一种席夫碱铂配合物及其制备方法和应用
【技术领域】：
[0001] 本发明涉及铂（II)配合物，具体涉及一种席夫碱铂（II)配合物及其制备方法和 应用。
【背景技术】：
[0002] 近年来，癌症已经成为严重威胁人类生命健康的主要疾病之一，在癌症的最有效 治疗过程中，铂类抗癌药物起着举足轻重的作用，它们已经成为癌症化疗中不可或缺的药 物，然而，目前上市的铂类药物也存许多各种各样的毒副作用，这些缺点限制了该类药物更 广泛的应用，同时也促进了人们对铂类抗癌药物机理的深入研宄，通过寻找不同于经典的 顺铂类药物的可能的抗癌机理，对大量合成的具有新型结构的抗癌铂配合物进行深入研 宄，期望得到高效、低毒、水溶性好，选择性高、与顺铂无交叉耐药的候选药物。
[0003] 众所周知，以顺铂为主的传统铂类抗癌药物的研宄大多是以DNA为作用靶点，然 而随着生命科学技术的不断深入，科学家们逐渐认识到铂配合物也可能通过作用于某些蛋 白抑制癌细胞的生长、繁殖。其中，蛋白酪氨酸磷酸酶（PTPs)由于其活性异常与癌症发生 和发展有着密切联系，已经成为目前抗癌药物的一个新靶点。为此我们选择具有较强生物 活性的席夫碱类化合物为配体合成结构简单的新型铂（II)配合物，从全新的角度研宄了 该配合物对PTPs活性的抑制作用及其抗肿瘤效果，本发明铂（II)配合物结构在国内外尚 未见报道。
【发明内容】
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[0004] 本发明的目的在于提供一种席夫碱铂（II)配合物及其制备方法，以及该配合物 作为蛋白酪氨酸磷酸酶IB抑制剂的应用，和在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0005] 本发明提供的一种席夫碱铂（II)配合物，其化学式为：Pt[X-PMP] [DMS0]C1，其中 X-PMP = 4-X-2-[(苯基亚胺）甲基]-苯酚（其中，X为Cl或者NO2)，其结构式为：
[0006]
[0007] 本发明提供的一种席夫碱铂（II)配合物的制备方法，包括如下步骤：
[0008] (1)合成4-X-2-[(苯基亚胺）甲基]-苯酚配体（X为Cl或者NO2)(合成方法参 照：韩虹，山西大学硕士学位论文，2012，pll-pl2);
[0009] (2)合成 Pt (DMSO)2Cl2前体铂配合物（合成方法参照：Jerold Η· Price，et. al. Inorganic Chemistry, 1972,11(6),1280-1284)；
[0010] (3)合成席夫碱铂（II)配合物：按每毫摩尔反应物加入50~IOOmL甲醇的量，将 4-X-2-[(苯基亚胺）甲基]-苯酚配体溶于甲醇溶液中，向其中滴加摩尔量为该反应物1~ 2倍的三乙胺，使其完全溶解，搅拌下，将与反应物等摩尔量的Pt (DMSO) 2C12加入到上述反 应溶液中，反应溶液避光并且通N2保护，加热回流反应1~4小时，停止反应，冷却有沉淀 生成，抽滤，产物依次用水和甲醇各洗涤至少3次，真空干燥，得黄色固体粉末。
[0011] 步骤中所述的X为Cl或者no2。
[0012] 本发明制得的席夫碱铂（II)配合物能够有效地抑制蛋白酪氨酸磷酸酶1B，可以 用作高效的蛋白酪氨酸磷酸酶IB抑制剂；同时该类配合物具有较强的体外抑制肿瘤生长 的活性，在相同实验条件下，抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖的能力强于顺铂，可以在制备抗肿 瘤药物中的应用。
[0013] 本发明的优点和效果：本发明的席夫碱铂（II)配合物制备方法简单，原料易得， 成本较低，在一般化学实验室均可完成，且生产过程对环境无污染；该配合物不仅能够有效 地抑制蛋白酪氨酸磷酸酶IB活性，可作为高效的蛋白酪氨酸磷酸酶IB抑制剂，而且具有比 顺铂更强的抑制MCF-7细胞增殖的作用，可为肿瘤治疗提供一种新的药物开发途径。
【附图说明】
[0014] 图1本发明席夫碱铂（II)配合物抑制PTPlB活性的IC5tl值测定图
[0015] 图2本发明席夫碱铂（II)配合物和顺铂分别对MCF-7细胞增殖的影响比较
【具体实施方式】
[0016] 下面结合附图和实例对本发明作进一步说明。
[0017] 实施例1
[0018] 配合物的制备：
[0019] (1)配体4-X-2-[(苯基亚胺）甲基]-苯酚（X为Cl或者NO2)按照文献方法（韩 虹，山西大学硕士学位论文，2012, pll-pl2)制备。
[0020] (2)参 照文献(Jerold H. Price, et. al. , Inorganic Chemistry, 1972, 11(6), 1280-1284)方法合成前体铂配合物 Pt (DMSO) 2C12。
[0021] (3)合成本发明席夫碱铂（II)配合物Pt[Cl-PMP] [DMS0]C1 :将 0· 5mmol (0· 116g)4-氯-2-[(苯基亚胺）甲基]-苯酷溶于50mL甲醇溶液，向其中滴加 0· 67mmol (100 μ L)三乙胺，使其完全溶解，搅拌下，将 0· 5mmol (0· 211g)的 Pt (DMSO)2Cl2 加入到上述反应溶液中，反应溶液避光并且通氮气保护，加热回流反应1~4小时，停止反 应后冷却，抽滤，产物依次用蒸馏水和甲醇多次洗涤，真空干燥，得黄色固体粉末，产率约 为59%。元素分析测定结果为 ：C15H15Cl2N02PtS，括号内为理论值（％) :C，33.58(33.40); H，2. 85 (2. 80) ;N, 2. 56 (2. 60)。部分红外光谱数据（V /cm-1) : 3048 (C-H)，1608 (C = N)，1305 (C-O)，1126 (S = 0),668 (C-S) ,547 (Pt-N) ,450 (Pt-O);紫外光谱数据（λ/ nm):418, 307, 243。
[0022] 用0· 5mmol(0. 121g)4-硝基-2-[(苯基亚胺）甲基]-苯酚代替 0. 5mmol (0. 116g)4-氯-2-[(苯基亚胺）甲基]-苯酷，在同样条件下合成钼（II)配合物 Pt[N02-PMP] [DMS0]C1，黄褐色固体产物，产率约为58%。元素分析结果按C15H15ClN 2O4PtS 计算：C，32. 91 (32. 76) ;H，2. 83 (2. 75) ;N，5. 14 (5. 09);部分红外光谱数据（V / cnT1) :3035 (C-H)，1608 (C = N)，1321(00)，1132 (S = 0),704 (C-S)，562 (Pt-N), 443 (Pt-O); 紫外光谱数据 UV ( λ /nm) : 414, 332, 204, 267。
[0023] 实施例2本发明配合物抑制PTPlB活性的测定
[0024] IC5tl即半数抑制浓度，是指被抑制酶的活性达到一半时所用抑制剂的浓度，IC 5Q值 的大小是抑制剂对酶活性抑制能力强弱的评判标准之一，该值越小表明抑制剂的抑制能力 就越强。IC 5tl测定实验中以对硝基苯磷酸二钠盐（pNPP)为反应底物，该底物在PTPlB催 化下易分解为黄色的对硝基苯酷（pNP)，而pNP在405nm处有较强紫外吸收，所以通过测定 该吸收值可以得知PTPlB作为催化剂已经反应的量，用该原理通过酶标仪检测得到一系列 405nm波长下的吸光度值，并利用Origin程序处理数据，拟合得到配合物抑制酶的IC 5tl值。
[0025] 具体的实验步骤为：将83 μ L含PTPlB酶的MOPS缓冲溶液（50mM NaCl，20mM MOPS，pH = 7. 2)加入96孔板，再按照浓度梯度递增依次加入10 μ L抑制剂，于37 °C恒 温水浴锅中反应30min，然后用2yL pNPP(0. 1M)启动反应，待颜色梯度出现后用5yL Na0H(2mM)终止反应，最后用酶标仪测量其紫外吸收强度，处理数据得到配合物抑制 PTPlB活性的IC5tl值（附图1)。从图中可以看出本发明配合物Pt[Cl-PMP] [DMS0]C1和 Pt[N02-PMP] [DMS0]C1对PTPlB酶抑制的IC5tl值的范围分别为0. 1~0. 5和3~7 μΜ，其 中Pt [Cl-PMP] [DMSO] Cl对PTPlB酶的抑制能力是顺铂（IC5tl为0· 6~3. 7 μ Μ)对PTPlB抑 制能力的6倍左右，由此可见，该类席夫碱配合物能够有效地抑制PTPlB活性，而且不同结 构的席夫碱铂（II)配合物对PTPs活性的抑制能力不同。
[0026] 实施例3本发明席夫碱铂配合物体外抗肿瘤活性测定
[0027] 将人乳腺癌细胞（1?^-7)在含有10%胎牛血清的培养基中37°〇、5%〇)2培养箱 中培养，用MTT法检测了本发明席夫碱铂（II)配合物对肿瘤细胞MCF-7增殖的影响，同时 以顺铂为阳性对照，分析比较了相同条件下这两种配合物与顺铂抑制MCF-7增殖的能力。 实验取对数生长期的MCF-7细胞经消化、离心收集后配制成ImL的细胞悬液，由血球计数 板测得细胞悬液内的细胞个数，取适量体积的该细胞悬液将其稀释成细胞密度约为I X KT4 个/mL的细胞悬液，均匀接种于96孔板，每孔200 μ L，将96孔板放置在CO2培养箱中孵 化，至细胞单层铺满孔低，加入7个浓度梯度的席夫碱铂（II)配合物，每组设6个复孔。 细胞继续在CO 2培养箱中孵化48小时后，倒置显微镜下观察细胞形态变化，然后每孔加入 20 μ LMTT (5mg/mL)溶液，继续孵育4小时，小心吸去上清液，每孔加入150的DMSO溶液，振 荡lOmin，待底部蓝色结晶状固体完全溶解，用酶标仪测得各孔溶液490nm处的吸光度值A。 以药物浓度为横坐标，细胞存活率为纵坐标绘制细胞生长曲线。
[0028] 细胞存活率（％ ) = (A实验组/A对照组）X 100
[0029] 附图2为相同浓度梯度的席夫碱铂（II)配合物（Pt [Cl-PMP] [DMSO] Cl和 Pt [NO2-PMP] [DMSO] Cl)和顺铂分别与MCF-7作用48小时后，它们抑制肿瘤细胞增殖情况的 比较，实验结果表明，本发明席夫碱铂（II)配合物对人乳腺癌细胞（MCF-7)有显著的抑制 作用，它们抑制MCF-7细胞增殖的IC 5tl值分别为0. 31~0. 41和0. 26~0. 87 μΜ，抑制效 果明显优于顺铂（IC5tl= 1. 43~9. 56 μΜ)，因此，本发明的铂类配合物可用作预防和治疗 乳腺癌的潜在药物。
【主权项】
1. 一种席夫碱铂（II)配合物，其特征在于，结构式为：2. 如权利要求1所述的一种席夫碱铂（II)配合物的制备方法，其特征在于，包括如下 步骤： (1) 合成4-X-2-[(苯基亚胺）甲基]-苯酚配体，X=C1或者N02; (2) 合成Pt(DMSO)2Cl，体铂配合物； (3) 合成席夫碱铂（II)配合物：称取一定量反应物4-X-2-[(苯基亚胺）甲基]-苯酚 溶于甲醇溶液中，向其中滴加摩尔量为该反应物1~2倍的三乙胺，使其完全溶解，搅拌下， 将与反应物等摩尔量的前体钼配合物Pt(DMSO) 2(：12加入到上述反应溶液中，反应溶液避光 并且通氮气保护，加热回流反应1~4小时，停止反应，冷却有沉淀生成，抽滤，产物依次用 水和甲醇各洗涤至少3次，真空干燥得固体粉末产品。3. 如权利要求1所述的席夫碱铂（II)配合物作为蛋白酪氨酸磷酸酶1B抑制剂的应 用。4. 如权利要求1所述的席夫碱铂（II)配合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
【专利摘要】本发明提供了一种席夫碱铂(II)配合物及其制备方法，以及该配合物的应用。本发明席夫碱铂(II)配合物化学式为：Pt[X-PMP][DMSO]Cl，其中X-PMP＝4-X-2-[(苯基亚胺)甲基]-苯酚(X＝Cl或者NO2)。其制备方法：称取反应物X-PMP溶于甲醇溶液中，向其中滴加摩尔量为该反应物1～2倍的三乙胺，搅拌下，将与X-PMP等摩尔量的Pt(DMSO)2Cl2加入到上述反应溶液中，反应溶液避光且通氮气保护，加热回流反应1～4小时，析出固体产物。本发明配合物制备方法简单，原料易得，成本较低。生物活性实验检测表明，该配合物不仅能够有效抑制可作为抗肿瘤药物靶点的PTP1B活性，而且对乳腺癌细胞增殖有显著的抑制作用，可在制备抗肿瘤药物中应用。
【IPC分类】A61P35/00, C07F15/00
【公开号】CN104910212
【申请号】CN201510229474
【发明人】袁彩霞, 卢丽萍, 朱苗力, 吴艳波
【申请人】山西大学
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年5月7日