具有抑制癌细胞生长活性的肽及其应用
【专利摘要】本发明涉及一种具有抑制癌细胞生长活性的肽，属于医药生物领域，所述肽包含如下的氨基酸序列：TQAFPGRSVPYEFFLQHMNT，其编码基因包含核苷酸序列acccaggcgtttccgggccgcagcgtgccgtatgaattttttctgcagcatatgaacacc。本发明的肽具有抑制癌细胞生长活性的作用，尤其对肺癌细胞或子宫颈癌细胞的生长具有抑制活性。
【专利说明】
具有抑制癌细胞生长活性的肽及其应用
技术领域
[0001] 本发明属于医药生物领域，本发明更具体涉及了一种具有抑制癌细胞生长活性的 肽及其应用。
【背景技术】
[0002] 在癌症发生与治疗的过程中，化学治疗一直属于主体部分。现有的临床使用的化 疗药物，如环磷酰胺、顺铂、阿糖胞苷、阿霉素和长春新碱等，它们主要是用来破坏细胞的周 期的，RNA、DNA和蛋白质都是此类药物的靶向目标。近年来，As 203在对于白血病的治疗上取 得了很大的进展，但是，该药物和其他化疗药物，其本身都有自己的毒性，不管是一种化疗 药物单独使用还是几种化疗药物结合运用在临床治疗上，其在对癌症有明显疗效，杀伤杀 死癌细胞的同时，也会损害病人的正常细胞。化疗药物的副作用最普遍的就是对病人的骨 髓产生极度抑制，造成病人的极大痛苦，甚至引起死亡。
[0003] 目前对于癌症的治疗主要有以下几种:手术治疗，对于良性肿瘤疗效较好，但是对 于没有包膜包裹的癌症组织和扩散性肿瘤难以完全根除;放射性治疗，是利用某些肿瘤对 射线敏感的特点选择性地杀死癌细胞，但是对于不敏感型以及易扩散型癌细胞疗效较差， 而且在治疗过程中也会造成正常细胞的死亡;化学治疗，是将对细胞有毒、有害的药物经由 循环系统带到全身，虽然对于扩散型癌细胞也有一定疗效，但是这种治疗方法对于全身的 正常细胞也会造成极大伤害，使癌症病人在治疗癌症过程中承受巨大的生理和心理的折 磨。因此开发出一种疗效好、应用范围广、副作用小的抗癌药物是癌症患者和医学工作者的 共同心愿。尽管近几十年来化疗药物在治疗癌症方面取得了很大的进展，但当前化疗药物 存在的问题仍然很多，如存在的毒性、特异性较低以及易产生耐药性，探讨新型疗法成为当 前的研究热点。
[0004] 生物活性肽通常含有2~20个氨基酸残基，其活性随着组成它们的氨基酸不同以 及氨基酸排列顺序不同而发生改变。肽具有多种生理功能，如抗氧化、抗增殖、抗微管蛋白 和细胞毒性，肽的这些活性使得它们具有抗癌潜能，这将在癌症治疗中有所贡献。由于肽具 有很强的穿透肿瘤组织的能力，因此不仅可以到达原发性肿瘤的靶点，还可以到达继发性 肿瘤的靶点，这些分子主要通过破坏细胞膜的完整性从而迅速杀死靶细胞，所以一般不产 生耐药性。
【发明内容】
[0005] 本发明目的是针对上述问题，提供一种具有抑制癌细胞生长活性的肽及其应用。
[0006] 本发明的目的在于提供了一种抑制癌细胞生长的肽，其包含氨基酸序列的肽 TQAFPGRSVPYEFFLQHMNT；
[0007] 作为一种优选方案，本发明提供的肽的序列为TQAFPGRSVPYEFFLQHMNT。
[0008] 本发明还提供了编码该短肽的核苷酸序列。
[0009] 作为一种优选方案，编码上述肽的核苷酸序列包含 acccaggcgtttccgggccgcagcgtgccgtatgaattttttctgcagcatatgaacacco
[0010] 作为一种优选方案，编码上述肽的核苷酸序列为 acccaggcgtttccgggccgcagcgtgccgtatgaattttttctgcagcatatgaacacc〇
[0011] 本发明的肽可用于制备具有治疗实体肿瘤的药物。
[0012] 采用化学合成的方法合成本发明的肽，即本领域熟知的已经非常成熟的固相肽合 成方法，可采用Boc方法也可以采用Fmoc方法。具体做法就是将被保护的氨基酸逐个偶联到 惰性固相载体上去，然后利用强酸将肽链从载体上裂解下来，同时去除侧链保护。
[0013] 本发明的肽具有抑制癌细胞生长活性的作用，尤其对肺癌细胞或子宫颈癌细胞的 生长具有抑制活性。
【具体实施方式】
[0014] 实施例1
[0015] 本发明肽的合成：
[0016] 本发明采用采用化学合成的方法制备所述的肽，即本领域熟知的已经非常成熟的 固相肽合成方法，既可以采用Boc方法也可以采用Fmoc方法。具体做法就是将被保护的氨基 酸逐个偶联到惰性固相载体上去，然后利用强酸将肽链从载体上裂解下来，同时去除侧链 保护。
[0017] 具体而言，使用Perkin-Elmer公司的ABI433A型多肽合成仪、选用Fmoc/HOBt/ DCCO.lOmmol模式，采用多肽固相合成法进行活性肽单体和酰胺化肽链的合成，合成中所用 氨基酸用Fmoc保护，合成用树脂为HMP树脂。合成结束后用含0.75g结晶酚，0.25ml二巯基乙 醇，0.7ml硫代苯甲醚，0.5ml去离子水，lOmlTFA三氟乙酸的切割试剂将肽从树脂上切割下 来。用反相高效液相色谱，在C 18柱上进行肽的纯化。制备得到氨基酸序列为 TQAFPGRSVPYEFFLQHMNT 的肽。
[0018] 实施例2
[0019] 抑制癌细胞的试验：
[0020] 本实施例的目的在于试验所述肽在一系列肿瘤细胞中的作用，实验将以生理盐水 作为阴性对照。选用细胞系为A549(ATCC，U.S.A，目录号：CCL-185)，Hela，人成骨细胞瘤细 胞系U-20S(P53+，RB-;ATCC，U. S.A，目录号：HTB-96)，在24孔板培养皿中种入1 X 105肿细 胞，培养液为10%FBS DMEM，第二天吸去液体，按照0.005mg/ml的量加入实施例1制备的肽 或生理盐水，轻轻晃动液体3次，在37°C、5 %C02中孵育180分钟。加入含1 %FBS DMEM培养基 至lml，将细胞放置于37°C、5 % C02中孵育3-10天，观察细胞状态。
[0021] 实验结果如下表1所示：
[0022] 表1肽抑制肿瘤细胞生长的实验结果
[0024]由上表可以看出本发明的肽对A549和He la细胞更敏感。
[0025] 实施例3
[0026] 抑制小鼠体内肿瘤的实验：
[0027]取对数生长期的HepG2细胞细胞株，在无菌条件下制备成lX107/ml细胞悬液，以 0.1ml接种于裸鼠右侧腋窝皮下。用游标卡尺测量裸鼠移植瘤直径，待肿瘤生长至100-200mm3后将动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察被试多肽的抗肿瘤效果。肿瘤直 径的测量次数为每1天测1次。给药方式均采用尾静脉注射。阴性对照组注射等量生理盐水， 每天1次；恩度组3 . Omg/kg，每天给药1次；实施例1中肽的高中低剂量组分别以10mg/kg、 5mg/kg、lmg/kg为给药剂量，每天给药1次。试验结束后，小鼠处死，手术剥取瘤块称重。其结 果见下表2所示：
[0028]表2肽抑制小鼠体内肿瘤的实验结果(每组裸鼠数量n = 5)
【主权项】
1. 一种肽，其特征在于:所述肽具有抑制癌细胞生长活性，尤其是抑制肺癌细胞或子宫 颈癌细胞的活性。2. 根据权利要求1中所述的肽，该肽包含如下的氨基酸序列:TQAFPGRSVPYEFFLQHMNT。3. 根据权利要求1中所述的肽，该肽的氨基酸序列如下所示:TQAFPGRSVPYEFFLQHMNT。4. 一种编码根据权利要求1所述肽的核苷酸。5. 根据权利要求4所述的核苷酸，其特征在于该核苷酸序列包含 acccaggcgtttccgggccgcagcgtgccgtatgaattttttctgcagcatatgaacacc〇6. 根据权利要求4所述的核苷酸，其特征在于该核苷酸序列为 acccaggcgtttccgggccgcagcgtgccgtatgaattttttctgcagcatatgaacacc〇7. 权利要求1-3中的所述肽的应用，其特征在于该应用为抑制肿瘤细胞生长的活性。8. 根据权利要求7中所述的应用，所述的肿瘤细胞是指肺癌细胞或子宫颈癌细胞。
【文档编号】C12N15/11GK105936642SQ201610538974
【公开日】2016年9月14日
【申请日】2016年7月9日
【发明人】韩萍, 王维, 张作进, 李冉, 张华 , 黄鹏
【申请人】青岛大学