一种蜗牛酶的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种酶的制备方法，具体地说是一种蜗牛酶的制备方法。
【背景技术】
[0002]蜗牛酶是从蜗牛的嗉囊和消化道中制备的混合酶，它含有纤维素酶、果胶酶、淀粉酶、蛋白酶等20多种酶。蜗牛酶是很有价值的一种酶，它可以用于酵母细胞壁的破碎，因此广泛用于细胞生物学和基因工程学的研宄；它可做饲料添加剂，从而提高饲料的消化率；也可用作果汁澄清，橘子脱囊衣，果酱制作等。蜗牛酶内含常见9种酶:从蜗牛消化腺中发现有纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶、阿尔法淀粉酶、甘露糖酶、蔗糖酶、半乳聚糖酶、蛋白水解酶、氨基酸转移酶等多种具有生物活性的混合酶。而目前蜗牛酶的提取方法存在工艺复杂、操作性差和提纯率低的缺陷，保存条件高使得蜗牛酶价格居高不下，不能实现量产。
【发明内容】
[0003]本发明就是为了解决现有蜗牛酶提取方法工艺复杂、操作性差、提纯率低、成本高的技术问题，提供一种工艺简单、操作性强、提纯率高、成本低的蜗牛酶的制备方法。
[0004]本发明提供一种蜗牛酶的制备方法，包括以下步骤:
[0005](I)蜗牛选购:选用鲜活褐云玛瑙螺；
[0006](2)蜗牛清洗:将蜗牛置于放养箱中净饿3天，每天早晚用温度为18°C?28°C的清水冲洗，洗掉粪便和杂物；
[0007](3)蜗牛去壳:取清洗干净的鲜活蜗牛，在工作台上敲碎蜗牛壳，小心剥去外壳；
[0008](4)取消化腺:顺蜗牛的消化道剪开体壁剥离出消化腺；
[0009](5)抽消化液:用灭菌针从蜗牛的素囊和胃里抽出红棕色的消化液，置于容器中；
[0010](6)第一次过滤:将收集好的消化液通过450目过滤网，收集在无菌离心管中；
[0011](7)离心:用低温离心机将第一次过滤后的消化液在O V?5°C下离心9分钟，离心转速为11000转/分，取上清液；
[0012](8)第二次过滤:将上清液经过细菌滤器过滤；
[0013](9)真空冻干:滤液用塑料容器进行真空冻干20小时，蜗牛酶含水量在5%以下；
[0014](10)胶磨:将冻干后的蜗牛酶在胶磨机中磨成粉末，分装在安瓶中；
[0015](11)保存:安瓶抽气封管，装箱后置于干燥阴凉处保存。
[0016]优选地，步骤(I)中选用的鲜活褐云玛瑙螺的重量为14克以上，步骤(2)中的放养箱的底部打满小孔，放养箱的利用空间为30%，冲洗用的清水温度为23°C ;步骤(7)中，离心时的温度为3°C ;步骤(9)中，蜗牛酶含水量为5%。
[0017]本发明的有益效果是，本方法工艺简单、操作性强、提纯率高，可实现蜗牛酶的量产，蜗牛酶成品价格低，并可在常温下保存8年而蜗牛酶的活性仍保持良好。经中国科学院遗传与发育生物学研宄所鉴定，本发明中的蜗牛酶具有有效降解酵母细胞壁的活性，每Ug的酶，2小时内，30°C水浴中可降解1.28X 106个酵母。试验所采用仪器为:BCA_100蛋白定量分析试剂盒(上海申能博采公司生产)、分光光度计(岛津公司生产)、OLYMPUS相差显微镜。
【附图说明】
[0018]图1是本发明的制备方法的过程图。
【具体实施方式】
[0019]如图1所示:
[0020](I)蜗牛选购:
[0021]选用14克以上的鲜活褐云玛瑙螺(学名:Achatina Fulica)。
[0022](2)蜗牛清洗:
[0023]将蜗牛置于底部打满小孔的放养箱中，每个放养箱利用空间约为30%，净饿3天，每天早晚用温度为18°C?28°C的清水冲洗，洗掉粪便和杂物，清洗可配合抹布，轻微翻动蜗牛，每次清洗还应仔细挑除已死掉的蜗牛。对于冲洗用的清水，其温度优选为23°C。
[0024](3)蜗牛去壳:
[0025]取50KG清洗干净的鲜活蜗牛，在工作台上敲碎蜗牛壳，小心剥去外壳。
[0026](4)取消化腺:
[0027]顺蜗牛的消化道剪开体壁剥离出消化腺。
[0028](5)抽消化液:
[0029]用灭菌针从蜗牛的素囊和胃里抽出红棕色的消化液，置于容器中，一只褐云玛瑙螺平均可抽取I?1.5毫升消化液。
[0030](6)第一次过滤:
[0031]将收集好的消化液通过450目过滤网，收集在无菌离心管中。
[0032](7)离心:
[0033]用低温离心机将第一次过滤后的消化液在0°C?5°C下离心9分钟，离心转速为11000转/分，取上清液。对于离心温度，优选为3°C。
[0034](8)第二次过滤:
[0035]将上清液经过细菌滤器过滤，可得滤液1000毫升。
[0036](9)真空冻干:
[0037]滤液用塑料容器进行真空冻干20小时，蜗牛酶含水量在5%以下，冻干的蜗牛酶为结晶体，呈棕褐色，可得150克结晶体。对于蜗牛酶含水量，优选为5%。
[0038](10)胶磨:
[0039]将冻干后的蜗牛酶在胶磨机中磨成粉末，分装在安瓶中。
[0040](11)保存:
[0041]安瓶抽气封管，装箱后置于干燥阴凉处保存。
【主权项】
1.一种蜗牛酶的制备方法，其特征是包括以下步骤: (1)蜗牛选购:选用鲜活褐云玛瑙螺； (2)蜗牛清洗:将蜗牛置于放养箱中净饿3天，每天早晚用温度为18°C?28°C的清水冲洗，洗掉粪便和杂物； (3)蜗牛去壳:取清洗干净的鲜活蜗牛，在工作台上敲碎蜗牛壳，剥去外壳； (4)取消化腺:顺蜗牛的消化道剪开体壁剥离出消化腺； (5)抽消化液:用灭菌针从蜗牛的素囊和胃里抽出红棕色的消化液，置于容器中； (6)第一次过滤:将收集好的消化液通过450目过滤网，收集在无菌离心管中； (7)离心:用低温离心机将第一次过滤后的消化液在0°C?5°C下离心9分钟，离心转速为11000转/分，取上清液； (8)第二次过滤:将上清液经过细菌滤器过滤； (9)真空冻干:滤液用塑料容器进行真空冻干20小时，蜗牛酶含水量在5%以下； (10)胶磨:将冻干后的蜗牛酶在胶磨机中磨成粉末，分装在安瓶中； (11)保存:安瓶抽气封管，装箱后置于干燥阴凉处保存。
2.根据权利要求1所述的蜗牛酶的制备方法，其特征是: 所述步骤(I)中选用的鲜活褐云玛瑙螺的重量为14克以上，所述步骤(2)中的放养箱的底部打满小孔，所述放养箱的利用空间为30%，冲洗用的清水温度为23°C ;所述步骤(7)中，离心时的温度为:TC ;所述步骤(9)中，蜗牛酶含水量为5%。
【专利摘要】本发明涉及一种蜗牛酶的制备方法，其解决了现有蜗牛酶提取方法工艺复杂、操作性差、提纯率低、成本高的技术问题，其步骤是：选用鲜活褐云玛瑙螺、清洗、去壳、取消化腺、抽消化液、第一次过滤、离心、第二次过滤、真空冻干、胶磨、保存。本发明广泛用于蜗牛酶的制备。
【IPC分类】C12N9-64, C12N9-88, C12N9-26, C12N9-18, C12N9-42
【公开号】CN104726440
【申请号】CN201510188175
【发明人】刘斌, 杨磊
【申请人】威海圣奥罗生物科技有限公司
【公开日】2015年6月24日
【申请日】2015年4月20日