一种同时提取dna和rna的方法
【专利摘要】本发明公开了一种同时提取DNA和RNA的方法，1)、将组织置于震荡管内，然后向震荡管内加入体积为500μl组织裂解液，将组织进行裂解，得到组织液；2)、将组织液转移到离心管内，然后向离心管内添加体积为100μl的1?溴?3?氯丙烷和浓度为20ng/μl的糖原，然后将离心管进行震荡、室温静置，然后进行离心后，离心管内液体分为三层，所述三层为上层、中层、下层；3)、取试管A和试管B，将步骤2中的离心管内的上层液体倒入试管A中进行RNA的提取，同时将离心管内的中下层液体倒入试管B中进行DNA的提取。本发明本发明的毒性更低，提取DNA和RNA更加快捷、高效；本发明提取的DNA和RNA的纯度很高，并且能够同时提取DNA和RNA，大大提高了工作效率。
【专利说明】
_种同时提取DNA和RNA的方法
技术领域
[0001 ]本发明涉及一种同时提取DNA和RNA的方法。
【背景技术】
[0002]临床组织样本是珍贵的遗传物质来源，通常情况下能够获得的量很少，如何更充分高效地利用有限的临床组织是一个亟需解决的问题。目前提取DNA和RNA的方法有两种，一种是Trizol即氯仿萃取法，另一种是硅胶模吸附法。前者所使用的氯仿是一种易制毒的危险有机溶剂，后者虽然操作简单但是获得的核酸纯度偏低，特别是在微量样本的核酸提取中效率尤其低下。
【发明内容】
[0003]本发明的目的是提供一种同时提取DNA和RNA的方法。
[0004]为了达到上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的:
[0005 ] 一种同时提取DNA和RNA的方法，步骤如下:
[0006]I)、将组织置于震荡管内，然后向震荡管内加入体积为500μ1组织裂解液，将组织进行裂解，得到组织液；
[0007]2)、将组织液转移到离心管内，然后向离心管内添加体积为ΙΟΟμΙ的1-溴-3-氯丙烷和浓度为20ngAU的糖原，然后将离心管进行震荡、室温静置，然后进行离心后，离心管内液体分为三层，所述三层为上层、中层、下层；
[0008]3)、取试管A和试管B，将步骤2中的离心管内的上层液体倒入试管A中进行RNA的提取，同时将离心管内的中下层液体倒入试管B中进行DNA的提取。
[0009]试管A中进行RNA的提取步骤如下:
[0010]第一步:将体积为150μ1的异丙醇添加到试管A中，将试管A依次进行上下颠倒混匀、室温静置、离心；
[0011]第二步:然后向试管A中加入500μ1体积浓度为75%的乙醇，进行漂洗；
[0012]第三步:离心后，将试管A中的液体倒出去，然后将试管A在室温晾干至白色沉淀变透明；
[0013]第四步:继续在试管A中加入体积为5ul到50μ1经焦碳酸二乙酯处理过的灭菌超纯水，所述焦碳酸二乙酯的体积浓度为1%。，然后将试管A进行水浴加热，然后震荡、离心，然后置于冰上，得到RNA液体，测定RNA纯度和浓度后将RNA液体在零下80度温度下进行保存。
[0014]试管B中进行DNA的提取步骤如下:
[0015]a、向试管B中加入200μ1 DNA提取缓冲液，将试管B进行55度水浴加热10分钟，水浴加热期间将试管B进行上下颠倒5次；
[0016]b、将试管B在室温进行静置10分钟后，然后4度12000转/分离心15分钟，此时试管B中的液体分为上下两层；
[0017]C、取试管C，将将试管B的上层液体倒入到试管C中，然后向试管C中加入体积为250μ?无水乙醇；
[0018]d、将试管C放在温度为零下20度下静置I小时，沉淀DNA，然后将试管C进行4度12000转/分离心;
[0019]e、向试管C中加入体积浓度为75%乙醇，进行漂洗，漂洗两次后，将试管C的上层液体倒出去，然后将试管C在室温晾干至白色沉淀变透明；
[0020]f、向试管C中加入10-50ul灭菌超纯水，震荡后离心，得到DNA液体，测定DNA纯度和浓度后将DNA液体在零下80度温度下进行保存。
[0021]本发明的DNA提取缓冲液包括IM三羟甲基氨基甲烷、3.75M异胍氢酸胍、0.3M硫氰酸铵、35mM梓檬酸钠。
[0022]本发明的有益效果如下:本发明采用1-溴-3-氯丙烷代替氯仿，大大降低了核酸提取过程中的毒害，因此本发明的毒性更低，提取DNA和RNA更加安全;此外本发明在加入1-溴-3-氯丙烷的同时添加了适量的糖原使核酸更容易沉淀，提取DNA和RNA更加快捷、高效；本发明利用DNA提取缓冲液使DNA更容易提取出来，本发明提取的DNA和RNA的纯度很高，并且能够同时提取DNA和RNA，大大提高了工作效率。
【具体实施方式】
[0023]下面结合对本发明的技术方案作进一步说明:
[0024]一种同时提取DNA和RNA的方法，步骤如下:
[0025]I)、将组织置于震荡管内，然后向震荡管内加入体积为500μ1组织裂解液，进行震荡使得组织进行裂解，震荡的时间为I分钟，得到组织液；
[0026]2)、将组织液转移到离心管内，然后向离心管内添加体积为ΙΟΟμΙ的1-溴-3-氯丙烷和浓度为20ngAU的糖原，然后将离心管进行震荡、室温静置12分钟，然后4度12000转/分离心15分钟后，离心管内液体分为三层，所述三层为上层、中层、下层；
[0027]3)、取试管A和试管B，将步骤2中的离心管内的上层液体倒入试管A中进行RNA的提取，同时将离心管内的中下层液体倒入试管B中进行DNA的提取；
[0028]试管A中进行RNA的提取步骤如下:
[0029]第一步:将体积为150μ1的异丙醇添加到试管A中，将试管A依次进行上下颠倒混匀、室温静置8分钟、随后4度12000转/分离心15分钟；
[0030]第二步:然后向试管A中加入500μ1体积浓度为75%的乙醇，进行漂洗；
[0031 ]第三步:4度12000转/分离心后，将试管A中的液体倒出去，然后将试管A在室温晾干至白色沉淀变透明；
[0032]第四步:继续在试管A中加入体积为5ul到50μ1经焦碳酸二乙酯处理过的灭菌超纯水，所述焦碳酸二乙酯的体积浓度为1%。，然后将试管A进行59度水浴加热10分钟，然后震荡、离心后，然后置于冰上，得到RNA液体，测定RNA纯度和浓度后将RNA液体在零下80度温度下进行保存。
[0033]试管B中进行DNA的提取步骤如下:
[0034]a、向试管B中加入200μ1 DNA提取缓冲液，将试管B进行水浴加热，水浴加热期间将试管B进行上下颠倒；
[0035]b、将试管B在室温进行静置，然后进行离心，此时试管B中的液体分为上下两层；
[0036]c、取试管C，将将试管B的上层液体倒入到试管C中，然后向试管C中加入体积为250μ?无水乙醇；
[0037]d、将试管C放在温度为零下20度下静置I小时，然后将试管C进行离心；
[0038]e、向试管C中加入体积浓度为75 %乙醇，进行漂洗，将试管C的上层液体倒出去，然后将试管C在室温晾干至白色沉淀变透明；
[0039]f、向试管C中加入10-50ul灭菌超纯水，震荡后离心，得到DNA液体，测定DNA纯度和浓度后将DNA液体在零下80度温度下进行保存。
[0040]本发明的DNA提取缓冲液包括IM三羟甲基氨基甲烷、3.75M异胍氢酸胍、0.3M硫氰酸铵、35mM梓檬酸钠。
[0041]本发明采用1-溴-3-氯丙烷代替氯仿，大大降低了核酸提取过程中的毒害，因此本发明的毒性更低，提取DNA和RNA更加安全;此外本发明在加入1-溴-3-氯丙烷的同时添加了适量的糖原使核酸更容易沉淀，提取DNA和RNA更加快捷、高效;本发明利用DNA提取缓冲液使DNA更容易提取出来，本发明提取的DNA和RNA的纯度很高，并且能够同时提取DNA和RNA，大大提高了工作效率。
[0042]需要注意的是，以上列举的仅是本发明的一种具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。
[0043]总之，本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。
【主权项】
1.一种同时提取DNA和RNA的方法，其特征在于，步骤如下: 1)、将组织置于震荡管内，然后向震荡管内加入体积为500μ1组织裂解液，将组织进行裂解，得到组织液； 2)、将组织液转移到离心管内，然后向离心管内添加体积为ΙΟΟμΙ的1-溴-3-氯丙烷和浓度为20ngAU的糖原，然后将离心管进行震荡、室温静置，然后进行离心后，离心管内液体分为三层，所述三层为上层、中层、下层； 3)、取试管A和试管B，将步骤2中的离心管内的上层液体倒入试管A中进行RNA的提取，同时将离心管内的中下层液体倒入试管B中进行DNA的提取。2.根据权利要求1所述一种同时提取DNA和RNA的方法，其特征在于，所述试管A中进行RNA的提取步骤如下: 第一步:将体积为150μ1的异丙醇添加到试管A中，将试管A依次进行上下颠倒混匀、室温静置、离心； 第二步:然后向试管A中加入500μ1体积浓度为75 %的乙醇，进行漂洗； 第三步:离心后，将试管A中的液体倒出去，然后将试管A在室温晾干至白色沉淀变透明； 第四步:继续在试管A中加入体积为5ul到50μ1经焦碳酸二乙酯处理过的灭菌超纯水，所述焦碳酸二乙酯的体积浓度为1%。，然后将试管A进行水浴加热，然后震荡、离心，然后置于冰上，得到RNA液体，测定RNA纯度和浓度后将RNA液体在零下80度温度下进行保存。3.根据权利要求1所述一种同时提取DNA和RNA的方法，其特征在于，所述试管B中进行DNA的提取步骤如下: a、向试管B中加入200μ1DNA提取缓冲液，将试管B进行水浴加热，水浴加热期间将试管B进行上下颠倒； b、将试管B在室温进行静置，然后进行离心，此时试管B中的液体分为上下两层； c、取试管C，将将试管B的上层液体倒入到试管C中，然后向试管C中加入体积为250μ1无水乙醇； d、将试管C放在温度为零下20度下静置I小时，然后将试管C进行离心； e、向试管C中加入体积浓度为75%乙醇，进行漂洗，将试管C的上层液体倒出去，然后将试管C在室温晾干至白色沉淀变透明； f、向试管C中加入10-50ul灭菌超纯水，震荡后离心，得到DNA液体，测定DNA纯度和浓度后将DNA液体在零下80度温度下进行保存。4.根据权利要求3所述一种同时提取DNA和RNA的方法，其特征在于，所述DNA提取缓冲液包括IM三羟甲基氨基甲烷、3.75M异胍氢酸胍、0.3M硫氰酸铵、35mM梓檬酸钠。
【文档编号】C12N15/10GK105838709SQ201610369194
【公开日】2016年8月10日
【申请日】2016年5月27日
【发明人】罗春芳, 孙建国, 胡慧
【申请人】赛澜生物技术(杭州)有限公司