一种提高阿维拉霉素有效组分a、b含量的结晶方法
【专利摘要】本发明公开了一种提高阿维拉霉素有效组分A、B含量的结晶方法，具体涉及生物制药领域。本发明包括如下步骤：(1)菌丝提取：将阿维拉霉素发酵液经过预处理，过滤，烘干得阿维拉霉素干菌丝；(2)浸渍液提取：将步骤(1)中的阿维拉霉素干菌丝在一定温度下加入有机溶剂搅拌，过滤得浸提液，将其减压蒸馏得到浓缩浸渍液；(3)成品：将步骤(2)中的浓缩浸渍液脱色，低温结晶得到阿维拉霉素成品。本发明解决了现有生产技术中存在的阿维拉霉素成品有效组分A、B含量低、收率低、工艺时间长等缺点，本发明有效的提高阿维拉霉素有效组分A、B的含量，并且操作简单，工艺时间短，生产过程无污染，溶剂可回收再利用，为企业节约了生产成本。
【专利说明】
一种提高阿维拉霉素有效组分A、B含量的结晶方法
技术领域
[0001]本发明涉及生物制药领域，具体而言，涉及一种提高阿维拉霉素有效组分A、B含量的结晶方法。
【背景技术】
[0002]阿维拉霉素，是由绿色产色链霉菌TU57发酵生产的甲基羟基甲氧基苯甲酸(DCIEA)的一种酯，属于正糖霉素族的寡聚糖类抗生素。阿维拉霉素已被证实对多种革兰氏阳性菌有抑制作用，包括一些致病菌，如万古霉素拮抗的肠道球菌，甲氧苯青霉素拮抗的葡萄球菌以及青霉素拮抗的肺炎双球菌，但对革兰氏阴性菌的抑制效果差。此外，阿维拉霉素对大肠杆菌有一种间接作用，即它可以影响细菌鞭毛及细菌的粘附，并通过抑制细菌粘附于宿主粘膜细胞表面而达到抑制细菌的感染，从而抑制了疾病的感染。阿维拉霉素为中性，呈无色针状结晶，熔点为181-182Γ，微溶于水，易溶于丙酮、丙醇、乙酸乙酯、苯和乙醚等有机溶剂中。阿维拉霉素约有A、A,、B、C、D1、D2、E、F、G、H、1、J、K等十多个组分。在这些组分中，以阿维拉霉素A(分子式为C61H88C12032 ;分子量1404.24)的活性最高，特别是对梭菌、链球菌和杆菌有效；其次是阿维拉霉素B (分子式为C59H84C12032 ;分子量1376.19)对葡萄球菌的活性最高；其它种类作用很小，且含量很低。以上所有类型都是阿维拉霉素A的衍生物。
[0003]阿维拉霉素中只有阿维拉霉素A的活性最高，阿维拉霉素B次之，其他都是阿维拉霉素A的衍生物，并且没有药用价值，它们结构相似，所以很难将其完全分离，是阿维拉霉素提取的一大难点。
[0004]阿维拉霉素正处于国外技术垄断阶段，国内企业还处于一种技术探索阶段。在专利号201210544526.7中介绍了提取阿维拉霉素纯度达到98 %的实验方法，但其收率偏低不适合工业化生产。现有技术国内生产的阿维拉霉素产品主要通过一种有机溶剂浸提、结晶的方式获得，该方法得到的成品含量较低，杂质较高，不能满足市场的质量标准，从而影响了企业效益。
【发明内容】
[0005]本发明所要解决的技术问题是提供一种采用混合溶剂浸提，减压浓缩，低温结晶，提高阿维拉霉素产品有效组分A和B含量以及收率低，适宜工业化生产的结晶方法。
[0006]为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是一种提高阿维拉霉素有效组分A、B含量的结晶方法，其特征在于:包括如下步骤:
[0007](I)菌丝提取
[0008]将阿维拉霉素发酵液经过预处理，过滤，烘干得阿维拉霉素干菌丝；
[0009](2)浸渍液提取
[0010]将步骤(I)中的阿维拉霉素干菌丝在一定温度下加入有机溶剂搅拌，过滤得浸提液，将其减压蒸馏得到浓缩浸渍液；
[0011](3)成品
[0012]将步骤(2)中的浓缩浸渍液脱色，低温结晶得到阿维拉霉素成品。
[0013]进一步的技术方案在于，所述预处理为将阿维拉霉素发酵液的pH调整至
7.0-15.0 ;所述预处理为将阿维拉霉素发酵液的pH调整至8.0-10.0。
[0014]进一步的技术方案在于，所述有机溶剂为多种溶剂的混合物。
[0015]进一步的技术方案在于，所述有机溶剂为二氯甲烷、氯仿、丙酮、丁酮、甲醇、乙醇、石油醚、正己烷中的至少两种。
[0016]进一步的技术方案在于，所述有机溶剂的成分互溶，且其溶解度依次降低。
[0017]进一步的技术方案在于，所述浸提液提取过程的温度为20-35°C ;所述浸提液提取过程的温度为25-30 °C。
[0018]进一步的技术方案在于，所述减压蒸馏温度为30_8(TC ;所述减压蒸馏温度为40-60。。。
[0019]进一步的技术方案在于，所述的脱色是使用活性炭脱色，其活性炭用量为浸提液质量的0.05% -0.5% ;其活性炭用量为浸提液质量的0.1% -0.4%。
[0020]进一步的技术方案在于，所述低温结晶温度为0-10°C ;所述低温结晶温度为2-7 Γ。
[0021]进一步的技术方案还在于，所述浸渍液体积为浸提液的1/3-4/5 ;所述浸渍液体积为浸提液的2/5-3/4。
[0022]采用上述技术方案所产生的有益效果在于:本发明针对现有生产技术中存在的阿维拉霉素成品有效组分A、B含量低、收率低、工艺时间长等缺点提供了一种提高阿维拉霉素有效组分A、B含量的结晶方法，该方法采用混合溶剂进行浸提，加活性炭脱色除杂质，低温结晶的方法。该方法可以有效的提高阿维拉霉素有效组分A、B的含量，并且操作简单，工艺时间短，生产过程中没有污水的产生，溶剂可以进行回收再利用，为企业节约了生产成本。
【具体实施方式】
[0023]下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0024]在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
[0025]本发明包括如下步骤:
[0026](I)菌丝提取
[0027]将阿维拉霉素发酵液经过预处理，过滤，烘干得阿维拉霉素干菌丝；
[0028](2)浸渍液提取
[0029]将步骤(I)中的阿维拉霉素干菌丝在一定温度下加入有机溶剂搅拌，过滤得浸提液，将其减压蒸馏得到浓缩浸渍液；
[0030](3)成品
[0031]将步骤(2)中的浓缩浸渍液脱色，低温结晶得到阿维拉霉素成品。
[0032]优选的，所述预处理为将阿维拉霉素发酵液的pH调整至7.0-15.0 ;所述预处理为将阿维拉霉素发酵液的pH调整至8.0-10.00
[0033]优选的，所述有机溶剂为多种溶剂的混合物。
[0034]优选的，所述有机溶剂为二氯甲烷、氯仿、丙酮、丁酮、甲醇、乙醇、石油醚、正己烷中的至少两种。
[0035]优选的，所述有机溶剂的成分互溶，且其溶解度依次降低。
[0036]优选的，所述浸提液提取过程的温度为20-35°C ;所述浸提液提取过程的温度为25-30。。。
[0037]优选的，所述压蒸馏温度为30_80°C ;所述减压蒸馏温度为40_60°C。
[0038]优选的，所述的脱色是使用活性炭脱色，其活性炭用量为浸提液质量的
0.05% -0.5% ;其活性炭用量为浸提液质量的0.1% -0.4%。
[0039]优选的，所述低温结晶温度为0-10°C ;所述低温结晶温度为2-7°C。
[0040]优选的，所述浸渍液体积为浸提液的1/3-4/5 ;所述浸渍液体积为浸提液的2/5-3/4o
[0041]实施例一
[0042]将阿维拉霉素发酵液pH值用2M/L的氢氧化钠溶液调至9.0，经过板框过滤，得到阿维拉霉素湿菌丝，湿菌丝进行烘干，得到阿维拉霉素干菌丝，
[0043]采用含量法测定阿维拉霉素含量为12%，采用相关物质法测得阿维拉霉素干菌丝中含有有效组分阿维拉霉素A含量68%，阿维拉霉素B含量13%。
[0044]取阿维拉霉素含量12%的干菌丝50g，加入250mL的有机混合溶剂(成分为二氯甲烷和无水甲醇，二氯甲烷和无水甲醇混合比例为2:1)，在28°C下搅拌60分钟，过滤得到浸提液。
[0045]浸提液在50°C条件下，减压蒸馏浓缩至2/5体积，将浓缩液加入活性炭，其用量为浸提液质量的0.1%，得到脱色液，将脱色液以5°C /h进行搅拌降温结晶，降至2°C时，停止降温，搅拌30分钟，得到阿维拉霉素成品5.lg。
[0046]阿维拉霉素成品采用相关物质法进行含量检测，阿维拉霉素A含量78%，阿维拉霉素B含量16%，收率85%。
[0047]实施例二
[0048]将阿维拉霉素发酵液pH值用2M/L的氢氧化钠溶液调至8.0，经过板框过滤，得到阿维拉霉素湿菌丝，湿菌丝进行烘干，得到阿维拉霉素干菌丝，
[0049]采用含量法测定阿维拉霉素含量为10.80%，采用相关物质法测得阿维拉霉素干菌丝中含有有效组分阿维拉霉素A含量65%，阿维拉霉素B含量11%。
[0050]取阿维拉霉素含量12%的干菌丝50g，加入250mL的有机混合溶剂(成分为二氯甲烷和石油醚，二氯甲烷和石油醚混合比例为2:1)，在30°C下搅拌60分钟，过滤得到浸提液。
[0051]浸提液在45°C条件下，减压蒸馏浓缩至2/5体积，将浓缩液加入活性炭，其用量为浸提液质量的0.2%，得到脱色液，将脱色液以5°C /h进行搅拌降温结晶，降至4°C时，停止降温，搅拌30分钟，得到阿维拉霉素成品4.7g。
[0052]阿维拉霉素成品采用相关物质法进行含量检测，阿维拉霉素A含量68.6%，阿维拉霉素B含量13.5%，收率87%。
[0053]实施例三
[0054]将阿维拉霉素发酵液pH值用2M/L的氢氧化钠溶液调至10.0，经过板框过滤，得到阿维拉霉素湿菌丝，湿菌丝进行烘干，得到阿维拉霉素干菌丝，
[0055]采用含量法测定阿维拉霉素含量为11.4%，采用相关物质法测得阿维拉霉素干菌丝中含有有效组分阿维拉霉素A含量66.4%,阿维拉霉素B含量12.8%。
[0056]取阿维拉霉素含量11.4%的干菌丝50g，加入250mL的有机混合溶剂(成分为氯仿和无水甲醇，氯仿和无水甲醇混合比例为3:1)，在25°C下搅拌60分钟，过滤得到浸提液。
[0057]浸提液在60°C条件下，减压蒸馏浓缩至2/5体积，将浓缩液加入活性炭，其用量为浸提液质量的0.3%，得到脱色液，将脱色液以5°C /h进行搅拌降温结晶，降至6°C时，停止降温，搅拌30分钟，得到阿维拉霉素成品4.9g。
[0058]阿维拉霉素成品采用相关物质法进行含量检测，阿维拉霉素A含量71.3%，阿维拉霉素B含量13.9%，收率86%。
[0059]实施例四
[0060]将阿维拉霉素发酵液pH值用2M/L的氢氧化钠溶液调至8.0，经过板框过滤，得到阿维拉霉素湿菌丝，湿菌丝进行烘干，得到阿维拉霉素干菌丝，
[0061]采用含量法测定阿维拉霉素含量为11.03%，采用相关物质法测得阿维拉霉素干菌丝中含有有效组分阿维拉霉素A含量66.4%,阿维拉霉素B含量11.42%。
[0062]取阿维拉霉素含量12%的干菌丝50g，加入250mL的有机混合溶剂(成分为二氯甲烷和无水乙醇，二氯甲烷和无水乙醇混合比例为2:1)，在28°C下搅拌60分钟，过滤得到浸提液。
[0063]浸提液在55°C条件下，减压蒸馏浓缩至3/4体积，将浓缩液加入活性炭，其用量为浸提液质量的0.3%，得到脱色液，将脱色液以5°C /h进行搅拌降温结晶，降至6°C时，停止降温，搅拌30分钟，得到阿维拉霉素成品5.lg。
[0064]阿维拉霉素成品采用相关物质法进行含量检测，阿维拉霉素A含量69.8%，阿维拉霉素B含量13.6%，收率92%。
[0065]综上所述，可知本发明针对现有生产技术中存在的阿维拉霉素成品有效组分A、B含量低、收率低、工艺时间长等缺点提供了一种提高阿维拉霉素有效组分A、B含量的结晶方法，该方法采用混合溶剂进行浸提，加活性炭脱色除杂质，低温结晶的方法。该方法可以有效的提高阿维拉霉素有效组分A、B的含量，并且操作简单，工艺时间短，生产过程中没有污水的产生，溶剂可以进行回收再利用，为企业节约了生产成本。
【主权项】
1.一种提高阿维拉霉素有效组分A、B含量的结晶方法，其特征在于:包括如下步骤: (1)菌丝提取 将阿维拉霉素发酵液经过预处理，过滤，烘干得阿维拉霉素干菌丝； (2)浸渍液提取 将步骤(I)中的阿维拉霉素干菌丝在一定温度下加入有机溶剂搅拌，过滤得浸提液，将其减压蒸馏得到浓缩浸渍液； (3)成品 将步骤(2)中的浓缩浸渍液脱色，低温结晶得到阿维拉霉素成品。2.根据权利要求1所述的一种提高阿维拉霉素有效组分A、B含量的结晶方法，其特征在于:所述预处理为将阿维拉霉素发酵液的PH调整至7.0-15.0 ;所述预处理为将阿维拉霉素发酵液的PH调整至8.0-10.003.根据权利要求1所述的一种提高阿维拉霉素有效组分A、B含量的结晶方法，其特征在于:所述有机溶剂为多种溶剂的混合物。4.根据权利要求3所述的一种提高阿维拉霉素有效组分A、B含量的结晶方法，其特征在于:所述有机溶剂为二氯甲烷、氯仿、丙酮、丁酮、甲醇、乙醇、石油醚、正己烷中的至少两种。5.根据权利要求3或4所述的一种提高阿维拉霉素有效组分A、B含量的结晶方法，其特征在于:所述有机溶剂的成分互溶，且其溶解度依次降低。6.根据权利要求1所述的一种提高阿维拉霉素有效组分A、B含量的结晶方法，其特征在于:所述浸提液提取过程的温度为20-35°C ;所述浸提液提取过程的温度为25-30°C。7.根据权利要求1所述的一种提高阿维拉霉素有效组分A、B含量的结晶方法，其特征在于:所述压蒸馏温度为30-8(TC ;所述减压蒸馏温度为40-60°C。8.根据权利要求1所述的一种提高阿维拉霉素有效组分A、B含量的结晶方法，其特征在于:所述的脱色是使用活性炭脱色，其活性炭用量为浸提液质量的0.05% -0.5% ;其活性炭用量为浸提液质量的0.1% -0.4%。9.根据权利要求1所述的一种提高阿维拉霉素有效组分A、B含量的结晶方法，其特征在于:所述低温结晶温度为O-1OtC ;所述低温结晶温度为2-rc。10.根据权利要求1所述的一种提高阿维拉霉素有效组分A、B含量的结晶方法，其特征在于:所述浸渍液体积为浸提液的1/3-4/5 ;所述浸渍液体积为浸提液的2/5-3/4。
【文档编号】C07H17/04GK106008624SQ201510476860
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2015年8月6日
【发明人】程豪
【申请人】河北圣雪大成制药有限责任公司