一种罂粟的pcr检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种罂粟的检测方法，尤指一种以rDNA-ITS通用引物经PCR(聚合酶 链式反应）方法检测罂粟植物材料。
【背景技术】
[0002] 罂粟（Papaver somniferum)是加工制作麻醉药品与毒品（鸦片、吗啡、海洛因） 的一种特殊经济作物。鸦片，是从婴粟的蒴果上割取的汁液加工制成，又名阿片、阿芙蓉、洋 药、土药、烟土、大烟等。在未加工的状态下是一种不透明的乳白色汁液，在婴粟植物的各个 部位都能发现，但最主要的还是集中在未成熟蒴果的活性成分里。这种乳白色的汁液一接 触空气即被氧化，变成暗棕色的粘稠物质，触摸时有粘性，且有一股淡淡的清香味，然后需 要在阳光下暴晒几天，塑成糕饼状、球状或块状的生鸦片。一个蒴果可以连续分泌鸦片好几 天，而且可以被切割6次之多，平均每只产量80毫克，一公顷婴粟可生产8-15公斤生鸦片。
[0003] 鸦片是一种杀害千百万人的毒品，吸食鸦片对人体的伤害是很大的，长期吸食鸦 片，可使人先天免疫力丧失，因而人体的整体衰弱使得鸦片成瘾者极易患上或感染各种疾 病，寿命也会缩短；过量吸食鸦片可引起急性中毒，可因呼吸抑制而死亡。鸦片害人身体，痹 人意志，使民人无力耕种，军人丧失战斗力。就大方面而言，其结果可使民族生存受到威胁。
[0004] 婴粟在中国的种植，开始时候只作为药用物质，种植范围有限，后来混合于烟草一 起吸食，促进其种植范围的扩大，中华人民共和国成立初期，鸦片的毒害进一步扩大，政府 组织全国性的禁毒，打击鸦片泛滥，国家又限制其种植，一直到现在，婴粟在中国的种植仅 限于法律允许的范围内种植。
[0005] 目前国际上解决鸦片及其衍生物给社会造成的危害问题，主要是通过限制婴粟的 种植范围来实现的。《中华人民共和国治安管理处罚法》第七十一条对非法种植罂粟、非法 买卖、运输、携带、持有少量等行为也作出了明确的处罚解释。但农村非法种植罂粟时有发 生且有扩大走势，因此有必要对罂粟植物材料进行准确鉴定。传统的罂粟植物鉴定方法主 要是依据其形态学或者解剖学特征进行的，而由于在分类学中近缘物种的罂粟属植物结构 非常相似，这给罂粟的物种准确鉴定带来一些困难，如鉴定工作周期较长、鉴定范围窄等， 且容易出错。因此，有必要建立一种能准确鉴定罂粟的快速分子检测方法。
【发明内容】
[0006] 本发明所要解决的技术问题是：针对上述现有技术的不足，提供一种罂粟的PCR 检测方法，该方法是以真核生物rDNA-ITS通用引物对待测材料的DNA提取物进行PCR扩 增，本检测方法有别于其它检测方法，可用于快速检测出待测样品是否为罂粟。
[0007] 为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：一种罂粟的PCR检测方法，该 方法是以真核生物rDNA-ITS通用引物对待测样品进行PCR扩增，再对PCR阳性产物进行克 隆、测序，将测序结果进行BLAST分析，最终对检测样品进行鉴定。
[0008] 所述待测样品采用简易碱法提取DNA。上述PCR产物大小为635bp。
[0009] 对本发明方法详细叙述如下：
[0010] -、引物选取：
[0011] 选取真核生物通用引物ITS4 (正向引物）、ITS5 (反向引物）。
[0012] 二、DNA的简易碱法提取：
[0013] 采取下述简易方法提取罂粟DNA :
[0014] (1)分析天平称重，称取20mg样品组织置于灭菌过的1. 5mL离心管中。
[0015] (2)配制 0? 5mol/L NaOH 溶液。
[0016] (3)在装有样品组织的1. 5mL离心管中加入100 y L 0. 5mol/L NaOH溶液。
[0017] (4)研磨破碎细胞匀浆，lOOOOrpm离心2min。
[0018] (5)快速移取5 y L上清提取液，加入495 y L Tris-Hcl缓冲液（PH = 8,0? lmol/ L)，混匀，作为DNA模板粗提物，对DNA粗提产物用试剂盒进行纯化。
[0019] 三、PCR 过程：
[0020] 采用上述引物对罂粟的DNA进行PCR检测。预期PCR产物为635bp。
[0021] PCR反应体系为50 yl，具体见下表1 :
[0022] 表1 PCR反应体系各主要成分及用量
[0023]
【主权项】
1. 一种罂粟的PCR检测方法，其特征在于：该方法是以真核生物rDNA-ITS通用引物对 待测样品进行PCR扩增，再对PCR阳性产物进行克隆、测序，将测序结果进行BLAST分析，最 终对检测样品进行鉴定。
2. 如权利要求1所述的一种罂粟的PCR检测方法，其特征在于：所述待测样品采用简 易喊法提取DNAd
【专利摘要】一种罂粟的PCR检测方法，是以真核生物rDNA-ITS通用引物对待测样品进行PCR扩增，再对PCR阳性产物进行克隆、测序，将测序结果进行BLAST分析，最终对检测样品进行鉴定。本检测方法有别于其它检测方法，可以用于快速检测鉴定罂粟植物材料，有利于打击非法种植罂粟，遏制毒品犯罪，保障人民群众的生命安全。
【IPC分类】C12Q1-68
【公开号】CN104673930
【申请号】CN201510137774
【发明人】高必达, 黄欣, 张汝佳
【申请人】湖南农业大学
【公开日】2015年6月3日
【申请日】2015年3月26日