一种阿克替苷及其分离制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及天然药物的分离，尤其是涉及一种采用柱色谱技术从紫葳科植物猫爪 藤地上部分分离制备阿克替苷的方法。
【背景技术】
[0002] 猫爪藤[Macfadyenaunguis-cati(L)A.Gentry]为紫葳科、猫爪藤属植物，原产热 带美洲的墨西哥、危地马拉等地，约1840年被引入厦门，后逸为野生并蔓延生长，为厦门主 要入侵植物之一，资源丰富。猫爪藤在原产地具有抗炎、治疗风湿、改善男性性功能等多种 活性，厦门产猫爪藤具抗氧化、抗肿瘤活性。猫爪藤地上部分含有阿克替苷，去咖啡酰基阿 克替苷，蓟黄素，熊果酸等活性成分。
[0003] 阿克替苷，又名毛蕊花苷、类叶升麻苷、洋丁香酚苷和麦角留苷，为苯乙醇苷类成 分，极性大，易溶于乙醇、甲醇、热水和乙酸乙酯。药理研究表明，阿克替苷具有抗氧化、神经 保护、抗炎、抗病毒、肝脏保护、肾炎治疗等多方面的生物活性。阿克替苷在列当科、唇形科、 玄参科等20科、160多种植物均报道含有，但受制于药材来源及含量的影响，工业分离制备 阿克替苷的方法报道甚少。
[0004] 中国专利CN102391327A公开一种阿克替苷的分离制备方法，将阿拉伯婆婆纳地 上部分粉碎后，沸水浸提3次，每次1~2h，合并浸提液，通过大孔树脂柱层析，乙醇水洗脱， 收集液浓缩回收乙醇，浓缩液进过高速离心机过滤，滤液通过膜分离机分离，得到组分再经 高效工业色谱柱分离制备，以水一醇体系梯度洗脱，合并富含阿克替苷的洗脱液，浓缩冷冻 干燥即得阿克替苷。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供可大规模生产的一种阿克替苷及其分离制备方法。
[0006] 所述阿克替苷的名称为2_(3'，4' -二羟基苯基）乙基-0-a-L-吡喃鼠李糖基 (1 - 3) - 0 -D-(4-0-咖啡酰基）吡喃葡萄糖苷，分子式为C29H36015，分子量为624. 59,结构 式为：
[0007]
[0008] 所述阿克替苷的制备方法，包括以下步骤：
[0009] 1)将猫爪藤的干燥地上部分粉碎后加入乙醇溶液后浸提，得浸提液；
[0010] 2)将浸提液浓缩干燥后用甲醇溶液分散悬浮，再用石油醚萃取，得脱脂脱色后的 甲醇液；
[0011] 3)将脱脂脱色后的甲醇液浓缩后水稀释，经大孔吸附树脂，以低浓度乙醇溶液洗 脱去杂，再用高浓度乙醇洗脱；收集含阿克替苷的洗脱液，浓缩后经反相硅胶柱色谱，以甲 醇一水体系梯度洗脱；合并含阿克替苷的洗脱组分，浓缩后再经LH-20凝胶，甲醇-丙酮体 系洗脱，浓缩干燥富含阿克替苷的组分，即得阿克替苷。
[0012] 在步骤1)中，所述乙醇溶液的加入量按质量比可为猫爪藤粉末的8~10倍；乙醇 溶液的质量百分浓度可为50%~95% ;所述浸提的温度可为45°C，浸提的次数可为2~5 次，每次浸提的时间可为4~6h。
[0013] 在步骤2)中，所述甲醇溶液的质量百分浓度可为50%~90%;所述萃取的次数可 为2~5次。
[0014] 在步骤3)中，所述大孔树脂可选自HP-20、D101、AB-8、DM130等中的至少一种；所 述低浓度乙醇可采用质量百分浓度为0~10%的乙醇；所述高浓度乙醇可采用质量百分浓 度为30%~60%的乙醇；所述反相硅胶柱可采用RP-18反相硅胶柱，所述甲醇可采用质量 百分浓度为25 %~50 %的甲醇；所述甲醇-丙酮体系中甲醇与丙酮的体积比可为1 : (0~ 5) 〇
[0015] 本发明具有如下的突出特点和技术效果：
[0016] 1)本发明制备阿克替苷以猫爪藤为原料，猫爪藤中阿克替苷含量高，制备工艺简 单。
[0017] 2)猫爪藤为入侵植物，生长旺盛，在我国部分地区分布面积大，价廉易得，资源丰 富，是生物药物和功能性食品开发应用的良好材料。
[0018] 3)生产规模容易放大。
【附图说明】
[0019]图1为阿克替苷的4-匪1?图谱。图中横坐标为化学位移（ppm)，纵坐标为峰强度。
[0020] 图2为阿克替苷的13C_NMR图谱。图中横坐标为化学位移（ppm)，纵坐标为峰强度。
【具体实施方式】
[0021] 实施例1
[0022] 猫爪藤干燥地上部分粉碎，称取1kg，加入8倍70%乙醇浸提3次，每次6h。合并 浸提液过滤浓缩至稠膏状，适量85%甲醇分散溶解，等体积石油醚萃取3次。甲醇液浓缩后 水分散，上样于D101型大孔树脂柱，10%乙醇洗脱除杂后用40%乙醇洗脱。收集乙醇洗脱 液，浓缩干后上样于RP-18反相硅胶柱，40 %甲醇溶液洗脱。收集含阿克替苷的组分，浓缩 后上样于LH-20凝胶，甲醇洗脱，收集目标成分，浓缩干燥即得阿克替苷。
[0023] 实施例2
[0024] 猫爪藤干燥地上部分粉碎，称取2kg，加入10倍85%乙醇浸提3次，每次6h。合并 浸提液过滤浓缩至稠膏状，70%甲醇分散溶解，石油醚萃取3次脱脂脱色。甲醇液浓缩后水 分散溶解，上样于HP-20型大孔树脂柱，5 %乙醇洗脱除杂后用50%乙醇洗脱，收集乙醇洗 脱液，浓缩干后上样于RP-18反相硅胶柱，25%甲醇溶液洗脱。收集含阿克替苷的组分，浓 缩后上样于LH-20凝胶，甲醇：丙酮=1 : 3洗脱，收集目标成分，浓缩干燥即得阿克替苷。
[0025] 柱色谱分离过程以TLC检测，GF254硅胶板为载体，氯仿：甲醇：甲酸（3 : 1 : 1) 展开，碘、硫酸乙醇显色。纯品以HPLC检测纯度，NMR确定所分离化合物为阿克替苷。
[0026] 阿克替苷的核磁数据列表见表1。
[0027] 表1.阿克替苷的NMR数据列表
[0028]
[0030] 阿克替苷的1H-NMR图谱参见图1，阿克替苷的13C-NMR图谱参见图2。
[0031] 本发明将猫爪藤地上部分干燥粉碎后，乙醇溶液浸提，再合并浸提液浓缩干燥，甲 醇溶液分散，石油醚脱脂脱色后经大孔吸附树脂，以乙醇-水梯度洗脱；收集含阿克替苷的 洗脱液，浓缩后经RP-18反相硅胶柱色谱，以甲醇一水体系梯度洗脱；合并含阿克替苷的洗 脱组分，浓缩后再经LH-20凝胶，甲醇一丙酮体系洗脱。浓缩干燥富含阿克替苷的组分即得 阿克替苷。本发明产品纯度高，工艺稳定，特别适用于从猫爪藤中分离制备高纯度的阿克替 苷。
【主权项】
1. 一种阿克替苷，其特征在于其名称为2-(3'，4' -二羟基苯基）乙基-O-a-L-吡 喃鼠李糖基（1 - 3)-P-D-(4-0-咖啡酰基）吡喃葡萄糖苷，分子式为C29H36O15，分子量为 624. 59,结构式为：Q2. 如权利要求1所述一种阿克替苷的制备方法，其特征在于包括以下步骤： 1) 将猫爪藤的干燥地上部分粉碎后加入乙醇溶液后浸提，得浸提液； 2) 将浸提液浓缩干燥后用甲醇溶液分散悬浮，再用石油醚萃取，得脱脂脱色后的甲醇 液； 3) 将脱脂脱色后的甲醇液浓缩后水稀释，经大孔吸附树脂，以低浓度乙醇溶液洗脱去 杂，再用高浓度乙醇洗脱；收集含阿克替苷的洗脱液，浓缩后经反相硅胶柱色谱，以甲醇一 水体系梯度洗脱；合并含阿克替苷的洗脱组分，浓缩后再经LH-20凝胶，甲醇-丙酮体系洗 脱，浓缩干燥富含阿克替苷的组分，即得阿克替苷。3. 如权利要求2所述一种阿克替苷的制备方法，其特征在于在步骤1)中，所述乙醇溶 液的加入量按质量比为猫爪藤粉末的8~10倍。4. 如权利要求2所述一种阿克替苷的制备方法，其特征在于在步骤1)中，所述乙醇溶 液的质量百分浓度为50 %~95%。5. 如权利要求2所述一种阿克替苷的制备方法，其特征在于在步骤1)中，所述浸提的 温度为45°C，浸提的次数可为2~5次，每次浸提的时间可为4~6h。6. 如权利要求2所述一种阿克替苷的制备方法，其特征在于在步骤2)中，所述甲醇溶 液的质量百分浓度为50%~90% ;所述萃取的次数可为2~5次。7. 如权利要求2所述一种阿克替苷的制备方法，其特征在于在步骤3)中，所述大孔树 脂选自HP-20、D101、AB-8、DM130中的至少一种。8. 如权利要求2所述一种阿克替苷的制备方法，其特征在于在步骤3)中，所述低浓度 乙醇采用质量百分浓度为〇~10%的乙醇；所述高浓度乙醇采用质量百分浓度为30%~ 60 %的乙醇。9. 如权利要求2所述一种阿克替苷的制备方法，其特征在于在步骤3)中，所述反相硅 月父柱米用RP_18反相娃I父柱。10. 如权利要求2所述一种阿克替苷的制备方法，其特征在于在步骤3)中，所述甲醇 采用质量百分浓度为25%~50%的甲醇；所述甲醇-丙酮体系中甲醇与丙酮的体积比为 1 : (0 ~5) 〇
【专利摘要】一种阿克替苷及其分离制备方法，涉及天然药物的分离。阿克替苷的名称为2-(3’,4’-二羟基苯基)乙基-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→3)-β-D-(4-O-咖啡酰基)吡喃葡萄糖苷，分子量为624.59。制备方法：将猫爪藤的干燥地上部分粉碎后加入乙醇溶液后浸提，将浸提液浓缩干燥后用甲醇溶液分散悬浮，再用石油醚萃取，将脱脂脱色后的甲醇液浓缩后水稀释，经大孔吸附树脂，以低浓度乙醇溶液洗脱去杂，再用高浓度乙醇洗脱；收集含阿克替苷的洗脱液，浓缩后经反相硅胶柱色谱，以甲醇—水体系梯度洗脱；合并含阿克替苷的洗脱组分，浓缩后再经LH-20凝胶，甲醇-丙酮体系洗脱，浓缩干燥富含阿克替苷的组分，即得阿克替苷。
【IPC分类】C07H1/08, C07H15/18
【公开号】CN105131056
【申请号】CN201510667017
【发明人】刘韶松, 郑志忠, 明艳林, 童庆宣, 陈良华, 李旭丹
【申请人】厦门华侨亚热带植物引种园
【公开日】2015年12月9日
【申请日】2015年10月15日