一种诃黎勒鞣花酸的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明公开了一种诃黎勒鞣花酸的制备方法，属于生物技术领域。
【背景技术】
[0002] 诃黎勒鞣花酸，英文名：Chebulagic acid，分子式C41H3tlO27，分子量为954. 672, CAS 登录号：23094-71-5,主要存在于苏木科、使君子科、无患子科多种植物中。其中使君子科植 物诃子的叶中含量丰富。其结构式如下：
现代研宄证明，诃黎勒鞣花酸具有较强的抗病毒活性，同时也可以作为合成其他活性 衍生物的原料。
[0003] 在《本草纲目》中记载，中药诃子叶具有下气消痰，止渴及泄痢等功效。
[0004] 陶瓷膜又称无机陶瓷膜，是以无机陶瓷材料经特殊工艺制备而形成的非对称膜。 陶瓷膜管壁密布微孔，在压力作用下，原料液在膜管内或膜外侧流动，小分子物质（或液体） 透过膜，大分子物质（或固体)被膜截留，从而达到分离、浓缩、纯化和环保等目的。陶瓷膜具 有分离效率高、效果稳定、化学稳定性好、耐酸碱、耐有机溶剂、耐菌、耐高温、抗污染、机械 强度高、再生性能好、分离过程简单、能耗低、操作维护简便、使用寿命长等众多优势，已经 成功应用于食品、饮料、植(药）物深加工、生物医药、发酵、精细化工等众多领域，可用于工 艺过程中的分离、澄清、纯化、浓缩、除菌、除盐等。
[0005] 通过文献检索，在现有专利中有关制备诃黎勒鞣花酸的方法很少见到，在公开的 发明专利中"一种诃黎勒鞣花酸的制备方法"（专利号201010535367. 5 )中采用的工艺步 骤为：取诃子叶粗粉，投入微波萃取装置中进行微波萃取，收集提取液，滤过，通过强碱性苯 乙烯型阴离子交换树脂吸附，以0. 5mol/L的NaOH溶液洗脱，收集洗脱，滤过，通过强酸性苯 乙烯型阳离子交换树脂，收集流出液，滤过，浓缩，加到大孔吸附树脂上吸附，乙醇洗脱，收 集洗脱液，减压回收乙醇并浓缩，加入甲醇结晶，洗涤、干燥，即得。该类方法所得产品纯度 低，植物有效成分的提取率不高，不适合工业化生产。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是为了补充现有诃黎勒鞣花酸制备方法的不足，提供一种所得产品 纯度高，环境友好，提取效率高、生产成本低的制备方法。
[0007] 为实现上述目的，诃黎勒鞣花酸的制备方法采用以下技术方案： (1) 原材料的处理：取诃子叶经60~80°c干燥，粉碎，过20~80目筛； (2) 酶解：将上述粗粉放入pH值4~5、固液比为1 :0. 5~1的稀酸溶液中，并向其中加入 粗粉重量〇. 1%~〇. 3%的纤维素酶和0. 1~0. 2%的果胶酶，在温度为45~50°C的条件下酶解 l~2h ； (3) 超声提取：将步骤（2)中酶解混合物置于超声提取器中，加入料液比为1 :2~5、 50~70%的乙醇水溶液，超声提取1~3次，每次1~2小时，得到诃黎勒鞣花酸粗提液； (4) 纯化：将上述诃黎勒鞣花酸粗提液首先在温度为20~40°C的条件下，用0. 4微米的 陶瓷膜分离出粗提液里面的蛋白质、多糖、鞣质等物质；再将所得到的提取液上大孔吸附树 脂柱，先用2~3倍柱体积的蒸馏水洗脱，再用2~4倍柱体积、40~60%的乙醇洗脱，收集乙醇 洗脱液用0. 1~〇. 5微米有机微孔滤膜过滤，通过HPLC外标法检测，收集富含诃黎勒鞣花酸 的部分； (5) 真空浓缩、冷冻干燥：将上述富含诃黎勒鞣花酸的液体部分经60~70°C真空浓缩至 固体含量为20~25%时，冷冻干燥得到诃黎勒鞣花酸产品。
[0008] 步骤（3)中所述超声提取的频率为20KHz~40KHz。
[0009] 步骤（3)中所述碱性乙醇水溶液的浓度为70~80%，用氢氧化钠或碳酸钠调节溶液 的 pH 为 8~10。
[0010] 步骤（4)中所述大孔吸附树脂为X-5、LSA-21、WLD、AB-8中的一种。
[0011] 本发明采用生物酶酶解辅助超声提取法来制备诃黎勒鞣花酸具有很多优点，其中 生物酶在酸性环境中可以破坏植物细胞壁，使得植物的有效成分充分流出，从而大大提高 了诃黎勒鞣花酸的提取率，另外超声提取法具有选择性好、能耗低、设备简单、操作简便等 优点；同时产品纯化时应用陶瓷膜和大孔吸附树脂可以大大提高所得产品的纯度，其中陶 瓷膜具有分离效率高、效果稳定、化学稳定性好、耐酸碱、耐有机溶剂、耐菌、耐高温、抗污 染、机械强度高、再生性能好、分离过程简单、能耗低、操作维护简便、使用寿命长等众多优 势。
[0012] 下面将结合【具体实施方式】进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限 于下列实施方式。
【具体实施方式】
[0013] 实施例1 : 取诃子叶经60°C干燥，粉碎，过20目筛；将药材粗粉放入pH值4、固液比为I :0.5的 稀酸溶液中，并向其中加入粗粉重量〇. 1%的纤维素酶和〇. 1%的果胶酶，在温度为45°C的条 件下酶解Ih ;将所得酶解混合物置于超声提取器中，加入料液比为1 :2、50%的乙醇水溶液， 在频率为20KHz的条件下超声提取1次，每次1小时，得到诃黎勒鞣花酸粗提液；将诃黎勒 鞣花酸粗提液首先在温度为20°C的条件下，用0. 4微米的陶瓷膜分离出粗提液里面的蛋白 质、多糖等物质；再将所得到的提取液上X-5型大孔吸附树脂柱，先用2倍柱体积的蒸馏水 洗脱，再用2倍柱体积、40%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液用0. 1~微米有机微孔滤膜过滤， 通过HPLC外标法检测，收集富含诃黎勒鞣花酸的部分；将上述富含诃黎勒鞣花酸的液体部 分经60°C真空浓缩至固体含量为20%时，冷冻干燥得到诃黎勒鞣花酸产品。经检测所得产 品中诃黎勒鞣花酸的含量为88. 25%，诃黎勒鞣花酸的提取率为51. 03%。
[0014] 实施例2 : 取诃子叶经70°C干燥，粉碎，过60目筛；将上述粗粉放入pH值5、固液比为1 :1的稀酸 溶液中，并向其中加入粗粉重量〇. 2%的纤维素酶和0. 2%的果胶酶，在温度为50°C的条件下 酶解2h ;将所得酶解混合物置于超声提取器中，加入料液比为1 :4、60%乙醇水溶液，在频率 为30KHz超声提取2次，每次1. 5小时，得到诃黎勒鞣花酸粗提液；将诃黎勒鞣花酸粗提液 首先在温度为30°C的条件下，用0.4微米的陶瓷膜分离出粗提液里面的蛋白质、多糖等物 质；再将所得到的提取液上LSA-21型大孔吸附树脂柱，先用3倍柱体积的蒸馏水洗脱，再用 3倍柱体积、50%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液用0. 3微米有机微孔滤膜过滤，通过HPLC外 标法检测，收集富含诃黎勒鞣花酸的部分；将富含诃黎勒鞣花酸的液体部分经65°C真空浓 缩至固体含量为25%时，冷冻干燥得到诃黎勒鞣花酸产品。经检测所得产品中诃黎勒鞣花 酸的含量为88. 85%，诃黎勒鞣花酸的提取率为51. 43%。
[0015] 实施例3 : 取诃子叶经80°C干燥，粉碎，过80目筛；将上述粗粉放入pH值5、固液比为1 :1的稀 酸溶液中，并向其中加入粗粉重量〇. 3%的纤维素酶和0. 2%的果胶酶，在温度为50°C的条件 下酶解2h ;将所得酶解混合物置于超声提取器中，加入料液比为1 :5、70%乙醇水溶液，在频 率为40KHz下超声提取3次，每次2小时，得到诃黎勒鞣花酸粗提液；将诃黎勒鞣花酸粗提 液首先在温度为40°C的条件下，用0. 4微米的陶瓷膜分离出粗提液里面的蛋白质、多糖等 物质；再将所得到的提取液上WLD型大孔吸附树脂柱，先用3倍柱体积的蒸馏水洗脱，再用 4倍柱体积、60%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液用0. 5微米有机微孔滤膜过滤，通过HPLC外 标法检测，收集富含诃黎勒鞣花酸的部分；将富含诃黎勒鞣花酸的液体部分经70°C真空浓 缩至固体含量为25%时，冷冻干燥得到诃黎勒鞣花酸产品。经检测所得产品中诃黎勒鞣花 酸的含量为89. 05%，诃黎勒鞣花酸的提取率为51. 79%。
【主权项】
1. 一种诃黎勒鞣花酸的制备方法，其特征在于，它主要是采用以下步骤： (1) 原材料的处理：取诃子叶经60~80°C干燥，粉碎，过20~80目筛； (2) 酶解：将上述粗粉放入pH值4~5、固液比为1 :0. 5~1的稀酸溶液中，并向其中加入 粗粉重量〇. 1%~〇. 3%的纤维素酶和0. 1~0. 2%的果胶酶，在温度为45~50°C的条件下酶解 l~2h ； (3) 超声提取：将步骤（2)中酶解混合物置于超声提取器中，加入料液比为1 :2~5、 50~70%的乙醇水溶液，超声提取1~3次，每次1~2小时，得到诃黎勒鞣花酸粗提液； (4) 纯化：将上述诃黎勒鞣花酸粗提液首先在温度为20~40°C的条件下，用0. 4微米的 陶瓷膜分离出粗提液里面的蛋白质、多糖等物质；再将所得到的提取液上大孔吸附树脂柱， 先用2~3倍柱体积的蒸馏水洗脱，再用2~4倍柱体积、40~60%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱 液用0. 1~0. 5微米有机微孔滤膜过滤，通过HPLC外标法检测，收集富含诃黎勒鞣花酸的部 分； (5) 真空浓缩、冷冻干燥：将上述富含诃黎勒鞣花酸的液体部分经60~70°C真空浓缩至 固体含量为20~25%时，冷冻干燥得到诃黎勒鞣花酸产品。2. 根据权利要求1所述的一种诃黎勒鞣花酸的制备方法，其特征在于：步骤（3)中所述 超声提取的频率为20KHz~40KHz。3. 根据权利要求1所述的一种诃黎勒鞣花酸的制备方法，其特征在于：步骤（3)中所述 碱性乙醇水溶液的浓度为70~80%，用氢氧化钠或碳酸钠调节溶液的pH为8~10。4. 根据权利要求1所述的一种诃黎勒鞣花酸的制备方法，其特征在于：步骤（4)中所述 大孔吸附树脂为X-5、LSA-21、WLD、AB-8中的一种。
【专利摘要】本发明公开了一种诃黎勒鞣花酸的制备方法，具体涉及一种生物酶酶解辅助超声提取法提取诃黎勒鞣花酸的方法。具体的工艺步骤为：原材料的处理→酶解→超声提取→纯化→真空浓缩、冷冻干燥，即得诃黎勒鞣花酸。本发明具有工艺简单、反应条件温和、选择性高、所得诃黎勒鞣花酸纯度高等优点。
【IPC分类】C07H13/08, C07H1/08
【公开号】CN104945447
【申请号】CN201510265113
【发明人】刘东锋, 杨成东
【申请人】南京泽朗医药科技有限公司
【公开日】2015年9月30日
【申请日】2015年5月22日