一种微球菌微胶囊及其在祛痘化妆品中的应用
【专利摘要】本发明公开了一种微球菌粉,所述微球菌粉的制备方法为活化微球菌,在添加有抗冻因子的培养基中扩大培养,6000?8000r/min离心收集菌泥,以菌泥重与甘氨酸?盐酸缓冲液体积比为1:1.5?2(g/ml)添加缓冲液,以2.5℃/min的预冻速度在?22~?30℃预冻2?4h,然后?40~?50℃真空冷冻干燥即得微球菌粉。本发明还公开一种含所述微球菌粉的微胶囊及其制备方法。本发明又公开一种含微球菌微胶囊的祛痘精华液。本发明的有益效果为能够直接给痤疮患者补充低于正常水平的微球菌,进而降低痤疮患者面部痤疮丙酸杆菌的数量,平衡痤疮患者面部菌群数量,达到显著治疗痤疮的效果,亦可防止痤疮的复发。
【专利说明】
-种微球菌微胶囊及其在怯痘化妆品中的应用
技术领域
[0001 ]本发明属于微胶囊技术领域,具体设及一种微球菌微胶囊及其在桂痘化妆品中的 应用。
【背景技术】
[0002] 瘦疮是一种累及毛囊皮脂腺的慢性炎症性皮肤疾病,好发于青少年,被人们称作 "美丽青春的杀手",是美容皮肤科最常见病种之一。其发病部位主要分布在面颊、胸部、肩 背部等皮脂腺分泌旺盛部位,临床表现为粉刺、炎性丘疹、脈瘤、结节、囊肿及不同程度的癒 痕等。瘦疮的确切病因及发病机制尚不十分明确,一般认为与内分泌因素(特别是雄性激 素)、毛囊皮脂腺导管角化异常、微生物感染、饮食、情绪、某些化学因子及药物等有关。其 中,微生物在瘦疮的发病过程中具有重要作用,尤其瘦疮丙酸杆菌长期被认为是瘦疮的首 要病原微生物。因此,目前治疗瘦疮很大程度上是围绕抑菌杀菌而采用糖皮质类激素、孕激 素、西咪替下等抗生素,尚无从平衡脸部皮肤表面正常菌群出发的瘦疮治疗产品。
[0003] 微胶囊技术是利用天然或合成的高分子成膜材料把分散均匀的固体微粒、液体或 气体包载形成微小固体颗粒的技术,其中包裹在微胶囊内部的物质成为忍材或囊屯、,微胶 囊外部的包载膜称为壁材或囊壁、壳体。始于20世纪30年代,由大西洋海岸渔业公司提出制 备鱼肝油-明胶微囊的方法。由于具有能够改变物料的状态、质量、体积和性能,保护敏感成 分,增强稳定性,控制忍材释放,降低或掩盖不良味道、降低挥发性,隔离组分等功能,微胶 囊技术广泛应用于各行各业各业,在化妆品行业,护肤品中含大量营养成分,由于不能被皮 肤吸收,导致皮肤表面化妆品营养过剩,造成"皮肤氧化",进而引发干燥、敏感、皱纹、色斑、 暗疮等皮肤问题。将微胶囊应用于化妆品可提高其中对环境敏感成分的稳定性;降低某些 成分的刺激作用;亦可在体内缓慢释放功能性成分,W达到长效的目的;同时将容易发生化 学反应的组分应用于同一体系中;掩蔽某些组分的不良气味等。当前微胶囊技术在化妆品 中的应用主要集中在将动植物提取液、酶制剂、氨基酸、维生素、蛋白质、颜料、香料及其他 活性成分用壁材包裹起来,基于微生物为忍材的微胶囊也主要集中在微胶囊益生菌,W其 它微生物为忍材的微胶囊报导甚少。
[0004] 中国专利CN 103160489 A《日化微胶囊益生菌的制备方法及应用》公开了一种制 备日化微胶囊益生菌的方法,该方法的步骤包括:首先,将Ξ种益生菌嗜酸乳杆菌、植物乳 杆菌和鼠李糖乳杆菌经发酵,离屯、得到湿菌体后,乳化、预冻和冻干,然后,将所得菌粉用明 胶与TG酶的交联物完成第一包埋,最后,用水溶性变性淀粉、麦芽糖和麦芽糊精的混合物完 成第二包埋。此方法制备所得的微胶囊益生菌,包埋率达到87%。可用于抑制瘦疮、缓解过 敏症状W及淡化色斑类日化品中。
[0005] 中国期刊曲剑华,姚卫海,王萍,等;座疮中医证型与面部菌群关系临床和实验研 究[J];中西医结合;2006年10期第100页公开瘦疮患者疮面检出的细菌主要为瘦疮丙酸杆 菌、金黄色葡萄球菌及表皮葡萄球菌,检出率显著高于正常人,而正常菌微球菌低于正常 人。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于针对现有技术中瘦疮治疗过分依赖抗生素,刺激性大,容易引 发副作用,亦缺乏基于面部正常寄居菌群为忍材的微胶囊而提供一种微球菌微胶囊及其在 桂痘化妆品中的应用,W期达到平衡瘦疮患者面部菌群,根治瘦疮的效果。
[0007] 微球菌(Micrococcus)是需氧生长的革兰氏阳性球菌,在自然界普遍存在,如空 气、±壤、水、植物、食品等,也在哺乳类动物皮肤上栖息生长。微球菌通常被认为是无害的 腐生菌,寄居在人体皮肤和呼吸道黏膜表面,在暴露的脸、手臂、腿部可检出。微球菌的菌落 大多呈现黄色、澄色或枯红色,显微镜下菌体较葡萄球菌大,呈四联或成对排列,立体感强。
[0008] 为实现上述发明目的,本发明采用的技术方案如下:
[0009] -种微球菌粉,所述微球菌粉的制备方法为活化微球菌,在添加有抗冻因子的培 养基中扩大培养,6000-8000r/min离屯、收集菌泥,W菌泥重与甘氨酸-盐酸缓冲液体积比为 1:1.5-2(旨/1111)添加缓冲液,^2.5°(:/111111的预冻速度在-22~-30°(:预冻2-地,然后-40~- 50°C真空冷冻干燥即得微球菌粉。
[0010] 在其中一个实施例,所述抗冻因子为〇.28%-〇.46%的化(:1、0.05%-0.07%甜菜 碱、0.16%-0.18%甘露醇中的至少一种。
[00川在其中一个实施例,所述抗冻因子为0.37%NaCl ,0.05%甜菜碱,17%甘露醇。
[0012] 在其中一个实施例,所述菌泥为处于稳定期的微球菌。
[0013] -种微球菌微胶囊,由忍材和复合壁材组成,所述忍材为微球菌粉;所述复合壁材 为1:2.5-3的壳聚糖与甲基纤维素。
[0014] -种微球菌微胶囊的制备方法,所述制备方法为将上述微球菌活菌菌粉Wl:5~8 的比例与复合壁材混合,加入0.2~0.4%的甲基丙締酸,乳化揽拌均匀,于30-37°C恒溫箱 中交联反应35-50mins后取出,得第一层包埋菌粉,所述复合壁材为1:2.5-3的壳聚糖与甲 基纤维素;将第一层包埋菌粉与低聚木糖按1:1.2-2.8的质量比混匀,12000~1400化pm分 散6-8min,乳化均质压力为45~55MPa,时间为35-50mins, W175~180°C的进风溫度,88°C 的出风溫度喷雾干燥,完成第二层包埋即得微球菌微胶囊。
[0015] 在其中一个实施例,所述微球菌微胶囊在制备桂痘化妆品中的应用。
[0016] -种含微球菌微胶囊的桂痘精华液,所述桂痘精华液包括如下重量百分比的组 分:
[0017] 下二醇:2.8-3.%,
[001 引卡波姆:0.08-0.12wt %,
[0019] 氨氧化钟:0.035-0.039wt %,
[0020] 甜菜碱:2.8-3.%,
[0021] 黄築树皮提取物:2.7-3.%,
[0022] 所述微球菌微胶囊:1.8-2.%,
[0023] 北美金缕梅提取物:9.5-10.5wt%,
[0024] 烟酷胺:3.6-4.4wt %,
[0025] PEG/PPG-14A二甲基酸:0.8-1.%,
[0026] 甲基异嚷挫嘟酬:0.06-0.08wt %,
[0027] 去离子水:余量。
[0028] 与现有技术相比,本发明的有益效果为通过制备高活力的微球菌粉,W微胶囊的 形式添加至桂痘化妆品中,能够直接给瘦疮患者补充低于正常水平的微球菌,进而降低瘦 疮患者面部瘦疮丙酸杆菌的数量,平衡瘦疮患者面部菌群数量,达到显著治疗瘦疮的效果, 亦可防止瘦疮的复发。
【附图说明】
[0029] 附图1抗冻因子NaCl对制得的微球菌粉菌活的影响
[0030] 附图2抗冻因子甜菜碱对制得的微球菌粉菌活的影响
[0031] 附图3抗冻因子甘露醇对制得的微球菌粉菌活的影响
[0032] 附图4收集的菌泥中微球菌的生长阶段对制得的微球菌粉菌活的影响
【具体实施方式】
[0033] 为使本技术领域的技术人员能更好地理解本发明的技术方案,下面结合实施例对 本发明技术方案进行详细说明。
[0034] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明,均为常规方法。
[0035] 下述实施例中所用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。
[0036] 1.抗冻因子、收集的菌泥中微球菌的生长阶段对制得的微球菌粉菌活的影响
[0037] 实施例1
[003引活化微球菌,在分别添加有0.19% ,0.28% ,0.37% ,0.46%及0.55%化C1抗冻因 子的培养基中扩大培养,60(K)r/min离屯、收集菌泥,W菌泥重与甘氨酸-盐酸缓冲液体积比 为l:1.5(g/ml)添加甘氨酸一盐酸缓冲液,W2.5°C/min的预冻速度在-22°C预冻化,然后- 40°C真空冷冻干燥即得微球菌活菌菌粉,测菌活,结果见图1。
[0039] 从图1可知当抗冻因子化C1的添加量为0.19%、0.55%时,制得的微球菌菌粉菌活 都仅为1 X l〇6cfu/g,显著低于化C1添加量为0.28 %,0.37 %,0.46 %时达到10 X 106cfu/g数 量级的菌活。由此可见,抗冻因子NaCl的最适添加范围为0.28%-0.46%。
[0040] 实施例2
[0041 ] 活化微球菌,在分别添加有0.04 %,0.05 %,0.06 %,0.07 %及0.08 %甜菜碱抗冻 因子的培养基中扩大培养7000r/min离屯、收集菌泥,W菌泥重与甘氨酸-盐酸缓冲液体积比 为1:1.75(g/ml)添加甘氨酸一盐酸缓冲液,W2.5°C/min的预冻速度在-26°C预冻化,然后- 45°C真空冷冻干燥即得微球菌活菌菌粉,测菌活,结果见图2。
[0042] 从图2可知当抗冻因子甜菜碱的添加量为0.04%、0.08%时,制得的微球菌菌粉菌 活都为3 X 106cfu/g,显著低于甜菜碱添加量为0.05%、0.06%、0.07 %分别为12 X 106cfu/ g、14X106cfu/g、12X106cfu/g的菌活数,由此可见,抗冻因子甜菜碱的最适添加范围为 0.05%-0.07%。
[0043] 实施例3
[0044] 活化微球菌,在分别添加有0.15% ,0.16% ,0.17% ,0.18%及0.19%甘露醇抗冻 因子的培养基中扩大培养,80(K)r/min离屯、收集菌泥,W菌泥重与甘氨酸-盐酸缓冲液体积 比为l:2(g/ml)添加甘氨酸一盐酸缓冲液,W2.5°C/min的预冻速度在-30°C预冻地,然后- 50°C真空冷冻干燥即得微球菌活菌菌粉,测菌活,结果见图3。
[0045] 从图3可知当抗冻因子甘露醇的添加量为0.15%、0.18%时,制得的微球菌菌粉菌 活都为3 X 106cfu/g,显著低于甘露醇添加量为0.16%、0.17%、0.18%分别为10 X 106cfu/ g、llX106cfu/g、12X106cfu/g的菌活数,由此可见,抗冻因子甘露醇的最适添加范围为 0.16%-0.18%。
[0046] 实施例4
[0047] 活化微球菌,在添加有0.06 %甜菜碱抗冻因子的培养基中扩大培养,700化/min离 屯、分别收集延迟期,对数期,稳定期及衰亡期菌泥,W菌泥重与甘氨酸-盐酸缓冲液体积比 为1:1.75(g/ml)添加甘氨酸一盐酸缓冲液,W2.5°C/min的预冻速度在-26°C预冻化,然后- 45°C真空冷冻干燥即得微球菌活菌菌粉,测菌活,结果见图4。
[0048] 从图4可知收集的菌泥中微球菌的生长阶段为对数期时制得的微球菌粉菌活达到 50 X 106cfu/g,显著高于收集的菌泥中微球菌处在延迟期、稳定期、衰亡期时分别为5 X 106cfu/g、8X106cfu/g、3X106cfu/g的菌活。由此可见,收集处于对数生长阶段的微球菌制 得的微球菌粉菌活最高。
[0049] 2.正交实验确定最佳的抗冻因子组合 [00加]实施例5
[0051]表1Ξ因素 Ξ水平(33)正交实验表
[0化2]
[0化3]表2Ξ因素 Ξ水平(33)正交实验结果
[0化4]
[Ο化5]
[0056] 从表2正交实验的结果极差R值分析可知各抗冻因子对制得的微球菌粉菌活的的 影响大小为B>C>A,即甜菜碱>甘露醇>NaCl。最优组合为A2B1C2,即化C1为0.37%,甜菜 碱为0.05%,甘露醇为0.17%,菌活高达10008620cfu/g。
[0057] 3.微球菌微胶囊的制备 [0化引实施例6
[0059] 将实施例1制得的微球菌粉W1: 5的比例与复合壁材混合,加入0.2%的甲基丙締 酸,乳化揽拌均匀,于30°C恒溫箱中交联反应35mins后取出,得第一层包埋菌粉,所述复合 壁材为1:2.5的壳聚糖与甲基纤维素;将第一层包埋菌粉与低聚木糖按1:1.2的质量比混 匀,12000巧m分散6min,乳化均质压力为45MPa,时间为35mins,W 175°C的进风溫度,88°C的 出风溫度喷雾干燥,完成第二层包埋即得微球菌微胶囊。
[0060] 实施例7
[0061] 将实施例2制得的微球菌粉:6.5的比例与复合壁材混合,加入0.3%的甲基丙 締酸,乳化揽拌均匀,于33.5°C恒溫箱中交联反应42.5mins后取出,得第一层包埋菌粉,所 述复合壁材为1: 2.75的壳聚糖与甲基纤维素;将第一层包埋菌粉与低聚木糖按1:2的质量 比混匀,13000巧m分散7min,乳化均质压力为50MPa,时间为42.5mins,W177.5°C的进风溫 度,88 °C的出风溫度喷雾干燥,完成第二层包埋即得微球菌微胶囊。
[0062] 实施例8
[0063] 将实施例3制得的微球菌粉Wl:8的比例与复合壁材混合,加入0.4%的甲基丙締 酸,乳化揽拌均匀,于37°C恒溫箱中交联反应50mins后取出,得第一层包埋菌粉,所述复合 壁材为1:3的壳聚糖与甲基纤维素;将第一层包埋菌粉与低聚木糖按1:2.8的质量比混匀, HOOOrpm分散8min,乳化均质压力为55MPa,时间为50mins,W180°C的进风溫度,88°C的出 风溫度喷雾干燥,完成第二层包埋即得微球菌微胶囊。
[0064] 含及不含微球菌微胶囊的桂痘精华液制备,其中实施例9-11微球菌微胶囊分别为 实施例6-8所得。
[0065] 表3实施例9-11及对比例1含及不含微球菌微胶囊桂痘精华液的配方
[0066]
[0067]
[0068] 如表3所示配方桂痘精华液的制备步骤为:先用A相中下二醇将卡波姆分散好,加 入乳化锅,然后加入水,揽拌升溫至80°C,保溫揽拌15min,均质3min后降溫;降溫至70°C加 入溶解好的B相,继续揽拌降溫;降溫至40°C,依次加入C相各原料,揽拌至溶解完全,对照样 板检测合格后出料即可。
[0069] W上实施例及对比例中所制备的桂痘精华液均经过皮肤安全性测试,证实对皮肤 无刺激,不会引发红斑、脱屑、刺痛及灼热等不良反应,可安屯、使用。
[0070] 随机挑选100名瘦疮志愿者,分成5组,其中实施例12-14瘦疮志愿者使用的是实施 例9-11制备的桂痘精华液、实施例15瘦疮志愿者使用的是对比例1制备的桂痘精华液、实施 例16瘦疮志愿者使用的是市售含杀菌成分的桂痘精华液,每日早晚各1次,连续使用20d,统 计使用前后瘦疮志愿者脸部的瘦疮丙酸杆菌数及微球菌数,结果见表4;停用1个月后,统计 各瘦疮志愿者的复发情况,结果见表5。
[0071] 中国期刊曲剑华,姚卫海,王萍,等;座疮中医证型与面部菌群关系临床和实验研 究[J];中西医结合;2006年10期第101页公开正常人面部瘦疮丙酸杆菌数为10686个/cm2, 瘦疮患者疮面丙酸杆菌数为53801个/cm2。中国会议论文何丽莎,路永红,高诗燕;寻常瘦疮 与正常人皮肤微生物的对比研究[A];全国中西医结合皮肤性病学术年会论文汇编[C]; 2014年公开96例正常人中有89例面部皮肤表面分离出223株细菌(阳性率92.71 % )。主要是 瘦疮丙酸杆菌67株(30.04% )、表皮葡萄球菌44株(19.72 % )、微球菌35株(15.7 % ),头状葡 萄球菌21株(9.42%)、颗粒丙酸杆菌6株(2.69%)。由此可知正常人面部瘦疮丙酸杆菌与微 球菌的数量比例为1.91:1。
[0072] 表4实施例12-16瘦疮志愿者使用桂痘精华液前后瘦疮丙酸杆菌、微球菌数量的变 化
[0073]
[0074] 从表2可知使用前瘦疮患者疮面瘦疮丙酸杆菌的数量均在58045个/cm2 W上,微球 菌的数量均在3009W上,但是实施例12-14瘦疮患者使用实施例9-11制备的桂痘精华液后 疮面瘦疮丙酸杆菌数量减少(10520-10623个/cm2)、微球菌的数量增加巧547-5592个/cm 2), 均接近正常人面部瘦疮丙酸杆菌(10686个/cm2)、微球菌的数量(5624个/cm2),而实施例15、 16的瘦疮患者分别使用未添加本发明含微球菌微胶囊的桂痘精华液、含杀菌成分的市售桂 痘精华液后疮面瘦疮丙酸杆菌数、微球菌数均远离正常人面部瘦疮丙酸杆菌、微球菌的数 量,瘦疮丙酸杆菌与微球菌间的数量比例亦失衡,由此可见本发明含微球菌微胶囊的桂痘 精华液可为瘦疮患者的疮面直接补充微球菌,同时降低瘦疮丙酸杆菌的数量,平衡瘦疮患 者疮面瘦疮丙酸杆菌与微球菌的比例。
[0075] 若使用后瘦疮消失,则为痊愈;若使用后瘦疮减少,则为有效;若使用后瘦疮略减 少或无变化,则为无效。
[0076] 表5实施例12-16瘦疮志愿者停用桂痘精华液1个月后瘦疮的复发状况
[0077]
[0078] 从表5可知实施例12-14瘦疮患者使用实施例9-11制备的桂痘精华液后有18个患 者痊愈,痊愈人数远高于实施例15、16的瘦疮患者使用未添加本发明含微球菌微胶囊的桂 痘精华液、含杀菌成分的市售桂痘精华液后分别为2个、1个的痊愈数。虽然实施例15、16的 瘦疮患者使用未添加本发明含微球菌微胶囊的桂痘精华液、含杀菌成分的市售桂痘精华液 后有效人数分别达到16个、18个,但停用1个月后复发人数也达到16个、18个,而实施例12- 14瘦疮患者使用实施例9-11制备的桂痘精华液后均未复发,由此可见,本发明含微球菌微 胶囊的桂痘精华液可显著治疗瘦疮,防复发。
【主权项】
1. 一种微球菌粉,其特征在于,所述微球菌粉的制备方法为活化微球菌,在添加有抗冻 因子的培养基中扩大培养,6000-8000r/min离心收集菌泥,以菌泥重与甘氨酸-盐酸缓冲液 体积比为l:1.5-2(g/ml)添加缓冲液,以2.5°C/min的预冻速度在-22~-30°C预冻2-4h,然 后-40~-50°C真空冷冻干燥即得微球菌活菌菌粉。2. 根据权利要求1所述微球菌粉,其特征在于,所述抗冻因子为0.28 %-0.46 %的NaCl、 0.05%-0.07%甜菜碱、0.16%-0.18%甘露醇中的至少1种。3. 根据权利要求2所述微球菌粉,其特征在于,所述抗冻因子为0.37%NaCl,0.05%甜 菜碱,17%甘露醇。4. 根据权利要求1-3任一项所述微球菌粉,其特征在于,所述菌泥为处于稳定期的微球 菌。5. -种微球菌微胶囊,其特征在于,所述微球菌微胶囊由芯材和复合壁材组成,所述芯 材为权利要求1-4任一项所述微球菌粉;所述复合壁材为1:2.5-3的壳聚糖与甲基纤维素。6. 根据权利要求5所述微球菌微胶囊的制备方法,其特征在于,所述制备方法为将上述 微球菌活菌菌粉以1:5~8的比例与复合壁材混合,加入0.2~0.4%的甲基丙烯酸,乳化搅 拌均匀,于30-37°C恒温箱中交联反应35-50mins后取出,得第一层包埋菌粉,所述复合壁材 为1:2.5-3的壳聚糖与甲基纤维素;将第一层包埋菌粉与低聚木糖按1:1.2-2.8的质量比混 匀,12000~14000rpm分散6-8min,乳化均质压力为45~55MPa,时间为35-50mins,以175~ 180 °C的进风温度,88 °C的出风温度喷雾干燥,完成第二层包埋即得微球菌微胶囊。7. 根据权利要求5或6所述微球菌微胶囊在制备祛痘化妆品中的应用。8. -种含微球菌微胶囊的祛痘精华液,所述祛痘精华液包括如下重量百分比的组分: 丁二醇:2.8-3.2wt%, 卡波姆:0.08-0.12wt%, 氢氧化钾:〇 · 035-0 · 039wt %, 甜菜喊:2 · 8-3 · 2wt %, 黄檗树皮提取物:2 · 7-3 · 2wt %, 权利要求5或6所述微球菌微胶囊:1.8-2.2wt %, 北美金缕梅提取物:9.5-10.5wt %, 烟醜胺:3 · 6-4 · 4wt %, PEG/PPG-14/7二甲基醚:0 · 8-1 · 2wt %, 甲基异噻唑啉酮:0.06-0.08wt %, 去离子水:余量。
【文档编号】A61K8/44GK106011024SQ201610546935
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年7月11日
【发明人】不公告发明人
【申请人】广州丹奇日用化工厂有限公司