消旋的二氢杨梅素一水合物结晶的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种消旋的二氢杨梅素一水合物结晶。本发明采用比旋法和高效液相手性拆分法对二氢杨梅素立体构型进行了表征。利用固态分析技术，包括单晶X射线衍射、粉末X射线衍射技术(XRD)、差示量热扫描法(DSC)、热重分析法(TGA)、卡尔费休滴定法和傅里叶变换衰减全反射红外光谱法(FT?ATR)对二氢杨梅素晶型进行了表征，本发明对二氢杨梅素进行了多晶型筛选为原料药工艺开发、固体制剂、半固体、悬浮剂等剂型开发和质量控制具有重要意义。
【专利说明】
消旋的二氢杨梅素一水合物结晶
技术领域
[0001] 本发明涉及医药技术领域，具体地指一种消旋的二氢杨梅素一水合物结晶。其分 案于申请号为2014107158285的中国发明专利"二氢杨梅素五种不同晶型物质"。
【背景技术】
[0002] 二氢杨梅素(0；[117(11'01115^；^61；[11)，又称蛇葡萄素(厶1]^)61〇口8；[11)，首先由1((^&1^和 Kubota于1940年从蛇葡萄属植物楝叶玉葡萄(Ampelopsis 11161丨36；1^01丨3)的叶中分离得到， 是一种二氢黄酮醇类黄酮化合物，化学结构为3，5，7，3 '，4 '，5 六羟基-2，3-双氢黄酮醇。 二氢杨梅素广泛存在于蛇葡萄科蛇葡萄属植物中，也存在于杨梅科、杜鹃科、藤黄科、大戟 科、橄榄科、豆科、山榄科及柳科等科植物中。
[0003] 二氢杨梅素为白色或淡黄色针状结晶，水溶性较差（0.2mg/ml，25°C)，易溶于热 水，乙醇、甲醇、丙酮和DMS0中。水溶液加热状态下化学稳定性较差，其固体状态下具有较好 的化学稳定性。
[0004] 二氢杨梅素分子立体构型中存在两个手性中心，Pubchem化合物数据库中收录了 两种二氢杨梅素构型，分别为(2R，3R)构型和(2R，3S)构型，其绝对构型可分别对应右旋，左 旋和消旋二氢杨梅素。现有多数文献报道中默认其为(2R，3R)构型，如下式所示，
[0005] (2R，3R)构型的二氢杨梅素结构
[0006]
[0007] 化合物立体构型特别是手性中心可能影响化合物的有效性、毒性和临床疗效，化 合物的稳定性也可能与之有关。
[0008] 现有技术水平下，当化合物存在手性中心时，化合物手性中心的绝对构型常采用 单晶X射线衍射和圆二色光谱法确定，手性拆分法或比旋法能够区分(+ )和（±)二氢杨梅 素。
[0009] 目前已有文献（①Yoo S M，Mun S,Kim J H.Recovery and pre-purification of (+)-dihydromyricetin from Hovenia dulcis[J].Process biochemistry,2006,41(3): 567-570.②Du Q,Cai ff,Xia M,et al.Purification of( + )-dihydromyricetin from leaves extract of Ampelopsis grossedentata using high-speed countercurrent chromatograph with scale-up triple columns[J].Journal of Chromatography A, 2002,973(1):217-220.③Gao J,Liu B，Ning Z，et al.Characterization and antioxidant activity of flavonoid-rich extracts from leaves of Ampelopsis grossedentata[J] .Journal of food biochemistry,2009,33(6) :808-820.)等报道了二 氢杨梅素水溶液或乙醇水溶液中冷却结晶析出为消旋产物。经实验测定市售样品多呈消旋 构型，与以上文献报道结果一致。
[0010]根据中国药典"多晶型药品的质量控制技术与方法指导原则"征求意见稿中多晶 型的定义，水合物或溶剂合物均属于药物多晶型范畴。药物多晶型可能引起溶解度，稳定性 和机械性质等方面的差异，影响药物临床疗效和制备工艺，因此需要在研究中加以关注，但 现阶段未见有关二氢杨梅素晶型筛选的报道。经测定多种市售样品中二氢杨梅素为具有消 旋结构二水合物的晶体物质。
[0011]结晶水与晶体表面的吸附水完全不同，表面吸附水易失去，且形成吸附水对于分 子量为400左右的化合物，重量改变<0.5%，基本不影响化合物性质，吸附水对粉末的团聚 和流动性具有一定的影响，过高的吸附水含量可能导致化合物潮解。而结晶水能够直接改 变化合物晶体结构，对化合物的重量改变多2%，可能导致化合物溶解度或稳定性发生较大 变化，一般而言，水合物的溶解度小于无水物，水合物结晶在水溶液中稳定性一般高于无水 物。
[0012] 在文南犬（Xu，Z ·，Liu，B ·，Ning，Z ·，&Zhang，Y ·· Racemic dihydromyricetin dihydrate.Acta Crystallographica Section E: Structure Reports Online,63.11 (2007) :4384.)中通过冷却结晶法制得二氢杨梅素单晶，并采用单晶X射线结果表明其结构 为消旋的二水合物。
[0013] 在研究二氢杨梅素多晶型的文献中（林淑英.显齿蛇葡萄中二氢杨梅素的提取纯 化及抗氧化活性研究[D].华南理工大学，2004)，作者考察了60%乙醇和水溶液冷却结晶获 得的晶型，展示的XRD结果中横坐标为d值与本发明中的XRD明显不同，另外作者认为获得了 两种不同的晶型，但采用显微镜拍照结果仅可判断为晶癖不同，无法得出该文章中"二氢杨 梅素存在多晶型"的结论。
[0014] 在文献（Ruan L P，Yu B Y，Fu G Μ，et al · Improving the solubi 1 ity of ampelopsin by solid dispersions and inclusion complexes[J]·Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis,2005,38(3) :457-464.)中提到使用的二氢杨 梅素原料为二水合物，但未就晶体结构和化合物立体构型进行说明。
[0015] 在文献(李瑛琦.瑶族藤茶质量标准及主要活性成分药物动力学研究[D].沈阳药 科大学，2003.)中双氢杨梅黄素即为本专利中提到的二氢杨梅素，作者在对二氢杨梅素结 构确证时采用了多项手段，包括圆二色光谱，证实其为(2R，3R)构型，但未就其晶体结构给 出具体说明，仅说明其为白色针状结晶并提供了红外光谱图。但由于二氢杨梅素分子中存 在较多氢键，可形成分子内和分子间氢键，还可能含有结晶水，仅从化合物在330001^ 1处存 在宽峰，无法表明其晶体结构。
【发明内容】
[0016] 本发明所要解决的技术问题就是提供了一种消旋的二氢杨梅素一水合物结晶。
[0017] 本发明中采用比旋法及手性试剂拆分对二氢杨梅素的化合物构型进行鉴别，分别 利用(+ )和（±)二氢杨梅素原料进行多晶型筛选，采用固态分析技术如:粉末X射线衍射，差 示量热扫描，卡尔费休法，热重分析和傅里叶变换衰减全反射红外光谱法对所得晶型进行 分析。经确证，二氢杨梅素至少存在5种晶型，5种晶型在稳定性和溶解度存在差异。
[0018]为解决上述技术问题，本发明提供的一种右旋的二氢杨梅素一水合物结晶，使用 旋光仪测得其比旋度[a ]D = +32° [ c 0.20，DMS0，20 °C ]，使用粉末X射线衍射(XRD)分析，采 用&11辐射，衍射峰位置2-1116丨&(5-45°)，具有如下特征峰 :6.63°，8.07°，9.51°，11.50°， 13.26°，16.08°，18.72°，27.20°，28.58°，28.88°。
[0019]进一步地，所述右旋二氢杨梅素二水合物在波数为3000-3500^^1的区间内具有以 下特征峰：3375 333432000^1
[0020] 再进一步地，所述右旋二氢杨梅素二水合物采用卡尔费休法测定其中水分含量为 10.1±0.3%(11 = 3，11为实验次数，下同）。
[0021] 本发明还提供了一种右旋二氢杨梅素无水物结晶，使用旋光仪测得其比旋度[a]D =+36° [ c 0.20，DMS0，20 °C ]，使用粉末X射线衍射(XRD)分析，采用CuKa辐射，衍射峰位置2-Theta(5-45°)，具有如下特征峰：7.27° ,9.69° ,11.07° ,15.76° ,22.74°，26.97°。
[0022]进一步地，所述右旋的二氢杨梅素无水物结晶在波数为3000-3500(3!!^的区间内 具有以下特征峰:3581、3399、32200^1。
[0023] 再进一步地，所述右旋二氢杨梅素无水物水分含量采用卡尔费休法测定小于 0 · 3% (n = 3) 〇
[0024] 本发明还提供了一种右旋的二氢杨梅素一水合物结晶，使用旋光仪测得其比旋度 [a ]D = +34° [ c 0 · 20，DMS0，20 °C ]，使用粉末X射线衍射(XRD)分析，采用CuKa辐射，衍射峰位 置2-Theta(5-45° )，具有如下特征峰：9.98° ,11.36° ,13.20° ,14.52° ,22.74° ,22.82°， 28.32。。
[0025]进一步地，所述二氢杨梅素一水合物结晶在波数为3000-3500(^^1的区间内具有以 下特征峰：3568、3293、3083cm-1。
[0026] 再进一步地，所述右旋二氢杨梅素一水合物采用卡尔费休法测定其中水分含量 5.30±0.2%。
[0027] 本发明还提供了一种消旋的二氢杨梅素无水物结晶，使用旋光仪测得其比旋度 [a ]D = 0° [ c 0.20，DMS0，20 °C ]，使用粉末X射线衍射(XRD)分析，采用CuKa辐射，衍射峰位置 2-Theta( 5-45° )，具有如下特征峰：10.02°，13.82°，14.50°，16.08°，21.22° ,23.54°， 25.32°,25.85°,26.72°,26.79°。
[0028]进一步地，所述消旋的二氢杨梅素无水物结晶在波数为3000-3500(^^1的区间内具 有以下特征峰：3581、3399、32200^1。
[0029] 再进一步地，所述消旋的二氢杨梅素无水物结晶采用卡尔费休法测定其中水分含 量小于0.4%。
[0030] 本发明还提供了
[0031] 再进一步地，所述消旋的二氢杨梅素一水合物结晶中水分含量5.31 ±0.5%。
[0032] 一种消旋的二氢杨梅素一水合物结晶，它的比旋度[a ]D = 0° [ c 0.20，DMS0，20 °C]，使用粉末X射线衍射(XRD)分析，采用CuKa辐射，衍射峰位置2-Theta(5-45°)，具有如下 特征峰：7.97° ,10.01° ,11.17° ,14.49° ,16.70° ,25.82° ,26.73°。
[0033]进一步地，所述消旋的二氢杨梅素一水合物结晶在波数为3000-3500(^4的区间内 具有以下特征峰:3568、3293、30830^1。
[0034]再进一步地，所述消旋的二氢杨梅素一水合物结晶中水分含量5.31 ±0.1%。
[0035] 本发明中二氢杨梅素五种不同晶型物质的制备方法均属于现有技术，
[0036] 本发明制备二氢杨梅素二水合物的方法包括冷却结晶法，抗溶剂结晶法，挥发结 晶法，晶种诱导法，溶剂转晶法和固态转晶法。
[0037] 所述的冷却结晶法是利用二氢杨梅素在溶剂中溶解度随温度变化较大而设计，利 用高温溶解，降温时析出结晶获得二氢杨梅素结晶。这一过程中可通过改变溶剂，加入晶种 或改变降温速率对工艺进行控制，溶剂可为水、乙醇，甲醇、乙腈等一种或多种的混合溶 剂。
[0038] 所述的抗溶剂结晶法是指将二氢杨梅素溶解于具有较高溶解度的A溶剂中（二氢 杨梅素溶解度>lmg/ml)，再加入大量具有较低溶解度且与A溶剂混溶的B溶剂(二氢杨梅素 溶解度<〇. 2mg/ml)，可制得二氢杨梅素结晶。这一工艺过程可通过改变溶剂A和B种类或体 积，改变加入B溶剂的速度对工艺进行控制。其中A溶剂可为DMS0、甲醇、乙腈、甲酸、乙醇、 DMF及其上述溶剂两种或多种任意比例的混合溶剂中，B溶剂可为冷水等。
[0039] 所述的挥发结晶法是指将二氢杨梅素溶解于具有挥发性溶剂中，且二氢杨梅素在 溶剂中溶解度>lmg/ml，缓慢挥发制得二氢杨梅素结晶。这一工艺过程可通过改变溶剂种 类和体积，挥发速率进行控制，其中溶剂可为乙醇、甲醇、乙腈等单一溶剂或任一比例混合 溶剂。
[0040] 所述的溶剂转晶法是指取二氢杨梅素原料，可为无水物、一水合物或无定形态，加 入溶剂中，保持溶液为混悬状态，不断搅拌，通过发生溶剂介导的晶型转化或溶剂溶解后析 出，进而获得二氢杨梅素结晶，该工艺可通过改变溶剂体积，水分活度，温度和搅拌速度以 控制工艺，溶剂可水与DMS0、甲醇、乙腈、甲酸、乙醇、DMF等单一或混合溶剂。
[0041] 所述的固态转晶法是指将二氢杨梅素结晶，可为无水物和一水合物，放置于一定 温度和湿度环境下，固态二氢杨梅素通过吸附外界的水分，水分子与晶态二氢杨梅素结合 生成二氢杨梅素二水合物。该工艺过程可通过改变初始原料的晶态结构，环境温度和湿度， 放置时间加以控制。
[0042] 本发明制备二氢杨梅素无水物的方法包括加热法和研磨法。
[0043] 所述的加热法是指将二氢杨梅素原料，可为二水合物和一水合物，将化合物升温 至较高温度，失去结晶水后继续加热，二氢杨梅素无水物晶态发生转变，由于二氢杨梅素加 热失去结晶水继续加热会发生转晶，高温应在180°C左右以获得二氢杨梅素稳定的无水物 结晶。该工艺可改变温度和加热时间进行控制。
[0044] 本发明制备二氢杨梅素一水合物的方法包括冷却结晶法和挥发结晶法
[0045] 所述的挥发结晶法是指二氢杨梅素，可为二水合物和一水合物，溶解于一种具有 较高溶解度的溶剂中（二氢杨梅素溶解度>lmg/ml)，缓慢挥发至结晶析出，获得结晶。该工 艺可通过改变原料晶型，溶剂种类和体积，挥发速率加以控制。其中溶剂可为水和乙醇的混 合溶剂。
[0046] 根据中国药典"多晶型药品的质量控制技术与方法指导原则"征求意见稿，创新 药物在开发含有固体的制剂时，若药物晶型会影响药品质量，必需进行晶型的定性和定量 控制。考虑到二氢杨梅素溶液口服后在体内的吸收迅速，固态二氢杨梅素很可能由于溶解 度偏小造成生物利用度偏低，晶型往往直接影响固态药物的稳定性和溶解度，本发明对二 氢杨梅素进行了多晶型筛选为原料药工艺开发、固体制剂、半固体、悬浮剂等剂型开发和质 量控制具有重要意义。
【附图说明】
[0047]图1为右旋的二氢杨梅素二水合物与市售样品的液相色谱图；
[0048]图2为右旋二氢杨梅素二水合物的XRD衍射图；
[0049]图3为右旋二氢杨梅素二水合物的差示量热扫描图；
[0050]图4为右旋二氢杨梅素二水合物的热重分析图；
[0051 ]图5为右旋二氢杨梅素二水合物的红外光谱图；
[0052]图6为右旋二氢杨梅素无水物的液相色谱图；
[0053]图7为右旋二氢杨梅素无水物的XRD衍射图；
[0054]图8为右旋二氢杨梅素无水物的差示量热扫描图；
[0055] 图9为右旋二氢杨梅素无水物的热重分析图；
[0056] 图10为右旋二氢杨梅素无水物的红外光谱图；
[0057] 图11为右旋二氢杨梅素一水合物的液相色谱图；
[0058]图12为右旋二氢杨梅素一水合物的XRD衍射图；
[0059] 图13为右旋二氢杨梅素一水合物的差示量热扫描图；
[0060] 图14为右旋二氢杨梅素一水合物的热重分析图；
[0061 ]图15为右旋二氢杨梅素一水合物的红外光谱图；
[0062]图16为消旋的二氢杨梅素无水物的液相色谱图；
[0063]图17为消旋的二氢杨梅素无水物的XRD衍射图；
[0064] 图18为消旋的二氢杨梅素无水物的差示量热扫描图；
[0065] 图19为消旋的二氢杨梅素无水物的热重分析图；
[0066]图20为消旋的二氢杨梅素无水物的红外光谱图；
[0067]图21为消旋的二氢杨梅素一水合物的液相色谱图；
[0068]图22为消旋的二氢杨梅素一水合物的XRD衍射图；
[0069] 图23为消旋的二氢杨梅素一水合物的差示量热扫描图；
[0070] 图24为消旋的二氢杨梅素一水合物的热重分析图；
[0071 ]图25为消旋的二氢杨梅素一水合物的红外光谱图；
【具体实施方式】
[0072] 为了更好地解释本发明，以下结合具体实施例进一步阐明本发明的主要内容，但 本发明的内容不仅仅局限于以下实施例。
[0073] 实施例1右旋二氢杨梅素二水合物的制备
[0074] 取200mg左右的右旋二氢杨梅素原料，可为无水物或一水合物，溶解于2ml90-100 °C的水溶液中，保温过滤，除去滤渣后，将溶液自然冷却至室温后析出结晶，制得右旋二氢 杨梅素二水合物。
[0075]实施例2右旋二氢杨梅素无水物的制备
[0076]取200mg左右的右旋二氢杨梅素原料，可为二水合物和一水合物，在温度为160°C 下放置lh，即可获得二氢杨梅素无水物。
[0077]实施例3右旋二氢杨梅素一水合物的制备
[0078]取200mg左右的右旋二氢杨梅素原料，可为二水合物和无水物，溶解于高浓度的乙 醇溶液中，缓慢挥发至结晶析出，可获得右旋二氢杨梅素一水合物。
[0079] 实施例4消旋的二氢杨梅素无水物的制备
[0080] 取200mg左右的消旋二氢杨梅素原料，可为二水合物和一水合物，在温度为160°C 下放置lh，即可获得二氢杨梅素无水物。
[0081 ]实施例5消旋的二氢杨梅素一水合物的制备
[0082]取200mg左右的消旋二氢杨梅素原料，可为二水合物和无水物，溶解于高浓度的乙 醇溶液中，缓慢挥发至结晶析出，可获得右旋二氢杨梅素一水合物。
[0083]将上述制备的二氢杨梅素五种不同晶型物质进行性能检测 [0084] 1、分析方法：
[0085] 1.1比旋法
[0086] WZZ-1自动指示旋光仪，上海物理光学仪器厂。
[0087]测定阶段，取二氢杨梅素晶型物质5.00g溶解于25ml DMS0,测定溶液旋光度，可计 算比旋度。
[0088] 1.2高效液相色谱手性拆分法
[0089] 采用Waters e2695高效液相色谱仪，C18硅胶色谱柱，以甲醇:β环糊精溶液(其中β 环糊精18g，磷酸10ml，加水至1000ml)，流速为lml/min，柱温30°C。检测波长290nm。
[0090] 1.3元素分析法
[0091] CHNS0元素分析仪(Vario EL111)
[0092] 1.4卡尔费休水分测定法
[0093] 仪器:超精科技SKF1(A)卡尔费休水分测定仪
[0094]测定阶段，每次取100_200mg二氢杨梅素晶型物质粉末，仪器自动滴定至终点，记 录显示的水分量，计算粉末中的水分含量。
[0095] 1.5粉末X射线衍射法
[0096] 仪器:荷兰帕纳科公司PANalytical B.V.
[0097] 靶:Cu-Κα 辐射
[0098] 波长：1·5406Α
[0099] 管压：4〇KV
[0100] 管流:40mA
[0101] 步长:0.02°
[0102] 扫描范围：5-45。
[0103]扫描速度:8。/min
[0104] 测定阶段，校正仪器后，取二氢杨梅素晶型物质粉末(D5Q<100ym)放入样品测定池 中，使用玻璃载玻片压制粉末至呈平面后，放入仪器中进行测定。
[0105] 1.6差示量热扫描法
[0106] 仪器：钼金-埃尔默仪器（上海）有限公司（PerkinElmer Instruments)Diamond DSC
[0107] 范围 30-27(TC
[0108] 升温速度 HTC/min
[0109] N2 流速：50ml/min
[0110] 1.7热重分析法
[0111] 仪器：钼金-埃尔默仪器（上海）有限公司（PerkinElmer Instruments)型号Pyrisl TGA
[0112] 范围 30_50(TC
[0113] 升温速度 10°C/min
[0114] N2 流速：50ml/min
[0115] 1.8红外光谱法
[0116] 仪器：德国Bruker公司VERTEX 70
[0117] 扫描范围：45001^-40000^1
[0118] 分辨率 dcnf1
[0119] 2、右旋的二氢杨梅素二水合物
[0120] 2.1比旋法
[0121] 取二氢杨梅素5.00g，溶解于25ml的DMS0溶液中，测得自制样品旋光度为6.491 土 0.013° (n = 5)，比旋度[a]D = +32°。
[0122] 2.2高效液相色谱手性拆分法
[0123] 如图1所示市售样品呈双峰，即表明其为消旋产物，右旋的二氢杨梅素二水合物呈 单峰，且表明其为右旋二氢杨梅素二水合物中右旋二氢杨梅素纯度多98 %。
[0124] 2.3元素分析法
[0125] 右旋二氢杨梅素二水合物中C:H:0 = 50.52% :4.50% :44.98%，即分子式应为 Cl5Hl6〇lQ，BPCl5Hl2H8 · 2H20。
[0126] 2.4卡尔费休滴定法
[0127] 经滴定测得右旋的二氢杨梅素二水合物中水分含量为10.1 ±0.3% (n = 3)，即对 应2分子的水分。
[0128] 2.5粉末X射线衍射法
[0129] 右旋二氢杨梅素二水合物的XRD衍射图（如图2所示)及其对应峰值见下表1
[0130]
[0131] 12345 2.6差示量热扫描法 2 右旋二氢杨梅素二水合物在109°C (峰值，下同）、152°C和252°C存在吸热峰，在192 °C存在放热峰。其中252 °C为晶态熔化过程，109 °C和152 °C对应阶段均为失去结晶水过程 (图 3)。 3 2.7热重分析法 4 二水合物在60 °C即开始失去结晶水，在150 °C结晶水完全失去。达到252 °C溶化后， 二氢杨梅素分子随着温度进一步升高发生了分解(图4)。 5 2.8.红外光谱法
[0137]由于分子内氢键和分子间氢键能够反映在波数为3000-350001^1间，右旋二氢杨梅 素二水合物在此区间内具有以下特征峰:3375、3334、32000^1 (图5)。
[0138] 3、右旋二氢杨梅素无水物
[0139] 3.1比旋法
[0140]取右旋二氢杨梅素无水物5.00g，溶解于25ml的DMS0溶液中，测得自制样品旋光度 为7.221±0.015°(11 = 5)，比旋度[€[]〇 = +36°。
[0141 ] 3.2高效液相色谱手性拆分法
[0142] 采用高效液相手性拆分表明其为右旋二氢杨梅素无水物中右旋的二氢杨梅素纯 度彡98%(图6)。
[0143] 3.3元素分析法
[0144] 右旋二氢杨梅素无水物C:H:0 = 56.26% :3.74% :40.00%，即分子式应为 Cl5Hl2〇8〇
[0145] 4.卡尔费休水分测定法
[0146] 测得右旋二氢杨梅素无水物水分含量小于0.3 % (η = 3)。
[0147] 5.粉末X射线衍射法
[0148] 右旋二氢杨梅素无水物的XRD衍射图（图7)及其对应峰值见下表2
[0149] 12345
2 3.6差示量热扫描法 3 右旋二氢杨梅素无水物恪点为253.9°C (以峰值计），在低于其恪点的加热的过程 中不存在任何吸热和放热峰(图8)。 4 3.7热重分析法 5 右旋二氢杨梅素无水物在60_240°C范围内，加热不会减失任何重量，达到252°C晶 体溶化，继续加热二氢杨梅素分子发生了分解(图9)。
[0155] 3.8红外光谱法
[0156]由于分子内氢键和分子间氢键可反映在波数为3000-3500(^4间，无水物具有以下 特征峰：3581、3399、3220cm-1 (图 10)。
[0157] 4、右旋二氢杨梅素一水合物
[0158] 4.1比旋法
[0159] 取右旋二氢杨梅素一水合物5.00g，溶解于25ml的DMS0溶液中，测得右旋二氢杨梅 素一水合物旋光度为6.835±0.020° (n = 5)，比旋度[a]D = +34°。
[0160] 4.2高效液相色谱手性拆分法
[0161] 采用高效液相手性拆分表明其为右旋二氢杨梅素一水合物中右旋的二氢杨梅素 纯度彡98%(图11)。
[0162] 4.3元素分析法
[0163] 测得右旋二氢杨梅素一水合物C: Η: 0 = 53.25 % : 4.14% : 42.61 %，即分子式应为 Cl5Hl4〇9〇
[0164] 4.4卡尔费休水分测定法
[0165] 测得右旋二氢杨梅素一水合物中水分含量5.30 ±0.2%。
[0166] 4.5粉末X射线衍射法
[0167] 右旋二氢杨梅素一水合物的XRD衍射图（图12)及其对应峰值见下表3
[0168]
[0169]
123456789101112 4.6差示量热扫描法 2 右旋二氢杨梅素一水合物测定中有3个吸热峰，峰值分别对应116.80 °C、146.78°C 和252.72°C，其中116.80°C对应失去一分子结晶水，146.78°C对应晶态的改变，252.72°C对 应二氢杨梅素无水物的熔点（图13)。 3 4.7热重分析法 4 右旋二氢杨梅素一水合物在60-240°C范围内，减失重量约为5%，即对应一分子结 晶水，达到252°C溶化后，二氢杨梅素分子发生了分解(图14)。 5 4.8红外光谱法 6
[0175]由于分子内氢键和分子间氢键可反映在波数为3000-350001^1间，右旋二氢杨梅素 一水合物具有以下特征峰:3568、3293、3083cm-1 (图15)。 7 5、消旋的二氢杨梅素无水物 8 5.1比旋法 9 取消旋二氢杨梅素无水物5.00g，溶解于25ml的DMS0溶液中，测得消旋的二氢杨梅 素无水物旋光度为〇°，比旋度[a]D = 〇°。 10 5.2高效液相色谱手性拆分法 11 采用高效液相手性拆分表明消旋二氢杨梅素无水物存在两个峰，且两个峰面积基 12 本相等，可知测得旋光度为〇的原因，在于含有等量的右旋二氢杨梅素和左旋二氢杨梅素 (图 16)。
[0181] 5.3元素分析法
[0182] 消旋的二氢杨梅素无水物C:H:0 = 56.27% :3.75% :39.98%，即分子式应为 Cl5Hl2〇8〇
[0183] 5.4卡尔费休水分测定法
[0184] 测得消旋的二氢杨梅素无水物中水分含量小于0.4%。
[0185] 5.5.粉末X射线衍射法消旋的二氢杨梅素一水合物的XRD衍射图（图17)及其对应 峰值见下表4
[0186]
[0193] 由于分子内氢键和分子间氢键可反映在波数为3000-3500(^4间，无水物具有以下 特征峰：3581、3399、3220cm- 1 (图 20)。
[0194] 6.、消旋的二氢杨梅素一水合物
[0195] 6.1比旋法
[0196] 取消旋二氢杨梅素一水合物5.00g，溶解于25ml的DMS0溶液中，测得自制样品旋光 度为0°，比旋度[a]D = 0°。
[0197] 6.2高效液相色谱手性拆分法
[0198] 采用高效液相手性拆分表明消旋二氢杨梅素一水合物存在两个峰，且两个峰面积 基本相等，可知其旋光度为〇的原因，在于可能含有等量的右旋二氢杨梅素和左旋二氢杨梅 素(图21)。
[0199] 6.3元素分析法
[0200] 消旋的二氢杨梅素一水合物C:H:0 = 53.23% :4.15% :42.62%，即分子式应为 Cl5Hl4〇9,即 Cl5Hl2〇8 · H20。
[0201] 6.4.卡尔费休水分测定法
[0202]测得消旋的二氢杨梅素一水合物水分含量5.31 ±0.1 %。
[0203] 6.5粉末X射线衍射法
[0204] 右旋二氢杨梅素一水合物的XRD衍射图（图22)及其对应峰值见下表5
[0205]
[0206]
[0207] 6.6差不量热扫描法
[0208]消旋的二氢杨梅素一水合物物失去结晶水后，熔点为253.9°C (以峰值计）（图23)。 [0209] 6.7热重分析法
[0210]消旋的二氢杨梅素一水合物在60-240°C范围内，减失重量约为5%，即对应一分子 结晶水，达到252°C溶化后，二氢杨梅素分子发生了分解(图24)。
[0211] 6.8红外光谱法
[0212] 由于分子内氢键和分子间氢键可反映在波数为3000-3500(^1间，一7K合物具有以 下特征峰:3568、3293、3083cm- 1，与右旋的二氢杨梅素基本一致（图25)。
[0213] 7、二氢杨梅素五种晶型的吸湿性比较
[0214] 采用饱和盐溶液在密封容器中在25°C制得不同湿度，分别为：11%(氯化锂），23% (草酸钾），33%(氯化镁），43%(碳酸钾），52%(硝酸镁），67%(氯化铜），75%(氯化钠）， 86% (氯化钾），93%(硝酸镁）。分别取制得的二氢杨梅素二水合物、无水物和一水合物，每 种晶型取3份，每份样品为200-300mg，放置于已知重量的扁形量瓶中。将扁形量瓶放入密封 容器内，放置3天后称重，分析数据后可获得不同晶型开始吸水的湿度，五种晶型分别为:右 旋二氢杨梅素二水合物>93%，右旋二氢杨梅素无水物和消旋二氢杨梅素无水物为23%， 右旋二氢杨梅素一水合物和消旋的二氢杨梅素一水合物为33%。
[0215] 其它未详细说明的部分均为现有技术。尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描 述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经 创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。
【主权项】
1. 一种消旋的二氢杨梅素一水合物结晶，特征在于：它的比旋度[a]D = 〇°[c 0.20， DMS0,20°C]，使用粉末X射线衍射(XRD)分析，采用CuKa辐射，衍射峰位置2-Theta(5-45°)， 具有如下特征峰：7.97° ,10.01° ,11.17° ,14.49° ,16.70° ,25.82° ,26.73°。2. 根据权利要求2所述消旋的二氢杨梅素一水合物结晶，其特征在于:所述消旋的二氢 杨梅素一水合物结晶在波数为3000-3500(31^ 1的区间内具有以下特征峰：3568、3293、 3083cm_1〇3. 根据权利要求1或2所述消旋的二氢杨梅素一水合物结晶，其特征在于:所述消旋的 二氢杨梅素一水合物结晶中水分含量5.31 ±0.1 %。
【文档编号】C07D311/32GK106008439SQ201610277767
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2014年12月1日
【发明人】施春阳, 方建国, 王文清, 熊微, 陈婧, 刘旭, 王晨光, 侯小龙
【申请人】华中科技大学同济医学院附属同济医院