一种万古霉素结晶工艺的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及抗生素分离纯化技术领域，更具体地说，它涉及一种万古霉素结晶工 〇
【背景技术】
[0002]万古霉素是由Micormick等于1956年从一株东方拟无枝酸菌的发酵液中分离得到 的一种糖肽类抗生素，由美国礼莱公司开发，1958年获FDA批准上市。20世纪80年代，随着β-内酰胺类抗生素的大量使用，由甲氧西林耐药金葡球菌(MRSA)所引起的感染逐渐流行。万 古霉素是目前临床上用于治疗由MRSA引起的严重感染疾病的重要药物，愈来愈引起人们的 重视。
[0003]现有技术中，万古霉素需要经过多次结晶超能得到高纯度的晶体，但是会造成一 定的损耗。
【发明内容】
[0004]针对现有技术存在的不足，本实发明的目的在于提供一种纯度尚、收率尚的万古 霉素的结晶工艺。
[0005] 为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案： 一种万古霉素结晶工艺，包括： 步骤一:将万古霉素发酵液进行纳滤，滤液通过交换树脂吸附、洗脱，得到含有万古霉 素粗液； 步骤二:将粗液加入到结晶容器中； 步骤三:将结晶容器抽为负压并加热，流加丙酮、正丁醇、碳酸二甲酯、四氯化碳进行结 晶； 步骤四：将结晶的结晶液进行过滤，得到一次结晶体； 步骤五:对一次结晶体进行抽滤，使用丙酮洗涤，得到万古霉素结晶。
[0006] 作为进一步优选:所述步骤三中负压为-0.08~-0.1 Mpa。
[0007] 作为进一步优选:丙酮:正丁醇:碳酸二甲酯：四氯化碳的质量比为1~2:6~10:2~3: 卜2〇
[0008] 作为进一步优选:所述步骤三中粗液与丙酮、正丁醇、碳酸二甲酯、四氯化碳总质 量比为5~10:1。
[0009] 作为进一步优选：：所述步骤一种交换树脂为SP825。
[0010] 作为进一步优选:将盐酸万古霉素浓缩液加入到结晶容器中，调节pH值为8~9。
[0011] 作为进一步优选:所述步骤二中通过氢氧化钠调节pH值。
[0012] 作为进一步优选:所述氢氧化钠浓度为1~4mol/L。
[0013] 本发明具有如下优点： 在整体工艺上，首先通过夹对万古霉素发酵液进行纳滤，以压力差为推动力，在还是发 酵液的状态时，就能够滤除大部分杂质，得到纯度较高的顽固霉素发酵液，之后对其进行树 脂吸附、洗脱，以进一步去除发酵液中的杂质。
[0014] 之后通过在负压结晶容器中流加丙酮、正丁醇、碳酸二甲酯、四氯化碳进行结晶。 由于丙酮、正丁醇、碳酸二甲酯、四氯化碳的沸点不同，在负压状态时，丙酮、正丁醇、碳酸二 甲酯、四氯化碳沸点均有降低，能够在发生结晶过程。同时本发明的结晶过程为逐步结晶的 过程，首先丙酮、正丁醇、碳酸二甲酯、四氯化碳沸点不同，蒸发的顺序也不同，随着温度升 高，首先是丙酮的蒸发，改变了整个体系的万古霉素的溶解度，使得最初的晶胞很容易产 生，之后是四氯甲烷的蒸发，能够进一步扩大晶体，再之后是碳酸二甲酯的蒸发，最后是正 丁醇。通过逐步结晶的方法，能够获得更加纯净的晶体，同时也能够缩短结晶时间，减少晶 胞和晶体扩大的时间。
[0015] 之后便将结晶也过滤，通过丙酮清洗进行抽滤，最终的到万古霉素晶体。
[0016] 在交换树脂的选择上选用SP825，SP825能够更好的过滤万古霉素发酵液中的杂 质，从而提高万古霉素的纯度。同时，通过氢氧化钠控制pH能够使得结晶效率更高。
【具体实施方式】
[0017] 实施例一： 步骤一:将万古霉素发酵液进行纳滤，滤液通过交换树脂吸附SP825、洗脱，得到含有万 古霉素粗液； 步骤二:将粗液加入到结晶容器中； 步骤三:将结晶容器抽为负压并加热，负压为:〇.9Mpa，流加丙酮、正丁醇、碳酸二甲酯、 四氯化碳进行结晶，丙酮：正丁醇:碳酸二甲酯：四氯化碳的质量比为1:10:2:2;加入丙酮、 正丁醇、碳酸二甲酯、四氯化碳用量为万古霉素发酵液的8倍。同时加入氢氧化钠调整pH值 至 8.5〇
[0018] 步骤四：将结晶的结晶液进行过滤，得到一次结晶体； 步骤五:对一次结晶体进行抽滤，使用丙酮洗涤，得到万古霉素结晶。
[0019] 实施例二 步骤一:将万古霉素发酵液进行纳滤，滤液通过交换树脂SP825吸附、洗脱，得到含有万 古霉素粗液； 步骤二:将粗液加入到结晶容器中； 步骤三:将结晶容器抽为负压并加热，负压为:〇.9Mpa，流加丙酮、正丁醇、碳酸二甲酯、 四氯化碳进行结晶，丙酮：正丁醇:碳酸二甲酯：四氯化碳的质量比为1.5:8:2.5:1;加入丙 酮、正丁醇、碳酸二甲酯、四氯化碳用量为万古霉素发酵液的5倍。同时加入氢氧化钠调整pH 值至8.5。
[0020] 步骤四：将结晶的结晶液进行过滤，得到一次结晶体； 步骤五:对一次结晶体进行抽滤，使用丙酮洗涤，得到万古霉素结晶。
[0021] 实施例三 步骤一:将万古霉素发酵液进行纳滤，滤液通过交换树脂SP825吸附、洗脱，得到含有万 古霉素粗液； 步骤二:将粗液加入到结晶容器中； 步骤三:将结晶容器抽为负压并加热，负压为:〇.9Mpa，流加丙酮、正丁醇、碳酸二甲酯、 四氯化碳进行结晶，丙酮:正丁醇:碳酸二甲酯：四氯化碳的质量比为2:6:3:1.5;加入丙酮、 正丁醇、碳酸二甲酯、四氯化碳用量为万古霉素发酵液的8倍。同时加入氢氧化钠调整pH值 至 8.5〇
[0022] 步骤四：将结晶的结晶液进行过滤，得到一次结晶体； 步骤五:对一次结晶体进行抽滤，使用丙酮洗涤，得到万古霉素结晶。
[0023] 实施例四 步骤一:将万古霉素发酵液进行纳滤，滤液通过磺酸型强酸性离子交换树脂吸附、洗 脱，得到含有万古霉素粗液； 步骤二:将粗液加入到结晶容器中； 步骤三:将结晶容器抽为负压并加热，负压为:〇.9Mpa，流加丙酮、正丁醇、碳酸二甲酯、 四氯化碳进行结晶，丙酮:正丁醇:碳酸二甲酯：四氯化碳的质量比为2:6:3:1.5;加入丙酮、 正丁醇、碳酸二甲酯、四氯化碳用量为万古霉素发酵液的8倍。同时加入氢氧化钠调整pH值 至 8.5〇
[0024] 步骤四：将结晶的结晶液进行过滤，得到一次结晶体； 步骤五:对一次结晶体进行抽滤，使用丙酮洗涤，得到万古霉素结晶。
[0025] 对比例一： 步骤一:将万古霉素发酵液进行纳滤，滤液通过磺酸型强酸性离子交换树脂吸附、洗 脱，得到含有万古霉素粗液； 步骤二:将粗液加入到结晶容器中； 步骤三:将结晶容器抽为负压并加热，负压为:〇.9Mpa，流加丙酮进行结晶，加入丙酮用 量为万古霉素发酵液的8倍。同时加入氢氧化钠调整pH值至8.5。
[0026] 步骤四：将结晶的结晶液进行过滤，得到一次结晶体； 步骤五:对一次结晶体进行抽滤，使用丙酮洗涤，得到万古霉素结晶。
[0027] 对比例二： 步骤一:将万古霉素发酵液进行纳滤，滤液通过磺酸型强酸性离子交换树脂吸附、洗 脱，得到含有万古霉素粗液； 步骤二:将粗液加入到结晶容器中； 步骤三:将结晶容器抽为负压并加热，负压为:〇.9Mpa，流加正丁醇进行结晶，加入正丁 醇用量为万古霉素发酵液的8倍。同时加入氢氧化钠调整pH值至8.5。
[0028] 步骤四：将结晶的结晶液进行过滤，得到一次结晶体； 步骤五:对一次结晶体进行抽滤，使用丙酮洗涤，得到万古霉素结晶。
[0029] 对比例三： 步骤一:将万古霉素发酵液进行纳滤，滤液通过磺酸型强酸性离子交换树脂吸附、洗 脱，得到含有万古霉素粗液； 步骤二:将粗液加入到结晶容器中； 步骤三:将结晶容器抽为负压并加热，负压为:0.9Mpa，流加碳酸二甲酯进行结晶，加入 碳酸二甲酯用量为万古霉素发酵液的8倍。同时加入氢氧化钠调整pH值至8.5。
[0030] 步骤四：将结晶的结晶液进行过滤，得到一次结晶体； 步骤五:对一次结晶体进行抽滤，使用丙酮洗涤，得到万古霉素结晶。
[0031] 对比例四： 步骤一:将万古霉素发酵液进行纳滤，滤液通过磺酸型强酸性离子交换树脂吸附、洗 脱，得到含有万古霉素粗液； 步骤二:将粗液加入到结晶容器中； 步骤三:将结晶容器抽为负压并加热，负压为:〇.9Mpa，流加四氯化碳进行结晶，加入四 氯化碳用量为万古霉素发酵液的8倍。同时加入氢氧化钠调整pH值至8.5。
[0032] 步骤四：将结晶的结晶液进行过滤，得到一次结晶体； 步骤五:对一次结晶体进行抽滤，使用丙酮洗涤，得到万古霉素结晶。
[0033] 试验方法:通过测定20个批次的产品的平均收率、平均纯度以及收率的标准差和 纯度的标准差。
[0034]试验数据：
通过上述试验数据可以得出，通过本发明工艺生产的万古霉素晶体，就有较高的收率 以及纯度。同时具有较好的稳定性。
[0035]以上所述仅是本发明的优选实施方式，本发明的保护范围并不仅局限于上述实施 例，凡属于本发明思路下的技术方案均属于本发明的保护范围。应当指出，对于本技术领域 的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理前提下的若干改进和润饰，这些改进和润饰也 应视为本发明的保护范围。
【主权项】
1. 一种万古霉素结晶工艺，包括： 步骤一:将万古霉素发酵液进行纳滤，滤液通过交换树脂吸附、洗脱，得到含有万古霉 素粗液； 步骤二:将粗液加入到结晶容器中； 步骤三:将结晶容器抽为负压并加热，流加丙酮、正丁醇、碳酸二甲酯、四氯化碳进行结 晶； 步骤四：将结晶的结晶液进行过滤，得到一次结晶体； 步骤五:对一次结晶体进行抽滤，使用丙酮洗涤，得到万古霉素结晶。2. 根据权利要求2所述的一种万古霉素结晶工艺，其特征在于:所述步骤三中负压为-0·08~-〇·lMpa〇3. 根据权利要求2所述的一种万古霉素结晶工艺，其特征在于:所述步骤三中丙酮：正 丁醇:碳酸二甲酯：四氯化碳的质量比为1~2:6~10:2~3:1~2。4. 根据权利要求3所述的一种万古霉素结晶工艺，其特征在于:所述步骤三中粗液与丙 酮、正丁醇、碳酸二甲酯、四氯化碳总质量比为5~10:1。5. 根据权利要求1所述的一种万古霉素结晶工艺，其特征在于:所述步骤一中交换树脂 为SP825。6. 根据权利要求1所述的一种万古霉素结晶工艺，其特征在于:所述步骤二为:将盐酸 万古霉素浓缩液加入到结晶容器中，调节pH值为8~9。7. 根据权利要求6所述的一种万古霉素结晶工艺，其特征在于:所述步骤二中通过氢氧 化钠调节pH值。8. 根据权利要求7所述的一种万古霉素结晶工艺，其特征在于:所述氢氧化钠浓度为1 ~4mol/L〇
【专利摘要】本发明公开了一种万古霉素结晶工艺，包括：步骤一：将万古霉素发酵液进行纳滤，滤液通过交换树脂吸附、洗脱，得到含有万古霉素粗液；步骤二：将粗液加入到结晶容器中；步骤三：将结晶容器抽为负压并加热，流加丙酮、正丁醇、碳酸二甲酯、四氯化碳进行结晶；步骤四：将结晶的结晶液进行过滤，得到一次结晶体；步骤五：对一次结晶体进行抽滤，使用丙酮洗涤，得到万古霉素结晶。通过本发明工艺生产的万古霉素晶体，就有较高的收率以及纯度。同时具有较好的稳定性。
【IPC分类】C07K1/30, C07K9/00, C07K1/34
【公开号】CN105524146
【申请号】CN201610043016
【发明人】芦琦, 陈晓静
【申请人】雅赛利(台州)制药有限公司
【公开日】2016年4月27日
【申请日】2016年1月23日