一种吉他霉素的药物组合物及其医药用图
【专利摘要】本发明公开了一种吉他霉素的药物组合物及其医药用途，本发明提供的吉他霉素的药物组合物中含有吉他霉素和一种结构新颖的天然产物化合物(Ⅰ)，吉他霉素、化合物(Ⅰ)单独作用时，对卵巢衰退引起的睡眠障碍具有治疗作用；吉他霉素和化合物(Ⅰ)联合作用时，治疗作用进一步提高，可以开发成治疗更年期综合征以及睡眠障碍的药物，与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。
【专利说明】
一种吉他霉素的药物组合物及其医药用途
技术领域
[0001] 本发明属于生物医药领域，涉及吉他霉素的新用途，具体涉及一种吉他霉素的药 物组合物及其医药用途。
【背景技术】
[0002] 吉他霉素抗菌性能与红霉素近似，对革兰氏阳性菌，如葡萄球菌、化脓性链球菌、 绿色链球菌、肺炎链球菌、破伤风杆菌、白喉杆菌等有较强的抑制作用。对革兰氏阴性菌，如 淋球菌、百日咳杆菌等革兰氏阴性菌也有相当的抑制作用。此外，对支原体、钩端螺旋体、立 克次体有抑制作用。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于提供一种吉他霉素的药物组合物，该药物组合物中含有吉他霉 素和一种天然产物，吉他霉素和该天然产物可以协同治疗更年期综合征以及睡眠障碍。
[0004] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0005] 一种具有下述结构式的化合物（I)，
[0006]
[0007] -种吉他霉素的药物组合物，包括吉他霉素、如权利要求1所述的化合物（I)和药 学上可以接受的载体，制备成需要的剂型。
[0008] 进一步地，药学上可以接受的载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、 崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体或润滑剂。
[0009] 进一步地，所述剂型包括片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、 膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。
[0010] 上述化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将商陆粉碎，用75~85%乙醇 热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取， 分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中正丁醇萃取物用 大孔树脂除杂，先用10 %乙醇洗脱8个柱体积，再用70 %乙醇洗脱10个柱体积，收集70 %洗 脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70%乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分 离，依次用体积比为60:1、30:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步 骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为8:1、4:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯 度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百 分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集10~15个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到 化合物(I)。
[0011] 进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)用80%乙醇热回流提取，合并提取 液。
[0012] 进一步地，化合物（I)的制备方法中，所述大孔树脂为D101型大孔吸附树脂。
[0013]进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯进行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0014] 上述化合物(I)在制备治疗更年期综合征以及睡眠障碍的药物中的应用。
[0015] 上述吉他霉素的药物组合物在制备治疗更年期综合征以及睡眠障碍的药物中的 应用。
[0016] 本发明的优点:本发明提供的吉他霉素的药物组合物中含有吉他霉素和一种结构 新颖的天然产物，吉他霉素、化合物（I)单独作用时，对卵巢衰退引起的睡眠障碍具有治疗 作用；吉他霉素和化合物（I)联合作用时，治疗作用进一步提高，可以开发成治疗更年期综 合征以及睡眠障碍的药物。
【具体实施方式】
[0017] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。
[0018] 实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0019] 试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0020] 分离方法：（a)将商陆（2kg)粉碎，用80 %乙醇热回流提取（15L X 3次），合并提取 液，浓缩至无醇味（3L)，依次用石油醚（3L X 3次）、乙酸乙酯（3L X 3次）和水饱和的正丁醇 (3LX3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中 正丁醇萃取物用D101型大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱8个柱体积，再用70%乙醇洗脱10 个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70%乙醇洗脱 浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为60:1 (10个柱体积）、30:1 (8个柱体积）、15:1 (10个 柱体积)和5:1(8个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组分4用 正相硅胶进一步分离，依次用体积比为8:1 (10个柱体积）、4:1 (8个柱体积)和2:1 (6个柱体 积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反 相硅胶分离，用体积百分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集10~15个柱体积洗脱液， 洗脱液减压浓缩得到化合物(I)(纯度大于98% )。
[0021] 结构确证:册431-]\^显示[]\?1]+为111/2 265.1359，结合核磁特征可得分子式为 C15H2Q〇4,不饱和度为 6。核磁共振氢谱数据 SH(ppm，CD2Cl2,500MHz):H-la(l.ll，m)，H-lb (1.94，m)，H-2(1.97，m，2H)，H-4(5.73，br，s)，H-5(2.24，d，J=10.4Hz)，H-9(2.21，m)，H-10 (1.61，m)，H-12a(5.53，t，J = 2.4Hz)，H-12b(5.14，t，J = 2.0Hz)，H-13a(4.33，dd，J=13.4， 2.0Hz)，H-13b(4.57，dd，J=13.4,2.0Hz)，H-14(1.07，d，J = 6.4Hz)，H-15(1.85，br，s);核 磁共振碳谱数据Sc(ppm，CD2C12，125MHz): 26 · 6(CH2，1 -C)，30 · 4(CH2，2-C)，136 · 8(C，3-C)， 145.2(CH，4-C)，47.7(CH，5-C)，77.9(C，6-C)，105.4(C，7-C)，215.1(C，8-C)，42.6(CH，9- C)，40.7(CH，10-C)，146.1(C，11-C)，112.9(CH2，12-C)，67.8(CH2，13-C)，15.4(CH 3，14-C)， 18.2(013，15-〇。该化合物的氢谱中有一个乙烯基甲基信号[5(11.85(3!1，1^，8，16-15)]，一 个双峰甲基信号[6 111.07(3!1，(1，1 = 6.4抱，16-14)]，一个末端双键质子信号[6115.53(1!1，^ =2.4抱，!1-123)和5.14(1!1，^ = 2.0!^，!1-1213)]，一个含氧亚甲基质子信号[5[14.33(1!1， (1(1，了=13.4,2.0抱，!1-133)和4.57(1!1，(1(1，了=13.4,2.0抱，!1-1313)]以及一个烯属次甲基质 子信号[S H5.73(lH，br，S，H-4)]。该化合物的碳谱显示15个碳信号，其中有两组双键碳信 号，一个羰基碳信号，一个半缩酮碳信号以及两个连氧碳信号。综合高分辨质谱和核磁数据 显示，该化合物可能为一个倍半萜类化合物。查阅文献可知，该化合物和已知化合物 Lyophyllone B具有相似的结构。比较两者核磁数据可知，相较于已知化合物，新化合物中 C-8位连氧碳信号的缺失的同时多了一个酮羰基碳信号。在该化合物的HMBC谱中，Me-14与 C-8，H-9与C-8以及H-10与C-8的相关性说明多出来的酮羰基是位于C-8位的。N0ESY谱中，H-10与Me-14，H-5与H-9之间的相关性说明H-10与Me-14为β构型。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和 N0ESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如下所示，立体构型进一 步通过ECD试验确定，理论值与实验值基本一致。
[0022] 该化合物化学式及碳原子编号如下：
[0023]
[0024] 实施例2:药理作用
[0025]本实施例以去卵巢大鼠为动物模型，采用大鼠皮层脑电图描记技术，从睡眠时相 方面观察药物改善更年期失眠症的作用。
[0026] 1、材料与方法
[0027] 1.1动物
[0028] Wistar大鼠，雌性，体重200g~240g，黑龙江中医药大学实验动物中心提供。
[0029] 1.2试剂与样品
[0030] 吉他霉素购自中国药品生物制品检定所。化合物(I)自制，制备方法见实施例1。
[0031] 1.3仪器
[0032] 16道生理信号记录仪(美国Stoelting公司），大鼠脑立体定位仪（美国Stoelting 公司），有机玻璃笼（自制），恒温恒湿自动光控电子屏蔽室。
[0033] 1.4大鼠分组及模型制备
[0034] 将大鼠分为5组，每组8只，分别为空白对照组、模型对照组和吉他霉素组(80mg· kg<)、化合物（I)组(80mg · kg<)、吉他霉素与化合物（I)组合物组【40mg · kg<吉他霉素+ 40mg · kg^1化合物（I)】。模型组和药物组分别做卵巢切除手术，空白对照组做假手术。模型 对照组和给药组为筛选合格的埋好记录电极的去卵巢大鼠。术后1周，给药组分别灌胃给予 相应药物，空白对照组和模型对照组灌胃给予等容量蒸馏水，共7d。
[0035]卵巢切除手术操作方法:戊巴比妥钠腹腔注射麻醉(40mg/kg)，脑立体定位仪固 定，头部剪毛与消毒后，剪开头部皮肤，分别于冠状缝前1mm及人字缝前1mm与颅骨中线右侧 旁开1mm交叉点处，用特制的止血钳夹住2个螺丝钉入颅骨内，使之与硬脑膜接触，但不穿透 硬脑膜，为皮层电极，用于记录脑电。在两侧颈肌内分别插入银丝电极以记录肌电，4个电极 分别焊至4线微型插座上，借牙科水泥固定于颅骨上，同时无菌操作行双侧卵巢切除术。空 白对照组（即假手术组)安装电极后仅切除约lg重脂肪，不切除卵巢。术后放在特制的有机 玻璃筒内单笼饲养，去卵巢大鼠3d后进行阴道涂片，连续5d，以证明去势是否彻底。各组大 鼠每天保证明暗交替12h。
[0036] 1.5慢波睡眠时间测定实验
[0037]末次给药30min后，头部的记录电极通过微型插座和连接线连接到16道生理信号 记录仪上，记录脑电和肌电（每日9:00~17:00间进行，计算机自动连续记录8h)，记录慢波 睡眠深睡期（SWS1)和浅睡期（SWS2)时间。
[0038] 1.6快速眼球运动睡眠时间测定实验
[0039]末次给药30min后，头部的记录电极通过微型插座和连接线连接到16道生理信号 记录仪上，记录脑电和肌电（每日9:00~17:00间进行，计算机自动连续记录8h)，记录快速 眼球运动睡眠(REM)的时间及清醒(WAKE)时间。
[0040] 1.7统计学方法
[0041]实验数据用均数土标准差(X土s)表示，应用SPSS18.0版统计软件进行单因素方差 分析和t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
[0042] 2、实验结果
[0043] 2.1对自由活动去卵巢大鼠浅睡期的影响
[0044]与空白对照组比，模型对照组大鼠 SWS2显著缩短(P<0.01)，说明造模成功；与模 型对照组比，吉他霉素组、化合物（I)组大鼠 SWS2延长(P<0.05);与模型对照组相比，吉他 霉素与化合物（I)组合物组大鼠 SWS2显著延长(P<0.01)。药物对SWS1没有明显影响。结果 见表1。
[0045] 2.2对自由活动去卵巢大鼠快速眼球运动睡眠的影响
[0046]与空白对照组比，模型对照组大鼠 REM显著延长(P<0.01)，说明造模成功；与模型 对照组比，吉他霉素组、化合物（I)组大鼠 REM缩短(P<0.05);与模型对照组相比，吉他霉素 与化合物（I)组合物组大鼠 REM显著缩短(P<0.01)。药物对SWS1没有明显影响。结果见表1。
[0047] 表1对自由活动去卵巢大鼠睡眠时相的影响
[0048]
[0049] 围绝经期综合征是指妇女在绝经前后，由于卵巢功能退行性改变、雌激素水平低 下、神经内分泌功能失调、免疫功能下降所导致的以植物神经系统功能紊乱为主并伴有心 理症状的一组证候群。主要症状按系统分为精神神经系统症状、血管舒缩失调症状、泌尿系 统、生殖道及第二性征改变等。目前西医治疗上主要有激素替代法和以镇静催眠药作为主 要治疗药物，同时配合非药物治疗(如睡眠卫生教育、光照治疗、心理和认知行为治疗)等疗 法。镇静安眠药物作用特点在于使失眠者入睡快，浅睡眠时间延长，中间不易醒，但都(95% 以上)程度不等地缩短了 SWS2和REMS睡眠，从而产生了严重的不良反应，如宿醉、耐受性及 依赖型等，使其应用受到限制。随着激素替代治疗使用的不断增加，其副作用受到越来越多 的重视，如诱发乳腺癌、子宫内膜癌、肝肾功能异常等风险增加。
[0050] 本实验采用大鼠皮层脑电图描记技术，首先对去卵巢大鼠的脑电图进行描记。结 果发现，去卵巢大鼠在睡眠时相上表现为SWS2明显缩短。SWS2在整个睡眠时相中称为慢波 睡眠深睡期，是最重要的睡眠成分。据此，国内学者提出新型催眠药物应选择性地延长慢波 睡眠深睡期，同时保证REM正常比例。国内学者还研究发现，慢波失眠者有深睡眠减少甚至 缺乏，REM(快动眼睡眠)活动度和密度低改变等。多项围绝经期综合征流行病学调查表明， 我国围绝经期症状中尤以睡眠障碍发生率高。本研究结果表明，去卵巢大鼠与假手术组在 睡眠时相上表现为SWS2明显缩短，与围绝经期患者主要症状为睡眠障碍相一致，从脑电图 方面为围绝经期患者的临床表现提供了依据。
[0051] 上述结果表明，吉他霉素、化合物（I)单独作用时，对卵巢衰退引起的睡眠障碍具 有治疗作用；吉他霉素和化合物（I)联合作用时，治疗作用进一步提高，可以开发成治疗更 年期综合征以及睡眠障碍的药物。
[0052]上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 一种具有下述结构式的化合物（I)，2. -种吉他霉素的药物组合物，其特征在于:包括吉他霉素、如权利要求1所述的化合 物(I)和药学上可以接受的载体，制备成需要的剂型。3. 根据权利要求2所述的吉他霉素的药物组合物，其特征在于:药学上可以接受的载体 包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体 或润滑剂。4. 根据权利要求2所述的吉他霉素的药物组合物，其特征在于:所述剂型包括片剂、胶 囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、 栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。5. 权利要求1所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于，包含以下操作步骤：（a)将商 陆粉碎，用75~85%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯 和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步 骤(a)中正丁醇萃取物用大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱8个柱体积，再用70%乙醇洗脱 10个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70%乙醇洗 脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为60:1、30:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗 脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为8:1、4:1和2: 1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相 硅胶分离，用体积百分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集10~15个柱体积洗脱液，洗 脱液减压浓缩得到化合物(I)。6. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)用80%乙醇热回 流提取，合并提取液。7. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:所述大孔树脂为DlOl型 大孔吸附树脂。8. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)中用二氯甲烷代 替乙酸乙酯进行萃取，得到二氯甲烷萃取物。9. 权利要求1所述的化合物（I)在制备治疗更年期综合征以及睡眠障碍的药物中的应 用。10. 权利要求2~4任一所述的吉他霉素的药物组合物在制备治疗更年期综合征以及睡 眠障碍的药物中的应用。
【文档编号】A61K31/7048GK106008425SQ201610335378
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年5月15日
【发明人】刘雨
【申请人】刘雨