使用酰基-CoA合成酶生物合成生成酰基-CoA的方法
【专利摘要】一种从长链羧酸制备羧基CoA的生物合成方法，其包括在细胞系统中表达ACS、供应长链羧酸至细胞系统、使细胞系统在培养基中生长、以及生成羧基CoA。
【专利说明】
使用酰基-CoA合成酶生物合成生成酰基-CoA的方法
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 本公开是标题为Methods of Using Acyl-CoA Synthetase for Biosynthetic Production of Acyl-CoAs的PCT专利申请。本申请要求2013年11月1日提交的美国临时专 利申请No. 61/898，944的优先权，该临时专利申请的全部内容以引用的方式并入本文。
技术领域
[0003] 本公开适用于食品、医药和药理学行业。本公开总体涉及使用酰基-CoA合成酶(酰 基辅酶A合成酶，ACS)生物合成生成酰基-CoA的方法。
【背景技术】
[0004] 辣椒素，8-甲基-N-香草基-反式-6-壬稀酰胺是在辣椒(辣椒属物种（Capsicum spp .))中产生的导致其辛辣味的次级代谢物。如图1中所指出，辣椒素据信由辣椒素合酶 (CS)合成，辣椒素合酶(CS)是一种从8-甲基壬烯酰-CoA将8-甲基壬烯酰部分转移至香草基 胺以形成酰胺缀合物的酰基转移酶，尽管编码CS的基因在提交相关临时申请时尚未经明确 鉴定。再次，如图1所详述，CS的底物，8-甲基壬烯酰-CoA通过酰基-CoA合成酶(ACS)的活性 衍生自8-甲基-反式-6-壬烯酸。
[0005] ACS催化羧酸通过ATP-依赖性两步反应转化为其酰基-CoA硫酯。在第一步中，游离 脂肪酸通过释放焦磷酸根被转化为酰基-AMP中间体。在第二步中，经活化的酰基基团被偶 联至CoA的硫醇基团，从而释放AMP和酰基-CoA产物(Groot等，1976) ACS和其它相关的蛋白 质的特征在于形成AMP结合基序(PROSITE PS00455)核心的高度保守的12个氨基酸序列。约 44个推测的ACS基因在模式植物拟南芥(Arabidopsis thaliana)中得以鉴定（Shockey等， 2003)。当前，它们中的约一半具有已知的生化功能，其包括长链酰基-CoA合成酶、酰基-ACP (酰基载体蛋白）合成酶、4-香豆酰-CoA连接酶、乙酰基-CoA合成酶、0PC-8: OCoA连接酶、琥 ?白酰苯甲酰-CoA连接酶、丙二酰-CoA合成酶及草酰-CoA合成酶(Shockey等，2003; Koo等， 2005;Κοο等，2006; Kim等，2008; Lin和01 iver，2008; Chen等，2011; Foster等，2012)。在辣椒 (Capsicum annuum)中，已克隆了三个全长推测的ACS基因（Lee等，2001 ;Mazourek等， 2009)。然而，认为这些蛋白质中没有任一种具有生化活性。
[0006]
【申请人】着手鉴定辣椒素生物合成、特别是ACS中涉及的基因。因为辣椒基因组序列 在研究开始时不可获得，所以
【申请人】采用RNA测序（RNA-Seq)技术用于魔鬼辣椒（ghost chili pepper，一种黄灯笼辣椒(C. chinense)和木本辣椒(C. frutescens)的种间杂交种） 的绿果的转录组分析。RNAseq实验通过M0gene，LC(St Louis，M0)进行。
【申请人】通过从头组 装原始RNAseq数据获得约18，987个重叠群，所述重叠群中的33个被注释为酰基-CoA合成 酶-样蛋白质。在这些重叠群中，Comp2147-l显示出与CaSIG4的良好匹配（图2)，CaSIG4是来 自辣椒中的编码推测的酰基-CoA合成酶的病原体-诱导型cDNA(Lee等，2001)。此外， <：〇1^66462和(：〇1^79520定位至辣椒（？6??6〇4051(6611831^41]616571)(图3)，并且 Compl67_cO、Compl67_cl 和 Comp46218 定位至辣椒 ACS2(GenBank:EU616572)(图4)。因此， ACS1和ACS2是从质体输出脂肪酸的酰基-CoA合成酶的两种候选物(Mazourek等，2009)。
[0007]
【申请人】证明了 ACS1是中链/长链酰基-CoA合成酶，其将8-甲基-反式-6-壬烯酸转 化为相应的8-甲基-6-壬烯酰-C〇A(辣椒素生物合成途径中的一种关键中间体）。
【申请人】在 本文申请中公开了使用ACS、特别是ACS1用于生物合成生成酰基-CoA的方法。
【发明内容】
[0008] 本公开解决了在细胞系统诸如酵母或细菌中生成酰基-CoA的技术问题。
【申请人】已 分离了ACS的基因，并在促进酰基-CoA生成的细胞系统中独特地使该基因表达。一种特殊的 酰基 -CoA，8-甲基_6_壬稀酰-CoA是辣椒素合酶(CS)的必需底物，其然后生成辣椒素。因此， 本公开提供了 8-甲基-6-壬烯酰-CoA的工业生产，并有助于促进辣椒素的随后生成。
[0009] 本公开是从中链/长链羧酸制备羧基CoA的生物合成方法，其包括在细胞系统中表 达ACS、向该细胞系统供应长链羧酸、使该细胞系统在培养基中生长、以及生成羧基CoA。
[0010] 另一个实施方式是制备8-甲基壬烯酰-CoA的生物合成方法，其包括在细胞系统中 表达ACS、向该细胞系统供应8-甲基-反式-6-壬烯酸、使该细胞系统在培养基中生长、以及 生成8-甲基壬烯酰-CoA。
【附图说明】
[0011] 为了更好地理解本公开，可参考附图，其中：
[0012] 图1示出了辣椒素的生物合成途径，其包括通过ACS从8-甲基-6-壬烯酸制备8-甲 基-6-壬稀酰-CoA的反应(从Stewart等(2007)改进而来）。
[0013] 图 2 示出了 Comp2147-l 与 CaSIG4(GenBank:AF354454)之间的序列比较。
[0014] 图 3示出了 Comp66462、Comp79520 与 ACS1 (GenBank: EU616571)之间的序列比较。
[0015] 图 4 示出了 (：〇1^167_。0、(：〇1^167_。1、(：〇1^46218与厶〇52(66118&吐41]616572)之间 的序列比较。
[0016] 图5示出了魔鬼辣椒ACS1与ACSl(GenBank:ACF17663)之间的序列比较。
[0017] 图6示出了魔鬼辣椒ACS1、拟南芥属植物LACS4(GenBank:AEE84812)和LACS5 (GenBank: AAM28872)的序列比对。
[0018] 图 7 示出了 BL21(DE3)细胞中 His-SUM〇-ACSl 表达的 SDS-PAGE 分析。0,20:IPTG 诱导 后的总蛋白；C:可溶性粗蛋白提取物；E1至E4:来自Ni-NTA柱的级分。ACS 1的分子量为约 73.5Kd，并且His-SUMO标签的分子量为约12Kd。
[0019] 图8示出了ACS1针对各种羧酸的活性。C2，乙酸;C4，丁酸;C6，己酸，C8，辛酸;C10， 癸酸;C12，月桂酸;C14，肉豆蔻酸;C16，棕榈酸;C18，硬脂酸。在100mM的pH 8.0的Tri缓冲液 中进行测定。
[0020] 图9示出了用8-甲基-反式-6-壬烯酸或8-甲基壬酸分别作为底物的ACS1的酶促产 物的HPLC图。
[0021] 图10示出了经纯化的8-甲基-反式-6-壬烯酰-CoA的负离子模式下的MS/MS分析。 [0022]图11示出了经纯化的8-甲基壬酰-CoA的负离子模式下的MS/MS分析。
[0023]图12示出了pH对ACS1针对8-甲基壬酸的活性的影响。四种不同的缓冲液体系用于 不同的pH范围。
[0024] 尽管本公开易受各种修改和可替代形式的影响，其特定实施方式通过在附图中以 例举的方式显示并将在本文中详细描述。然而，应理解本文提出的附图和详述不意在限制 本公开为公开的特定实施方式，但相反意图覆盖落入由随附的权利要求限定的本公开的精 神和范围内的所有修改、等效物和替代物。
【具体实施方式】
[0025] 定义 [0026]细胞系统
[0027]细胞系统是提供异位蛋白表达的任何细胞。其包括细菌、酵母、植物细胞和动物细 胞。其包括原核细胞和真核细胞两者。其还包括基于细胞组分(诸如核糖体）的蛋白质的体 外表达。
[0028]使细胞系统生长
[0029] 生长包括提供使细胞繁殖和分裂的培养基。其还包括提供资源，使得细胞或细胞 组分可翻译和制备重组蛋白。
[0030] 蛋白表达
[0031] 蛋白生成可在基因表达后发生。其由DNA已转录为信使RNA(mRNA)之后的阶段组 成。然后将mRNA翻译为多肽链，其最终折叠为蛋白质。DNA通过转染存在于细胞中，转染为一 种有意将核酸引入至细胞中的方法。该术语通常用于真核细胞中的非病毒方法。还可涉及 其它方法和细胞类型，尽管其它术语是优选的："转化"通常用于描述细菌、非动物真核细 胞，包括植物细胞中的非病毒DNA转移。在动物细胞中，转染是优选的术语，因为转化还用于 指代这些细胞中的癌性状态(致癌作用）的进展。转导通常用于描述病毒介导的DNA转移。转 化、转导和病毒感染包含在本申请的转染的定义下。
[0032] 本公开的一个实施方式是从中链至长链羧酸制备羧基CoA的生物合成方法，其包 括在细胞系统中表达ACS、向该细胞系统供应中链至长链羧酸、使该细胞系统在培养基中生 长、以及生成羧基CoA。
[0033] 另一个实施方式是从由魔鬼辣椒克隆的ACS1表达ACS。替代的实施方式是ACS基于 LCAS4或LCAS5从拟南芥属植物表达。在另一个实施方式中，ACS从由辣椒属物种克隆的ACS2 表达。此外，ACS是与从魔鬼辣椒克隆的ACS1共享至少66%的序列同一性的ACS。在另一个变 型中，ACS是与从魔鬼辣椒克隆的ACS1共享至少97%的序列相似性的ACS。
[0034] 另一个实施方式是中链或长链羧酸是8-甲基-反式-6-壬烯酸。长链羧酸通常具有 14个至18个碳，而中链羧酸通常具有8个至13个碳。在一个实施方式中，供应中链至长链羧 酸至细胞系统包括添加中链至长链羧酸至细胞系统。在一个可替代的实施方式中，供应中 链至长链羧酸至细胞系统包括在细胞系统中从生物合成途径表达中链至长链羧酸。
[0035] 至于实施方式中的细胞系统，其选自由以下组成的组：细菌、酵母及其组合，或者 提供将允许生物合成生成的任何细胞系统。
[0036] 本公开的一个实施方式是制备8-甲基壬烯酰-CoA的生物合成方法，其包括在细胞 系统中表达ACS、供应8-甲基-反式-6-壬烯酸至细胞系统、使细胞系统在培养基中生长、以 及生成8-甲基壬烯酰-CoA JCS从由魔鬼辣椒克隆的ACS1表达。ACS可从由拟南芥属植物克 隆的LCAS4或LCAS5表达。在另一个实施方式中，ACS从由辣椒属物种克隆的ACS2表达。此外， ACS是与从魔鬼辣椒克隆的ACS1共享至少66%的序列同一性的ACS。在另一个变型中，ACS是 与从魔鬼辣椒克隆的ACS1共享至少97%的序列相似性的ACS。
[0037] 实施例1 [0038] 生成酰基-CoA
[0039] 克隆
[0040]
【申请人】使用引物ACSl-sum〇-F:CGC GAA CAG ATT GGA GGT GCAACAGATAAATTTATTATTG和ACSl-sum〇-R:GTG GCG GCC GCT CTA TTA TCACTTGGTACCCTTGTACAT从魔鬼辣椒绿果的cDNA扩增ACS1基因。所得的PCR产物在1 %琼脂 糖凝胶上纯化并与线性pETite N_His SUMO Kan表达载体(Lucigen，Middleton，WI)混合。 DNA混合物用于通过热激(Lucigen)转化HI-对照10G化学感受态细胞。完全测序基因插入序 列，并将编码的氨基酸序列与ACS1的氨基酸序列比对(图5)。如图5所示，除了辣椒ACS1中的 I le476被魔鬼辣椒ACS1中的Val的替代外，这两条序列几乎是相同的。魔鬼辣椒ACS1的序列 用于搜索比对(bias)拟南芥数据库（http : //www.arabidopsis · org/)，并鉴定LCAS4和 LACS5为其同系物（图6)。如图6所示，这三条序列共享66.7%的序列同一性和97.1 %的序列 相似性。LACS4和LACS5两者经生化表征为参与脂肪酸和甘油脂质代谢的长链酰基-CoA合成 酶（Shockey等，2002)。最近，LACS4被证明为拟南芥属植物中花粉包被脂质形成所需 (Jessen等，2011) 〇
[0041 ] 表达
[0042]
【申请人】使用pETite N-His SUM0-魔鬼辣椒ACS1转化HI-对照BL21(DE3)细胞 (Lucigen)，并且His-SUM〇-ACSl的表达由0.5mM的IPTG在16°C下诱导20小时。融合蛋白通过 Ni-NTA柱纯化（图7KACS1具有约73.5Kd的分子量，并且His-SUMO标签的尺寸为约12Kd。 SDS-PAGE上的His-SUM〇-魔鬼辣椒ACS1融合蛋白迀移靠近预测尺寸(约85Kd)(图7)。
[0043] 产物
[0044]
【申请人】使用基于HPLC的方法以测量魔鬼辣椒ACS 1的活性(Chen等，2011)。简而言 之，反应混合物（400yL)含有0.1M Tris-HCl(pH 7.5)、2mM DTT、5mM ATP、10mM MgCl2、 0.5mM CoA、0.1%Triton和200μΜ羧酸。通过添加20μ1纯化酶起始反应，并在30分钟后通过 添加20μ1 乙酸终止反应。利用Acclaim?.120C18反相柱（Thermo Scientific ;3μ，120 Α，. 150 X 3mm)的 Dkinex .- U丨ti_Mate? :)>()()〇LC系统（Thermo Sc ientif ic)进行HPLC。流动相由 溶剂A(0.1 %三氟乙酸)和溶剂B(乙腈)组成。梯度洗脱程序如下:0至5分钟，5%的B; 5分钟 至9分钟，5 %至80 %的B的线性梯度;9分钟至11分钟，80 %的B; 11分钟至12分钟，5 %的B。流 速是0.6ml/min。二极管阵列检测器收集200-nm至400-nm范围内的数据。为了检测和定量底 物和产物，在257nm下测量峰面积。
[0045] 如图8所示，ACS1针对各种中链至长链羧酸具有活性，其中针对癸酸(C10)具有最 高活性。相反，ACS1针对乙酸(C2)或丁酸(C4)-短链羧酸不显示任何活性。
[0046]
【申请人】然后使用8-甲基-反式-6-壬烯酸(6E)(辣椒素生物合成途径中的内源性中 间体)或其还原产物8-甲基壬酸(8M)作为底物来测定ACS1的活性。如图9所示，ACS1显示对 两种底物具有活性，其中针对6E具有更高的活性。
【申请人】收集了产物峰相应的HPLC级分，并 将它们经SpeedVac浓缩器(SpeedVac Concentrator)干燥以用于进一步的MS/MS鉴定。 [0047] 确认产物
[0048]将每种干燥的样品重悬于40yL的1:1:2的甲醇：水：乙腈缓冲液中。使用TriVersa Nanotnate? (Advion，I thaca，NY)，将 1 OyL用于直接输注。质谱仪LTQ-〇rbi trap Ve 1 os (Thermo Fisher Scientif ic，Waltham，MA)以负离子模式运行。在FT细胞中在300m/z至2， OOOm/z质量范围内进行MS测量扫描。解析度被设定为60,000@400m/Z<XID片段化用于MS/ MS，并且检测在离子阱中进行，其分离窗为1.5m/z。片段化用35%的标准化碰撞能量进行。 如图10至图11所示，MS数据分别匹配8-甲基-反式-6-壬烯酰-CoA和8-甲基壬酰-CoA的分子 量。
[0049] 还研究了 ACS1针对8-甲基壬酸的pH最优值。乙酸盐、磷酸盐、Tris和甘氨酸/NaOH 缓冲液用于提供4.0至10.5的pH范围。如图12所示，ACS1的pH最优值为约9.5。
[0050] 因此，
【申请人】已经鉴定了提供辣椒素合酶的底物的魔鬼辣椒中的新型中链/长链 酰基-CoA合成酶。此外，所述新型酶还可应用于生物燃料业中用于制备中链脂肪酸衍生物。
[0051] 另外的实施方式包括通过利用基因过表达标准已知技术过表达ACS1，使用ACS1改 变辣椒植物中辣椒素类物质的水平。另一个实施方式包括通过利用标准的已知敲除或敲低 基因表达技术来敲除或敲低ACS1，使用ACS1调控辣椒植物中辣椒素类物质的水平。再次，通 过本领域普通技术人员所知的标准的分子细胞策略和技术进行过表达或敲除/敲低。另一 个实施方式包括使用ACS1生成酰基-CoA及其包括脂肪酸的下游代谢物，涉及ACS1的表达或 过表达。另一个变型是使用ACS1调控酰基-CoA及其包括脂肪酸的下游代谢物的水平，包括 敲除或敲低ACS1。
[0052]可利用由所述方法制备的酰基CoA制备辣椒素，并且所制备的酰基CoA通常具有中 链多样性。再次，尽管ACS1可介导中链-羧酸和长链-羧酸两者转化为酰基-CoA，但中链活性 比长链活性重要得多，因为中链活性是今日生物燃油业中的必需组成。如上针对ACS1所述 的另一个重要性是其可用于通过转基因技术改变植物中的辣椒素水平。然而，ACS1不被排 除在关于长链酰基-CoA的用途之外。
[0053]在一个实施方式中，细胞系统，诸如基于细菌的系统或基于酵母的系统可经改变 以表达ACS 4CS可以为从魔鬼辣椒克隆的ACS1。其它适合的ACS是基于拟南芥属植物的 LCAS4和LCAS5的ACS。其它已知的ACS1和ACS2也可在细胞系统中表达。然后可将适当的底 物，诸如8-甲基-反式-6-壬烯酸和8-甲基壬酸供应至细胞系统。底物也可作为细胞系统内 的生物合成途径的一部分表达。然后孵育细胞系统，使得生物合成生成8-甲基-反式-6-壬 烯酰-CoA或8-甲基壬酰-CoA。
[0054] 同一性和相似性
[0055] 同一性是在比对序列（其可仅使用序列信息或结构信息或一些其它信息进行，但 通常其仅基于序列信息）后在一对序列之间相同的氨基酸的分数，而相似性是基于使用一 些相似性矩阵的比对指定的评分。相似性指数可为以下BL0SUM62、PAM250或G0NNET中的任 一者，或者本领域技术人员进行蛋白质序列比对所用的任何矩阵。
[0056] 同一性是两条子序列之间一致性的程度(序列之间没有空位）。25%或更高的同一 性意指功能的相似性，而18%至25%意指结构或功能的相似性。记住两条完全不相关或随 机序列(其为多于100个残基)可具有高于20%的同一性。相似性是当比较两条序列时，这两 条序列之间相似的程度。这取决于它们的同一性。
[0057] 如从前文描述显而易见，本公开的某些方面不限于本文说明的实施例的特定细 节，并且因而考虑到本领域技术人员将进行其它改变和应用或其等效形式。因此权利要求 应意欲覆盖所有不偏离本公开的精神和范围的此类改变和应用。
[0058] 此外，除非另外限定，否则本文所用的所有技术和科学术语都具有与本公开所属 领域普通技术人员通常理解的含义相同的含义。尽管在实践或测试本公开中可使用与本文 描述的那些方法和材料相似或相等的任何方法和材料，但是上文描述了优选的方法和材 料。
[0059] 本公开的其它方面、目标和优势可通过研究附图、公开内容和随附的权利要求获 得。
[0060] 参考文献
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【主权项】
1. 一种从中链羧酸或长链羧酸制备羧基CoA的生物合成方法，其包括： 在细胞系统中表达酰基-CoA合成酶(ACS); 供应中链羧酸或长链羧酸或两者至所述细胞系统； 使所述细胞系统在培养基中生长；以及 生成羧基CoA。2. 如权利要求1所述的从中链羧酸或长链羧酸制备羧基CoA的生物合成方法，其中，所 述ACS从由魔鬼辣椒克隆的ACSl或由辣椒克隆的CaSIG4或由辣椒克隆的ACSl或其组合表 达。3. 如权利要求1所述的从中链羧酸或长链羧酸制备羧基CoA的生物合成方法，其中，所 述ACS从由拟南芥属植物克隆的基于LCAS4或LCAS5的基因表达。4. 如权利要求1所述的从中链羧酸或长链羧酸制备羧基CoA的生物合成方法，其中，所 述ACS从由辣椒植物克隆的ACS2表达。5. 如权利要求1所述的从中链羧酸或长链羧酸制备羧基CoA的生物合成方法，其中，所 述ACS是与从魔鬼辣椒克隆的ACSl共享至少66 %的序列同一性的ACS。6. 如权利要求1所述的从中链羧酸或长链羧酸制备羧基CoA的生物合成方法，其中，所 述ACS是与从魔鬼辣椒克隆的ACSl共享至少97%的序列相似性的ACS。7. 如权利要求1所述的从中链羧酸或长链羧酸制备羧基CoA的生物合成方法，其中，所 述长链羧酸是8-甲基-反式-6-壬烯酸。8. 如权利要求1所述的从中链羧酸或长链羧酸制备羧基CoA的生物合成方法，其中，所 述供应中链羧酸或长链羧酸或两者至所述细胞系统包括添加中链羧酸或长链羧酸或两者 至所述细胞系统。9. 如权利要求1所述的从中链羧酸或长链羧酸制备羧基CoA的生物合成方法，其中，所 述供应中链羧酸或长链羧酸或两者至所述细胞系统包括在所述细胞系统中基于所述细胞 系统中的生物合成途径表达所述中链羧酸或长链羧酸或两者。10. 如权利要求1所述的从中链羧酸或长链羧酸制备羧基CoA的生物合成方法，其中，所 述细胞系统选自由以下组成的组:细菌、酵母、植物细胞、动物细胞、体外翻译系统及其组 合。11. 一种制备8-甲基壬烯酰-CoA的生物合成方法，其包括： 在细胞系统中表达ACS; 供应8-甲基-反式-6-壬烯酸至所述细胞系统； 使所述细胞系统在培养基中生长；以及 生成8-甲基壬烯酰-CoA。12. 如权利要求11所述的制备8-甲基壬烯酰-CoA的生物合成方法，其中，所述ACS从由 魔鬼辣椒克隆的ACSl或由辣椒克隆的CaSIG4或由辣椒克隆的ACSl或其组合表达。13. 如权利要求11所述的制备8-甲基壬烯酰-CoA的生物合成方法，其中，所述ACS从基 于由拟南芥属植物克隆的LCAS4或LCAS5的基因表达。14. 如权利要求11所述的制备8-甲基壬烯酰-CoA的生物合成方法，其中，所述ACS从由 辣椒植物克隆的ACS2表达。15. 如权利要求11所述的制备8-甲基壬烯酰-CoA的生物合成方法，其中，所述ACS是与 从魔鬼辣椒克隆的ACSl共享至少66 %的序列同一性的ACS。16. 如权利要求11所述的制备8-甲基壬烯酰-CoA的生物合成方法，其中，所述ACS是与 从魔鬼辣椒克隆的ACSl共享至少97%的序列相似性的ACS。17. 如权利要求11所述的制备8-甲基壬烯酰-CoA的生物合成方法，其中，所述供应8-甲 基-反式-6-壬烯酸至所述细胞系统包括添加所述8-甲基-反式-6-壬烯酸至所述细胞系统。18. 如权利要求11所述的制备8-甲基壬烯酰-CoA的生物合成方法，其中，所述供应8-甲 基-反式-6-壬烯酸至所述细胞系统包括在所述细胞系统中基于所述细胞系统中的生物合 成途径表达所述8-甲基-反式-6-壬烯酸。19. 如权利要求11所述的制备8-甲基壬烯酰-CoA的生物合成方法，其中，所述细胞系统 选自由以下组成的组:细菌、酵母、植物细胞、动物细胞、体外翻译系统及其组合。 20. ACS 1用于调控辣椒植物中辣椒素类物质的水平的用途，所述调控包括过表达ACS 1、 或者敲除或敲低ACSl。 21. ACSl用于调控酰基-CoA及其包括脂肪酸的下游代谢物的水平的用途，所述调控包 括在细胞系统中过表达ACSl、或者敲除或敲低细胞系统中的ACSl。
【文档编号】C12N15/82GK105916991SQ201480072149
【公开日】2016年8月31日
【申请日】2014年11月3日
【发明人】陈辉, 王弘雪, 余晓丹
【申请人】康纳根有限公司