列，其特征在于，BC15的核心序列为BC15-31和 BC15-27,其核苷酸序列分别为SEQ No. 1和SEQ No. 2。
2. -种核酸适配体BC15的核心序列BC15-31的类似物，其特征在于，在BC15-31序列 5'端的3位、15位、22位、24位、26位、28位或30位，其中一位或者多位上掺入化学式I或 化学式II所示的异核苷化合物以代替天然核苷化合物在相应位置进行偶联，
3. 权利要求1所述的核酸适配体BC15的核心序列在制备诊断或治疗肿瘤药物中的应 用。
4. 权利要求2所述的核酸适配体BC15的核心序列BC15-31的类似物在制备诊断或治 疗肿瘤药物中的应用。
【专利摘要】本发明涉及一种核酸适配体BC15的核心序列，BC15的核心序列为BC15-31和BC15-27，其核苷酸序列分别为SEQ No.1和SEQ No.2。本发明中核酸适配体BC15的核心序列BC15-31的类似物，即在BC15-31序列5’端的3位、15位、22位、24位、26位、28位或30位，其中一位或者多位上掺入异核苷化合物以代替天然核苷化合物在相应位置进行偶联。本发明适配体BC15的核心序列BC15-31和BC15-27及其BC15-31的类似物能够识别肝癌组织切片，与靶蛋白有更强的亲和能力，以及对肿瘤细胞生长增殖的抑制能力，使得本发明在肿瘤的诊断和治疗领域具有广泛的应用价值和市场前景。
【IPC分类】A61P35-00, A61K48-00, C12N15-115, C12Q1-68
【公开号】CN104651368
【申请号】CN201310576245
【发明人】杨振军, 李理宇, 邵宁生, 蔡报斌, 李少华, 李昆峰, 丁红梅, 李慧
【申请人】北京大学, 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所
【公开日】2015年5月27日
【申请日】2013年11月15日