一种酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束及其制备方法
【专利摘要】一种酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束及其制备方法，它本发明涉及一种载药胶束及其制备方法。本发明的目的要解决现有硬脂酸葡聚糖胶束无pH响应特性的问题。酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束是以葡聚糖为原料，依次经过氧化反应，与己二胺发生还原反应，与硬脂酸进行酰化，得到硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物，再利用其双亲性在水中自组装为纳米胶束。制备方法：一、制备聚醛葡聚糖；二、制备己二胺?聚醛葡聚糖；三、制备硬脂酸酰胺化葡聚糖；四、自组装纳米胶束，得到酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束。本发明制备的酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束作为疏水抗肿瘤药物的载体使用。
【专利说明】
一种酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束及其制备方法
技术领域
[0001 ]本发明涉及一种载药胶束及其制备方法。
【背景技术】
[0002]癌症乃全球重大公共医疗卫生问题之一，2015年，仅中国因癌死亡人数即达到280多万(约平均7500人/天)，但目前临床抗癌药物在实际应用中尚存在毒性强、水溶性差、半衰期短、体内易降解、无特定靶向等系列制约因素，因此，急待新型药物载体的研发制备。近年，胶束药物载体研究快速崛起，其结构可控、载药量及负载率高，能够增强药效、降低毒性、提高血药浓度、控制药物缓释、促进疏水药物的增溶与携氧、保护药物逃脱免疫系统吞噬、诱导药物对肿瘤细胞的靶向性及病源刺激响应特性。特别是自组装纳米双亲聚合物胶束药物载体，其亲水外壳能够避免网状内皮系统(RES)识别与吞噬，延长药物体内循环时间；疏水内核可作为疏水药物储存器，具有较强药物负载能力；同时，聚合物胶束是唯一能够克服多药耐药的药物载体，并可通过各异的修饰方法实现靶向给药。因此，国内外学者在寻找新型抗癌载药胶束过程中不断探索，具有高生物相容性的葡聚糖衍生物成为研究热点之一O
【发明内容】
[0003]本发明的目的要解决现有硬脂酸葡聚糖胶束无pH响应特性的问题，而提供一种酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束及其制备方法。
[0004]—种酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束，它以葡聚糖为原料，经过氧化反应在葡聚糖结构表面引入活性醛基，得到聚醛葡聚糖，再将聚醛葡聚糖与己二胺反应，生成己二胺-聚醛葡聚糖，所述的己二胺-聚醛葡聚糖具有稳定碳氮单键结构，且携带活性氨基；己二胺-聚醛葡聚糖与硬脂酸进行酰化，得到硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物，利用硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物的双亲性在水中自组装为纳米胶束，即为酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束。
[0005]—种酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的制备方法，具体是按以下步骤完成的:
[0006]—、制备聚醛葡聚糖:①、将葡聚糖溶解于蒸馏水中，得到浓度为5 m m ο I / L?15mmol/L的葡聚糖水溶液；②、将高碘酸钠溶解于蒸馏水中，得到浓度为0.1 lmol/L?
0.3311101凡的高碘酸钠水溶液;?、在避光条件下将浓度为51]11]101凡?151]11]101凡的葡聚糖水溶液与浓度为0.1111101/1?0.3311101/1的高碘酸钠水溶液混合，并在温度为25°(:和转速为800r/min?1600r/min的避光条件下搅拌反应4h?8h，得到反应产物，将反应产物转移至透析袋中，所述透析袋的截留分子量为3500，去离子水透析24h?36h，在透析袋中得到透析产物;所述浓度为0.llmol/L?0.33mol/L的高碘酸钠水溶液与浓度为5mmol/L?15mmol/L的葡聚糖水溶液的体积比为1:10?15;④、将透析产物进行真空冷冻干燥，得到白色粉末，SP为聚醛葡聚糖，所述聚醛葡聚糖的平均氧化度为20% ;
[0007]二、制备己二胺-聚醛葡聚糖:将聚醛葡聚糖溶于蒸馏水，得到浓度为lOmmol/L?16mmol/L的聚醛葡聚糖水溶液，利用恒压漏斗将浓度为lOmmol/L?16mmol/L的聚醛葡聚糖水溶液在搅拌条件下逐滴加入己二胺中，所述浓度为lOmmol/L?16mmol/L的聚醛葡聚糖水溶液中聚醛葡聚糖与己二胺的摩尔比为1:10?15，然后在温度为20?25°C的搅拌条件下反应4h?6h，再加入氰基硼氢化钠，所述的氰基硼氢化钠与己二胺的摩尔比为1:1，继续在温度为20?25 °C的搅拌条件下反应Sh?12h，得到反应物，将反应物转移至透析袋I中，所述透析袋I的截留分子量为3500，去离子水透析24h?36h，在透析袋I中得到水透析产物;将水透析产物转移至透析袋II中，所述透析袋II的截留分子量为3500，无水乙醇透析Sh?12h，在透析袋II中得到乙醇透析产物，将乙醇透析产物旋蒸去除乙醇，即得到己二胺-聚醛葡聚糖；
[0008]三、制备硬脂酸酰胺化葡聚糖:向己二胺-聚醛葡聚糖中依次加入N，N_二甲基甲酰胺和二甲基亚砜，所述的己二胺-聚醛葡聚糖与N，N-二甲基甲酰胺的体积比为1:1?2，所述的N，N-二甲基甲酰胺与二甲基亚砜的体积比为1:1?2，然后在搅拌条件下以恒压漏斗逐滴加入浓度为lOmol/L?20mol/L硬脂酸-DMSO溶液，所述的己二胺-聚醛葡聚糖与浓度为1011101/1?2011101/1硬脂酸-0150溶液中硬脂酸的摩尔比为1:10?20，然后均分三次加入乙基-1，3-二甲基丙基碳二亚胺盐酸盐活化剂，所述的浓度为lOmol/L?20mol/L硬脂酸-DMSO溶液中硬脂酸与乙基-1，3_二甲基丙基碳二亚胺盐酸盐活化剂的摩尔比为1:1，并在温度为60?80°C的搅拌条件下反应7h?12h，自然冷却至室温后，得到硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物溶液；
[0009]四、自组装纳米胶束:
[0010]采用溶剂扩散法与聚焦超声法联用技术将硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物溶液制成酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束。
[0011]本发明优点:
[0012]—、本发明制备的酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束选用原料为葡聚糖和硬脂酸，都是天然的而非合成化合物，安全性相对较高；
[0013]二、本发明制备的酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的载药量为13.84%，药物负载率为86.31%，酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束利用其特殊空心结构增强了天然抗肿瘤药物姜黄素的溶解性；
[0014]三、本发明制备的酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束是以酰胺键连接的，根据酰胺键的特殊性质实现了PH敏感性(酸敏感型)，具体表现为:采用透析袋扩散法考察释药情况发现随着pH降低，药物释放速率明显加快，从pH= 7.4时58 %增至pH =5.5时的80 %?85 %，说明载药胶束在酸介质中药物释放明显提高，即本发明制备的酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束具有PH敏感性。
[0015]本发明制备的酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束作为疏水抗肿瘤药物的载体使用。
【附图说明】
[0016]图1是【具体实施方式】二步骤一的反应机理图；
[0017]图2是【具体实施方式】二步骤二的反应机理图；
[0018]图3是【具体实施方式】二步骤三的反应机理图；
[0019]图4是红外光谱图，图中a表示实施例1步骤一①中所述葡聚糖的红外光谱图，图中b表示实施例1步骤一中得到的聚醛葡聚糖的红外光谱图；
[0020]图5是实施例1步骤二得到的己二胺-聚醛葡聚糖的红外光谱图；
[0021]图6是实施例1步骤四中得到的酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的红外光谱图；
[0022]图7是实施例1步骤四得到的酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束结构示意图
[0023]图8是实施例1步骤四中得到的酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束以DMS0-d6为溶剂的核磁共振氢谱图；
[0024]图9是图8的局部放大图；
[0025]图10是热失重分析图，图中a表示实施例1步骤四中得到的酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的热失重分析曲线，图中b表示实施例1步骤一①中所述葡聚糖的热失重分析曲线，图中c表示实施例1步骤三中所述硬脂酸的热失重分析曲线；
[0026]图11是实施例1步骤四中得到的酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束以D2O为溶剂的核磁共振氢谱图；
[0027]图12是实施例1步骤四中得到的酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束以DMS0-d6为溶剂的核磁共振氢谱图；
[0028]图13是以芘作为荧光探针对不同浓度酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的荧光谱图，图中a为浓度为1.0mmol/mL酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的荧光谱图，图中b为浓度为0.8mmol/mL酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的荧光谱图，图中c为浓度为0.5mmol/mL酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的荧光谱图，图中d为浓度为0.4mmol/mL酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的荧光谱图，图中e为浓度为0.3mmol/mL酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的荧光谱图，图中f为浓度为0.1mmol/mL酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的荧光谱图，图中g为浓度为10—Vmol/mL酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的荧光谱图，图中h为浓度为10—4HimoVmL酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的荧光谱图；
[0029]图14 为 I1A3 对 IgC 作图；
[0030]图15是实施例1步骤四得到的酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的粒径分布曲线图；
[0031]图16是实施例1步骤四得到的酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束放大10000倍的扫描电镜图；
[0032]图17是实施例1步骤四得到的酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束放大15000倍的透射电镜图；
[0033]图18是实施例1步骤四得到的酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束放大30000倍的透射电镜图；
[0034]图19是X-射线衍射图谱，图中a表示姜黄素的X-射线衍射图谱，图中b表示姜黄素与载体混合物的x-射线衍射图谱，图中C表示实施例2得到的双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米载药胶束的X-射线衍射图谱；
[0035]图20是释药曲线，图中▲表示在pH=5.5时，实施例2得到的双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米载药胶束的释药曲线，图中?表示在pH = 6.5时，实施例2得到的双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米载药胶束的释药曲线，图中.表示在pH = 7.4时，实施例2得到的双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米载药胶束的释药曲线。
【具体实施方式】
[0036]【具体实施方式】一:本实施方式是一种酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束，它以葡聚糖为原料，经过氧化反应在葡聚糖结构表面引入活性醛基，得到聚醛葡聚糖，再将聚醛葡聚糖与己二胺反应，生成己二胺-聚醛葡聚糖，所述的己二胺-聚醛葡聚糖具有稳定碳氮单键结构，且携带活性氨基；己二胺-聚醛葡聚糖与硬脂酸进行酰化，得到硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物，利用硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物的双亲性在水中自组装为纳米胶束，即为酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束。
[0037]【具体实施方式】二:本实施方式是一种酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的制备方法，具体是按以下步骤完成的:
[0038]一、制备聚醛葡聚糖:①、将葡聚糖溶解于蒸馏水中，得到浓度为5mmol/L?15mmol/L的葡聚糖水溶液；②、将高碘酸钠溶解于蒸馏水中，得到浓度为0.1 lmol/L?
0.3311101凡的高碘酸钠水溶液;?、在避光条件下将浓度为51]11]101凡?151]11]101凡的葡聚糖水溶液与浓度为0.llmol/L?0.33mol/L的高碘酸钠水溶液混合，并在温度为25°C和转速为800r/min?1600r/min的避光条件下搅拌反应4h?8h，得到反应产物，将反应产物转移至透析袋中，所述透析袋的截留分子量为3500，去离子水透析24h?36h，在透析袋中得到透析产物;所述浓度为0.llmol/L?0.33mol/L的高碘酸钠水溶液与浓度为5mmol/L?15mmol/L的葡聚糖水溶液的体积比为1:10?15;④、将透析产物进行真空冷冻干燥，得到白色粉末，SP为聚醛葡聚糖，所述聚醛葡聚糖的平均氧化度为20% ;
[0039]二、制备己二胺-聚醛葡聚糖:将聚醛葡聚糖溶于蒸馏水，得到浓度为lOmmol/L?16mmol/L的聚醛葡聚糖水溶液，利用恒压漏斗将浓度为lOmmol/L?16mmol/L的聚醛葡聚糖水溶液在搅拌条件下逐滴加入己二胺中，所述浓度为lOmmol/L?16mmol/L的聚醛葡聚糖水溶液中聚醛葡聚糖与己二胺的摩尔比为1:10?15，然后在温度为20?25°C的搅拌条件下反应4h?6h，再加入氰基硼氢化钠，所述的氰基硼氢化钠与己二胺的摩尔比为1:1，继续在温度为20?25 °C的搅拌条件下反应Sh?12h，得到反应物，将反应物转移至透析袋I中，所述透析袋I的截留分子量为3500，去离子水透析24h?36h，在透析袋I中得到水透析产物;将水透析产物转移至透析袋II中，所述透析袋II的截留分子量为3500，无水乙醇透析Sh?12h，在透析袋II中得到乙醇透析产物，将乙醇透析产物旋蒸去除乙醇，即得到己二胺-聚醛葡聚糖；
[0040]三、制备硬脂酸酰胺化葡聚糖:向己二胺-聚醛葡聚糖中依次加入N，N_二甲基甲酰胺和二甲基亚砜，所述的己二胺-聚醛葡聚糖与N，N-二甲基甲酰胺的体积比为1:1?2，所述的N，N-二甲基甲酰胺与二甲基亚砜的体积比为1:1?2，然后在搅拌条件下以恒压漏斗逐滴加入浓度为lOmol/L?20mol/L硬脂酸-DMSO溶液，所述的己二胺-聚醛葡聚糖与浓度为1011101/1?2011101/1硬脂酸-0150溶液中硬脂酸的摩尔比为1:10?20，然后均分三次加入乙基-1，3-二甲基丙基碳二亚胺盐酸盐活化剂，所述的浓度为lOmol/L?20mol/L硬脂酸-DMSO溶液中硬脂酸与乙基-1，3_二甲基丙基碳二亚胺盐酸盐活化剂的摩尔比为1:1，并在温度为60?80°C的搅拌条件下反应7h?12h，自然冷却至室温后，得到硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物溶液；
[0041]四、自组装纳米胶束:
[0042]采用溶剂扩散法与聚焦超声法联用技术将硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物溶液制成酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束。
[0043]图1是【具体实施方式】二步骤一的反应机理图，通过图1可知高碘酸根离子可与葡聚糖表面的邻二醇结构发生氧化反应，生成聚醛葡聚糖向葡聚糖分子表面引入活性醛基，调节葡聚糖与高碘酸根离子投入比例可控制聚醛葡聚糖氧化度。
[0044]图2是【具体实施方式】二步骤二的反应机理图，通过图2反应了聚醛葡聚糖表面的活性醛基可与己二胺中的氨基脱水生成亚胺键，在氰基硼氢化钠作用下，利用还原氨化作用将亚胺键还原成稳定的碳氮单键结构，生成己二胺-聚醛葡聚糖。反应过程中，应注意两种反应物并非简单互混，而是将聚醛葡聚糖溶液缓慢滴加至己二胺溶液中，且保证己二胺过量，这样相当于大量氨基基团包围少量聚醛葡聚糖，使后者的醛基基团优先与氨基基团反应，从而降低甚至避免了聚醛葡聚糖间的交联，也可保证己二胺的另一氨基基团被保留进行下一步反应。
[0045]图3是【具体实施方式】二步骤三的反应机理图，通过图3可知己二胺-聚醛葡聚糖中的活性氨基可与疏水羧酸硬脂酸的羧基基团脱水缩合生成酰胺键，将硬脂酸接枝于己二胺-聚醛葡聚糖分子表面，实现葡聚糖疏水改性。
[0046]【具体实施方式】三:本实施方式与【具体实施方式】二的不同点是:步骤一①中所述葡聚糖的平均分子量为10000。其他与【具体实施方式】二相同。
[0047]【具体实施方式】四:本实施方式与【具体实施方式】二或三之一不同点是:步骤一③中在避光条件下将浓度为5mmo I/L?15mmo I/L的葡聚糖水溶液与浓度为0.1 Imo I/L?
0.33mol/L的高碘酸钠水溶液混合，并在温度为25°C和转速为1000r/min?1500r/min的避光条件下搅拌反应5h?6h，得到反应产物。其他与【具体实施方式】二或三相同。
[0048]【具体实施方式】五:本实施方式与【具体实施方式】二至四之一不同点是:步骤二中利用恒压漏斗将浓度为101111]101凡?161111]101凡的聚醛葡聚糖水溶液在搅拌速度为8001'/1]1；[11?1600的搅拌条件下逐滴加入己二胺中。其他与【具体实施方式】二至四相同。
[0049]【具体实施方式】六:本实施方式与【具体实施方式】二至五之一不同点是:步骤二中利用恒压漏斗将浓度为10mmol/L?16mmol/L的聚醛葡聚糖水溶液在搅拌速度为1000r/min?1500r/min的搅拌条件下逐滴加入己二胺中，然后在温度为20?25°C和搅拌速度为100r/min?1500r/min的搅拌条件下反应4.5h?5.5h，再加入氰基硼氢化钠，继续在温度为20?25 0C和搅拌速度为1000r/min?1500r/min的搅拌条件下反应8.5h?11.5h，得到反应物。其他与【具体实施方式】二至五相同。
[0050]【具体实施方式】七:本实施方式与【具体实施方式】二至六之一不同点是:步骤三中在搅拌速度为4001'/111；[11?10001'/1]1；[11的搅拌条件下以恒压漏斗逐滴加入浓度为101]101/1^?20mol/L硬脂酸-DMSO溶液。其他与【具体实施方式】二至六相同。[0051 ]【具体实施方式】八:本实施方式与【具体实施方式】二至七之一不同点是:步骤三中在搅拌速度为500r/min?800r/min的搅拌条件下以恒压漏斗逐滴加入浓度为12mol/L?18mo I/L硬脂酸-DMSO溶液，并在温度为65?75 °C的搅拌条件下反应7.5h?11.5h，自然冷却至室温后，得到粗产物。其他与【具体实施方式】二至七相同。
[0052]【具体实施方式】九:本实施方式与【具体实施方式】二至八之一不同点是:步骤四中采用溶剂扩散法与聚焦超声法联用技术将硬脂酸-己二胺-聚醛葡聚糖制成酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的具体制备过程如下:利用恒压漏斗将硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物溶液在搅拌速度为500r/min?1600r/min的室温搅拌条件下逐滴加入蒸馈水中，并在搅拌速度为500r/min?1600r/min的室温搅拌条件持续搅拌Ih?3h，然后转移至透析袋中，去离子水透析48h?96h，在透析袋中得到透析后溶液，在50W?150W条件下对透析后溶液聚焦超声Imin?5min，采用间歇脉冲工作方式进行聚焦超声，脉冲宽度为Is?3s，间歇时间为Is?3s，得到超声后溶液，在离心转速为lOOOOr/min下对超声后溶液进行离心分离1min?20min，得到上清液进行真空冷冻干燥，即得到酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束;所述的硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物溶液与蒸馏水的体积比为1:2?
5。其他与【具体实施方式】二至八相同。
[0053]【具体实施方式】十:本实施方式与【具体实施方式】二至九之一不同点是:步骤四中采用溶剂扩散法与聚焦超声法联用技术将硬脂酸-己二胺-聚醛葡聚糖制成酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的具体制备过程如下:利用恒压漏斗将硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物溶液在搅拌速度为500r/min?900r/min的室温搅拌条件下逐滴加入蒸馈水中，并在搅拌速度为500r/min?900r/min的室温搅拌条件持续搅拌1.5h?2.5h，然后转移至透析袋中，去离子水透析48h?96h，在透析袋中得到透析后溶液，在60W?100W条件下对透析后溶液聚焦超声2min?3min，采用间歇脉冲工作方式进行聚焦超声，脉冲宽度为1.5s?2.5s，间歇时间为1.5s?2.5s，得到超声后溶液，在离心转速为10000r/min下对超声后溶液进行离心分离15min，得到上清液进行真空冷冻干燥，即得到酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束;所述的硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物溶液与蒸馏水的体积比为1:2.5?4.5。其他与【具体实施方式】二至九相同。
[0054]【具体实施方式】十一:本实施方式是一种酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的使用方法，具体是按以下步骤完成的:将酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束和疏水抗肿瘤药物依次溶于二甲基亚砜中，得到共容物，然后在搅拌速度为800r/min?1600r/min的条件下将共容物逐滴加入蒸馈水中，并在搅拌速度为800r/min?1600r/min的室温搅拌条件持续搅拌Ih?3h，然后转移至透析袋中，去离子水透析48h?96h，在透析袋中得到透析产物，将透析产物进行真空冷冻干燥，即得到双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米载药胶束;所述的酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束与疏水抗肿瘤药物的质量比为5:1;所述的疏水抗肿瘤药物的质量与二甲基亚砜的体积比为lmg:0.2mL?0.25mL;所述的疏水抗肿瘤药物的质量与蒸馈水的体积比为lmg:1mL?1.5mL0
[0055]【具体实施方式】十二:本实施方式与【具体实施方式】十一的不同点是:所述的疏水抗肿瘤药物为姜黄素。其他与【具体实施方式】十一相同。
[0056]采用下述试验验证本发明效果
[0057]实施例1:一种酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的制备方法，具体是按以下步骤完成的:
[0058]一、制备聚醛葡聚糖:①、将0.1mmol葡聚糖溶解于15mL蒸馏水中，得到葡聚糖水溶液;②、将高碘酸钠溶解于蒸馏水中，得到浓度为0.22mol/L的高碘酸钠水溶液;③、在避光条件下将步骤一①得到的葡聚糖水溶液与浓度为0.22mol/L的高碘酸钠水溶液混合，并在温度为25 0C和转速为1000r/min的避光条件下搅拌反应5h，得到反应产物，将反应产物转移至透析袋中，所述透析袋的截留分子量为3500，去离子水透析24h，在透析袋中得到透析产物;所述浓度为0.22mol/L的高碘酸钠水溶液与步骤一①得到的葡聚糖水溶液的体积比为1:10;?、将透析产物进行真空冷冻干燥，得到白色粉末，即为聚醛葡聚糖，所述聚醛葡聚糖的平均氧化度为20%;
[0059]二、制备己二胺-聚醛葡聚糖:将0.5mmol聚醛葡聚糖溶于40mL蒸馏水，得到聚醛葡聚糖水溶液，利用恒压漏斗将聚醛葡聚糖水溶液在搅拌速度为800r/min的搅拌条件下逐滴加入5.0mmoI己二胺中，然后在室温及搅拌速度为800r/min的搅拌条件下反应4h，再加入
5.0mmol氰基硼氢化钠，继续在室温及搅拌速度为800r/min的搅拌条件下12h，得到反应物，将反应物转移至透析袋I中，所述透析袋I的截留分子量为3500，去离子水透析36h，在透析袋I中得到水透析产物;将水透析产物转移至透析袋II中，所述透析袋II的截留分子量为3500，无水乙醇透析12h，在透析袋II中得到乙醇透析产物，将乙醇透析产物旋蒸去除乙醇，即得到己二胺-聚醛葡聚糖；
[0060]三、制备硬脂酸酰胺化葡聚糖:向1mmol己二胺-聚醛葡聚糖中依次加入SmL N,N-二甲基甲酰胺和SmL 二甲基亚砜，然后在搅拌速度为800r/min的搅拌条件下以恒压漏斗逐滴加入浓度为20mol/L硬脂酸-DMSO溶液，所述的己二胺-聚醛葡聚糖与浓度为20mol/L硬脂酸-DMSO溶液中硬脂酸的摩尔比为1:15，然后均分三次加入乙基-1，3_ 二甲基丙基碳二亚胺盐酸盐活化剂，所述的浓度为20mol/L硬脂酸-DMSO溶液中硬脂酸与乙基-1，3_二甲基丙基碳二亚胺盐酸盐活化剂的摩尔比为1:1，并在温度为70°C的搅拌条件下反应8h，自然冷却至室温后，得到粗产物，将粗产物置于透析袋中，所述透析袋的截留分子量为3500，去离子水透析48h，在透析袋中得到透析产物，将透析产物进行真空冷冻干燥，得到硬脂酸-己二胺-聚醛葡聚糖；
[0061]四、自组装纳米胶束:
[0062]利用恒压漏斗将30mL硬脂酸-己二胺-聚醛葡聚糖溶液在搅拌速度为800r/min的室温搅拌条件下逐滴加入80mL蒸馏水中，并在搅拌速度为800r/min的室温搅拌条件持续搅拌1.5h，然后转移至透析袋中，去离子水透析96h，在透析袋中得到透析后溶液，在10W条件下对透析后溶液聚焦超声3min，采用间歇脉冲工作方式进行聚焦超声，脉冲宽度为2s，间歇时间为2s，得到超声后溶液，在离心转速为lOOOOr/min下对超声后溶液进行离心分离15min，得到上清液进行真空冷冻干燥，即得到酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束。
[0063]图4是红外光谱图，图中a表示实施例1步骤一①中所述葡聚糖的红外光谱图，图中b表示实施例1步骤一中得到的聚醛葡聚糖的红外光谱图，从图4中可以看出，葡聚糖及聚醛葡聚糖均在3400cm—1附近出现宽而强的如-H吸收峰，在2900cm—1附近出现连接葡萄糖单位的糖苷键的CH2伸缩振动峰，在1200?1000cm—1处出现Uc-O吸收峰，此均是葡聚糖特征吸收峰，说明二者具有类似化学结构。但聚醛葡聚糖与葡聚糖又存在差异，如聚醛葡聚糖在1728cm—1处出现新醛基的特征峰，且从图中可以看出3400?3200cm—1处υο—η吸收峰变窄，表明产物中羟基含量减少，910cm—1附近的C-C键的特征峰变弱，说明Na14已破坏葡萄糖单位部分C-C键生成醛基基团。图5是实施例1步骤二得到的己二胺-聚醛葡聚糖的红外光谱图，从图中可知，己二胺-聚醛葡聚糖与聚醛葡聚糖相比1728.13cm—工的叱=。消失，1440.77cm—1出现C-N的特征吸收峰，说明聚醛葡聚糖的醛基与己二胺的氨基通过还原氨化以新化学键C-N相连，而1551.59cm—1出现的N-H特征峰表明己二胺中一个氨基基团与醛基发生反应，而另一氨基基团则被保留，继续下步反应。图6是实施例1步骤四得到的酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的红外光谱图，从图中可知，1550cm—1附近N-H的特征峰发生明显蓝移，且强度有所减弱，而在1701cm—\l205cm—1处出现了酰胺键中C-N及C = O特征峰，表明硬脂酸通过酰胺键与己二胺-聚醛葡聚糖所携活性氨基连接，且在2850cm—1附近出现甲基Uc-H特征峰，再次表明硬脂酸已成功接枝至HMDA-OxDex分子表面，实现葡聚糖的疏水改性。
[0064]图7是实施例1步骤四得到的酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束结构示意图；图8是实施例1步骤四得到的酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束以DMS0-d6为溶剂的核磁共振氢谱图；图9是图8的局部放大图；各峰位置对应图7中的序号位置，分别归属如下(DMS0-d6ppm):0.855(2H，s，SA 17_H2)，I.045?I.081 (4H，s，HMDA 9-H2,HMDAl2-H2) ,1.240(28H, s, SA I6H28)，I.492(2H，m，SA 14_H2)，I.59?I.70(4H，s，HMDA10-H2，HMDAn-H2)，2.112(2H，s，SA 15_H2)，2.118?2.212(4H，s，HMDA 8-H2，HMDA13-?)，2.213-3.744(9H，s，0xDex 2_Hi，OxDex 3-Hi,OxDex 4-Hi,OxDex 5_Hi，OxDex 6-H2，OxDex 7-H2)，4.854( IH，t，OxDex 1-H1)，核磁氢谱中分别含有葡聚糖、己二胺、硬脂酸的特征峰，由此可知，硬脂酸成功通过己二胺为连接手臂接枝到聚醛葡聚糖分子表面，即完成疏水改性。
[0065]对实施例1步骤四得到的酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束、实施例1步骤一①中所述葡聚糖和实施例1步骤三中所述硬脂酸进行热失重分析(TGA)Jn图10所示，图10是热失重分析图，图中a表示实施例1步骤四得到的酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的热失重分析曲线，图中b表示实施例1步骤一①中所述葡聚糖的热失重分析曲线，图中c表示步骤三中所述硬脂酸的热失重分析曲线;三种化合物在初始阶段均出现少量重量减少现象，主要是由于水分蒸发。从图中可知，葡聚糖在330°C左右重量损失最大，在350°C时，其失重率为81.3%，当温度继续升高至600°C时，失重率达到92.4%。实施例1步骤四得到的酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束失重情况与葡聚糖相比，初始失重温度降低为240°C，这说明随着温度升高，硬脂酸会首先失去，剩余多糖骨架；随着温度继续升高至6000C时，失重率达到87.4%，失重速率小于葡聚糖失重速率，这说明葡聚糖经氧化、还原氨化等系列反应后热稳定性有所增加。观察图10中硬脂酸失重曲线，硬脂酸在160?230°C之间完成整个失重过程，说明较葡聚糖相比，硬脂酸对温度更加敏感，易高温降解，这从侧面验证了实施例1步骤四得到的酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束中硬脂酸会最先随温度升高而失去。
[0066]实施例1步骤四得到的酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束包括亲水性葡聚糖和疏水羧酸基团硬脂酸，因而具有两亲性，可在水溶液中通过疏水作用力形成壳核结构，此特性在不同溶剂1H匪R谱图中能够表现。如图11和图12所示，图11是实施例I步骤四得到的酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束以D2O为溶剂的核磁共振氢谱图；图12是实施例1步骤四得到的酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束以DMS0-d6为溶剂的核磁共振氢谱图；通过图11和图12可知，以DMS0-d6为溶剂1H NMR谱中含有葡聚糖与硬脂酸特征峰，而以D2O为溶剂1H NMR谱中无硬脂酸特征峰，仅可观察到葡聚糖的特征峰。表明硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物在D2O中由于疏水聚集作用形成了具有壳-核结构的自组装胶束，疏水硬脂酸构成胶束内核，而亲水性葡聚糖构成胶束外壳，因此当其处于水环境中核磁图谱只能检测到葡聚糖的特征峰，硬脂酸特征峰消失。图11和图12有力表明硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物形成了稳定壳核结构。
[0067]以水为溶剂配置不同浓度的酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束，浓度分另1J为 10—4mmol/mL、10—2mmol/mL、0.lmmol/mL、0.3mmol/mL、0.4mmol/mL、0.5mmol/mL、0.8mmo 1/mL和1.0mmoI/mL，实施例1步骤四得到的酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束以临界胶束浓度(CMC)大小评价胶束聚集能力。以芘作为荧光探针，在373、379、384、394、480nm处检测激发态荧光的五重发射峰，并以1373/1384比值变化衡量酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的CMC。如图13所示，图13是以芘作为荧光探针对不同浓度酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的荧光谱图，图中a为浓度为1.0mmol/mL酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的荧光谱图，图中b为浓度为0.8mmol/mL酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的荧光谱图，图中c为浓度为0.5mmol/mL酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的荧光谱图，图中d为浓度为0.4mmol/mL酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的荧光谱图，图中e为浓度为0.3mmol/mL酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的荧光谱图，图中f为浓度为0.1mmol/mL酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的荧光谱图，图中g为浓度为10—Vmol/mL酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的荧光谱图，图中h为浓度为10—4HimoVmL酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的荧光谱图；由图可见，随胶束溶液浓度增大，芘的荧光发射强度发生相应改变:芘在极性介质中荧光强度较强而在非极性介质中荧光强度变弱。如图13所示，当芘处于浓度为10—4HimoVmL酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束(图13中h)中，花的荧光强度与其在水介质中的荧光强度类似，且Ii/I3=1.977(水中》2.0);随着浓度增加至0.3mmol/mL(图13中e)，花的荧光强度发生急剧变化，I1A3 = 1.26，表明硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物在水溶液中发生了聚集，形成了疏水结构域，荧光探针向疏水结构域转移同时降低了其发射光谱强度；当酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束浓度增加至0.8?1.0mmol/mL，此时疏水结构域已完全形成，因此在两种浓度胶束溶液中花的焚光强度大小相似，二者荧光吸收曲线基本重合(图13中a和b)。
[0068]图14为I1A3对IgC作图，当酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束浓度较低，对芘的荧光强度未产生明显影响，当浓度增加，li/13值呈直线下降，说明硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物在水中发生了自聚集，导致荧光探针芘逐渐由水介质转移至疏水微环境。Ιι/Ι3变化的转折点，即两直线交点所对应的浓度为该双亲性衍生物的临界胶束浓度(CMC)，此硬脂酸-己二胺-聚醛葡聚糖的临界胶束浓度为0.070mg/mL。
[0069]以动态光散射(DLS)测定实施例1步骤四得到的酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束粒径分布情况，如图15所示，图15是实施例1步骤四得到的酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的粒径分布曲线图，从图14可知，该双亲性硬脂葡聚糖聚合物纳米胶束平均粒径为311.3nm，属于纳米级别，且具有较好的单分散性(PDI<
0.5)，再对其以透射及扫描超微结构观察，如图16、图17和图18所示，图16是实施例1步骤四得到的酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束放大10000倍的扫描电镜图；图17是实施例1步骤四得到的酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束放大15000倍的透射电镜图；图18是实施例1步骤四得到的酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束放大30000倍的透射电镜图；通过图16-18所示，可看出硬脂酸酰胺化葡聚糖胶束呈球形，分布均匀、表面光滑完整，且从图中可明显观察到葡聚糖胶束具有空心壳核结构，说明可作为疏水药物的良好载体。
[0070]实施例2:—种酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的使用方法，具体是按以下步骤完成的:将20mg酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束和4mg疏水抗肿瘤药物依次溶于8mL二甲基亚砜中，得到共容物，然后在搅拌速度为800r/min的条件下将共容物逐滴加入16mL蒸馏水中，并在搅拌速度为800r/min的室温搅拌条件持续搅拌Ih，然后转移至透析袋中，去离子水透析48h，在透析袋中得到透析产物，将透析产物进行真空冷冻干燥，即得到双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米载药胶束;所述的疏水抗肿瘤药物为姜黄素。
[0071]以天然抗肿瘤药物姜黄素为模型药物，考察酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束对姜黄素增溶效果，经检测双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米载药胶束载药量为13.84%,药物负载率为86.31 %，说明实施例1制备的酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束对姜黄素有增溶效果。
[0072]将20mg实施例1制备的酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束和4mg疏水抗肿瘤药物依次溶于8mL二甲基亚砜中，然后在搅拌速度为800r/min的条件下将共容物逐滴加入16mL蒸馏水，得到姜黄素/空白胶束混合物;对姜黄素、姜黄素/空白胶束混合物和双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米载药胶束进行检测，如图19所示，图19是X-射线衍射图谱，图中a表示姜黄素的X-射线衍射图谱，图中b表示姜黄素/空白胶束混合物的X-射线衍射图谱，图中c表示实施例2得到的双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米载药胶束的X-射线衍射图谱；由图可见，姜黄素在2Θ10?30°有特定晶体衍射峰，姜黄素与空白胶束载体的简单混合物也可观察到此特征峰，而姜黄素载药胶束则未检测出该晶体峰，此结果充分表明实施例2制备的双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米载药胶束非姜黄素与空白胶束载体的简单互混，而是疏水药物姜黄素通过疏水间作用力载入胶束载体疏水结构域内部，即实现了胶束载体对疏水药物的增溶作用。
[0073]采用透析袋扩散法考察载药胶束体外释放情况，准备等量的三份实施例2得到的双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米载药胶束，然后分别置于PH为7.4,6.5和5.5的PBS缓冲液中释放，得到相应曲线如图20所示，图20是释药曲线，图中▲表示在pH=5.5时，实施例2得到的双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米载药胶束的释药曲线，图中?表示在pH=6.5时，实施例2得到的双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米载药胶束的释药曲线，图中.表示在pH=7.4时，实施例2得到的双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米载药胶束的释药曲线；由于葡聚糖与疏水羧酸之间是以具有酸敏感性的酰胺键连接的，故此酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束具有一定PH敏感性。由图可知，随pH降低，药物释放速率明显加快，从pH = 7.4时58 %增至pH= 5.5的83 %左右，S卩在酸介质中药物释放明显提高。而由于肿瘤细胞的大量繁殖，肿瘤血管无法提供足够的营养及氧气，会导致ATP水解并产生乳酸，即肿瘤组织PH低于正常细胞，可以推测:该聚合物胶束在pH= 7.4左右的正常体液中药物释放缓慢，待接触到肿瘤组织，释药速率加快，即本发明制备的酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束具有良好肿瘤靶向效果。
【主权项】
1.一种酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束，其特征在于酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束以葡聚糖为原料，经过氧化反应在葡聚糖结构表面引入活性醛基，得到聚醛葡聚糖，再将聚醛葡聚糖与己二胺反应，生成己二胺-聚醛葡聚糖，所述的己二胺-聚醛葡聚糖具有稳定碳氮单键结构，且携带活性氨基;己二胺-聚醛葡聚糖与硬脂酸进行酰化，得到硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物，利用硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物的双亲性在水中自组装为纳米胶束，即为酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束。2.—种酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的制备方法，其特征在于酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的制备方法是按以下步骤完成的: 一、制备聚醛葡聚糖:①、将葡聚糖溶解于蒸馏水中，得到浓度为5mmol/L?15mmol/L的葡聚糖水溶液;②、将高碘酸钠溶解于蒸馏水中，得到浓度为0.1lmol/L?0.33mol/L的高碘酸钠水溶液；③、在避光条件下将浓度为5mmol/L?15mmol/L的葡聚糖水溶液与浓度为0.1111101/1^?0.3311101/1的高碘酸钠水溶液混合，并在温度为25°(:和转速为80(^/1^11?1600r/min的避光条件下搅拌反应4h?8h，得到反应产物，将反应产物转移至透析袋中，所述透析袋的截留分子量为3500，去离子水透析24h?36h，在透析袋中得到透析产物;所述浓度为0.I lmol/L?0.33mol/L的高碘酸钠水溶液与浓度为5mmol/L?15mmol/L的葡聚糖水溶液的体积比为1:10?15;④、将透析产物进行真空冷冻干燥，得到白色粉末，即为聚醛葡聚糖，所述聚醛葡聚糖的平均氧化度为20% ; 二、制备己二胺-聚醛葡聚糖:将聚醛葡聚糖溶于蒸馏水，得到浓度为lOmmol/L?16mmol/L的聚醛葡聚糖水溶液，利用恒压漏斗将浓度为lOmmol/L?16mmol/L的聚醛葡聚糖水溶液在搅拌条件下逐滴加入己二胺中，所述浓度为lOmmol/L?16mmol/L的聚醛葡聚糖水溶液中聚醛葡聚糖与己二胺的摩尔比为1:10?15，然后在温度为20?25°C的搅拌条件下反应4h?6h，再加入氰基硼氢化钠，所述的氰基硼氢化钠与己二胺的摩尔比为1:1，继续在温度为20?25 °C的搅拌条件下反应Sh?12h，得到反应物，将反应物转移至透析袋I中，所述透析袋I的截留分子量为3500，去离子水透析24h?36h，在透析袋I中得到水透析产物;将水透析产物转移至透析袋II中，所述透析袋II的截留分子量为3500，无水乙醇透析Sh?12h，在透析袋II中得到乙醇透析产物，将乙醇透析产物旋蒸去除乙醇，即得到己二胺-聚醛葡聚糖； 三、制备硬脂酸酰胺化葡聚糖:向己二胺-聚醛葡聚糖中依次加入N，N-二甲基甲酰胺和二甲基亚砜，所述的己二胺-聚醛葡聚糖与N，N-二甲基甲酰胺的体积比为1:1?2，所述的N，N-二甲基甲酰胺与二甲基亚砜的体积比为1:1?2，然后在搅拌条件下以恒压漏斗逐滴加入浓度为lOmol/L?20moVL硬脂酸-DMSO溶液，所述的己二胺-聚醛葡聚糖与浓度为lOmol/L?20mol/L硬脂酸-DMSO溶液中硬脂酸的摩尔比为1:10?20，然后均分三次加入乙基-1，3-二甲基丙基碳二亚胺盐酸盐活化剂，所述的浓度为lOmol/L?20mol/L硬脂酸-DMSO溶液中硬脂酸与乙基-1，3_二甲基丙基碳二亚胺盐酸盐活化剂的摩尔比为1:1，并在温度为60?80°C的搅拌条件下反应7h?12h，自然冷却至室温后，得到硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物溶液； 四、自组装纳米胶束: 采用溶剂扩散法与聚焦超声法联用技术将硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物溶液制成酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束。3.根据权利要求2所述的一种酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的制备方法，其特征在于步骤一①中所述葡聚糖的平均分子量为10000。4.根据权利要求2所述的一种酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的制备方法，其特征在于步骤一③中在避光条件下将浓度为5mmol/L?15mmol/L的葡聚糖水溶液与浓度为0.1111101/1?0.3311101/1的高碘酸钠水溶液混合，并在温度为25°(:和转速为1000r/min?1500r/min的避光条件下搅拌反应5h?6h，得到反应产物。5.根据权利要求2所述的一种酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的制备方法，其特征在于步骤二中利用恒压漏斗将浓度为10mmol/L?16mmol/L的聚醛葡聚糖水溶液在搅拌速度为800r/min?1600的搅拌条件下逐滴加入己二胺中。6.根据权利要求4所述的一种酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的制备方法，其特征在于步骤二中利用恒压漏斗将浓度为10mmol/L?16mmol/L的聚醛葡聚糖水溶液在搅拌速度为1000r/min?1500r/min的搅拌条件下逐滴加入己二胺中，然后在温度为20?25 0C和搅拌速度为1000r/min?1500r/min的搅拌条件下反应4.5h?5.5h，再加入氰基硼氢化钠，继续在温度为20?25°C和搅拌速度为1000r/min?1500r/min的搅拌条件下反应8.5h?11.5h，得到反应物。7.根据权利要求2所述的一种酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的制备方法，其特征在于步骤三中在搅拌速度为400r/min?1000r/min的搅拌条件下以恒压漏斗逐滴加入浓度为I Omo I /L?20mo I /L硬脂酸-DMSO溶液。8.根据权利要求7所述的一种酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的制备方法，其特征在于步骤三中在搅拌速度为500r/min?800r/min的搅拌条件下以恒压漏斗逐滴加入浓度为12mol/L?18mol/L硬脂酸-DMSO溶液，并在温度为65?75°C的搅拌条件下反应7.5h?11.5h，自然冷却至室温后，得到粗产物。9.根据权利要求2所述的一种酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的制备方法，其特征在于步骤四中采用溶剂扩散法与聚焦超声法联用技术将硬脂酸-己二胺-聚醛葡聚糖制成酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的具体制备过程如下:利用恒压漏斗将硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物溶液在搅拌速度为500r/min?1600r/min的室温搅拌条件下逐滴加入蒸馈水中，并在搅拌速度为500r/min?1600r/min的室温搅拌条件持续搅拌Ih?3h，然后转移至透析袋中，去离子水透析48h?96h，在透析袋中得到透析后溶液，在50W?150W条件下对透析后溶液聚焦超声Imin?5min，采用间歇脉冲工作方式进行聚焦超声，脉冲宽度为Is?3s，间歇时间为Is?3s，得到超声后溶液，在离心转速为10000r/min下对超声后溶液进行离心分离1min?20min，得到上清液进行真空冷冻干燥，即得到酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束;所述的硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物溶液与蒸馏水的体积比为I: 2?5。10.根据权利要求9所述的一种酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的制备方法，其特征在于步骤四中采用溶剂扩散法与聚焦超声法联用技术将硬脂酸-己二胺-聚醛葡聚糖制成酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束的具体制备过程如下:利用恒压漏斗将硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物溶液在搅拌速度为500r/min?900r/min的室温搅拌条件下逐滴加入蒸馈水中，并在搅拌速度为500r/min?900r/min的室温搅拌条件持续搅拌1.5h?2.5h，然后转移至透析袋中，去离子水透析48h?96h，在透析袋中得到透析后溶液，在60W?10W条件下对透析后溶液聚焦超声2min?3min，采用间歇脉冲工作方式进行聚焦超声，脉冲宽度为1.5s?2.5s，间歇时间为1.5s?2.5s，得到超声后溶液，在离心转速为10000r/min下对超声后溶液进行离心分离15min，得到上清液进行真空冷冻干燥，SP得到酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束;所述的硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物溶液与蒸馏水的体积比为1:2.5?4.5。
【文档编号】A61K9/107GK105837836SQ201610236099
【公开日】2016年8月10日
【申请日】2016年4月15日
【发明人】王路, 李玮, 李书彬, 王振宇
【申请人】哈尔滨工业大学