一种雷公藤甲素的提取制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种雷公藤甲素的提取制备方法，属于医药技术领域。
【背景技术】
[0002] 雷公藤（TripterygiumwilfordiiHookf.)系卫矛科雷公藤属植物，中药大辞 典记载，具有祛风除湿、通络止痛、消肿止痛、解毒杀虫的功效，临床用于治疗类风湿性关节 炎、慢性肾炎和红斑狼疮等自身免疫性疾病，近年来用于器官移植的抗排斥反应治疗，均取 得了较好疗效。现代研宄相继发现雷公藤有抗炎、抗免疫、抗生育、抗肿瘤、抗菌活性等作 用。至今从雷公藤中已分离出200多种化学单体，其中二萜类、倍半萜生物碱类、三萜类为 主要活性成分。
[0003] 雷公藤甲素（triptolide)是从雷公藤中分离出的活性最高的环氧化二萜内酯化 合物，是雷公藤的主要有效成分之一，其相关效价比雷公藤总苷高100-200倍。经药理和临 床试验表明，其具有确切的免疫抑制、抗炎、抗生育及抗肿瘤等生物活性。
[0004] 然而雷公藤甲素在雷公藤中的含量很低，其提取分离的得率也很低，据文献报道， 植物分离得率仅为0. 001 % (w/w)。
[0005] 雷公藤甲素粗提物的制备工艺主要有乙醇回流提取一中性氧化铝吸附一三氯 甲烷萃取、乙醇回流提取一三氯甲烷萃取、乙醇回流提取一乙酸乙酯萃取和水煮醇沉一 乙酸乙醋或三氯甲烷萃取等，所得的三氯甲烷浸膏中雷公藤甲素的含量为0.23%左右。 CN101434638A提供了一种从雷公藤中提取雷公藤甲素粗品的方法，采用含氯的烷烃进行加 压提取，提取液减压浓缩后得雷公藤甲素粗品，纯度1 %左右。
[0006] CN101367862公开了一种从雷公藤中分离高纯度雷公藤甲素的方法，用醇对药材 进行热提，所得醇提物先用石油醚萃取，然后用氯仿或二氯甲烷萃取，氯仿或二氯甲烷萃取 物上氧化铝或硅胶柱进行柱层析，以氯仿/甲醇或二氯甲烷/甲醇混合溶剂洗脱，将分段收 集的馏分再上高效制备液相色谱得到雷公藤甲素半成品，最后在有机溶剂中结晶得雷公藤 甲素纯品。
[0007] CN103524591A公开了一种以雷公藤根为原料提取雷公藤甲素的方法：雷公藤根 的醇提取浸膏分配在由聚合物-无机盐水溶液和乙醇形成的双水相体系中，然后用水不溶 性有机溶剂对分配在双水相体系中雷公藤浸膏进行萃取，得到有效部位。将得到的有效部 位用醇溶解，加水结晶除去大部分非有效物质得到富集的有效部位。该富集的有效部位经 过硅胶柱层析分离，重结晶后得到雷公藤甲素。
[0008] 目前雷公藤甲素提取纯化方法普遍存在粗提物雷公藤甲素富集率低、纯化工艺复 杂、耗时长、效率低、收率低、成本高等缺陷。
【发明内容】
[0009] 为了克服上述现有技术的不足，本发明提供了一种雷公藤甲素提取制备的新方 法，可以大大简化生产工艺提高生产效率、提高雷公藤甲素收得率。
[0010] 本发明采用的技术方案是：
[0011] 提供一种雷公藤甲素的提取制备方法，其包括如下步骤：
[0012] (1)提取：将雷公藤药材粉碎至20~30目，用5~15倍量（重量）乙酸乙酯回 流提取2~3次，每次4~8小时，过滤后浓缩提取液得到重量为雷公藤药材重量2~3% 的浸膏；
[0013] (2)碱洗：将浸膏用二氯甲烷溶解后用0. 2~0. 8moL/L NaOH溶液洗涤2~3次， 浓缩二氯甲烷相得碱洗后浸膏；
[0014] (3)第一次柱层析：将碱洗后浸膏上正相硅胶柱，先用二氯甲烷洗脱，洗脱液颜色 变淡后用二氯甲烷/甲醇混合溶剂洗脱1~2个柱体积，然后用甲醇洗脱，浓缩甲醇洗脱液 得甲醇洗脱物；
[0015] (4)第二次柱层析：将甲醇洗脱物再上正相硅胶柱，用石油醚/乙酸乙酯混合溶剂 进行梯度洗脱，收集含雷公藤甲素的洗脱液，浓缩至1/4~1/10倍体积后静置析晶，得雷公 藤甲素粗品；
[0016] (5)纯品制备：将雷公藤甲素粗品用有机溶剂溶解后静置析晶，过滤出晶体得雷 公藤甲素纯品。
[0017] 任选地，步骤（1)回流提取时可加入药材重量0.05~0.15%的抗坏血酸。
[0018] 在一实施方案中，步骤（2)所述二氯甲烷的用量为每公斤药材用二氯甲烷0.5~ 1. 5升，每次碱洗NaOH溶液用量为二氯甲烷的0. 5~1. 6倍（体积）。
[0019] 在一实施方案中，步骤（3)柱层析采用200~300目正相硅胶，用量为浸膏重量的 2~10倍，采用湿法裝柱的方式，所述混合溶剂为二氯甲烷：甲醇=80~10:1(体积比） 的混合溶剂。
[0020] 在一实施方案中，步骤（4)柱层析采用200~300目正相硅胶，用量为浸膏重量的 20~60倍，采用干法裝柱或湿法裝柱的方式，所述混合溶剂为石油醚：乙酸乙酯=10~ 1:1(体积比）的混合溶剂。
[0021] 在一实施方案中，步骤（4)所述梯度洗脱方式为依次用石油醚：乙酸乙酯=10:1、 6:1、4:1、2:1、1:1(体积比）的混合溶剂洗脱，每个比例洗脱3~10个柱体积。
[0022] 在一实施方案中，步骤（5)所述有机溶剂选自以下溶剂体系：石油醚/二氯甲烷、 石油醚/乙酸乙酯、石油醚/丙酮、异丙醚。
[0023]在一实施方案中，步骤（4)、（5)所述静置析晶的温度为4°C或室温。
[0024] 本发明柱层析待分离样品的制备方法：适量二氯甲烷溶解浸膏，加入适量80目正 相硅胶中搅拌吸附，约50°C减压蒸发掉有机溶剂后研散成均匀的沙粒状即得。
[0025] 本发明所采用的雷公藤药材优选雷公藤甲素含量大于30ppm(即0. 003% )的药 材，与低含量药材相比，相同的成本消耗可以得到更多量的雷公藤甲素产品，有助于更好地 降低单位产品的生产成本，提高经济效益。
[0026] 药材中雷公藤甲素的含量测定方法：取50g药材粉碎至20~30目，用20倍甲醇回 流提取2次，每次4小时，提取液过滤后浓缩，用甲醇溶解并定容至50mL作为供试品溶液； 取雷公藤甲素对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并制成每ImL含50yg的溶液作为对照品 溶液；HPLC色谱条件：色谱柱：phenomenex C18(4.6_X250mm，5ym);流动相：A:甲醇，B: 甲醇-水（40:60);流速：0.9mL/min，按下表进行梯度洗脱：
[0027] 雷公藤甲素梯度洗脱条件
[0028]
【主权项】
1. 一种雷公藤甲素的提取制备方法，其特征在于包括如下步骤： (1) 提取：将雷公藤药材粉碎至20~30目，用5~15倍量（重量）乙酸乙酯回流提 取2~3次，每次4~8小时，过滤后浓缩提取液得到重量为雷公藤药材重量2~3%的浸 膏； (2) 碱洗：将浸膏用二氯甲烧溶解后用0. 2~0. 8moL/LNaOH溶液洗绦2~3次，浓缩 二氯甲烷相得碱洗后浸膏； (3) 第一次柱层析：将碱洗后浸膏上正相硅胶柱，先用二氯甲烷洗脱，洗脱液颜色变淡 后用二氯甲烷/甲醇混合溶剂洗脱1~2个柱体积，然后用甲醇洗脱，浓缩甲醇洗脱液得甲 醇洗脱物； (4) 第二次柱层析：将甲醇洗脱物再上正相硅胶柱，用石油醚/乙酸乙酯混合溶剂进行 梯度洗脱，收集含雷公藤甲素的洗脱液，浓缩至1/4~1/10倍体积后静置析晶，得雷公藤甲 素粗品； (5) 纯品制备：将雷公藤甲素粗品用有机溶剂溶解后静置析晶，过滤出晶体得雷公藤 甲素纯品。
2. 如权利要求1所述的雷公藤甲素的提取制备方法，其特征在于步骤（1)回流提取时 加入药材重量0. 05~0. 15%的抗坏血酸。
3. 如权利要求1或2所述的雷公藤甲素的提取制备方法，其特征在于步骤（2)所述二 氯甲烷的用量为每公斤药材用二氯甲烷〇. 5~1. 5升，每次碱洗NaOH溶液用量为二氯甲烷 的0? 5~1. 6倍（体积）。
4. 如权利要求1或2所述的雷公藤甲素的提取制备方法，其特征在于步骤（3)柱层析 采用200~300目正相硅胶，用量为浸膏重量的2~10倍，采用湿法裝柱的方式，所述混合 溶剂为二氯甲烷：甲醇=80~10:1 (体积比）的混合溶剂。
5. 如权利要求1或2所述的雷公藤甲素的提取制备方法，其特征在于步骤（4)柱层析 采用200~300目正相硅胶，用量为浸膏重量的20~60倍，采用干法裝柱或湿法裝柱的方 式，所述混合溶剂为石油醚：乙酸乙酯=10~1:1(体积比）的混合溶剂。
6. 如权利要求5所述的雷公藤甲素的提取制备方法，其特征在于步骤（4)所述梯度洗 脱方式为依次用石油醚：乙酸乙酯=1〇:1、6 :1、4:1、2:1、1:1(体积比）的混合溶剂洗脱， 每个比例洗脱3~10个柱体积。
7. 如权利要求1或2所述的雷公藤甲素的提取制备方法，其特征在于步骤（5)所述有 机溶剂选自以下溶剂体系：石油醚/二氯甲烷、石油醚/乙酸乙酯、石油醚/丙酮、异丙醚。
8. 如权利要求1或2所述的雷公藤甲素的提取制备方法，其特征在于步骤（4)、（5)所 述静置析晶的温度为4°C或室温。
9. 如权利要求1~8任一项所述的雷公藤甲素的提取制备方法，其特征在于，所述雷公 藤药材为雷公藤甲素含量大于30ppm的药材。
【专利摘要】本发明提供一种雷公藤甲素的提取制备方法，用乙酸乙酯提取雷公藤药材，浸膏用二氯甲烷溶解后碱洗，然后进行二次正相硅胶柱层析，第一次柱层析依次用二氯甲烷、二氯甲烷/甲醇混合溶剂、甲醇洗脱，第二次柱层析用石油醚/乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱，最后通过结晶操作制得雷公藤甲素纯品。该制备方法步骤少、操作简便，可高收率地得到高纯度的雷公藤甲素产品，大大降低了雷公藤甲素的生产成本。
【IPC分类】C07J73-00
【公开号】CN104788532
【申请号】CN201510213692
【发明人】谢相林, 付书青
【申请人】成都健腾生物技术有限公司
【公开日】2015年7月22日
【申请日】2015年4月30日