一种酶法制备他汀类化合物中间体的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种生物技术领域，具体地，涉及一种酶法制备他汀类化合物中间体 的方法。
【背景技术】
[0002] 阿托伐他汀是他汀类血脂调节药，属HMG-CoA还原酶抑制剂。口服吸收后的水解 产物在体内竞争性地抑制胆固醇合成过程中的限速酶羟甲戊二酰辅酶A还原酶，从而减少 胆固醇的合成，增加低密度脂蛋白受体的合成，由此用于防治高胆固醇血症、混合型高脂 血症、冠心病和脑中风。
[0003] 目前通常采用化学方法合成阿托伐他汀的中间体，由于该方法具有生产成本高、 污染大的缺点，因而最近逐渐开始用酶一化学方法来代替该化学方法。然而，目前采用的酶 普遍催化活性较低，导致催化反应用酶量很大，影响提取收率，并且生产成本依旧较高。
[0004] 因此，本领域迫切需要开发一种能够降低生产成本并且对环境友好的生物合成方 法，具体地，需要开发一种利用具有高效催化活性的酶制备他汀类化合物中间体的方法。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种具有高效催化活性的酶以及用该酶制备他汀类化合物 中间体的方法。
[0006] 本发明第一方面提供了一种制备式II化合物的方法，所述方法包括步骤：
[0007] (a)在醇脱氢酶CmADH3存在下，对式III化合物进行催化还原反应，从而生成式 II化合物；
[0008]
【主权项】
1. 一种制备式π化合物的方法，其特征在于，所述方法包括步骤： (a)在醇脱氢酶CmADH3存在下，对式III化合物进行催化还原反应，从而生成式II化 合物；
其中，R选自C1-C6烷基或Cl 一 C6卤代烷基。
2. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法在辅酶因子的存在下进行。
3. -种制备式I所示的（4R-Cis) -6-氰基-2, 2-二甲基-1，3-二氧已环-4-乙酸烷基 酯化合物的方法，其特征在于，包括步骤： (a) 在醇脱氢酶CmADH3存在下，对式III化合物进行发生催化还原反应，从而生成式 II化合物；
(b) 在惰性溶剂中，将式II化合物与2,2_二甲氧基丙烷反应，形成式I化合物：
其中，上述各式中，R选自C1-C6烷基或Cl 一 C6卤代烷基。
4. 一种合成他汀类化合物的方法，其特征在于，所述方法包括步骤： (a) 式III化合物通过催化还原反应生成式II化合物，其中，所述步骤（a)在醇脱氢酶 CmADH3存在的条件下进行； (b) 式II化合物与2, 2-二甲氧基丙烷反应，形成式I化合物；和 (c) 将所述式I化合物作为中间体，制备他汀类化合物。
5. -种反应混合物，其特征在于，所述混合物包括： ⑴醇脱氢酶CmADH3 ; (ii) 式III化合物和/或式II化合物；以及 (iii) 所述辅酶因子。
6. 如权利要求5所述的反应混合物，其特征在于，所述混合物还包括所述辅酶因子的 再生系统。
7. -种醇脱氢酶或表达重组酶的工程菌的用途，其特征在于，所述醇脱氢酶或表达重 组酶的工程菌用于催化还原式III化合物，从而生成式II化合物。
8. -种多核苷酸，其特征在于，所述核苷酸选自下组： (a) 核苷酸序列如SEQ ID NO. :3所示的多核苷酸； (b) 核苷酸序列与SEQ ID NO. :3所示序列的同源性彡90% (较佳地彡95%)，且具有 式III化合物催化还原活性的多核苷酸； (c) 如SEQ ID NO. : 3所示的多核苷酸突变1-60个（较佳地1-30,更佳地1-6个）核 苷酸，且具有式III化合物催化还原活性的多核苷酸； (d) 用于编码SEQ ID NO. :1所示的氨基酸序列。
9. 一种表达载体，其特征在于，所述载体含有权利要求8所述的多核苷酸。
10. -种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有权利要求9所述的表达载体、或其 染色体整合有外源的权利要求8所述的多核苷酸。
【专利摘要】本发明公开了一种生物合成他汀类化合物中间体的方法，具体地，本发明公开了一种酶法制备他汀类化合物中间体的方法，包括以下步骤：(a)在醇脱氢酶CmADH3、辅酶因子和任选的所述辅酶因子的再生系统存在的条件下，对式III化合物进行催化还原反应，从而生产式II化合物；(b)将式II化合物与2，2-二甲氧基丙烷反应，形成式I化合物。该方法不仅能够降低生产成本，还能降低环境污染，具有极大的应用价值。
【IPC分类】C12R1-19, C12N1-21, C12N15-53, C12N1-19, C12N9-04, C12P13-00, C12N15-63
【公开号】CN104830921
【申请号】CN201510209354
【发明人】陶荣盛, 孙梁栋, 朱傅赟, 杨晟, 蒋宇
【申请人】上海工业生物技术研发中心, 中国科学院上海生命科学研究院湖州工业生物技术中心
【公开日】2015年8月12日
【申请日】2015年4月27日