一种检测蚕砂制品抗霉菌性能的方法
【专利摘要】本发明公开了一种检测蚕砂制品抗霉菌性能的方法；步骤如下：1、在营养琼脂培养基斜面划线接种，作为斜面保藏菌；2、无菌水倒入步骤1培养好的斜面菌种中，洗出孢子液倒入含玻璃珠的无菌三角瓶中，得到霉菌孢子液；3、霉菌孢子液离心，去上清，加入无菌水离心洗涤，制备接种霉菌孢子液；4、制作加样袋；5、将加样袋加入无菌水预润湿作为空白对照品，加样袋中分别加入抗菌和非抗菌的蚕砂制品，加入无菌水预润湿作为待测样品及对照样品；6、将待测样品、对照样品及空白对照品分别置于涂布有接种霉菌孢子液的琼脂平板表面，并取接种霉菌孢子液滴于三个样品上；7、记录蚕砂制品的抗菌性能。通过上述方式，本发明操作简单、速度快、使用成本低。
【专利说明】
一种检测蚕砂制品抗霉菌性能的方法
技术领域
[0001]本发明涉及蚕砂制品抗霉菌性能，特别是一种操作简单、速度快、使用成本低的检测蚕砂制品抗霉菌性能的方法。
【背景技术】
[0002]蚕砂，又名蚕矢，多产于江苏、浙江、四川等地，为蚕蛾科昆虫家蚕蛾幼虫的干燥粪便。性味甘温，有燥湿、祛风、化浊、活血定痛之功效。民间用蚕砂作枕芯的填充物，有清肝明目、养目、养脑、治高血压、耳鸣等功效，婴幼儿使用效果更为明显。蚕砂枕采用优质蚕砂为原料，保持头部温度均恒。做到真正凉头热脚、健康睡眠，老年人使用可祛风除湿、聪耳明目、和胃化浊。无毒无副作用，常年有效，老幼咸宜。医学证明，蚕砂枕能祛风除湿，凉爽止汗，祛署退火，健脑益智。特别有益于青少年和幼儿枕出健康周正的头型。但蚕砂制品易发生霉变，霉变后的产品不仅影响其使用功效，严重时亦会对人体产生危害，敏感体质的人可能会产生过敏反应等。因此，蚕砂制品生产厂家将蚕砂用作填充物时一般多采用抗菌抑菌处理以防止其发生霉变，以期使得蚕砂制品更好的应用于人们日常生活中。
[0003]然而，要对蚕砂制品进行抗菌检测，判断其抗菌性能及功效，目前没有现存的检测方法可以采用，最终无法实施蚕砂制品的抗菌性能评估。为此，本发明反复探索了各种抗菌检测实验方法，并进行了对比试验，最终采用琼脂平皿法实现了对蚕砂制品的抗菌性能检测。蚕砂大小不一，呈颗粒状，因而导致其检测操作困难，针对这一问题，本发明采用与蚕砂材料类同的家蚕丝绸制成蚕砂试验套，将蚕砂放入套中完成了蚕砂的抗菌检测试验，为蚕砂抗菌制品的开发以及对现有的各种抗菌广品的检测提供基础，对建立香砂制品抗菌性能的标准检测方法具有现实意义。
【发明内容】
[0004]本发明主要解决的技术问题是提供一种操作简单、速度快、使用成本低的检测蚕砂制品抗霉菌性能的方法。
[0005]为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是一种检测蚕砂制品抗霉菌性能的方法，具体步骤如下:
步骤I:霉菌冻干菌菌粉中加入培养液溶解得到菌悬液，用移液枪吸取少许菌悬液接种至培养基斜面上，28°c 土TC培养7?14天，此斜面可在2?8°C下保存I个月，作为斜面保藏菌；步骤2:将含有0.05%非离子分散剂的无菌水倒入步骤I培养好的斜面菌种中，用无菌接种环轻刮菌种表面洗出孢子，把斜面上洗下的霉菌孢子液倒入含玻璃珠的无菌三角瓶中，得到霉菌孢子液；
步骤3:将步骤2得到的霉菌孢子液离心，去上清，加入无菌水离心洗涤3次;加入营养液稀释至霉菌孢子浓度为I X 16?5 X 16个/mL，作为接种霉菌孢子液；
步骤4:剪取真丝圆片，两片对称缝制真丝布袋作为加样袋，真丝边缘不超过0.3mm，121°〇湿热灭菌15min; 步骤5:在步骤4中的加样袋中分别加入抗菌蚕砂制品及非抗菌蚕砂制品，加入含有0.05%非离子润湿剂的无菌水预润湿，使蚕砂的湿度平衡至90%以上，作为待测样品及对照样品；
步骤6:将步骤4中的加样袋加入含有0.05%非离子润湿剂的无菌水预润湿，作为抗菌性能检测的空白对照品；
步骤7:取步骤3制备的接种霉菌孢子液均匀涂布于琼脂平板培养基中，将步骤5中的待测样品、对照样品及步骤6中的空白对照品分别置于琼脂平板表面，用吸管在每个待测样品、对照样品及空白对照品上分别均匀滴加少量霉菌孢子液，28°C 土 1°C培养7?14天，每个样品至少3个平行试验；
步骤8:在培养期间，记录各样品表面霉菌生长情况，将待测样品、对照样品和空白对照品培养后的各平行试验的抑菌圈直径的平均值分别记为数值A、B和C，按下式计算抗菌蚕砂制品的抗菌率:抗菌率=(B-A)/BX 100%，获得蚕砂制品的抗菌性能，以百分率计。
[0006]优选的，试验时所选用的菌株为黑曲霉ATCC16404或球毛壳菌ATCC6205或绳状青霉 ATCC10509或绿色木霉 ATCC28020 ；
优选的，步骤4中的真丝加样袋为GB/T7568.6-2002标准真丝制品，直径3.8 ± 0.5cm，真丝边缘不超过0.3mm。
[0007]本发明的有益效果是:本发明所述的一种检测蚕砂制品抗霉菌性能的方法，操作简单、速度快、使用成本低;通过利用溶出性抗菌剂可以离开蚕砂制品进入培养皿的特性，采用在蚕砂制品上接种测试菌的方法，利用肉眼观察蚕砂制品的微生物生长情况，来检测蚕砂制品的抗霉菌性能，从而实现对蚕砂制品的抗霉菌性能的评估。适用于抗菌剂整理的香砂制品的抗霉菌性能评估。
【具体实施方式】
[0008]下面对本发明的较佳实施例进行详细阐述，以使本发明的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本发明的保护范围做出更为清楚明确的界定。
[0009]本发明实施例包括:
一种检测蚕砂制品抗霉菌性能的方法，具体步骤如下:
步骤1:霉菌冻干菌菌粉中加入培养液溶解得到菌悬液，用移液枪吸取少许菌悬液接种至培养基斜面上，28°C 土 TC培养7?14天，此斜面可在2?8°C下保存I个月，作为斜面保藏菌；试验时应采用3~10代内转接的新鲜霉菌培养物。
[0010]步骤2:将含有0.05%非离子分散剂的无菌水倒入步骤I培养好的斜面菌种中，用无菌接种环轻刮菌种表面洗出孢子，把斜面上洗下的霉菌孢子液倒入含玻璃珠的无菌三角瓶中，得到霉菌孢子液；
步骤3:将步骤2得到的霉菌孢子液离心，去上清，加入无菌水离心洗涤3次;加入营养液稀释至霉菌孢子浓度为I X 106-5 X 16个/mL，制备接种霉菌孢子液；
步骤4:剪取真丝圆片，两片对称缝制真丝布袋作为加样袋，真丝边缘不超过0.3mm，121°〇湿热灭菌15min;
步骤5:在步骤4中的加样袋中分别加入抗菌蚕砂制品及非抗菌蚕砂制品，加入含有
0.05%非离子润湿剂的无菌水预润湿，使蚕砂的湿度平衡至90%以上，作为待测样品及对照样品；
步骤6:将步骤4中的加样袋加入含有0.05%非离子润湿剂的无菌水预润湿，作为抗菌性能检测的空白对照品；
步骤7:取步骤3制备的接种霉菌孢子液均匀涂布于琼脂平板培养基中，将步骤5中的待测样品、对照样品及步骤6中的空白对照品分别置于琼脂平板表面，在每个待测样品、对照样品及空白对照品上分别均匀滴加0.2 ± 0.0ImL霉菌孢子液，28 °C ± 1°C培养7?14天，每个样品至少3个平行试验；
步骤8:在培养期间，记录各样品表面霉菌生长情况，将待测样品、对照样品和空白对照品培养后的各平行试验的抑菌圈直径的平均值分别记为数值A、B和C，按下式计算抗菌蚕砂制品的抗菌率:抗菌率=(B-A)/BX 100%，获得蚕砂制品的抗菌性能，以百分率计。
[0011 ]本实施例的具体实施步骤如下，(I)黑曲霉冻干菌菌粉中加入0.5mL察式培养液溶解得到菌悬液，用移液枪吸取0.1mL菌悬液接种至察氏培养基斜面上，28°C ± I °C培养7d;加入1mL含有0.05%分散剂吐温80的无菌水，刮取菌种表面洗出孢子，倒入含玻璃珠的无菌三角瓶中，得到黑曲霉孢子液；
(2)4000r/min离心黑曲霉孢子液30min，去上清，加入50mL含有0.05%分散剂吐温80的无菌水离心洗涤3次，去上清，加入无机盐营养液稀释至霉菌孢子浓度为3 X 16个/mL，得到黑曲霉接种孢子液；
(3)采用GB/T7568.6-2002标准真丝制品，剪取直径为3.8±0.5cm的真丝圆片，两片对称缝制真丝加样袋，真丝边缘不超过0.3mm，121°C湿热灭菌15min;
(4)在加样袋中分别加入1.5g抗菌蚕砂及1.5g非抗菌蚕砂，加入含有0.05%非离子润湿剂的无菌水预润湿，作为待测样品及对照样品。以不加蚕砂的加样袋作为空白对照品。
[0012](5)用涂布棒将ImL浓度为3 X 16个/mL黑曲霉孢子液均匀分散于含3%葡萄糖的无机盐琼脂平板表面，将待测样品、对照样品及空白对照品分别置于琼脂平板表面，在每个待测样品、对照样品及空白对照品上分别均匀滴加0.2mL的霉菌孢子液，每个样品3个平行试验，28°C ± 10C培养7?14d，得到抗菌性能检测结果。
[0013]本发明的有益效果是:本发明所述的一种检测蚕砂制品抗霉菌性能的方法，操作简单、速度快、使用成本低;通过利用溶出性抗菌剂可以离开蚕砂制品进入培养皿的特性，采用在蚕砂制品上接种测试菌的方法，利用肉眼观察蚕砂制品的微生物生长情况，来检测蚕砂制品的抗霉菌性能，从而实现对蚕砂制品的抗霉菌性能的评估。适用于抗菌剂整理的香砂制品的抗霉菌性能评估。
[0014]以上仅是本发明的具体应用范例，对本发明的保护范围不构成任何限制。凡采用等同变换或者等效替换而形成的技术方案，均落在本发明权利保护范围之内。
【主权项】
1.一种检测蚕砂制品抗霉菌性能的方法，其特征在于:具体步骤如下: 步骤I:霉菌冻干菌菌粉中加入培养液溶解得到菌悬液，用移液枪吸取少许菌悬液接种至培养基斜面上，28°c 土TC培养7?14天，此斜面可在2~8°C下保存I个月，作为斜面保藏菌； 步骤2:将含有0.05%非离子分散剂的无菌水倒入步骤I培养好的斜面菌种中，用无菌接种环轻刮菌种表面洗出孢子，把斜面上洗下的霉菌孢子液倒入含玻璃珠的无菌三角瓶中，得到霉菌孢子液； 步骤3:将步骤2得到的霉菌孢子液离心，去上清，加入无菌水离心洗涤3次;加入营养液稀释至霉菌孢子浓度为I X 16?5 X 16个/mL，作为接种霉菌孢子液； 步骤4:剪取真丝圆片，两片对称缝制真丝布袋作为加样袋，真丝边缘不超过0.3mm，121°〇湿热灭菌15min; 步骤5:在步骤4中的加样袋中分别加入抗菌蚕砂制品及非抗菌蚕砂制品，加入含有0.05%非离子润湿剂的无菌水预润湿，使蚕砂的湿度平衡至90%以上，作为待测样品及对照样品； 步骤6:将步骤4中的加样袋加入含有0.05%非离子润湿剂的无菌水预润湿，作为抗菌性能检测的空白对照品； 步骤7:取步骤3制备的接种霉菌孢子液均匀涂布于琼脂平板培养基中，将步骤5中的待测样品、对照样品及步骤6中的空白对照品分别置于琼脂平板表面，用吸管在每个待测样品、对照样品及空白对照品上均匀滴加少量霉菌孢子液，28°C 土 TC培养7?14天，每个样品至少3个平行试验； 步骤8:在培养期间，记录各样品表面霉菌生长情况，将待测样品、对照样品和空白对照品培养后的各平行试验的抑菌圈直径的平均值分别记为数值A、B和C，按下式计算抗菌蚕砂制品的抗菌率:抗菌率=(B-A)/BX 100%，获得蚕砂制品的抗菌性能，以百分率计。2.根据权利要求1所述的检测蚕砂制品抗霉菌性能的方法，其特征在于:所述菌株选用黑曲霉ATCC16404或球毛壳菌ATCC6205或绳状青霉ATCC10509或绿色木霉ATCC28020。3.根据权利要求1所述的检测蚕砂制品抗霉菌性能的方法，其特征在于:步骤4中的真丝加样袋为GB/T7568.6-2002标准真丝制品，直径3.8 ±0.5cm，真丝边缘不超过0.3mm。
【文档编号】C12Q1/18GK106047983SQ201610420403
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年6月14日
【发明人】王毅婧, 董斌
【申请人】苏州市职业大学