异丙基三唑并吡啶化合物的制作方法
【专利摘要】本发明提供了下式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、使用所述化合物治疗糖尿病的方法和用于制备所述化合物的方法，其中R1选自H、CH3、CN、CH2CN、C(CH3)2CN和F；R2选自H、O(C1?C3烷基)R5、CH2CN和CN；R3选自H、OCH3、CN、C(CH3)2CN和CH2CN；R4选自H和CH3；R5选自H、CN、C(CH3)2CN、OCH3、S(O)2CH3和C(CH3)2OH；条件是，选自R1、R2、R3和R4中的至少一个是H。(I)。
【专利说明】异丙基三唑并吡啶化合物
[0001] 本发明涉及三唑并吡啶化合物或者它们的药学上可接受的盐，以及化合物在治疗 中的用途。本发明的三唑并吡啶化合物是GPR-40的激活剂。
[0002] GPR-40也称为游离脂肪酸受体1(FFA1或者FFAR1)，据报道主要在啮齿动物胰腺β 细胞、胰岛瘤细胞系和人体胰岛中以高水平表达。胰岛素分泌的葡萄糖调节是激活GPR-40 的重要特征。实现GPR-40激活的化合物与刺激患有II型糖尿病(T2D)的患者中的胰岛素分 泌相关。作为GPR-40激活剂的化合物期望在GPR-40介导的病况的治疗中使用。
[0003] W02004/041266公开了 GPR-40受体功能调节剂，其包括具有芳环和能够释放阳离 子的基团的化合物。
[0004] 本发明提供下式I的化合物，或者其药学上可接受的盐：
其中 R1选自 Η、CH3、CN、CH2CN、C (CH3) 2CN和 F; R2选自 Η、0( Ci-C3烷基)R5、CH2CN 和CN; R3选自 Η、0CH3、CN、C (CH3) 2CN 和CH2CN; R4选自H和CH3;并且 R5选自 11、^(：((：!13)2^0013、3(0)2〇13和(：((：!13)2〇11;条件是，选自1?1、1?2、1?和1?4中的至 少一个是Η。
[0005] 本发明的化合物具有在上述结构中用星号(*)标识的手性碳。优选的化合物具有 上述所示的构型，其按惯例被称为S构型。为了免生疑问，本发明包括所有手性碳构型，如由 式la所示：
[0006] 在一个实施方案中，R1选自H、CH3和F。在一个实施方案中，R 1选自Η和CH3。
[0007] 在另一个实施方案中，R2选自Η和-(KQ-G烷基)R5。在一个实施方案中，R2选自Η和 0CH 3。在一个实施方案中，R5选自 Η、-S (0) 2CH3和-C (CH3) 2〇Η。
[0008] 另一个实施方案是其中R3是Η、!?1是CH3并且R4是CH 3的化合物。在另一个实施方案 中，R3 是Η，R1 是 CH3，R4 是 CH3 并且 R2 是-〇CH3。
[0009] 在一个实施方案中，R3选自Η和0CH3。在一个实施方案中，R3是H。
[0010]在一个实施方案中，R4是CH3。一个实施方案是其中R1是CH 3、R2是Η或-〇CH3、R3是Η并 且R4是CH3的化合物。在一个实施方案中，R1是CH3并且R 4是CH3。
[0011] 本发明的一个优选的化合物是⑶-3-{4-[2-异丙基-8-(4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸，或者其药学上可接受 的盐。本发明的一个优选的化合物是(S)-3-{4-[8-(2,6-二甲基-苯基)-2-异丙基_[1，2,4] 三唑并[l，5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸，或者其药学上可接受的盐。
[0012] 本发明还提供药物组合物，其包含如上所述的式I的化合物或者其药学上可接受 的盐，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或者赋形剂。
[0013] 本发明还提供药物组合物，其包含如上所述的式I的化合物或者其药学上可接受 的盐，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或者赋形剂，以及任选的一种或多种治 疗剂。附加的治疗剂包括例如二甲双胍和/或捷诺维(Januvia)。
[0014] 本发明还提供在哺乳动物中治疗糖尿病的方法。所述方法包括对需要治疗的哺乳 动物给药有效量的如上式I所述的化合物或者其药学上可接受的盐。更优选地，本发明提供 在需要治疗的哺乳动物中治疗II型糖尿病的方法，其包括给药有效量的如上式I所述的化 合物或者其药学上可接受的盐。
[0015] 本发明提供用于治疗的如上所述的根据式I的化合物或者其药学上可接受的盐。
[0016] 在又一个形式中，本发明提供用于在需要糖尿病治疗的哺乳动物中治疗糖尿病的 如上所述的根据式I的化合物、其药学上可接受的盐或者药物组合物。优选所述用途是用于 治疗II型糖尿病并且所述哺乳动物是人。
[0017] 本发明提供根据式I的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗糖尿病的药 物中的用途。优选所述药物是用于治疗II型糖尿病。
[0018] 在又一个形式中，本发明提供式II的中间体化合物或其药学上可接受的盐：
II 其中，R1选自 Η、CH3、CN、CH2CN、C (CH3) 2CN和 F; R2选自 H、0( CrCs烷基)R5、CH2CN 和CN; R3选自 Η、OCH3、CN、C (CH3) 2CN 和CH2CN; R4选自H和CH3; R5选自 11、^(：((：!13)2^0013、3(0)2〇13和(：((：!13)2〇11;条件是，选自1?1、1?2、1?和1?4中的至 少一个是H;并且 R选自Cl-4烷基、Cl-4卤代烷基、C3_6环烷基、Cl-4烷基 -C3_6环烷基、苯基和Cl-5烧 基苯基，从而提供式I的化合物或者其药学上可接受的盐。优选的R基团包括d-2烷基、&-2 卤代烷基、苯基和&-2烷基苯基。特别优选的R基团包括甲基、乙基、苯基和苯甲基。
[0019] 本发明还提供用于制备上式I所述的化合物的过程或者方法。所述方法包括使根 据式II的中间体化合物去保护(de-protect)或者去酯化(de-esterify)，从而制备式I的化 合物或者其药学上可接受的盐。
[0020] 本领域技术人员将容易地理解并且能够实现去保护反应而无需过度实验。将被本 领域技术人员认识到的是，除了羧酸和被保护的羧酸之外，可以使用其它能容易地转化为 羧酸的官能团代替羧酸或者被保护的酸。这样的官能团、制备和这些官能团向羧酸的转化 可以在下述文献中找到：Larock. R.C的 "Comprehensive Organic Transformations: A Guide to Functional Group Preparations"，Wiley VCH，1999和Smith.， Μ·Β·与March, J.的"March's Advanced Organic Chemistry, Reactions, Mechanisms and Structure"，Wiley-Interscience，第六版，2007。
[0021] 本发明的化合物可以作为药学上可接受的盐提供。"药学上可接受的盐"是指被认 为对于临床和/或兽医用途而言可接受的本发明的化合物的盐。药学上可接受的盐和用于 制备它们的常规方法是本领域公知的。参见例如：P. Stahl等人，Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use,(VCHA/ffiley-VCH,2002)； S.M. Berge等人，〃Pharmaceutical Salts," Journal of Pharmaceutical Sciences，第 66卷，第1期，1977年1月。
[0022] 个别异构体、对映体或者非对映体可以在式I的化合物的合成中任何方便的点处 通过例如手性色谱法的方法进行分离。此外，在下述方案和制备中所述的中间体包含多个 氮、羟基和酸保护基团如酯。在每次出现中，取决于特定的反应条件和待实施的特定转换， 所述可变的保护基团可以相同或者不同。保护和去保护条件对本领域技术人员是公知的并 且被描述于文献中。参见例如，Greene 和Wuts，Pro ieci ire Grot/i/3 Orga/jic Greene和P. Wuts编著，第二版，1991)。
[0023] 在本文中使用的缩写根据dcia，第17卷，第1期，1984所定义。其它 的缩写定义如下："ADDP"是指1-(偶氮二羰基)二哌啶；"BSA"是指牛血清白蛋白；"n-BuLi" 是指正丁基锂；"DIBAL"是指二异丁基氢化铝；"DCM"是指二氯甲烷；"DMEM"是指达尔伯克氏 改良伊格尔氏培养基(Dulbecco's Modified Eagle's Medium) ;"DMF"是指二甲基甲酰胺； "DEAD"是指偶氮二甲酸二乙酯；"DMF"是指二甲基甲酰胺；"DMS0"是指二甲基亚砜；"EC 5q"是 指在最大响应的一半时的有效浓度；"EtOAc"是指乙酸乙酯；"EtOH"是指乙基醇或者乙醇； "F12"是指Ham's F12培养基；"FA"是指脂肪酸；"FBS"是指胎牛血清；"HEK"是指人胚肾； "IC5Q"是指产生对药剂(agent)而言可能的最大抑制响应的50%的该药剂的浓度；"MeOH"是 指甲基醇或者甲醇；"MTBE"是指甲基叔丁基醚；"NBS"是指N-溴代丁二酰亚胺；"Pd(amph 〇S) Cl2"是指双(二叔丁基(4-二甲基氨基苯基)膦)二氯钯（II);"Pd(dppf)Cl2"是指[1，Γ-双 (二苯基膦基）二茂铁-二氯化钯（II); "Pd(PPh3)2Cl2"是指双（三苯基膦）氯化钯（II); "PPAR"是指过氧化物酶体增殖物激活受体；"PPRE"是指过氧化物酶体增殖物响应元件； "RFU"是指相对荧光单位；"RPMI"是指洛斯维?帕克纪念研究所(Roswell Park Memorial Institute); "TFA"是指三氟乙酸；"THF"是指四氢呋喃；"TK"是指胸苷激酶;并且"TAK875" 是指被称为fasiglifam的Takeda化合物。
[0024]如在文本中使用的术语烷基是直链烷基，例如乙基或正丙基;或者支链烷基，例如 异丙基或叔丁基。术语&-4卤代烷基是指具有1、2、3或更多个连接至烷基链的碳的卤素基 团的烷基基团。如果存在两个或多个卤素，卤素不必连接至相同的碳。该术语还包括全卤代 烷基，其中所述烷基基团的所有氢原子都被卤素替代。
[0025] 在下述方案中，除非另有说明，所有的取代基都如上文所定义。试剂和起始材料通 常对于本领域普通技术人员是容易获得的。其它试剂和起始材料可以通过类似于合成已知 结构相似的化合物的有机和杂环化学的标准技术以及下述包括任何新程序的制备和实施 例中描述的程序来制造。
[0026] 方案 1
式I的化合物可以根据如方案1所描述的反应来制备。PG是开发用于酸的保护基团，例 如酯，参见上文。方案1(步骤1)描述了苯磺酸取代的二氨基吡啶季铵盐(quaternary salt) 的形成。可以使单甲基或者三甲基苯基氨基磺酸盐（1)与取代的2-氨基吡啶（2)反应，从而 提供二氨基吡啶季铵盐(3)。然后，可以使用极性质子溶剂如MeOH在有机碱如三乙胺中使该 季铵盐（3)与2-甲基丙醛（4,步骤2a)反应，从而形成取代的[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶 (6)。替代地，可以在碱性有机溶剂如吡啶中使2-甲基丙酰氯(5,步骤2b)与所述季铵盐(3) 反应，从而形成取代的[1，2，4 ]三唑并[1，5-a ]吡啶(6)。可以在标准条件下使用还原剂如二 异丁基氢化铝(DIBAL)在温度如-78°C下在极性非质子溶剂如DCM中，将化合物(6)的酯还原 成甲基羟基，从而获得羟基化合物(7,步骤3)。本领域公知的其它还原剂是氢化铝锂或者硼 氢化钠。可以将化合物(7)在Mitsunobu条件下烷基化成醚（10,步骤5b) Jitsunobu条件是 本领域公知的，并且涉及使用膦(例如三苯基膦、三丁基膦或者三乙基膦)和偶氮二甲酸酯 (例如偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)或偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD))或偶氮二羰基化物(例如 ADDP)使醇(7)与亲和试剂如酚(9)反应。替代地，可以将醇(7)转化成卤素(8,步骤4)如溴代 物或者氯代物，其使用氯化亚砜从而形成氯代物或者在DCM中使用三溴化磷从而形成溴代 物。然后，可以在碱性条件下使用无机碱如碳酸铯或者乙酸钾在极性非质子溶剂如乙腈中， 用酚(9)将所述卤代化合物(8)烷基化，从而获得化合物（10,步骤5a)。8_卤素取代的[1，2， 4]三唑并[1，5-a]吡啶（10)可以在Suzuki-Miyaura交叉偶联条件下用硼酸试剂偶联。本领 域技术人员将认识到，存在多种可用于促进这样的交叉偶联反应的条件。因此，合适的钯试 剂包括双(三苯基膦)二氯化钯（11)1(1( &111?11〇8)(：12、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)与三环己 基膦、双(二苯基膦基)二茂铁)氯化钯（II)、四（三苯基膦)钯、或者乙酸钯（II)。合适 的碱包括在合适的非极性溶剂如1，4_二氧杂环己烷中的碳酸铯、碳酸钠、碳酸钾、或者磷酸 三钾一水合物，从而获得8-取代的[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡啶（II，步骤6)。可以在本领域 公知的标准碱性条件下使II的被保护的酸去保护，从而获得式I的化合物(步骤7)。用于酯 的去保护的条件是本领域公知的，其使用在极性质子溶剂如乙醇或者MeOH或者水/THF溶剂 混合物中的碱如氢氧化钠或者氢氧化锂。其它替代的去保护条件包括在二氯乙烷或者THF 中使用三甲基氢氧化锡或者三甲基娃醇钾(potassium trimethylsilanolate)作为碱从而 获得式I的化合物。
[0027]方案 2
在方案2中显示的另一个变体中，如方案1，步骤6中所述的，8-溴取代的[1，2，4]三唑 并[1，5-a]P比啶(7,步骤1)可以在Suzuki-Miyaura交叉偶联条件下使用硼酸试剂偶联，从而 获得化合物（12)。然后，如在上述方案1，步骤5b中所述的，可以在Mitsunobu条件下使该醇 (12)与酚(9)反应，从而在步骤2a中获得化合物II。替代地，如方案1，步骤4中所述的，可以 将化合物12的醇卤代从而获得化合物13。然后，可以在如方案1，步骤5b中所述的碱性条件 下将卤代的化合物（13)烷基化，从而获得化合物11(步骤2b)。然后，如方案1，步骤7中所述 的，使式II的化合物去保护，从而获得式I的化合物。
[0028] 制备和实施例 下述制备和实施例进一步举例说明了本发明并代表了式（I)的化合物的典型合成。除 非相反地说明，本文中所述的化合物是使用Accelrys Draw 4.0，IUPACNAME A⑶LABS或者 1?1^1313，版本2.5 3?2进行命名和编号。
[0029] 制备 1 6-氨基-烟酸甲酯
在〇°C下，向搅拌的6-氨基-烟酸(25 g，181.1 mmol)在MeOH (200 mL)中的溶液中添加 浓H2SO4 (7 mL)，并且将反应混合物在80 °C下加热过夜。将反应混合物冷却至室温并用饱和 的NaHC03溶液（100 mL)中和。将沉淀的固体过滤并在真空下干燥，从而获得作为黄色固体 的标题化合物（22 gJlf/ohLCMS m/z 153 (M+H) +。
[0030] 制备 2 6-氨基烟酸乙酯
向搅拌的6-氨基烟酸（3 Kg，21.61 mol)在乙醇（30 L)中的溶液中添加浓H2S〇4 (3 L)，并且将反应混合物在78°C下加热16小时。将反应混合物冷却至室温并在减压下蒸发。使 用饱和的NaHC03溶液将残留物中和至pH~7.5，并且将其用Et0A C(3X5L)萃取。将合并的 有机萃取物用水(2X5 L)、盐水溶液(brine s〇lution)(5 L)洗涤，经硫酸钠干燥，并将其 蒸发，从而获得作为近白色固体的标题化合物(3.4敁，93.87%)。^1^ m/z 167 (M+H) +。 [0031 ]基本上通过制备2的方法来制备下述化合物。
[0033]制备 4 6_氨基-5-溴-烟酸甲酯
在〇°C下，向搅拌的6-氨基烟酸甲酯(22 g，143.7 mmol)在THF (500 mL)中的溶液中添 加 NBS (27.9 g，158.1 mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌过夜。将氯化铵（100 mL)添 加至反应混合物，并用EtOAc (2X100 mL)萃取混合物。将合并的有机萃取物用盐水溶液 (100 mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下蒸发。将粗材料通过硅胶柱色谱法 (combiflash)纯化，并将其用己烷中的35% EtOAc洗脱从而获得作为浅棕色固体的标题化 合物（28 gJtSQ/ohLCMS m/z (79Br/81Br) 231/233 (M+H) +。
[0034]基本上通过制备4的方法来制备下述化合物。
[0036] 制备 6 (E)-N-(对甲苯磺酰基）氧基乙亚胺酸乙酯（（E)-Ethyl N- (p-toluene sulfonyl) oxyacetimidate)
在室温下，向搅拌的（E)-N-羟基乙亚胺酸乙酯(47.2 g，458.7 mmol)在DMF (300 mL) 中的溶液中添加三乙胺（128 ml，917.4 mmol)，并且将混合物搅拌20分钟。添加对甲苯磺酰 氯（100 g，458.7 mmol )，并且将反应混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物用水(200 mL)稀释，并用EtOAc (3X150 mL)萃取。将合并的有机萃取物经硫酸钠干燥、过滤并蒸发， 从而获得作为白色固体的标题化合物（94 gJOUACMS m/z 258 (M+H) +。
[0037] 制备 7 (E)-N-(2,4,6-三甲基苯磺酰基)氧基乙亚胺酸乙酯
在〇°C下，向搅拌的N-羟基乙亚胺酸乙酯(42 g，183 mmol)在DMF (100 mL)中的溶液中 添加三乙胺(49.2 ml，366 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌10分钟，并再次冷却至0°C。 分批添加2，4,6-三甲基-苯磺酰氯(40 g，183 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将 反应混合物用EtOAc (100 mL)稀释，用冰水(2X500 mL)、盐水溶液(50 mL)洗涤，经无水硫 酸钠干燥，过滤并蒸发，从而获得不需要进一步纯化即可使用的作为浅黄色固体的标题化 合物(40 g，粗品 hLC-MS m/z 286.1 [M+H] +。
[0038] 制备 8 (2，4，6-三甲基苯磺酰基)氧基氨基甲酸叔丁酯
向搅拌的2,4,6_三甲基苯-1-磺酰氯（5.5 Kg，25.14 mol)在MTBE (55 L)中的溶液中 添加羟基氨基甲酸叔丁酯(4 Kg，30.17 mo 1 )，并将其冷却至0 °C。经1小时的时间将三乙胺 (3.05 Kg，30.17 mol)添加至反应混合物，并且将反应混合物在0°C下搅拌2小时。将反应混 合物过滤并用MTBE (2x5 L)洗涤。将滤液浓缩至12 L的体积并添加正己烷(6 L)，并且将混 合物再蒸馏至高至12 L的体积。向粗化合物中添加 MTBE在正己烷中的5%溶液(60 L)，并且 将混合物搅拌2小时。过滤反应混合物，从而获得作为近白色固体化合物的第一产物(6.13 Kg)。将滤液浓缩至干燥并添加 MTBE在正己烷中的5%溶液（10 L)。将反应混合物搅拌30分钟 并过滤，从而获得标题化合物的第二产物(0.86 Kg)，将其与第一产物合并从而获得标题化 合物(6.99 g，88%)。
[0039] 制备 9 0-(对甲苯磺酰基)羟胺
在〇°C下，向搅拌的（E)-N-(对甲苯磺酰基)氧基乙亚胺酸乙酯（10 g，38.9 mmol)在1， 4-二氧杂环己烷(40 mL)中的溶液中添加 HC104(3.0 mL)，并且将反应混合物在室温下搅拌 1小时。将反应混合物用水稀释，并用DCM (2 X 10 mL)萃取。将合并的有机萃取物经硫酸钠 干燥并过滤。不需要浓缩即可直接使用溶液（9 g，100%粗品）。
[0040] 制备 10 0- (2，4，6-三甲基苯磺酰基)羟胺
在〇°C下，向搅拌的（E)-N-(2,4,6-三甲基苯磺酰基)氧基乙亚胺酸乙酯（16 g，62.167 mmol)在1,4-二氧杂环己烧(200 mL)中的溶液中添加高氯酸(8 mL)，并且将反应混合物在 室温下搅拌1.5小时。将反应混合物用水(30 mL)稀释，并用DCM (2X20 mL)萃取。将合并的 有机层用盐水溶液(20 mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并且不需要浓缩即可使用滤液。 [0041 ] 替代制备10 在〇°C下，经45分钟的时间向包含三氟乙酸（19.74 L)的100 L反应器中添加(2,4,6_三 甲基苯磺酰基)氧基氨基甲酸叔丁酯(6.99 Kg，22.18 mol)，并且将反应混合物在0°C下搅 拌2小时。将反应混合物用碎冰(8 L)然后用冰水(16 L)淬灭，并且将其搅拌15分钟。添加额 外的冰水(24 L)，并将混合物搅拌15分钟。将固体沉淀过滤、用水洗涤并干燥，从而获得不 需要进一步纯化即可使用的白色固体(4.77 Kg，100%)。
[0042]制备 11 1，2-二氨基-3-溴-5-甲氧基羰基-吡啶鑰4-甲基苯磺酸盐
在室温下，向搅拌的〇(对甲基苯磺酰基)轻胺(9 g，48.1 mmol)在DCM (50 mL)中的溶 液中添加6-氨基-5-溴-烟酸甲酯（11.1 g，48.1 mmol)，并将混合物搅拌16小时。将反应混 合物冷却至〇°C，并添加二乙基醚。将沉淀的固体过滤并在真空下干燥，从而获得作为近白 色固体的标题化合物（9 8,45%)</Η MMR (400 MHz, d6-DMS0) δ 9.09 (bs, 2H), 8.69 (d, /= 1.6 Hz, 1H), 8.46 (q, /= 8.0 Hz, 1H), 7.06 (s, 3H), 6.71 (s, 2H), 4.31 (q, /= 11.6 Hz, 2H), 2.14 (s, 3H), 1.25-1.32 (m, 4H)〇
[0043] 基本上通过制备11的方法来制备下述化合物。
[0044] 表 3
a. ΧΗ NMR (400 MHz, d6-DMS0) δ 9.09 (bs, 2H), 8.69 (d, /= 1.6 Hz, 1H), 8.46 (q, /= 8.0 Hz, 1H), 7.06 (s, 3H), 6.71 (s, 2H), 4.31 (q, /= 11.6 Hz, 2H), 2.14 (s, 3H), 1.25-1.32 (m, 4H)〇
[0045] 替代制备12
将作为湿滤饼的0-(2,4,6-三甲基苯磺酰基)羟胺（假定4.77 Kg，22.17 mol)溶解于 DCM (25 L)中，并分离出水层，将有机层用水(2X10 L)和盐水溶液（10 L)洗涤。将有机层 转移至100 L反应器中并用额外的DCM (45 L)稀释。将反应混合物冷却至10°C_15°C，并经 15分钟的时间分批添加6-氨基-5-溴-烟酸乙酯(4.24 Kg，17.29 mol)。将反应混合物在室 温下搅拌16小时。过滤反应混合物，并且将固体滤饼用DCM (3X10 L)洗涤并干燥，从而获 得作为白色固体的第一产物(2.7 Kg)。浓缩滤液，从而获得厚的团块，将其在DCM(20 L)中 磨碎2小时。过滤固体，并且将湿滤饼用DCM (2X5 L)洗涤并干燥，从而获得作为近白色固 体的第二产物（1.1 Kg)，将其与第一产物合并从而获得标题化合物(3.8 Kg，37.25%) 1CMS m/z (79Br/81Br) 260/262 (M+H) +。
[0046] 制备 13 3-(4,4,5,5-四甲基_[1，3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-苯甲腈
在0°C下，向搅拌的3-氨基-苯甲腈(0.5 g，4.23 mmol)在乙腈(30 mL)中的溶液中添加 亚硝酸叔丁酯和双(频哪醇合）二硼（13丨8。;[1^。0131:0(1;[1301'011)(1.29 8,5.076 1]11]1〇1)。将混 合物在80 °C下加热2小时。将反应混合物冷却至室温并在减压下浓缩。将粗材料通过硅胶柱 色谱法(combiflash)来纯化，用4% EtOAc/己烷洗脱从而获得标题化合物(0.35 g，99.8%)。 LCMS m/z 294 (M+H)+〇
[0047] 基本上通过制备13的方法来制备下述化合物。
[0049] 制备 15 3,5_二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基_[1，3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-苯甲腈
向搅拌的4-溴-3,5-二甲基-苯甲腈(0.5 g，2.38 mmol)和双(频哪醇合)二硼(0.9 g， 3.57 mmol)在DMF (20 mL)中的溶液中添加 CH3C00K (1.051 g，10.71 mmol)。将混合物用 氩气吹扫30分钟，然后添加 Pd(dppf)2Cl2.DCM (0.097 g，0.119 mmol)并将混合物在100°C 下加热过夜。将反应混合物冷却至室温并通过硅藻土过滤。将滤液用水(30 mL)稀释，并用 EtOAc (2X30 mL)萃取。将合并的有机萃取物用饱和盐水溶液（20 mL)洗涤，经硫酸钠干 燥，过滤并浓缩。将粗材料通过硅胶柱色谱法(combiflash)来纯化，用6% EtOAc/己烧洗脱 从而获得作为褐色液体的标题化合物(0.4 gJSyohLCMS m/z 288(M+H) +。
[0050] 制备 16 2-(4-溴-苯基)-2-甲基-丙腈
在〇°C下，向（4-溴-苯基)-乙腈(1 g，5.10 mmol)在DMF (10 mL)中的溶液中添加氢化 钠(0.408 g，10.20 mmo 1，矿物油中60%)。将反应混合物在0°C下搅拌15分钟，然后在0 °C下 添加碘甲烷(0.69 ml，11.22 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用氯 化铵水溶液(5 mL)淬灭，并用EtOAc (2X20 mL)萃取。将合并的有机萃取物用水(20 mL)和 盐水（20 mL)洗涤，经无水Na2S04干燥，过滤并蒸发。将粗材料通过硅胶柱色谱法 (combif lash)来纯化，用己烷中的5-10%Et0Ac洗脱从而获得近白色固体(0.9 g，78%)。4 匪R (400 MHz、CDC13) δ 7.51 (d， / = 8.4 Hz, 1H)， 7.34 (d， / = 8.4 Hz, 1H)， 1.77 (s， 3H)。
[0051 ]基本上通过制备16的方法来制备下述化合物。
[0053] 制备 18 4-氯-2，2-二甲基丁臆
在-60°(：下，向搅拌的二异丙胺(2.43 1111，17.36臟〇1)在干燥的1'册（2〇1^)中的溶液 中逐滴添加 n-BuLi (14.4 ml，17.36 mmol)，并逐渐使其加温至0°C，并搅拌20分钟。将反应 混合物冷却至_78°C，并添加无水乙腈（1.42 ml，14.47 mmol )，并且将反应在相同的温度下 搅拌45分钟。在-78°C下添加1-溴-4-氯丁烷（1.3 ml，15.91 mmol)，使其加温至室温并搅 拌3小时。将反应混合物用饱和的NH4C1溶液(25 mL)淬灭，用EtOAc (2X50 mL)萃取。将合 并的有机萃取物用水(50 mL)和盐水(50 mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并蒸发至干燥。将粗 产物通过硅胶柱色谱法(combiflash)来纯化，用己烧中的5% EtOAc洗脱从而获得标题化合 物（0.5 8,25.2%)。咕 NMR (400 MHz、CDC13);3.67-3.63 (m， 2H), 2.06-2.02 (m， 2H)， 1.45-1.36 (m， 6H)〇
[0054] 制备 19 4-溴-2-甲基-丁-2-醇
在0°C下，向搅拌的4-溴-丁酸甲酯（2 g，12.27 mmol)在二乙基醚(20 mL)中的溶液中 添加甲基溴化镁（16.4 ml，49.08 mmol )，并且将混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物 用1 N HC1淬灭，并用二乙基醚(2X20 mL)萃取。将合并的有机萃取物用饱和盐水溶液(20 mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗材料通过硅胶柱色谱法(combi flash)纯化，用 20% EtOAc/己烷洗脱从而获得标题化合物（1.3 8,65%)。咕 NMR (400 MHz、CDC13): δ 3.48 (t, /= 8.0 Hz, 2H), 2.16 (t, /= 7.4 Hz, 2H), 1.89 (s, 6H), 1.76 (s, 3H), 1.27 (s, 6H)〇
[0055] 制备 20 8_溴-2-异丙基-[1,2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-甲酸甲酯
在室温下，向搅拌的1，2_二氨基-3-溴-5-甲氧基羰基-吡啶鑰4-甲基苯磺酸盐(9 g， 21.4 mmol)在MeOH (35 mL)中的溶液中添加2-甲基丙醛(0.98 ml，10.7 mmol)和三乙胺 (8.6 ml，64.2 mmol)，并将混合物搅拌48小时。将反应混合物蒸发至干燥，将残留物用水 (50 mL)稀释并用EtOAc (2X50 mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水溶液(50 mL)洗涤， 经硫酸钠干燥，过滤并蒸发至干燥。将粗材料通过硅胶柱色谱法(comb if lash)来纯化，用己 烷中的15-20%Et0Ac洗脱从而获得作为浅黄色固体的标题化合物（1.5 8，12%)儿01^ m/z (79Br/81Br) 298/300 (M+H) + 〇
[0056] 替代制备20 在〇 °C下，向搅拌的2，4，6-三甲基-苯磺酸1，2-二氨基-3-溴-5-甲氧基羰基-吡啶鑰盐 (10 g，22.3 mmol)在 MeOH (100 mL)中的溶液中添加 2-甲基丙醛（0.8 g，l ml，ll.l mmol)和三乙胺（9 ml，66.9 mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌48小时。将反应混合物 蒸发，用水稀释，并用EtOAc (2X100 mL)萃取。将合并的有机萃取物用水(2X50 mL)、饱和 的氯化铵溶液(50 mL)、盐水(50 mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发至干燥。将粗材 料通过硅胶柱色谱法(combiflash)来纯化，用己烷中的20-40%Et0Ac洗脱从而获得作为近 白色固体的标题化合物(2.7 8,43.5%)儿〇]\^ m/z (79Br/81Br) 298/300 [M+H] +。
[0057] 制备 21 8-溴-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-甲酸乙酯
在室温下，向揽摔的1，二氛基_3_漠_5_(乙氧基幾基)吡啶-1-鐵2，4，6_二甲基苯横 酸盐(2.2 Kg，4.78 mol)在吡啶（6.6 L)中的溶液中添加2-甲基丙酰氯（2.55 Kg，23.90 mol)，并将反应混合物在100°C下加热5小时。将反应混合物蒸发至干燥，将残留物用水(20 L)稀释并搅拌1小时。将沉淀的固体过滤，用水(3X5 L)洗涤并干燥。将粗产物通过硅胶快 速色谱法来纯化，用己烷:Et0Ac(8.0:2.0)洗脱从而获得作为近白色固体的标题化合物 (800 g,53.7%)〇LC-MS m/z (79Br/81Br) 312/314 [M+H] + 〇
[0058] 制备 22 (8-溴-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基)-甲醇
在-78°C下，向8-溴-2-异丙基-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡啶-6-甲酸甲酯（1.4 g，4.70 mmol)在DCM (30 mL)中的溶液中添加二异丁基氢化错（9.5 ml，9 mmol，己烧中1 Μ)。将反 应混合物加温至〇°C并搅拌3小时。将反应混合物用MeOH (20 mL)淬灭，并通过硅藻土过滤， 用EtOAc (30 mL)洗涤，并在减压下蒸发，从而获得标题产物（1.8 g，100%粗品hLCMS m/z (79Br/81Br) 270/272 (M+H) + 〇
[0059] 基本上通过制备22的方法使用适当的羧酸酯来制备下述化合物。
[0060] 表 6
[0061 ]制备 29 8_溴-6-氯甲基-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶
将(8-溴-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基)-甲醇（1.8 g，0.57 mmol)和氯 化亚砜（10 mL)的混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物用饱和的碳酸氢钠溶液（20 mL)淬灭，并用EtOAc (3X20 mL)萃取。将合并的有机萃取物经硫酸钠干燥、过滤并在真空 下蒸发，从而获得标题化合物（1.1 g^yohLCMSm/z (79Br/81Br) 288/290 [M+H] +。
[0062]基本上通过制备29的方法来制备下述化合物。
[0064] 制备 32 1-溴-3-溴甲基-2-甲基-苯
在〇°C下，向（3-溴-2-甲基-苯基)-甲醇(2 g，9.9 mmol)在DCM (25 mL)中的溶液中添 加三溴化磷（1.76 ml，14.9 mmol)，并使反应混合物加温至室温并将其搅拌1小时。将反应 混合物用DCM (20 mL)稀释，用NaHC03水溶液淬灭，并用DCM (3X50 mL)萃取。将合并的有 机萃取物用水（10 mL)和盐水（10 mL)洗涤，经无水Na2S04干燥，过滤并蒸发至干燥，从而获 得标题化合物(2 8,77%)儿〇]\^ m/z 264 [M+H] +。
[0065] 基本上通过制备32的方法来制备下述化合物。
[0067] 制备 36 (3-溴-2-甲基-苯基)-乙腈
在室温下，向溴-3-溴甲基-2-甲基-苯(0.2 g，7.6 mmol)在DMF (15 mL)中的溶液中添 加氰化钠(0.55 g，11.4 mmol)。将反应混合物在100°C下加热12小时，并用高锰酸钾溶液淬 灭，过滤，并且将滤液用水稀释并用EtOAc (2X20 mL)萃取。将有机萃取物经Na2S04干燥，过 滤并蒸发。将粗材料通过硅胶柱色谱法(combiflash)纯化，用己烧中的10-25% EtOAc洗脱 从而获得标题化合物(0.8 8,28.2%)儿(：-]^ m/z 211 [M+H] +。
[0068] 制备 37 2-异丙基-8-(4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-甲酸甲酯
向搅拌的8-溴-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-甲酸甲酯（0.8 g，2.6 mmol)和4-甲氧基2,6-二甲基苯基硼酸（0.522 g，2.9 mmol)在甲苯（12 mL)和EtOH (3 mL)中的溶液中添加2 M K2C03溶液(3.9 ml，7.8 mmol)。将混合物用氩气吹扫30分钟，添加 Pd(PPh3)2Cl2 (0.182 g，0.26 mmol)并将反应混合物在100°C下加热16小时。将反应混合物 冷却至室温，通过硅藻土过滤，将滤液用水(20 mL)稀释并用EtOAc (2X20 mL)萃取。将合 并的有机萃取物用饱和盐水溶液（1 〇 mL)洗涤，经硫酸钠干燥、过滤并浓缩。将粗材料通过 硅胶柱色谱法(combif lash)来纯化，用己烷中的15-20%Et0Ac洗脱从而获得作为黄色液体 的标题化合物(0.26 g，27.4%) 1CMS m/z 354 (M+H) +。
[0069] 替代制备37 在室温下，向搅拌的8-溴-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-甲酸甲酯（2.5 g，8.8 mmol)和4-甲氧基2,6_二甲基苯基硼酸（1.4 g，8.83 mmol)在甲苯（16 mL)中的溶 液中添加磷酸三钾（5.3 g，12.4 mmol)，并将反应混合物用氮气吹扫20分钟，然后添加 Pd (amphos)Cl2 (0.57 g，0.802 mmol)。将反应混合物在70°C下加热过夜。将反应混合物通过 硅藻土过滤，用EtOAc (2X20 mL)洗涤并将滤液蒸发。将粗材料通过硅胶柱色谱法 (combif lash)来纯化，用己烷中的30%Et0Ac洗脱从而获得作为褐色固体的标题化合物（1.5 g,65.54%)〇LC-MS m/z 354 [M+H]+〇
[0070] 替代制备37 向搅拌的8-溴-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-甲酸甲酯（1.05 g，3.52 mmol)和4-甲氧基2,6_二甲基苯基硼酸(0.63 g，3.52 mmol)在1，4_二氧杂环己烧(20 mL) 中的溶液中添加2 M K2C03溶液（1.4 ml，2.9 mmol)。将混合物用氩气吹扫30分钟，然后添加 Pd(PPh3)2Cl2 (0.041 g，0.059 mmol)并将反应混合物加热至100°C进行16小时。将反应混 合物冷却至室温，通过硅藻土过滤，将滤液用水(20 mL)稀释并用EtOAc (2X20 mL)萃取。 将合并的有机萃取物用盐水（10 mL)洗涤，经硫酸钠干燥、过滤并浓缩。将粗材料通过硅胶 柱色谱法(combif lash)来纯化，用己烷中的14% EtOAc洗脱从而获得标题化合物(0.13 g， 16%)〇LCMS m/z 354 (M+H)+〇
[0071] 制备 38 2-异丙基-8-(4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-[l，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-甲酸乙酯
向搅拌的8-溴-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-甲酸乙酯（400 g，1.28 mol)和4-甲氧基2,6-二甲基苯基硼酸（276.8 g，1.54 mol)在甲苯(8 L)中的溶液中添加 K3P〇4 (816 g，3.84 mol)在水(3.84 L)中的溶液，并且将反应混合物用氮气吹扫1小时，然 后添加 Pd(amphos)Cl2 (45.36 g，0.064 mol)，并且将反应混合物用氮气吹扫20分钟。将反 应混合物在75 °C下加热16小时。将反应混合物冷却至室温，通过硅藻土过滤，并用EtOAc (3 XI L)洗涤。将滤液用水(5 L)稀释，并用EtOAc (2X1.5 L)萃取。将合并的有机萃取物用 水(2.5 L)和盐水(2.5 L)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩至干燥。将粗产物(600 g)与另 一粗品批次(400 g)合并，并通过硅胶柱色谱法纯化，用己烷中的15-20% EtOAc洗脱从而获 得作为淡黄色固体的标题化合物(901 g，95.68%)。
[0072] 制备 39 8-(2-氟-5-甲氧基-苯基)-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-甲酸乙酯
向搅拌的8-溴-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-甲酸乙酯（0.45 g，1.509 mmol)和2-氟4-甲氧基苯基硼酸(0.512 g，3.018 mmol)在1,4-二氧杂环己烧（6 mL)中的 溶液中添加2 M K2C03 (0.624 g，4.527 mmol)。将混合物用氩气吹扫30分钟，添加 Pd (PPh3)4 (0.087 g，0.075 mmol)，并且在微波中将混合物在100°C下加热1小时。将反应混合 物冷却至室温并通过硅藻土过滤。将滤液用水(20 mL)稀释，并用EtOAc (2X10 mL)萃取。 将合并的有机层用盐水（10 mL)洗涤，经硫酸钠干燥、过滤并浓缩。将粗材料通过硅胶柱色 谱法(comb if lash)来纯化，用己烷中的15-20% EtOAc洗脱从而获得标题化合物(0.17 g， 33%)〇LCMS m/z 344 (M+H)+〇
[0073] 制备 40 6-氯甲基-2-异丙基-8-(4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-[l，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶
在〇°C下，向[2-异丙基-8-(4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡 啶-6-基]-甲醇(0.21 g，0.64 mmol)在DCM (10 mL)中的溶液中添加 SOCI2 (0.12 ml，1.61 mmol)。然后使混合物经1小时加温至室温。将反应混合物冷却至0°C，用饱和的碳酸氢钠溶 液(20 mL)淬灭，并用DCM (3X20 mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水溶液洗涤，经硫酸 钠干燥、过滤并蒸发至干燥，从而获得作为褐色固体的标题化合物（0.06 gjgyc^LCMS m/ z；344 (M+H)+〇
[0074] 制备 41 2-[2-(6-羟基甲基-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-8-基)-苯基]-2-甲基-丙 腈
在0°C下，向揽摔的2_{2_[6_(叔丁基二甲基-娃烷基氧基甲基)_2_异丙基-[1，2,4]二 唑并[l，5-a]吡啶-8-基]-苯基}-2_甲基-丙腈（0.6 g，1.33 mmol)在THF (10 mL)中的溶 液中添加四正丁基氟化铵(0.52 g，2 mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌1小时。将反应 混合物用水（10 mL)稀释，并用EtOAc (2X20 mL)萃取。将合并的有机萃取物用水（10 mL) 和盐水（10 mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发至干燥。将粗材料通过硅胶柱色谱法 (combif lash)来纯化，用己烷中的40%Et0Ac洗脱从而获得作为白色固体的标题化合物(0.4 mg,50%)〇LC-MS m/z 335 [M+H]+〇
[0075] 制备 42 8-溴-6-(叔丁基二甲基-硅烷基氧基甲基)-2-异丙基-[1，2，4 ]三唑并[1，5-a ]吡啶
在〇°C下，向搅拌的8-溴-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基)-甲醇(0.25 g， 0.92 mmol)在DMF (5 mL)中的溶液中添加咪唑（0.209 g，1.38 mmol)，并且将反应混合物 在室温下搅拌5分钟，冷却至0°C并添加叔丁基氯二甲基硅烷(0.209 g，l.38 mmol)。将反应 混合物在室温下搅拌12小时。将反应混合物用水稀释，并用EtOAc (2X25 mL)萃取。将合并 的有机萃取物用盐水(20 mL)洗涤，经Na2S04干燥，过滤并蒸发至干燥。将粗产物通过硅胶柱 色谱法(combiflash)来纯化，用己烷中的10-30% EtOAc洗脱从而获得标题化合物(0.32 g， 90%)〇LCMS m/z 384/386 [M+H]+〇
[0076] 制备 43 {2-[6-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基甲基)-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-8-基]-苯基乙臆
在室温下，向揽摔的8_漠_6_(叔丁基-二甲基-娃烷基氧基甲基)_2_异丙基-[1，2,4]二 唑并[l，5-a]吡啶（1.3 g，3.38 mmol)和[2-(4,4,5,5_四甲基_[1，3,2]二氧杂硼杂环戊 烷-2-基)-苯基]-乙腈（0.82 g，3.38 mmol)在二氧杂环己烷（10 mL)的溶液中添加乙酸 钾（0.93 g，6.76 mmol)，并且将反应混合物用氮气吹扫20分钟。添加 Pd(PPh3)4 (0.195 g， 0.16 mmo 1)，然后在密封管中将反应混合物在100 °C下加热12小时。将反应混合物冷却，并 通过娃藻土过滤，并将滤液蒸发至干燥。将粗产物通过硅胶柱色谱法(combi flash)来纯化， 用己烷中的10-30% EtOAc洗脱从而获得标题化合物(0.6 8,42%)。^1^ m/z 421 [M+H] +。
[0077] 制备 44 2-(3-溴-2-甲基-苯基)-2-甲基-丙腈
在0°C下，向NaH (0.22 g，5.6 mmol，石蜡油中60%)在THF中的溶液中添加(3-溴-2-甲 基-苯基)-乙腈(0.6 g，2.8 mmol)在THF (4 mL)中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌30 分钟，然后添加碘甲烷（0.43 ml，7 mmo 1)。将反应混合物室温下搅拌12小时，用饱和的 NH4C1水溶液淬灭，并在EtOAc (2X25 mL)中萃取。将有机层用盐水（10 mL)洗涤，经Na2S〇4 干燥，过滤并蒸发。将另一批次的粗品与该批次合并，并通过硅胶柱色谱法(combiflash)纯 化，用己烷中的10-30% EtOAc洗脱从而获得标题化合物（1.2 8,75.9%)儿01^ m/z 239 [M +H] + 〇
[0078] 基本上通过制备44的方法来制备下述化合物。
[0079] 表 9
[0080] 制备 47 2_异丙基-8-(4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-甲酸甲酯
向搅拌的8-溴-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-甲酸甲酯（0.8 g，2.6 mmol)和4-甲氧基2,6-二甲基苯基硼酸（0.522 g，2.9 mmol)在甲苯（12 mL)和EtOH (3 mL)中的溶液中添加2 M K2C03溶液(3.9 ml，7.8 mmol)。将混合物用氩气吹扫30分钟，添加 Pd(PPh3)2Cl2 (0.182 g，0.26 mmol)并将反应混合物在100°C下加热16小时。将反应混合物 冷却至室温，通过硅藻土过滤，将滤液用水(20 mL)稀释并用EtOAc (2X20 mL)萃取。将合 并的有机萃取物用饱和盐水溶液（1 〇 mL)洗涤，经硫酸钠干燥、过滤并浓缩。将粗材料通过 硅胶柱色谱法(combiflash)来纯化，用己烷中的15-20%Et0Ac洗脱从而获得作为黄色液体 的标题化合物(0.26 g，27.4%) 1CMS m/z 354 (M+H) +。
[0081 ] 替代制备47 在室温下，向搅拌的8-溴-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-甲酸甲酯（2.5 g，8.8 mmol)和4-甲氧基2,6_二甲基苯基硼酸（1.4 g，8.83 mmol)在甲苯（16 mL)中的溶 液中添加磷酸三钾（5.3 g，12.4 mmol)，并且将反应混合物用氮气吹扫20分钟，然后添加 Pd(amphos)Cl2 (0.57 g，0.802 mmol)。将反应混合物在70°C下加热过夜。将反应混合物通 过硅藻土过滤，用EtOAc (2X20 mL)洗涤并将滤液蒸发。将粗材料通过硅胶柱色谱法 (combiflash)来纯化，用己烷中的30%Et0Ac洗脱从而获得作为褐色固体的标题化合物（1.5 g,65.54%)〇LC-MS m/z 354 [M+H]+〇
[0082] 替代制备47 向搅拌的8-溴-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-甲酸甲酯（1.05 g，3.52 mmol)和4-甲氧基2,6_二甲基苯基硼酸(0.63 g，3.52 mmol)在1，4_二氧杂环己烧(20 mL) 中的溶液中添加2 M K2C03溶液（1.4 ml，2.9 mmol)。将混合物用氩气吹扫30分钟，然后添加 Pd(PPh3)2Cl2 (0.041 g，0.059 mmol)并将反应混合物在100°C下加热16小时。将反应混合 物冷却至室温，通过硅藻土过滤，将滤液用水(20 mL)稀释并用EtOAc (2X20 mL)萃取。将 合并的有机萃取物用盐水（10 mL)洗涤，经硫酸钠干燥、过滤并浓缩。将粗材料通过硅胶柱 色谱法（combif lash)来纯化，用己烷中的14% EtOAc洗脱从而获得标题化合物（0.13 g， 16%)〇LCMS m/z 354 (M+H)+〇
[0083] 制备 48 2-异丙基-8-(4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-[l，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-甲酸乙酯
向搅拌的8-溴-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-甲酸乙酯（400 g，1.281 mol)和4-甲氧基2,6-二甲基苯基硼酸(276.8 g，1.538 mol)在甲苯(8 L)中的溶液中添加 K3P〇4 (816 g，3.844 mol)在水(3.84 L)中的溶液，并且将反应混合物用氮气吹扫1小时，然 后添加 Pd(amphos)Cl2 (45.36 g，0.064 mol)，并且将反应混合物用氮气吹扫20分钟。将反 应混合物在75 °C下加热16小时。将反应混合物冷却至室温，通过硅藻土过滤，并用EtOAc (3 XI L)洗涤。将滤液用水(5 L)稀释，并用EtOAc (2X1.5 L)萃取。将合并的有机萃取物用 水(2.5 L)和盐水(2.5 L)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩至干燥。将粗产物(600 g)与另 一粗品批次(400 g)合并，并通过硅胶柱色谱法纯化，用己烷中的15-20% EtOAc洗脱从而获 得作为淡黄色固体的标题化合物(901 g，95.68%)。
[0084] 制备 49 8_溴-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-甲酸甲酯
在室温下，向搅拌的1，2_二氨基-3-溴-5-甲氧基羰基-吡啶鑰4-甲基苯磺酸盐(9 g， 21.4 mmol)在MeOH (35 mL)中的溶液中添加异丁酸(0.98 ml，10.7 mmol)和三乙胺(8.6 ml，64.2 mmol)，并将混合物搅拌48小时。将反应混合物蒸发至干燥，将残留物用水(50 mL) 稀释并用EtOAc (2X50 mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水溶液(50 mL)洗涤，经硫酸钠 干燥，过滤并蒸发至干燥。将粗材料通过硅胶柱色谱法(comb if lash)来纯化，用己烧中的 15-20%Et0Ac洗脱从而获得作为浅黄色固体的标题化合物（1.5 gMyohLCMS m/z (79Br/ 81Br) 298/300 (M+H) + 〇
[0085] 替代制备49 在〇 °C下，向搅拌的2，4，6-三甲基-苯磺酸1，2-二氨基-3-溴-5-甲氧基羰基-吡啶鑰盐 (10 g，22.3 mmol)在 MeOH (100 mL)中的溶液中添加 2-甲基-丙醛（0.8 g，l ml，ll.l mmol)和三乙胺（9 ml，66.9 mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌48小时。将反应混合物 蒸发，用水稀释，并用EtOAc (2X100 mL)萃取。将合并的有机萃取物用水(2X50 mL)、饱和 的氯化铵溶液(50 mL)、盐水(50 mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥、过滤并蒸发至干燥。将粗材 料通过硅胶柱色谱法(combiflash)来纯化，用己烷中的20-40%Et0Ac洗脱从而获得作为近 白色固体的标题化合物(2.7 8,43.5%)儿〇]\^ m/z (79Br/81Br) 298/300 [M+H] +。
[0086] 制备 50 8-溴-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-甲酸乙酯
在室温下，向揽摔的1，二氛基_3_漠_5_(乙氧基幾基)吡啶-1-鐵2，4，6_二甲基苯横 酸盐（2.2 Kg，4.779 mol)在吡啶（6.6 L)中的溶液中添加异丁酰氯（2.546 Kg，23.895 mol)，并将反应混合物在100°C下加热5小时。将反应混合物蒸发至干燥，将残留物用水(20 L)稀释并搅拌1小时。将沉淀的固体过滤，用水(3X5 L)洗涤并干燥。将粗产物通过硅胶快 速色谱法来纯化，用己烷:Et0Ac(8.0:2.0)洗脱从而获得作为近白色固体的标题化合物 (800 g,53.7%)〇LC-MS m/z (79Br/81Br) 312/314 [M+H] + 〇
[0087] 制备 51 (8-溴-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基)-甲醇
在-78°C下，向8-溴-2-异丙基-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡啶-6-甲酸甲酯（1.4 g，4.70 mmol)在DCM (30 mL)中的溶液中添加二异丁基氢化错（9.5 ml，9 mmol，己烧中1 Μ)。将反 应混合物加温至〇°C并搅拌3小时。将反应混合物用MeOH (20 mL)淬灭，并通过硅藻土过滤， 用EtOAc (30 mL)洗涤，并在减压下蒸发，从而获得标题产物（1.8 g，100%粗品hLCMS m/z (79Br/81Br) 270/272 (M+H) + 〇 [0088]基本上通过制备51的方法来制备下述化合物。
[0090]制备 588-溴-6-氯甲基-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶
将(8-溴-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基)-甲醇（1.8 g，0.57 mmol)和氯 化亚砜（10 mL)的混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物用饱和的碳酸氢钠溶液（20 mL)淬灭，并用EtOAc (3X20 mL)萃取。将合并的有机萃取物经硫酸钠干燥、过滤并在真空 下蒸发，从而获得标题化合物（1.1 g^yohLCMSm/z (79Br/81Br) 288/290 [M+H] +。
[0091 ]基本上通过制备58的方法来制备下述化合物。
[0093]制备 61 (S)-3-[4-(8-溴-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基甲氧基)-苯基]-己-4-炔酸乙酯
向搅拌的（3)-3-(4-羟基-苯基)-己-4-炔酸乙酯（1.]^，3.8 1111]1〇1)和8-溴-6-氯甲 基-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶在乙腈(20 mL)中的溶液中添加碳酸铯(2.48 g， 7.62 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物通过娃藻土过滤，用EtOAc (20 mL)洗涤并蒸发至干燥。将残留物溶解于EtOAc (30 mL)中，用水(2X30 mL)和盐水溶 液（20 mL)洗涤，经硫酸钠干燥，并在减压下蒸发。将粗材料通过硅胶柱色谱法 (combif lash)来纯化，用己烷中的35-40% EtOAc洗脱从而获得标题化合物（1.0 g，53.4%)。 LCMS m/z (79Br/81Br) 484/486 (M+H) +。
[0094]基本上通过制备61的方法来制备下述化合物。
[0096]制备 67 (S)-3-{4-[8-(4-氰基-苯基)-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基甲氧基]_ 苯基}-己-4-炔酸乙酯
向搅拌的（S)-3-[4-(8-溴-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基甲氧基)-苯 基]-己-4-炔酸乙酯（1.0 g，2.07 mmol)和4-氰基苯基硼酸(0.602 g，9.6 mmol)在1,4-二 氧杂环己烧（10 mL)中的溶液中添加2 Μ碳酸钾(0.542 g，6.18 mmol)的溶液。将混合物 在氮气氛围下吹扫20分钟，并添加 Pd(PPh3)4 (0.117 g，0.103 mmol)。在微波中将反应混 合物在100°C下搅拌4小时。将反应混合物用EtOAc (30 mL)稀释，用水(2X30 mL)和盐水溶 液（30 mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下蒸发。将残留物通过硅胶柱色谱法 (combif lash)来纯化，用己烧中的30-40%Et0Ac洗脱从而获得作为无色液体的标题化合物 (0.500 g，47.8%)oLCMS m/z 507 (M-H)+。
[0097]基本上通过制备67的方法来制备下述化合物。
[0099] 制备 72 (S)-3-(4-{8-[4-(氰基-二甲基-甲基)-苯基]-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡 啶-6-基甲氧基}_苯基)_己-4-炔酸乙酯
在室温下，向搅拌的2-甲基-2-[4-(4,4,5,5-四甲基_[1，3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-苯基]-丙腈（0.184 g，0.680 mmol)和(S)-3-[4-(8-溴-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[1， 5_a]吡啶-6-基甲氧基)-苯基]-己-4-炔酸乙酯（0.3 g，0.619 mmol)在1,4-二氧杂环己烧 (10 mL)中的溶液中添加2 Μ碳酸钾（0.619 ml，1.238 mmol)。将反应混合物在氮气氛围 下吹扫20分钟，并添加 Pd(PPh3)2Cl2 (0.021 g，0.0309 mmol)。将反应混合物在100°C下加 热16小时。将反应混合物通过硅藻土过滤，并用Et0Ac(2 X 20 mL)洗涤。将滤液用冷水(2 X 10 mL)和盐水（10 mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发至干燥。将粗材料通过硅胶柱 色谱法(combif lash)纯化，用己烧中的30-50%Et0Ac洗脱从而获得作为无色液体的标题化 合物（0.13 gJS^/ohLC-MS m/z 547 [M+H] +。
[0100] 基本上通过制备72的方法来制备下述化合物。
[0102]制备 74 (S)-3-{4-[8-(2-氰基-苯基)-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基甲氧基]_ 苯基}-己-4-炔酸乙酯
向搅拌的（S)-3-[4-[8-(8-溴-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基甲氧基]_ 苯基}-己-4-炔酸乙酯（0.200 g，1.64mmol)和2-(4,4,5,5_四甲基_[1，3,2]二氧杂硼杂 环戊烧-2-基)-苯甲腈(0.110 g，l.96 mmol)在1,4-二氧杂环己烧（9 mL)中的溶液中添加 固体碳酸钾(0.172 g，4.92 mmol)。将混合物在氮气氛围下吹扫20分钟，并添加 Pd(PPh3)4 (0.024 g，0.800 mmol)。将反应混合物在100°C下加热过夜，通过娃藻土过滤，用EtOAc洗 涤，并在减压下蒸发至干燥。将残留物通过硅胶柱色谱法(combiflash)来纯化，用己烷中的 29-32% EtOAc洗脱从而获得标题化合物（0.140 gjea/ohLCMS m/z 507 (M+H) +。
[0103] 制备 75 (S)-3-(4-{8-[3-(氰基-二甲基-甲基)-苯基]-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡 啶-6-基甲氧基}_苯基)_己-4-炔酸乙酯.
向搅拌的（S)-3-[4-(8-溴-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基甲氧基)-苯 基]-己-4-炔酸乙酯（0.4 g，0.82 mmol)和2-甲基-2-[3-(4,4,5,5-四甲基_[1，3,2]二氧 杂棚杂环戊烧_2_基)-苯基]-丙臆（0.23 g，0.9 mmol)在1，4_二氧杂环己烧（40 mL)中的 溶液中添加 K2⑶3 (0.33 g，2.4 mmol)。将混合物用氮气吹扫10分钟。然后，添加 Pd(dppf) 2C12.DCM (0.066 g，0.08 mmol)，并将混合物在100°C下加热12小时。将反应混合物冷却至 室温并通过娃藻土过滤。将滤液用EtOAc (2 X 30 mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。 将粗材料通过硅胶柱色谱法(comb if lash)纯化，用己烧中的15-20% EtOAc洗脱从而获得标 题化合物（0.1 8,22.22%)。1^1^ m/z 549.5 (M+H) +。
[0104] 制备 76 8- (4-羟基-2，6-二甲基-苯基)-2-异丙基-[1，2，4 ]三唑并[1，5-a ]吡啶-6-甲酸甲酯
在-40°C下，向2-异丙基-8-(4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡 啶-6-甲酸甲酯（1.25 g，3.5 mmol)在DCM (30 mL)中的溶液中添加三溴化硼(0.51 ml， 5.3 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物用碳酸氢钠水溶液(5 mL)淬 灭，并用EtOAc (2X20 mL)萃取。将合并的有机萃取物用水（10 mL)和盐水溶液（10 mL)洗 涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发，从而获得标题化合物(0.9 8,76%)丄〇]\^ m/z 340 [M +H] +。
[0105] 制备 77 8-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2,6-二甲基-苯基]-2-异丙基_[1，2,4]三唑并 [l，5-aM啶-6-甲酸甲酯
在0°C下，向搅拌的8-(4-羟基-2，6-二甲基-苯基)-2-异丙基-[1，2，4]三唑并[1，5-a] 吡啶-6-甲酸甲酯（0.9 g，2.65 mmol)在DMF (30 mL)中的溶液中添加咪唑（0.540 g， 7.96 mmol)和叔丁基二甲基氯硅烷（1.2 g，7.96 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16小 时。将反应混合物用水(30 mL)稀释，并用EtOAc (2X50 mL)萃取。将合并的有机萃取物用 水(30 mL)和盐水溶液(30 mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发。将粗材料通过硅胶柱 色谱法(combif lash)来纯化，用己烷中的8% EtOAc洗脱从而获得标题化合物（1.1 g，92%)。 LC-MS m/z 454 [M+H]+〇
[0106] 制备 78 ((S)-3-(4-{8-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2,6-二甲基-苯基]-2-异丙基[1，2， 4 ]三唑并[1，5-a ]吡啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸乙酯
向搅拌的{8-[ 4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2，6-二甲基-苯基]-2-异丙基-[1，2， 4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基}-甲醇(0.8 g，1.8 mmol)在DCM (20 mL)中的溶液中添加(S)-3-(4-羟基-苯基)-己-4-炔酸乙酯（0.655 g，2.8 mmol)、DEAD (0.43 ml，2.8 mmol)和三 苯基膦（0.566 g，2.16 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌90分钟。将反应混合物蒸发，并 将粗材料通过硅胶柱色谱法(combiflash)来纯化，用己烧中的18% EtOAc洗脱从而获得标 题化合物（1 gjia/ohLC-MS m/z 640 [M+H] +。
[0107] 制备 79 (S)-3-{4-[8-(4-羟基-2，6-二甲基-苯基)-2-异丙基-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸乙酯
在〇°C下，向搅拌的（S)-3-(4-{8-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2,6_二甲基-苯 基]-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸甲酯（0.1 g， 1.56 mmol)在THF (20 mL)中的溶液中添加四正丁基氟化铵（0.8 g，3.12mmol)。将反应混 合物在室温下搅拌1小时。将混合物用水（10 mL)稀释，并用EtOAc (2X20 mL)萃取。将合并 的有机萃取物用水（10 mL)和盐水(10 mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发至干燥。将 粗材料通过硅胶柱色谱法(comb if lash)来纯化，用己烧中的40%Et0Ac洗脱从而获得作为白 色固体的标题化合物(0.4 gjOa/ohLC-MS m/z 526 [M+H] +。
[0108] 制备 80 2-异丙基-8-[4-(2-甲氧基-乙氧基)-2,6-二甲基-苯基]_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡 啶-6-甲酸甲酯
在室温下，向搅拌的8-( 4-羟基-2，6-二甲基-苯基)-2-异丙基-[1，2，4 ]三唑并[1，5-a ] 吡啶-6-甲酸甲酯（0.40 g，l.185 mmol)和 1-溴-2-甲氧基-乙烷（0.82 ml，9.06 mmol)在 乙腈（15 mL)中的溶液中添加碳酸铯（0.734 g，2.26 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌 过夜。将混合物通过硅藻土过滤，用EtOAc (20 mL)洗涤并浓缩，从而获得残留物。将残留物 溶解于EtOAc (30 mL)中，用水（2X30 mL)、盐水溶液(30 mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并 在减压下蒸发。将粗化合物通过硅胶柱色谱法(combif lash)纯化，用己烧中的30%Et0Ac洗 脱从而获得作为白色半固体的标题化合物(0.350 g，87%)。LCMS m/z 397 (M+H) +。
[0109] 制备 81 8-(2,6-二甲基-4-(3-(甲基磺酰基)丙氧基)苯基)-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a] P比啶-6-甲酸乙酯
在室温下，向搅拌的8-(4-羟基-2，6_二甲基苯基)-2-异丙基-[1，2，4]三唑并[1，5-a] P比啶-6-甲酸乙酯（1.1 g，3.11 mmol)和3_(甲基磺酰基）丙基-4-甲基苯磺酸酯（1.09 g， 3.73 mmol)在DMF (15 mL)中的溶液中添加碳酸钾（1.29 g，9.34 mmol)。将反应混合物在 80 °C下加热16小时。然后，将混合物用水淬灭，并用EtOAc (2X70 mL)萃取。将有机萃取物 用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并在减压下蒸发。将粗化合物通过硅胶柱色谱法(combiflash) 来纯化，用正己烷中的45% EtOAc洗脱从而获得标题化合物（0.8 8,54.27%)丄01^ m/z 474.41 (M+H)+〇
[0110] 制备 82 ((S)-3-(4-{8-[4-(3-羟基-3-甲基-丁氧基)-2,6-二甲基-苯基]-2-异丙基 _[1，2,4] 三唑并[1，5-a ]吡啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸乙酯
向搅拌的（S)-3-(4-{8-[4-(3-羟基-3-甲基-丁氧基)-2,6_二甲基-苯基]-2-异丙基-[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基甲氧基}-苯基）-己-4-炔酸乙酯（0.09 g，0.17 mmol)在 乙腈（10 mL)中的溶液中添加4-溴-2-甲基-丁-2-醇（0.114 g，0.68 mmol)和碳酸铯 (0.168 g，0.51 mmol)。将反应混合物在100°C下搅拌4小时。将反应混合物溶解于水（10 mL)中，并用EtOAc (2X20 mL)萃取。将合并的有机萃取物用水（10 mL)和盐水（10 mL)洗 涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发。将粗材料通过硅胶柱色谱法来纯化，用己烷中的40% EtOAc洗脱从而获得作为褐色固体的标题化合物(0.05 gjimhLC-MS m/z 612 [M+H] +。
[0111] 制备 83 (S)-3-(4-{8-[4-(3-氰基-3,3-二甲基-丙氧基)-2,6-二甲基-苯基]-2-异丙基-[1，2， 4 ]三唑并[1，5-a ]吡啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸乙酯
向搅拌的（S)-3-{4-[8-(4-羟基-2,6-二甲基-苯基)-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[1，5-a]P比啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸乙酯（0.16 g，0.304 mmol)和4-氯-2,2-二甲基丁 腈（0.047 g，0.364 mmol)在DMF (10 mL)中的溶液中添加碳酸铯(0.29 g，0.912 mmol)， 并在90°C下搅拌4小时。将反应混合物通过硅藻土过滤，将滤液用水(30 mL)稀释并用EtOAc (2X30 mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水溶液(2 mL)洗涤，经无水Na2S04干燥，并蒸发 至干燥。将粗化合物通过硅胶柱色谱法(combiflash)来纯化，用30% EtOAc/己烧洗脱从而 获得标题化合物(0.17 gjAa/ohES/MS m/z 621.4 [M+H] +。
[0112] 制备 84 (S)-3-{4-[8- (4-氰基甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a] 吡啶-6-基甲氧基]-苯基}_己-4-炔酸乙酯
向搅拌的（S)-3-(4-{8-[4-羟基-2,6-二甲基-苯基]-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[1，5-a]P比啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸甲酯(0.09 g，0.17 mmol)在乙腈（10 mL)中的溶液 中添加溴乙腈(0.26 g，0.22 mmol)和碳酸钾(0.046 g，0.34 mmol)。将反应混合物在100°C 下搅拌4小时。将反应混合物用水（10 mL)稀释，并用EtOAc (2X20 mL)萃取。将合并的有机 萃取物用水（10 mL)、盐水（10 mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发至干燥。将粗材料 通过硅胶柱色谱法(combif lash)来纯化，用己烧中的35%EtOAc洗脱从而获得作为褐色固体 的标题化合物(0.08 g，82.4%) IC-MS m/z 565 [M+H] +。
[0113] 实施例1 (S)-3-{4-[2-异丙基-8-(4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-[l，2,4]三唑并[1，5-&]吡啶_ 6-基甲氧基]-苯基}_己-4-炔酸
向（S)-3-{4-[2-异丙基-8-(4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-[1，2,4]三唑并[1，5-&]吡 啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸乙酯（0.11 g，0.2 mmol)在EtOH (15 mL)中的溶液中 添加5 N NaOH (0.12 ml，0.61 mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物蒸发至干 燥，将残留物用正戊烷洗涤，干燥并再溶于水(5 mL)中。将溶液用饱和的柠檬酸溶液酸化至 约pH 5。将固体沉淀过滤，用水洗涤，并干燥从而获得作为白色固体的标题化合物(0.068 gJSo/ohLCMS m/z 512 (Μ+Η) + </Η MMR (400 MHz, d6-DMS0) δ 12.17 (bs, 1H), 8.95 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.26 (t, /= 8.0 Hz, 2H), 6.98 (d, /= 8.4 Hz, 2H), 6.73 (s, 2H), 5.20 (s, 2H), 3.92 (s, 1H), 3.76 (s, 3H), 3.08 (t /= 8.0 Hz, 2H), 2.65 (s, 2H), 1.89 (s, 6H), 1.75 (s, 3H), 1.27 (d, /= 6.4 Hz, 6H)〇
[0114] 基本上通过实施例1的方法来制备下述化合物。
[0116] 替代制备，实施例1 在10-15°C下，向⑶-3-{4-[2-异丙基-8-(4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-[1，2,4]三唑 并[l，5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸乙酯（419 g，0.776 mol)在EtOH (8.38 L)和THF (1 L)中的溶液中添加 NaOH (62.1 g，1.55 mol)在水(310 mL)中的溶液。将反应 混合物加温至25°C并搅拌2小时。添加额外的NaOH (31.05 g，0.78 mol)在水（155 mL)中的 溶液，并将反应搅拌另外1.5小时。将反应混合物蒸发至干燥，从而获得粘性材料，将其用水 (4.5 L)稀释并用二乙基醚(3X2.5 L)洗涤。将水层冷却至0°C，并用饱和的柠檬酸溶液酸 化至pH 4.2,并搅拌30分钟。将所得到的白色乳液用DCM (3X5 L)萃取。将合并的有机萃取 物用水(3X4 L)和盐水(4 L)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发至干燥，从而获得粘性 油。将该油溶解于DCM (5 L)中并过滤，从而除去可能存在的任何颗粒。将所得到的滤液浓 缩成粘性油。添加二乙基醚（2.5 L)，然后添加正己烷(5 L)，并且将混合物搅拌4小时。从 所得到的胶状材料中，在40°C下除去溶剂12小时，从而获得作为标题化合物的淡黄色固体 (341.9 g,86%)〇LCMS m/z 512 (M+H)+〇
[0117] Tris 盐制备 (S)-3-{4-[8-(2,6-二甲基-苯基)-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基甲氧 基!h苯基卜己-4-炔酸的tris盐是通过在80°C下(板温度）以1000 rpm搅拌的同时将(S)-3-{4-[8-(2,6_二甲基-苯基)-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}- 己-4-炔酸（492 mg)溶解于乙腈（10 mL)中来制备。添加三羟甲基氨基甲烷 (Tromethamine)(tris) (492 mg)(溶解于 1 mL的水中）。将样品在80°C/1000 rpm下衆化 15分钟。关闭加热和搅拌，并使得板达到室温。在室温下短时间恢复搅拌。在达到室温后，将 样品放置在5°C的冰箱中30分钟。通过真空过滤分出白色的固体Tris盐形式，并将其适当地 在真空和气流下在滤纸上干燥15分钟。将所得到的亮白色固体（由于片状形态）用70°C真空 烘箱干燥。回收所得到的（S)-3-{4-[8-(2,6-二甲基-苯基)-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[1， 5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸的tris盐(458 mg, 74%收率）。
[0118] 实施例6 (S)-3-(4-( (8-(2,6-二甲基-4-(3-(甲基磺酰基)丙氧基)苯基)-2-异丙基_[1，2,4]三 唑并[1，5-a]吡啶-6-基）甲氧基)苯基)己-4-炔酸
向搅拌的（S)-3-(4-((8-(2,6-二甲基-4-(3-(甲基磺酰基)丙氧基)苯基)-2-异丙基-[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基）甲氧基）苯基）己-4-炔酸乙酯（0.200 g，0.309 mmol) 在EtOH (15 mL)中的溶液中添加5 N氢氧化钠（0.18 ml，0·93 mmol)。将反应混合物在室 温下搅拌16小时。将反应混合物浓缩，并将残留物用二乙基醚(2X10 mL)洗涤，溶于水(25 mL)中并用1.0 N HC1酸化(pH 4-5)。将化合物用DCM (2X25 mL)萃取，并且将有机萃取物 经无水Na2S〇4干燥，过滤并浓缩至干燥。将粗材料进一步通过制备型HPLC纯化。制备型HPLC 条件：柱:X BRIDGE C18 (19 X 250) mm，5μ;移动相（A):0.1% TFA;移动相（B):乙腈； 流速:梯度，15 ml/分钟，从而获得作为白色固体的标题化合物(0.070 8,36.64%)。^1^ m/ z 318.50 (M+H)+〇
[0119] 实施例7 (S)-3-(4-{8-[4-(3-氰基-3,3-二甲基-丙氧基)-2,6-二甲基-苯基]-2-异丙基-[1，2， 4 ]三唑并[1，5-a ]吡啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸
向搅拌的（S)-3-(4-{8-[4-(3-氰基-3,3-二甲基-丙氧基)-2,6-二甲基-苯基]-2-异丙 基-[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基甲氧基}-苯基）-己-4-炔酸乙酯（0.16 g，0.258 mmol)在EtOH (10 mL)中的溶液中添加5 N氢氧化锂(0.15 ml，0.774 mmol)，并且将混合 物在80°C下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩，并且将残留物用乙醚/正戊烷（1:1)磨 碎。将该材料溶解于水中，并用柠檬酸溶液酸化至约5的pH。将固体沉淀过滤并冷冻干燥，从 而获得作为白色固体的标题化合物(0.145 g^UACMS m/z 593.4[M+H] +。
[0120]基本上通过实施例7的方法来制备下述化合物。
[0122] 实施例9 (S)-3-(4-{8-[2-(氰基-二甲基-甲基)-苯基]-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡 啶-6-基甲氧基}_苯基)_己-4-炔酸
向（S)-3-(4-{8-[2-(氰基-二甲基-甲基)-苯基]-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡 啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸乙酯（0.06 g，0.109 mmol)在THF/水（6 mL/2 mL)中 的溶液中添加2 M LiOH (0.109 ml，0.218 mmol)。将混合物在室温下搅拌12小时。在减压 下蒸发THF。将粗材料用饱和的柠檬酸溶液酸化(pH~5)。然后，将固体沉淀过滤并经真空干 燥，从而获得作为近白色固体的标题化合物(0.043 g^UAC-MS m/z 521 [M+H] +。
[0123] 基本上通过实施例9的方法来制备下述化合物。
[0125] 实施例12 ((S)-3-{4-[8-(3-氰基甲基-苯基)-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-1甲氧 基]-苯基}-己-4-炔酸
向（S)-3-(4-{8-[3-(氰基-二甲基-甲基)-苯基]-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡 啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸乙酯（0.07 g，0.13 mmol)在THF (7 mL)和水（3 mL) 中的溶液中添加 LiOH*H2〇 (0.028 g，0.67 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌48小时。将 反应混合物蒸发至干燥，然后用水（10 mL)稀释，用柠檬酸酸化(pH~5)并用DCM (2X30 mL)萃取。将合并的有机萃取物经无水硫酸钠干燥并浓缩。将粗材料通过硅胶柱色谱法 (combiflash)纯化，用15-50% EtOAc/己烷洗脱从而获得标题化合物（0.025 g，29.41%)。 LCMS m/z 493.3 (M+H)+〇
[0126] 基本上通过实施例12的方法来制备下述化合物。
a 通过制备型HPLC来纯化，其使用柱:Kinetex C18 (50 mm X 2.1 mm X 1.7 μπι)，使 用移动相(Α)水中的0.01% TFA和(Β)乙腈，具有0.3 mL/分钟的流速。
[0128] 实施例16 (S)-3-{4-[8-(4-氰基甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-2-异丙基-[1，2,4]三唑并[1，5-&] 吡啶-6-基甲氧基]-苯基}_己-4-炔酸
向搅拌的（S)-3-{4-[8- (4-氰基甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-2-异丙基_[1，2,4]三唑 并[1，5-a]吡陡基甲氧基]-苯基}-己-4 -块酸乙醋（0.07 g，0.12 mmol)在二氣乙烧 (10 mL)中的溶液中添加三甲基氢氧化锡（0.224 g，l.23 mmol)，并将混合物在80°C下加 热96小时。将反应混合物冷却至室温，并用1.5 N HC1溶液（20 mL)洗涤，并用EtOAc (2X 20 mL)萃取。将合并的有机萃取物用饱和盐水溶液（10 mL)洗涤，经硫酸钠干燥、过滤并浓 缩。将粗材料通过硅胶柱色谱法(combiflash)纯化，用49% EtOAc/己烧洗脱从而获得作为 黄色固体的标题化合物(0.023 g，34.8%) 1CMS m/z 536 (M+H) +。
[0129] 基本上通过实施例16的方法来制备下述化合物。
[0131] GPR40:信息 最近由Nagasumi报道的使用转基因小鼠在胰岛素 II启动子的控制下过度表达人体 GPR40基因的研究结果进一步支持下述观点:GPR40在体内的GDIS和血浆葡萄糖水平的调节 中起到了重要的作用，尤其是在胰岛素抵抗的啮齿动物模型中。Nagasumi K等人， Overexpression of GPR40 in pancreatic β-cells augments glucose-stimulated insulin secretion and improves glucose tolerance in normal and diabetic mice, Diabetes 58: 1067-1076，2009。还参见Briscoe CP等人，TAe orpAa/? 61 jOroiei/?-coupled receptor GPR40 is activated by medium and long chain fatty acids, Journal Biological Chemistry 278: 11303 - 11311，2003。这些发现进一步支持了下 述观点：可以特别期望开发新的GPR40调节剂化合物以用于T2D的治疗。
[0132] 试验 钙通量初步试验 基本上如下所述地测试在本文中示例的化合物，并且展现出对于钙通量初步试验而言 小于500 nM的EC5Q值，并展现出>50%的功效。
[0133] 这些试验用于通过测量细胞内钙水平的提高来筛选化合物，当配体结合并激活 GPR40时导致所述细胞内钙水平的提高，由此证明了 GPR40激动剂的效能和功效。将过度表 达人体GPR40 cDNA的HEK293细胞用于所述研究，所述细胞在37°C和5% C02下保持在补充有 10% FBS和800 μg/ml的遗传霉素的以3:1的比例的达尔伯克氏改良伊格尔氏培养基与F12 培养基中。在试验缓冲液（lXHBSS(Hank's平衡盐溶液）和20 mM HEPES(4-(2-羟基乙基）-1-哌嗪乙磺酸））中，在存在或不存在0.1%不含脂肪酸的BSA的情况下使用Calcium 4 Dye试 验试剂盒(Molecular Devices)进行激动剂试验。使用焚光成像读板仪(FLIPR)作为细胞内 钙的提高来测量受体激活。将超出基线的荧光最大改变用于测定激动剂响应。使用Excel Fit软件(第4版；IDBS)通过绘制浓度vs相对荧光单位(RFU)来计算化合物的EC 5Q值。基于与 天然配体亚油酸相比化合物所展现出的最大响应来计算百分比功效。当在该试验中检验 时，实施例1的受试化合物具有247 nM( ±23.9，n=12)的EC5Q和78.7%的功效（± 12.5，n=12)。 这些结果进一步证明了该化合物作为GPR40激动剂的所期望的效能和功效。（平均值土SEM; SEM =该平均值的标准误差）。
[0134] 选择性试验 过氧化物酶体增殖物激活受体(ΡΡΑΙ〇α、δ和γ功能试验 由于已知GPR40通过结合至PPARy的配体而激活，所以在Gal4 PPARa、Gal4 PPARS和 PPAR γ报告子(reporter)试验中检验示例化合物以确定示例化合物的选择性。使用Fugene 用多种受体和报告子质粒转染源自非洲绿猴的肾组织的CV1细胞。对于Gal4 PPARa和Gal4 PPAR5试验，将含有酵母转录蛋白Gal4响应元件的五个串联副本(tandem copies)的报告子 质粒（在由腺病毒的主要晚期启动子驱动的萤火虫荧光素酶基因的上游克隆）与Simian Virus 40 (SV40)驱动的构成性地表达含有Gal4 DNA结合域(DBD)和PPARa或PPARS配体结合 域的杂交蛋白的质粒一起转染。对于PPAR γ试验，将均由巨细胞病毒(CMV)启动子驱动的编 码PPARy和RXRa的质粒与含有由ΤΚ启动子驱动的荧光素酶报告子cDNA和受体响应元件（2 XPPRE)的质粒一起转染。细胞在T225 cm2细胞培养烧瓶中在带有5%木炭剥离的FBS和用于 个别试验的特异性质粒的DMEM培养基中转染。在过夜培养后，将转染的细胞胰蛋白酶化，在 含有5%木炭剥离的FBS的DMEM培养基中点板于不透明的96孔盘中（15，000细胞/孔），培养4 小时并暴露于以半对数稀释的0.17 nM至10 μΜ的受试化合物或参比化合物。与化合物培养 24小时后，使细胞裂解并通过发光测定荧光素酶活性作为受体激活的量度。将数据拟合成 四参数拟合的logistics模型以测定EC 5Q值。相对于用10 μΜ适当的PPAR激动剂参比化合物 (2-甲基-2-(4-{2-甲基-3-[2-(苯基羰基)-4-(三氟甲氧基)苯氧基]丙氧基}苯氧基)丙酸） 获得的最大刺激来测定最大百分比刺激。〈20%的功效被认为是阴性的。在PPAR功能试验中， 对于实施例1的化合物的EC 5q如下所述:PPARa> 10 μΜ;ΡΡΑΚδ = 4 μΜ;ΡΡΑΙ?γ = 2.26 μΜ。 这些数据表明，实施例1的示例化合物具有弱的PPAR活性。因此，这些试验支持了下述观点： 在所述的试验中，示例化合物具有如期望的弱的或者阴性的PPAR功效。
[0135] 对GPR-40的体外结合亲和力 运行使用自制放射性标记（5 nM [3H]-TAK-875)和由过度表达人体GPR40(hGPR40)构 造的HEK293细胞制备的膜的快速洗滤的放射性配体竞争结合试验，从而测定受试化合物的 平衡解离常数(KD。将竞争曲线绘制为特异性抑制百分比vs化合物浓度，并使用具有可变 斜率的四参数非线性回归拟合进行分析。使用Cheng-Prusoff方程Ki = IC5〇/(l + (D/Kd))计 算Ki值，其中IC5〇是导致50%结合抑制的化合物浓度，D是试验中使用的放射性配体的浓度， 并且K d是所述受体和所述放射性配体的平衡解离常数，其由饱和结合分析实验测定（[3H] TAK-875的Kd = 6.2)。对于实施例l，Ki=15.8 ηΜ±3·86，η=5/6。参见Cheng, Υ·和Prusoff, ff.Η. (1973) "Relationship between the inhibition constant (Ki) and the concentration of inhibitor which causes 50 per cent inhibition (IC50) of an enzymatic reaction"，22(23):3099_108。（平均值土SEM;SEM =该 平均值的标准误差）。这些数据证明，实施例1的化合物是人体GPR40的高亲和力配体。
[0136] 竞争结合动力学-测定受体停留时间 使用由Motulsky, H. J.和L. C. Mahan (1984)，"The kinetics of competitive radioligand binding predicted by the law of mass action" Mol Pharm 25(1): 1-9 描述的方法量化未标记化合物的缔合与解离速率。在不存在或存在lx Ki、3x Ki或lOx Ki的 未标记化合物的情况下，在多个时间点用6-8 nM [3H] TAK875培养人体GPR40膜。使用快速 洗滤进行将结合和游离的放射性配体分离至纤维玻璃过滤器上，并在液体闪烁计数器中计 数。通过将数据在GraphPad Prism 6(用于Windows的6.03版，GraphPad Software，La Jolla California USA, www.graphpad.com)中拟合成竞争性结合模型的动力学来计算速 率。实施例1的化合物显示出GPR40停留时间（τ)为169分钟（± 52.1，n=4)，其表明该GPR40配 体具有在受体上足够的停留时间，从而产生体内响应(平均值±SEM;SEM =平均值的标准 误差）。
[0137] 采用1% FBS的人和小鼠 β-抑制蛋白激动剂试验以测定β-抑制蛋白的募集： 人胚肾（hEK293)-hFFARl细胞购自DiscoveRx。表达mFFARl的人骨肉瘤（U20S)细胞由 DiscoveRX开发。这些细胞共同表达Prolink (PK)标记的GPR40和Enzyme Acceptor (EA)标 记的β-抑制蛋白融合蛋白。如果GPR40的激活刺激β-抑制蛋白的募集，这将迫使β-半乳糖苷 酶03_〖&1)酶片段互补，形成13-〖31酶，所述13-〖31酶使用0丨8〇〇￥61^?31：11!11111丨61'检测试剂盒 生成化学发光信号。在含有1% FBS(胎牛血清）的培养基中，将细胞以5,000细胞/孔在384孔 板中培养过夜。将在DMS0中连续稀释的化合物(2χ稀释以产生20个浓度)逐步降低地在含 有1% FBS(胎牛血清）的培养基中稀释并添加至细胞中，最终的最高浓度由100 μΜ起始。在 添加化合物后，在5% C02培养箱中在37°C下培养细胞90分钟，并添加 DiscoveRX试剂盒检测 试剂。在室温下培养1小时后，用Envision读取器确定化学发光信号的测量。将数据拟合成4 参数拟合的logistics以测定EC 5Q值，相对于在1 μΜ下内标GPR40激动剂标准TAK875的最大 响应来测量%活性。实施例1具有30.6 ηΜ( ± 12.3，η=2)的hGPR40 b-抑制蛋白EC5Q，其中％刺 激最大值(FA)为 170(±5·95，η=2)，和4.87 ηΜ(±1·48，η=3)的mGPR40 b-抑制蛋白，其中％ 刺激最大值(FA)为149( ± 11.8，n=3)。（平均值土 SEM; SEM =该平均值的标准误差）。这些数 据表明实施例1是可以通过β-抑制蛋白发出信号的GPR40激动剂。
[0138] 可以容易地根据本领域已知的公认实践（例如在Remington's "Pharmaceutical Sciences"，Gennaro, Ed.，Mack Publishing Co. Easton Pa. 1990 中找到的）将本发明 的示例化合物配制为药物组合物，例如片剂、固体或者凝胶填充的胶囊剂、粉剂、混悬剂或 者溶液。该组合物还可以包含一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂和稀释剂。
[0139] 优选的药物组合物包括被配制为片剂或胶囊剂用于口服给药的那些。片剂或胶囊 剂可以治疗糖尿病(特别是II型糖尿病)的有效量包含本发明的化合物。本领域技术人员将 理解的是，可以将式I的化合物与一种或多种额外的治疗剂进行给药。可以优选将药物组合 物配制成包含式I的化合物和一种或多种额外的治疗剂。
[0140] 将药物组合物以治疗糖尿病(更特别是II型糖尿病）的有效量给药至患者。可以通 过医疗服务提供者确定治疗患者的有效的适当的量或者剂量。
【主权项】
1. 化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物为：其中， R1选自 H、CH3、CN、CH2CN、C (CH3) 2CN和F; R2选自 H、O (C1-C3 烷基)R5、CH2CN 和CN; R3选自 H、OCH3、CN、C( CH3 )2CN 和CH2CN; R4选自H和CH3;并且 R5选自 11、^(：(013)2^0013、3(0)2〇13和(：(01 3)2〇11;条件是，选自1?1、1?2、1?和1?4中的至 少一个是H。2. 如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3是H。3. 如权利要求1至2中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1选自H和CH3。4. 如权利要求1至3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2选自H和0 (C1-C 3 烷基)R5。5. 如权利要求1至4中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2选自H和 OCH3o6. 如权利要求1至5中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4是CH3。7. 如权利要求1至6中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是CH3。8. 如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物为（S)-3-{4-[2-异 丙基-8-( 4-甲氧基-2，6-二甲基-苯基)-[1，2，4 ]三唑并[I，5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸。9. 如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物为(S)-3-{4-[8-(2， 6-二甲基-苯基)-2-异丙基_[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸。10. 药物组合物，其包含根据权利要求1至9中任一项所述的化合物或其药学上可接受 的盐，以及至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或者赋形剂。11. 在需要治疗糖尿病的哺乳动物中治疗糖尿病的方法，其包括给药有效量的如权利 要求1至9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。12. 在需要治疗II型糖尿病的哺乳动物中治疗II型糖尿病的方法，其包括给药有效量 的如权利要求1至9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。13. 如权利要求1至9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗。14. 如权利要求1至9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗II型 糖尿病。15. 根据式II的化合物或其药学上可接受的盐，共T，?ΓΙΖ￡ 曰 Η、υΗ3、υ?Ν、υΗ2υ?Ν、ΙΛυΗ3;2?1Ν々μΓ ; R2选自 H、O (C1-C3 烷基)R5、CH2CN 和CN; R3选自 H、OCH3、CN、C( CH3 )2CN 和CH2CN; R4选自H和CH3; R5选自 11、^(：(013)2^0013、3(0)2〇13和(：(01 3)2〇11;条件是，选自1?1、1?2、1?和1?4中的至 少一个是H;并且 R选自Cl_4烷基、Cl_4卤代烷基、C3-6环烷基、Cl_4烷基-C3-6环烷基、苯基和Cl_5烷基 苯基。16. 权利要求15的化合物，其中R1和R4各自是CH3。17. 权利要求15的化合物，其中R1和R4各自是H。18. 如权利要求15至17中任一项所述的化合物，其中R2选自H和OCH3。19. 用于制备下式I的化合物或其药学上可接受的盐的方法，其中， R1选自 H、CH3、CN、CH2CN、C (CH3) 2CN和F; R2选自 H、O (Ci-C3 烷基)R5、CH2CN 和CN; R3选自 H、OCH3、CN、C( CH3 )2CN 和CH2CN; R4选自H和CH3; R5选自 11、^(：(013)2^0013、3(0)2〇13和(：((：!13)2〇11;条件是，选自1?1、1?2、1?和1?4中的至 少一个是H;并且 R选自Cl-4烷基、Cl-4卤代烷基、C3_6环烷基、Cl-4烷基 -C3_6环烷基、苯基和Cl-5烷基 苯基，从而提供式I的化合物或其药学上可接受的盐。
【文档编号】A61P3/10GK105899509SQ201580004121
【公开日】2016年8月24日
【申请日】2015年1月6日
【发明人】C.汉杜基, P.麦蒂, A.R.米勒
【申请人】伊莱利利公司