滇鸡血藤药材分子身份证的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药材物种鉴定领域，具体涉及滇鸡血藤药材DNA条形码标准序列， 为滇鸡血藤药材提供分子身份证。
【背景技术】
[0002] 《中华人民共和国药典》2010年版收载滇鸡血藤Kadsurae Caulis为木兰科植物 内南五味子Kadsura interior A.C. Smith的干燥藤莖。《中国植物志》将其记录为凤庆南 五味子，产于云南西南部（保山、凤庆、临沧、耿马）。性苦、甘，温。归肝、肾经。具有活血补 血，调经止痛，舒筋通络的功效。可用于月经不调，痛经，麻木瘫痪，风湿痹痛，气血虚弱，为 传统中成药复方滇鸡血藤膏的君药成分。由于本草记载差异和不同地区使用习惯的不同， 中药的学名、别名繁多混乱，出现异药同名和同名异药的现象。如《本草纲目拾遗》和《植物 名实图考》中将滇鸡血藤收载为"鸡血藤"。有些地区将滇鸡血藤、鸡血藤、大血藤等多种含 有红色树脂的藤茎均称之为"血藤"。而来源不同的药材，具有不尽相同的功效主治，药材的 误用或混用，会造成"病准，方对，药不灵"的现象，影响中医临床疗效，延误中医治疗，甚至 损害患者健康。为保证滇鸡血藤的质量，保障用药安全、有效，我们需要对其物种和资源进 行准确鉴定。
[0003] DNA条形码分子鉴定法是利用基因组中一段公认的、相对较短的DNA序列来进行 物种鉴定的一种分子生物学技术，它摆脱了传统形态鉴定方法依赖长期经验的障碍，具有 鉴定结果可重复性良好；方法通用性强；可构建统一数据库和鉴定平台，易于推广和标准 化等优势。可作为传统形态鉴别方法的有效补充。目前GenBank中未见到滇鸡血藤相关基 因序列。本发明提供的滇鸡血藤DNA条形码标准序列，能够为滇鸡血藤药材提供分子身份 证，有利于实现滇鸡血藤的快速准确鉴定。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供滇鸡血藤药材的DNA条形码标准基因序列，为其物种和资 源的鉴定研宄提供快速准确的方法。
[0005] 为实现上述目的，本发明可通过如下技术方案实现：一种滇鸡血藤药材标准检测 序列叶绿体trnH-psbA序列，具有如下所述的基因序列SEQ ID NO. 1 :
【主权项】
1. 滇鸡血藤药材DNA条形码标准检测基因，其特征在于所述条形码标准检测基因为叶 绿体trnH-psbA序列，具有如下所述的基因序列SEQ ID NO. 1 : I GACTAAGACT TCGGTCTTAA TGTATACGAG ACCTTGAAGG AACAATACAA TACCAAACCT 61 CTTGAGAAAA CAAGAAAATT GGTTATTGTA TTGTTTCTTC AATTGACAAT TGAGTAGTGT 121 TTTATTGTGT TTTAATGGCA TCTTATGCCA GAGATATGTA AAATATAGTT CTCTGTATGA 181 AATGACTMA TTCAAAATAC TAAATTCTGA ATAGTCCAAA TGGAATCTTT TGGATAGAGA 241 GGAGG
2. 权利要求1所述的滇鸡血藤药材DNA条形码标准检测基因的PCR引物，其特征在于 叶绿体trnH-psbA引物序列为： 正向引物 PA : 5' -GTTATGCATGAACGTAATGCTC-3 '， 反向引物 TH : 5' -CGCGCATGGTGGATTCACAATCC-3 '。
3. -种滇鸡血藤药材的快速分子鉴定方法，包括： 1) 从待测滇鸡血藤药材组织中分离提取总DNA 2) 以该DNA为模板，用上述引物，通过聚合酶链式反应扩增出目标基因； 3) 取适量步骤2)中获得的PCR产物，用琼脂糖凝胶电泳分离检测，溴乙锭染色后于凝 胶成像系统检测，叶绿体trnH-psbA序列PCR产物应在约400bp处出现一条目的条带，阴性 对照应无条带； 4) 对扩增产物进行测序，测序峰图经校对拼接，去除引物区和低质量区； 5) 根据测序结果，如果与上述基因序列SEQ ID NO. 1的同源性在99%以上，即可判断 所述的检测样品为滇鸡血藤。
【专利摘要】本发明公开了滇鸡血藤药材DNA条形码标准序列和滇鸡血藤药材快速分子鉴定的方法，其特征在于所述DNA条形码标准检测基因为叶绿体trnH-psbA基因，具有基因序列SEQ ID NO.1。该方法可以为滇鸡血藤药材提供分子身份证，从而对其进行准确快速的鉴定。该方法主要流程包括：滇鸡血藤实验样本首先由形态学专家鉴定，DNA分离提取及PCR扩增、测序，测序结果通过手工校对、序列拼接，所得序列与对照药材的序列进行比对，以确保结果的可靠性。本发明采用传统的形态学鉴定与分子鉴定相结合，可确保物种鉴定的准确性和可靠性。本发明提供的滇鸡血藤的DNA条形码标准基因序列及方法能够实现滇鸡血藤药材的快速准确鉴定，缩短鉴定时间。
【IPC分类】C12Q1-68, C12N15-11
【公开号】CN104878114
【申请号】CN201510330543
【发明人】姚辉, 周红, 陈士林, 宋经元, 辛天怡
【申请人】中国医学科学院药用植物研究所
【公开日】2015年9月2日
【申请日】2015年6月16日