从莲房中制备槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法
【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及中药技术领域，尤其涉及从莲房中制备槲皮素-3-0- β -D-葡萄糖醛酸苷的方法。
【背景技术】
[0002]莲房Nelumbinis Tfece/? (<3<^/7观是睡莲科植物莲 Nelumbo nucifera Gaertn.的干燥花托，味苦，性涩、温，具有化瘀止血的功效，用于崩漏，尿血，痔疮出血，产后瘀阻，恶露不尽。药理研宄表明，莲房具有抗氧化、抗辐射、抗肿瘤、抗衰老、抗心肌缺血、保肝和保护心血管等作用。槲皮素-3-0- β -D-葡萄糖醛酸苷是莲房中含量最高的黄酮醇苷类成分，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种生物活性，以往从莲房中分离该化合物的主要步骤为:莲房干燥后粉碎，用75%乙醇回流提取，提取液回收乙醇后加水溶解，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取。正丁醇部分经硅胶柱反复层析，二氯甲烷-甲醇梯度洗脱后再经过反复硅胶柱色谱、S印hadex LH 20柱色谱后得到槲皮素-3_0_ β-D-葡萄糖醛酸苷(Wu YB,Zheng LJ, Wu JG, et al.Ant1xidant Activities of Extract and Fract1ns fromReceptaculum Nelumbinis and Related Flavonol Glycosides.1nternat1nal Journalof Molecular Sciences, 2012，13(6): 7163-7173);或者新鲜莲房用 60% 甲醇于 50°C浸提，提取液回收溶剂后上AB-8大孔树脂，依次用水洗脱，再用70%乙醇洗脱，70%乙醇洗脱液回收溶剂后加入乙酸酸化后的丙酮，离心后收集沉淀，沉淀溶于水后再经过聚酰胺柱色谱和反相C18柱色谱，以不同浓度的甲醇水混合溶剂洗脱后得到到槲皮素-3-0-β -D-葡萄糖酸酸苷(Xiao JS, Xie BJ, Cao YP, et al.Characterizat1n of OligomericProcyanidins and Identificat1n of Quercetin Glucuronide from Lotus (NelumbonuciferaGaertn.) Seedpod.Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2012,60(11): 2825-2829)。
[0003]上述的制备方法步骤繁琐、操作费时、产品得率较低、有机溶剂用量较大、成本较高、易造成环境污染，而且产品易残留有机溶剂从而影响产品的安全性，不适合工业化生产。因此，急需一种高效、简便、低成本、安全的提取分离技术来解决现有技术中所存在的这一问题。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供从莲房中制备槲皮素-3-0-β -D-葡萄糖醛酸苷的方法。本方法通过乙醇和水混合溶剂来进行提取分离，保证产品的安全性，也简化了分离的流程，适用于工业化生产。
[0005]为实现上述目的，本发明采用如下技术方案:以莲房为原料，经含水乙醇回流提取提取，浓缩液经大孔吸附树脂初步纯化，10%乙醇洗脱部位直接经反相硅胶柱纯化，制得槲皮素-3-0-葡萄糖醛酸苷单体化合物。
[0006]本发明提供的制备槲皮素-3-0-β -D-葡萄糖醛酸的方法包括以下步骤: a:将干燥后的莲房粉碎，用30%-75%乙醇回流提取2次，提取液减压浓缩，得到初提取物；
b:步骤a中所得的初提取物加水溶解后过滤，滤液上大孔树脂，依次用10 BV水洗脱，再用15%乙醇洗脱，收集15%乙醇洗脱洗脱液，减压回收溶剂，得到含槲皮素-3-0-葡萄糖醛酸苷的粗提取物；
c:将步骤b中所得的粗提取物过反相C18硅胶柱色谱，以水洗脱4-8倍柱体积，再用15%乙醇洗脱洗，收集15%乙醇洗脱洗脱液，减压回收溶剂，得槲皮素-3-0- β -D-葡萄糖醛酸苷。
[0007]所述步骤a中的莲房药材和乙醇水的料液比为1:10-20。
[0008]所述步骤a中的提取方法为回流提取、超声提取、和浸渍提取中的任意一种。
[0009]所述步骤b中的大孔树脂优选中极性或弱极性大孔树脂。
[0010]本发明的优点是:本提取方法选用安全、无毒的水和乙醇为提取溶剂，既保证了产品的质量又不会污染环境，且生产成本低、制备方法简单，适合用于工业化大生产。另外本产品的研宄还可以发掘莲房潜在的医药用途，促进莲房药材的深加工，提高农产品的附加值，增加莲农的收入。
【具体实施方式】
[0011]下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，所述的是对本发明的解释而不是限定。
[0012]实施例1
莲房药材500g，用10倍30%乙醇回流提取2次，提取液过滤，滤液合并减压浓缩，得到提取物，提取物加水溶解后过滤，滤液上HPD-722大孔树脂，依次用10 BV水洗脱，再用15%乙醇洗脱，收集15%乙醇洗脱液，减压浓缩后用水溶解，上反相C18硅胶柱色谱，以10 BV水洗脱，再用15%乙醇洗脱，收集15%乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得槲皮素-3-0- β -D-葡萄糖醛酸苷6.18g，经HPLC法检测，纯度为91.4%。
[0013]实施例2
莲房药材500g，用15倍50%乙醇回流提取2次，提取液过滤，滤液合并减压浓缩，得到提取物，提取物加水溶解后过滤，滤液上HPD-400大孔树脂，依次用10 BV水洗脱，再用15%乙醇洗脱，收集15%乙醇洗脱液，减压浓缩后用水溶解，上反相C18硅胶柱色谱，以10 BV水洗脱，再用15%乙醇洗脱，收集15%乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得槲皮素-3-0- β -D-葡萄糖醛酸苷6.34g，经HPLC法检测，纯度为92.4%。
[0014]实施例3
莲房药材500g，用20倍75%乙醇回流提取2次，提取液过滤，滤液合并减压浓缩，得到提取物，提取物加水溶解后过滤，滤液上AB-8大孔树脂，依次用10 BV水洗脱，再用15%乙醇洗脱，收集15%乙醇洗脱液，减压浓缩后用水溶解，上反相C18硅胶柱色谱，以10 BV水洗脱，再用15%乙醇洗脱，收集15%乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得槲皮素-3-0- β -D-葡萄糖醛酸苷5.94g，经HPLC法检测，纯度为93.3%。
[0015]以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。
【主权项】
1.从莲房中制备槲皮素-3-0-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法，其特征在于:以莲房为原料，经含水乙醇回流提取提取，浓缩液经大孔吸附树脂初步纯化，10%乙醇洗脱部位直接经反相硅胶柱纯化，制得槲皮素-3-0-葡萄糖醛酸苷单体化合物。
2.根据权利要求1所述的从莲房中制备槲皮素-3-0-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法，其特征在于:具体步骤包括如下: a:将干燥后的莲房粉碎，用30%-95%乙醇回流提取2次，提取液减压浓缩，得到初提取物； b:步骤a中所得的初提取物加水溶解后过滤，滤液上大孔树脂，先用水洗脱6-10个柱体积，再用15%乙醇洗脱，收集15%乙醇洗脱洗脱液，减压回收溶剂，得到含槲皮素-3-0-葡萄糖醛酸苷的粗提取物； c:将步骤b中所得的粗提取物过反相C18硅胶柱色谱，以水洗脱4-8倍柱体积，再用15%乙醇洗脱洗，收集15%乙醇洗脱洗脱液，减压回收溶剂，得槲皮素-3-0- β -D-葡萄糖醛酸苷。
3.根据权利要求1所述的从莲房中制备槲皮素-3-0-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法，其特征在于:所述步骤a中的莲房药材和乙醇水的料液比为1:10-20。
4.根据权利要求1所述的从莲房中制备槲皮素-3-0-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法，其特征在于:所述步骤a中的提取方法为回流提取、超声提取、和浸渍提取中的任意一种。
5.根据权利要求1所述的从莲房中制备槲皮素-3-0-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法，其特征在于:所述步骤b中的大孔树脂优选中极性或弱极性大孔树脂。
【专利摘要】本发明涉及中药技术领域，尤其涉及从莲房中制备槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法。所述方法是以莲房为原料，经含水乙醇回流提取，浓缩液经大孔吸附树脂初步纯化，10%乙醇洗脱部位直接经反相硅胶柱纯化，制得槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷单体化合物，纯度达90%以上。该方法原料丰富易得，工艺简单易行，操作简便，高效环保，适用于工业应用。
【IPC分类】C07H17-07, C07H1-08
【公开号】CN104817603
【申请号】CN201510168190
【发明人】吴岩斌, 吴锦忠, 郑淑霞, 吴建国
【申请人】福建中医药大学
【公开日】2015年8月5日
【申请日】2015年4月11日