一种汉防己甲素、乙素的制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种汉防己甲素、乙素的制备方法，属于药物制备技术领域，采用亲脂性叔胺总碱经2个步骤制得，1）中压硅胶色谱柱法分离，以石油醚?乙酸乙酯?二乙胺洗脱；2）结合制备高效液相色谱法纯化，甲醇?水为流动相，最后将洗脱液分别浓缩蒸干即可，该方法具备操作方便、快捷，纯度、提取率高的优点。
【专利说明】
一种汉防己甲素、乙素的制备方法
技术领域
[0001 ]本发明涉及药物的制备方法，具体为一种汉防己甲素、乙素的制备方法。【背景技术】
[0002]汉防己别名粉防己、山乌龟、石蟾蜍、倒地拱，是防己科千金藤属植物汉防己的干燥块根，含有多糖、生物碱等多种成分，其主要有效成分为汉防己甲素和汉防己乙素。汉防己甲素具有消炎、镇痛、降血压、抗肿瘤、抗缺氧性肺动脉高压、抑制肺纤维化等作用。汉防己乙素是一种天然的钙拮抗剂，对高血压、糖尿病、肝纤维化等疾病具有治疗作用，还具有脑细胞保护作用和广谱消炎抗菌作用。现有制备汉防己甲素、乙素的方法存在工艺复杂、成产成本高，制备效率低的普遍缺点。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于克服现有方法的工艺复杂和制备成本高，提供一种新的汉防己甲素、乙素的制备方法。
[0004]为达到上述目的，采用的技术方案为:一种汉防己甲素、乙素的制备方法，包含如下步骤:1 )、中压硅胶色谱柱法分离汉防己甲素、乙素:装一支体积为49mmX 460mm的色谱柱，将亲脂性叔胺总碱装入柱中，以石油醚-乙酸乙酯-二乙胺洗脱，流速为80 mL/min，收集洗脱液并用TLC检视，合并相同组分；回收溶剂，得到两种组分Fr 1和Fr 2;2)制备高效液相色谱法纯化汉防己甲素、乙素:针对组分Fr 1和Fr 2采用YMC-pack色谱柱250*10 mmD，S-5 mi，12 nm,选择230 nm为检测波长，流速为4 mL/min，甲醇-水为流动相，进样分离，收集分离得到的两个主峰的洗脱液，将洗脱液分别浓缩蒸干，即得。
[0005]进一步，所述步骤1)中，色谱柱所用硅胶为300-400目。
[0006]进一步，所述步骤1)中，洗脱剂石油醚-乙酸乙酯-二乙胺的比例为9:1:0.1-5:1: 0.1〇
[0007]进一步，所述步骤1)中，使用旋蒸仪回收溶剂。
[0008] 进一步，所述步骤2)中，组分Fr 1和Fr 2进样前用0.22 Ml微孔滤膜过滤。[〇〇〇9] 进一步，所述步骤2 )中，甲醇、水的比例为17:3。[〇〇1〇] 进一步，所述步骤2)中，进样量为0.5 mL。
[0011]采用上述方案的有益效果为:本发明的中压硅胶色谱柱法结合制备高效液相色谱法制备的汉防己甲素、乙素具备操作方便、快捷，纯度高的优点，一种制备方法可得到两种产物，提取率较高。【附图说明】[0〇12]图1为本发明实施例制取的汉防己甲素、乙素的TLC碘化铋钾和TLC 254nm紫外显色图。[〇〇13]图2为本发明实施例制得的汉防己甲素的1H-NMR的检测图。[〇〇14]图3为本发明实施例制得的汉防己乙素的1H-NMR的检测图。【具体实施方式】
[0015]下面结合实施例及附图进一步介绍本发明，但本发明不仅限于下述实施例，可以预见本领域技术人员在结合现有技术的情况下，实施情况可能产生种种变化。
[0016]一种汉防己甲素、乙素的制备方法，包含如下步骤:1 )、中压硅胶色谱柱法分离汉防己甲素、乙素:装一支体积为49mmX 460mm的色谱柱，色谱柱所用硅胶为300-400目。将亲脂性叔胺总碱装入柱中，以石油醚-乙酸乙酯-二乙胺(9: 1:0.1-5:1:0.1)洗脱，流速为80 mL/min，收集到的洗脱液用TLC检视，组分相同的合并。用旋蒸仪回收溶剂，得到两种主要组分Fr 1和Fr 2,分别含有量较大的汉防己甲素和乙素。 [〇〇17]2)、制备高效液相色谱法纯化汉防己甲素、乙素:采用YMC-pack色谱柱(250*10mmD，S-5 wii，12 nm),选择230 nm为检测波长，流速为4 mL/min，甲醇(A)-水(B)为流动相， 不断调整甲醇(A)-水(B)比例和进样量(进样前样品过0.22 mi微孔滤膜)。直至摸索一个合适的色谱条件，最后得出甲醇、水比例为85%: 15%，进样量为0.5 mL峰型较好，分离度高。收集分离得到的两个主峰的洗脱液，其余组分弃去。收集到的洗脱液分别浓缩蒸干，取适量的产品用甲醇溶解后TLC与标准品对照，以石油醚:乙酸乙酯:二乙胺(3:2:1)作展开剂，碘化铋钾作显色剂。在254nm紫外下检视。[〇〇18]本发明制得的汉防己甲素、乙素与其对照品，斑点颜色和位置一致，成分单一。如图1所示，左侧为TLC碘化铋钾显色图，右侧为汉TLC 254nm紫外显色图，斑点从左至右依次为汉防己甲素、汉防己甲素标准品、汉防己乙素、汉防己乙素标准品。[〇〇19]如图2,制取的汉防己甲素1H-匪R结果:类白色粉末.4-匪R(400 MHz, CDC13):2.33(s，3H)， 2.41 ?2.47(m， lH)，2.52(d， /=12.0 Hz, 1H), 2.62( s， 3H), 3.19(s， 3H), 3.25(dd，/=12.0,8.0 Hz, 1H), 3.37(s，3H), 3.43?3.48(m, 1H), 3.51 ?3.56 (m, 1H), 3.75(s, 3H), 3.88(dd, /=12.0,4.0Hz, 1H), 3.93(s,3H), 5.99(s, 1H), 6.29(s, 1H), 6.30(m, 2H), 6.51(s,lH), 6.55(s, 1H), 6.81(d, /=8.0 Hz, 1H), 6.86(dd, /=8.0, 4.0 Hz, 1H), 6.87(s, 1H), 6.89(s, 1H), 7.13(dd, /=8.0, 4.0 Hz, 1H), 7.34(d, /=8.0 Hz, 1H) 〇
[0020]如图3,制取的汉防己甲素，类白色粉末? iH-NMRGOO MHz, CDC13): 2.33(s，3H), 2.41 ?2.45(m，2H)，2.56(d，/=16.0 Hz, 1H), 2.63( s，3H), 3.26(dd，/=12.0，8.0Hz, 1H)， 3.35(s， 3H), 3.48?3.54(m, 2H), 3.77(s， 3H), 3.88-3.91(m， 1H)， 3.92(s,3H), 6.05(s, 1H), 6.29(s, 1H), 6.32(m, 1H), 6.52(s,lH), 6.56(s, 1H), 6.81(d, /=8.0 Hz, 1H), 6.86(0, 1H), 6.87(o, 1H), 6.89(o, 1H), 7.13(dd, /=8.0,4.0Hz, 1H), 7.34(d, /=8.0 Hz, 1H) 〇
[0021]汉防己甲素和乙素的区别是7号位上的取代基不同，甲素为甲氧基，乙素为酚羟基。在1H-匪 R 中，3.0-4.0 之间有 4 个甲氧基信号，3.19(s, 3H，H-7)，3.37(s, 3H，H-6 ) 3.75(s，3H，H-6)，3.93(8,3扎11-12)，而在汉防己乙素中，只有3个甲氧基信号3.35(8， 3H)，3.77(s，3H)，3.92(s，3H)分别是6位，6位和12位，所以从1H-匪R可以很容易分辨出甲素和乙素。
【主权项】
1.一种汉防己甲素、乙素的制备方法，其特征包含如下步骤:1 )、中压硅胶色谱柱法分离汉防己甲素、乙素:装一支体积为49mm X 460mm的色谱柱，将 亲脂性叔胺总碱装入柱中，以石油醚-乙酸乙酯-二乙胺洗脱，流速为80 mL/min，收集洗脱 液并用TLC检视，合并相同组分；回收溶剂，得到两种组分Fr 1和Fr 2;2)制备高效液相色谱法纯化汉防己甲素、乙素:针对组分Fr 1和Fr 2采用YMC-pack色 谱柱250*10 mmD，S-5 mi，12 nm,选择230 nm为检测波长，流速为4 mL/min，甲醇-水为流动 相，进样分离，收集分离得到的两个主峰的洗脱液，将洗脱液分别浓缩蒸干，即得。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是:所述步骤1)中，色谱柱所用硅胶为300-400 目。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是:所述步骤1)中，洗脱剂石油醚-乙酸乙 酯-二乙胺的比例为9:1:0.1-5:1:0.1。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是:所述步骤1)中，使用旋蒸仪回收溶剂。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是:所述步骤2)中，组分Fr 1和Fr 2进样前 用0.22 ym微孔滤膜过滤。6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是:所述步骤2)中，甲醇、水的比例为17:3。7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是:所述步骤2)中，进样量为0.5 mL。
【文档编号】C07D491/18GK105968120SQ201610366510
【公开日】2016年9月28日
【申请日】2016年5月30日
【发明人】付少彬, 杨鸿强, 孟庆峰, 张茂生
【申请人】遵义医学院