新型紫杉类化合物及其制备方法和应用
【专利摘要】本发明公开了一种新型紫杉类化合物及其制备方法和应用，该新型紫杉类化合物的制备方法具有以下步骤：先对吉西他滨中的两个羟基进行保护，然后与氯甲酸烷基酯进行缩合反应，接着脱除羟基保护基团，得到中间体G1；先对中间体G1其中一个羟基进行保护，然后再对另一个羟基进行保护，接着脱除第一个羟基脱保基团，得到中间体G2；将7,10?二（三氯乙氧基甲酰）多西他赛与二酸酐反应得到中间体D1；将中间体D1与中间体G2进行缩合反应得到中间体D2；对中间体D2进行羟基脱保护得到目标产物。本发明的新型紫杉类化合物毒性较小，抗肿瘤活性较高，尤其是对于胃肠道癌、肺癌、乳腺癌以及白血病等实体肿瘤具有很好的抑制率。
【专利说明】
新型紫杉类化合物及其制备方法和应用
技术领域
[0001] 本发明涉及一种新型紫杉类化合物及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 现有的紫杉类化合物大多存在毒性较大、抗肿瘤活性较低等不足，尤其是对于胃 肠道癌、肺癌、乳腺癌以及白血病等实体肿瘤的抑制效果不佳。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于解决现有技术的不足，提供一种毒性较小、抗肿瘤活性较高、尤 其是对于胃肠道癌、肺癌、乳腺癌以及白血病等实体肿瘤具有很好的抑制率的新型紫杉类 化合物及其制备方法和应用。
[0004] 实现本发明上述目的的技术方案是:一种新型紫杉类化合物，其结构如通式（I)所 示：
(1)0
[0005] 通式（I)中，R1为心~(：6烷基或取代烷基，优选为乙基、正丁基或者正己基，更优选 为正丁基。
[0006] η为0~6,优选为0~2,更优选为1。
[0007] 上述新型紫杉类化合物的制备方法具有以下步骤： S1:先对吉西他滨中的两个羟基进行保护，然后与氯甲酸烷基酯进行缩合反应，接着脱 除羟基保护基团，得到中间体G1; S2:先对步骤S1制得的中间体G1其中一个羟基进行保护，然后再对另一个羟基进行保 护，接着脱除第一个羟基脱保基团，得到中间体G2; S3:将7,10-二(三氯乙氧基甲酰)多西他赛与二酸酐反应得到中间体D1; S4:将步骤S3制得的中间体D1与步骤S2制得的中间体G2进行缩合反应得到中间体D2; S5:对步骤S4制得的中间体D2进行羟基脱保护得到目标产物。
[0008] 上述步骤si中采用的羟基保护试剂为六甲基二硅氮烷、六甲基二硅氧烷、三甲基 氯硅烷或者三甲基碘硅烷，优选为六甲基二娃氮烧。
[0009] 上述步骤si中所述的氯甲酸烷基酯为氯甲酸甲酯、氯甲酸乙酯、氯甲酸正丙酯、氯 甲酸异丙酯、氯甲酸正丁酯、氯甲酸正戊酯、氯甲酸正己酯中的一种，优选为氯甲酸乙酯、氯 甲酸正丁酯或者氯甲酸正己酯，更优选为氯甲酸正丁酯。
[0010] 上述步骤S2中第一个羟基保护采用的保护试剂为叔丁基二甲基氯硅烷、异丙基二 甲基氯硅烷、乙基二甲基氯硅烷或者三甲基氯硅烷，优选为叔丁基二甲基氯硅烷。
[0011] 上述步骤S2中第二个羟基保护采用的保护试剂为氯甲酸-2,2,2-三氯乙酯。
[0012]上述步骤S3中采用的二酸酐为丁二酸酐、戊二酸酐或者己二酸酐，优选为戊二酸 酐。
[0013] 上述步骤S4中采用的缩合试剂为1-(3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐 (EDCI)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)、二环己基碳二亚胺(DCC)或者 N，N-二异丙基碳二亚胺(DIC)，优选为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐或者1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐，更优选为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚 胺盐酸盐。
[0014] 上述步骤S4的缩合反应优选在4-二甲氨基吡啶的存在下进行。
[0015] 上述步骤S5的羟基脱保护是在锌粉和乙酸钠的存在下进行的。
[0016] 上述新型紫杉类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0017] 上述肿瘤为血液瘤或者恶性实体瘤；具体来说，上述肿瘤包括结肠癌、直肠癌、胃 癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、肝癌、食道癌、脑肿瘤、卵巢癌、子宫癌、肾癌、头颈癌、 皮肤癌、膀胱癌、外阴癌、睾丸瘤、绒毛癌、生殖细胞瘤、恶性淋巴瘤、白血病和多发性骨髓 瘤;优选包括结肠癌、直肠癌、胃癌、肺癌、乳腺癌以及白血病。
[0018] -种药物组合物，其含有作为活性成分的上述新型紫杉类化合物以及一种或者多 种药用载体/赋形剂。
[0019] 上述药物组合物的剂型为注射剂型或者是口服剂型，其中注射剂型为溶液型注射 剂、混悬型注射剂、乳剂型注射剂、或注射用无菌粉末；口服剂型为片剂、散剂、颗粒剂、胶囊 剂、微丸制剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、糖浆剂或者酏剂。
[0020] 本发明具有的积极效果：本发明的新型紫杉类化合物毒性较小（MTD剂量只有 250mg/kg)，抗肿瘤活性较高，尤其是对于胃肠道癌、肺癌、乳腺癌以及白血病等实体肿瘤具 有很好的抑制率(结肠癌TGI可达85.69%)。
【附图说明】
[0021] 图1为中间体G1的1H-NMR谱图。
[0022] 图2为中间体G2的1H-NMR谱图。
[0023] 图3为中间体D1的1H-NMR谱图。
[0024] 图4为中间体D2的1H-NMR谱图。
[0025] 图5为新型紫杉类化合物Z1的1H-NMR谱图。
[0026] 图6为新型紫杉类化合物Z1的13C_NMR谱图。
[0027]图7为新型紫杉类化合物Z1的HSQC图（异核单量子相关谱图）。 【具体实施方式】 [0028](实施例1) 本实施例的新型紫杉类化合物Z1的结构式如下：
§
[0029]该新型紫杉类化合物Z1的制备方法具有以下步骤： S1:制备中间体G1，合成路线如下：
[0030」具体方法如下：
S11:在1L的圆底烧瓶中加入30g的吉西他滨（0.11411101)、14311^的六甲基二硅氮烷 (0.68mol、6eq. )、0· 569g的硫酸铵(4mmol、0.038eq.)以及143mL的二氧六环，然后将混合物 至于130°C的油浴中，回流1.5h，直至不再有氨气产生。
[0031]待挥发物蒸发后，先将半结晶固体真空干燥lOmin，剩余物用干燥的甲苯共蒸发二 次后于60°C真空干燥，得到53.99g的白色结晶固体。
[0032] S12:0°C的温度下，向含有28.05g上述S11制得的白色结晶固体(59mmol)和8.02mL 的N-甲基咪唑（101mmol、l .7eq.)的296mL二氯甲烧溶液中加入11.3mL的氯甲酸正丁酯 (89mmol、1.5eq.)，此时无沉淀产生，将反应混合物室温（15~25°C，下同）下搅拌4h，然后在 30°C的温度下蒸除溶剂，向剩余物中加入197mL的甲醇和41mL的三乙胺(0.27m 〇l、5eq)，将 反应混合物室温下搅拌过夜，第二天TLC表明几乎都是产物。
[0033]将反应混合物蒸除溶剂，剩余物溶解在500mL的乙酸乙酯/二氯甲烷混合溶液（1: 3 )中，然后与300mL的柠檬酸溶液(含42g柠檬酸)在分液漏斗中混合摇晃，将有机层直接倒 入含有100g硅胶的过滤漏斗中，将水相用200mL的乙酸乙酯/二氯甲烷混合溶剂（1:3)提取3 次，再依次用100mL的乙酸乙酯/二氯甲烷混合溶剂（1:3)和300mL的甲醇/二氯甲烷混合溶 剂（1:20)进行洗脱，产物用1300mL的甲醇/二氯甲烷混合溶剂（1:20)洗脱。蒸除溶剂后于60 °C真空干燥，得到19.8g白色固体泡沫中间体G1，收率为92.0%(以吉西他滨计）。
[0034] 中间体G1的1H-NMRi普图见图1。
[0035] 4 匪R (399.86 MHz, DMS〇-c/6): δ = 0.90 (t，3H，5 / = 7.42 Hz, CH3)， 1.30-1.41 (m, 2H, CH2CH2CH2CH3), 1.54-1.64 (m, 2H, CH2CH2CH2CH3), 3.65 (dm, 1H, 2 J = 12.69 Hz, 3 J = 3.22 Hz, H-Sa'), 3.81 (dm, 1H, 2 J = 12.69 Hz, H-Sb'), 3.86-3.91 (m, 1H, H-4'), 4.12 (t, 2H, 3 J = 6.64 Hz, CH2CH2CH2CH3), 4.13-4.25 (m, 1H, H-3'), 5.30 (t, 1H, 5/= 5.37 Hz, 0H-5'), 6.17 (t, 1H, 3 J (h-f) = ? .^>2 Hz, Η-Γ), 6.32 (d, 1H, 5 / = 6.45 Hz, 0H-3'), 7.10 (d, 1H, 5 / = 7.71 Hz, H-5), 8.22 (d, 1H, 3 J= 7.71 Hz, H-6), 10.84 (br s, 1H, NH)〇
[0036] 1^：/]\^化51)[]\1+!1]+理论值：364.13，实测值 ：364.17。
[00371 ? 9.制么·由伙r; 9 _合f#敗姥fm下.
[00Lw」 片丨干yj仏》:
将1 · 5g步骤S1制得的中间体Gl(4. lmmol)、0 · 653g的叔丁基二甲基氯硅烷(4 · 3mmol、 1.0569.)和0.765!1^的吡啶（9.511111101，2.369.)溶解在151^的二氯甲烷中，室温搅拌111，1^ 表明反应进行了一半。将反应混合物搅拌过夜，仍有较多中间体G1存在，再添加0.187g的叔 丁基二甲基氯硅烷（1.24mmo 1、0.3eq.)，将反应混合物室温搅拌6h，TLC表明仍然存在中间 体G1，再加入0.124g的叔丁基二甲基氯硅烷(0.83臟01、0.269.)，继续搅拌过夜，第二天110 表明没有中间体G1，随后加入0.2-33mL的吡啶（2.9mmo 1、0.7eq .)，接着在0 °C下加入 0.625mL的氯甲酸-2，2，2-三氯乙酯（4.5mmol、1. leq.)，将反应混合物室温搅拌0.5h，TLC表 明反应完全。
[0039] 将反应混合物与3.90g的柠檬酸（18.6mmol，4.5eq.)-起摇晃，蒸除溶剂后的提取 物无需干燥，将剩余物在40°C下进行高真空干燥，然后溶解在27mL的四氢呋喃中，将溶液冷 却至〇°C，加入三乙胺以及3倍的氢氟酸，将溶液置于5°C的冰箱中过夜，第二天将反应混合 物置于20°C保持3h，然后在该温度下蒸除溶剂。将剩余物经硅胶柱层析(含55g硅胶），然后 依次用500mL的乙酸乙酯/二氯甲烷混合溶剂（1:5)以及450mL的乙酸乙酯/二氯甲烷混合溶 剂（1:2)洗脱。合并相同组分，蒸除溶剂后于60°C真空干燥，得到1.904g的白色固体泡沫中 间体G2,收率为86%。
[0040] 中间体G2的1H-NMR谱图见图2。
[0041] ΧΗ NMR (399.86 MHz, DMS〇-c/ β) : δ = 0.90 (t, 3Η,= 7.32 Ηζ, CH2CH2CH2CH3), 1.30-1.41 (m, 2Η, CH2CH2CH2CH3), 1.55-1.64 (m, 2Η, CH2CH2CH2CH3), 3.68-3.76 (m, 1Η, H-5a，），3.78-3.85 (m, 1Η, H-5b，），4.12 (t, 2Η, 5 / = 6.64 Hz, CH2CH2CH2CH3), 4.34-4.39 (m, 1H, H-4'), 5.01 (d, 1H, 2 J = 12.20 Hz, Troc), 5.09 (d, 1H, 2 J = 12.20 Hz, Troc), 5.31-5.41 (m, 2H, H-3', OH-5'), 6.34 (t, 1H, 5 J (h-f) = 8.60 Hz, Η-Γ), 7.13 (d, 1H, 5 / = 7.62 Hz, H-5), 8.15 (d, 1H, 5 /= 7.62 Hz, H-6), 10.87 (br s, 1H, NH) 〇
[0042] LC/MS(ESI)[M+H]+ 理论值：538.0,实测值：538.2。
[00431 H制客由1'团优D1 .合成路钱加 T.
[0044」 具体万法如卜：
将0.95g的7，10-二（三氯乙氧基甲酰）多西他赛（0.8211111101)和0.9358的戊二酸酐 (8.2mmol、10eq.)溶解在10.6mL的吡啶（131mmol、160eq.)中，将反应混合物室温搅拌2.5h， 然后置于_20°C的冰箱中过夜，第二天再将反应混合物室温搅拌3h以上，TLC表明反应基本 完成。
[0045]在30°C下蒸除吡啶，并将剩余物在该温度下真空干燥，将剩余物溶解在5.5g的柠 檬酸（26mm〇l、32eq.)溶液中，然后用二氯甲烷提取，将提取物直接倒入硅胶柱（含20g硅 胶），将杂质用110mL的甲醇/二氯甲烷混合溶剂（1:100)洗去，将产物用143mL的甲醇/二氯 甲烷混合溶剂（1:100)以及102mL的甲醇/二氯甲烷混合溶剂（1:50)洗出，蒸除溶剂后于40 °(：真空干燥，得到1.055g白色固体中间体D1粗品。
[0046] 将粗品经硅胶柱层析(含35g硅胶），然后依次用50mL的二氯甲烷、210mL的乙酸乙 酯/二氯甲烷混合溶剂（1:20)以及220mL的乙酸乙酯/二氯甲烷混合溶剂（1:10)洗去杂质， 将洗脱后的组分收集于试管中，并用乙酸乙酯/二氯甲烷混合溶剂（1:5)进行柱洗脱。合并 相同组分，蒸除溶剂后于40°C真空干燥，得到0.623g白色固体中间体D1成品，收率为60%。
[0047] 中间体D1的1Η-NMR谱图见图3。
[0048] ΧΗ NMR (399.86 MHz, OMSO-de)： δ = 0.98 (s, 3H, CH3), 1.03 (s, 3H, CH3), 1.38 (s, 9H, BOC), 1.51-1.65 (m, 1H), 1.68 (s, 3H, CH3), 1.72-1.91 (m, 4H), 1.80 (s, 3H, CH3), 2.26 (s, 3H, OAc), 2.28 (t, 2H, 3 J= 7.42 Hz, COCH2CH2CH2COOH)，2.46 (t, 2H, 5 /= 7.23 Hz, COCH2CH2CH2⑶OH), 2.56-2.50 (m, 1H), 3.65 (d, 1H, 5 /= 6.83 Hz, CH), 4.03-4.10 (m, 2H), 4.77 (d, 1H, 2 J = 12.01 Hz, Troc-a), 4.81 (s, 1H), 4.93 (d, 1H, 2 J = 12.01 Hz, Troc-a), 4.95 (d, 1H, 2 J= 12.10 Hz, Troc-b), 4.98-5.02 (m, 1H), 5.00 (d, 1H, 2 J= 12.10 Hz, Troc-b), 5.01-5.07 (m, 1H), 5.09 (d, 1H, 3 J = 8.40 Hz), 5.38-5.47 (m, 2H), 5.79 (t, 1H, 3 J= 8.89 Hz, CH), 6.09 (s, 1H), 7.18 (t, lH,5/= 7.32 Hz, CH^ph), 7.37 (d, 2H,5 / = 7.62 Hz, CH^ph), 7.41-7.47 (m, 2H, CHrfh), 7.65-7.72 (m, 2H, CHrfz), 7.76 (t, 1H,5 / = 7.32 Hz, CH^bz), 7.88 (d, 1H, 5/ = 8.98 Hz, NH-BOC), 7.99 (d, 2H,5/= 7.22 Hz, CH^bz), 12.13 (br s, 1H, C00H)〇
[0049] LC/MS(ESI)[M+Na]+ 理论值：1292.2,实测值：1292.2。
[0050] S4:制备中间体D2,合成路线如下：
[005?」 具体万沄如卜：
0°C的温度下，将0 · 277mg步骤S2制得的中间体G2(0 · 51mmol、1 · leq · )、0 · 594mg步骤S3 制得的中间体01(0.471111]1〇1、169)、9811^的碳化二亚胺（0.511]11]1〇1、1.169.)以及11.411^的4-二甲氨基吡啶(95 · 10 6 mol、0.2eq.)溶解在0.934mL的二氯甲烷中，将反应混合物缓慢加 热至室温，搅拌过夜，第二天，TLC表明为主要产品和一些轻微的杂质。
[0052] 将反应混合物直接倒入硅胶柱(含35g硅胶）中，依次用50mL的二氯甲烷、205mL的 乙酸乙酯/二氯甲烷混合溶剂（1:40)、210mL的乙酸乙酯/二氯甲烷混合溶剂（1:20)以及 220mL的乙酸乙酯/二氯甲烷混合溶剂（1:10)将杂质洗去，将洗脱后的组分收集于试管中， 用360mL的乙酸乙酯/二氯甲烷混合溶剂（1:5)进行柱洗脱，合并相同组分，蒸除溶剂后于40 °(：真空干燥，得到0.636g无色透明中间体D2，收率为76%。
[0053] 中间体D2的1H-NMR谱图见图4。
[0054] 4 匪R (399.86 MHz, DMSO-c/i；): δ = 4 NMR (399.86 MHz, DMSO-c/i；): δ = 0.90 (t, 3H, 5 / = 7.32 Hz, CH2CH2CH2CH3), 0.98 (s, 3H, CH3), 1.02 (s, 3H, CH3), 1.30-1.41 (m, 2H, CH2CH2CH2CH3), 1.37 (s, 9H, BOC), 1.51-1.66 (m, 4H, CH2CH2CH2CH3, CH2-a, CH2-a), 1.68 (s, 3H, CH3), 1.75-1.89 (m, 4H), 1.80 (s, 3H, CH3), 2.26 (s, 3H, OAc), 2.43 (t, 2H, 3 J = 7.52 Hz, COCH2CH2CH2CO), 2.46 (t, 2H, 3 J = 8.01 Hz, COCH2CH2CH2CO), 3.65 (d, 1H, 3 J = 6.64 Hz, CH), 4.03-4.10 (m, 2H), 4.12 (t, 2H, 5 /= 6.64 Hz, CH2CH2CH2CH3), 4.43 (dd, 1H, 2 J = 12.10 Hz, 3 J = 6.25 Hz, H-5'a), 4.51 (dd, 1H, 2 J = 12.10 Hz, 3 J = 2.84 Hz, H-5' b), 4.55-4.62 (m, 1H, H-4'), 4.77 (d, 1H, 2 J = 12.11 Hz, Troc-a), 4.80 (s, 1H), 4.93 (d, 1H, 2 J = 12.11 Hz, Troc-a), 4.94 (d, 1H, 2 J = 12.10 Hz, Troc- b) , 4.97-5.20 (m, 3H), 5.01-5.10 (m, 2H), 5.09 (d, 1H, 2 J = 12.30 Hz, Troc- c) , 5.37-5-57 (m, 3H), 5.80 (t, 1H, 3 J = 8.98 Hz, CH), 6.09 (s, 1H), 6.36 (t, 2H, 5 J (h-f) = 8.30 Hz, Η-Γ), 7.16 (d, 1H, 3 J = 7.61 Hz, H-5), 7.18 (t, m,3 J = 7.42 Hz, CH^ph), 7.37 (d, 2H,5/= 7.62 Hz, CH^ph), 7.40-7.47 (m, 2H, CHrfh), 7.65-7.72 (m, 2H, CH^bz), 7.76 (t, lH,5/= 7.42 Hz, CH^bz), 7.87 (d, 1H, 3 J = 8.98 Hz, NH-BOC), 7.99 (d, 2H,5/= 7.42 Hz, CH^bz), 8.07 (d, 1H, 5 /= 7.42 Hz, H-6), 10.90 (br s, 1H, NH) 〇
[0055] LC/MS(ESI)[M+H-Troc]+理论值：1617.3,实测值：1617.6。
[0056] S5:制备新型紫杉类化合物Zl，合成路线如下：
[0057] 具体方法如下： 将1. l〇lg的乙酸钠（13.4mm〇l、4〇eq.)溶解在12mL甲醇和12mL醋酸的混合溶液中，然后 将该溶液加入到装有ο. 602g步骤S4制得的中间体D2(0.34mmol)的烧瓶中，待其完全溶解 后，加入1.756g的锌粉（27mmol、40eq.)，将反应混合物在5°C超声振动15min并剧烈摇晃， TLC表明中间体D2消失，只有微量的二(三氯乙氧基甲酰)产物和一定量的单(三氯乙氧基甲 酰)产物，绝大部分是目标产物。继续超声振动并剧烈摇晃持续15min，TLC显示没有二(三氯 乙氧基甲酰)产物，但仍有一部分单(三氯乙氧基甲酰)存在，将反应混合物第三次超声振动 并剧烈摇晃15min，然后倒入50mL含有19.44g的碳酸氢钠(0.23mol)水悬浮液中，接着加入 乙酸乙酯，过滤，滤液用乙酸乙酯提取，提出物于25°C蒸干。
[0058]将剩余物溶于二氯甲烷后经硅胶柱层析（含35g硅胶），然后依次用203.3mL的甲 醇/二氯甲烷混合溶剂（1:60)以及615mL的甲醇/二氯甲烷混合溶剂（1:40)洗脱，将洗脱后 的组分收集于试管中，依次用206.7mL的甲醇/二氯甲烷混合溶剂（1:30)以及208mL的甲醇/ 二氯甲烷（1:25)混合溶剂进行洗脱。合并相同组分，蒸除溶剂后于40°C真空干燥，得到 0.244g无色透明目标产物Z1，收率为57%，纯度为95.0%(HPLC)。
[0059] 目标产物Z1的1H-NMR谱图、13C-NMR谱图以及HSQC谱图分别见图5~图7。
[0060] ΧΗ NMR (399.86 MHz, DMS〇-c/ β) : δ = 0.90 (t, 3Η, 5 / = 7. 13 Hz, CH2CH2CH2CH3), 0.97 (s, 6H, CH3X2), 1.29-1.41 (m, 2H, CH2CH2CH2CH3), 1.36 (s, 9H, BOC), 1.51 (s, 3H, CH3), 1.53-1.67 (m, 4H, CH2CH2CH2CH3, CH2-a, CH2-a), 1.70 (s, 3H, CH3), 1.76-1.89 (m, 3H, COCH2CH2CH2CO, CH2-b), 2.23 (s, 3H, OAc), 2.25-2.33 (m, 1H, CH2-b), 2.38-2.48 (m, 4H, COCH2CH2CH2CO), 3.63 (d, 1H, 3 J = 6.44 Hz, CH), 3.97-4.07 (m, 3H, CH, CH2O), 4.06-4.12 (m, 1H, H-4'), 4.12 (t, 2H, 3 J = 6.44 Hz, CH2CH2CH2CH3), 4.18-4.31 (m, 1H, H-3'), 4.32-4.47 (m, 3H, H-5，，i-〇H), 4.86-4.95 (m, 2H, CH, OH), 5.00 (d, 1H, 5/= 6.64 Hz, OH), 5.03-5.14 (m, 3H, CHX3), 5.40 (d, 1H, 5 / = 6.83 Hz, CH), 5.77 (t, 1H, 5 / = 8.59 Hz, CH), 6.22 (t, 2H, 5 J (h-f) = 7.52 Hz, Η-Γ), 6.49 (d, 1H, 3 J = 6.06 Hz, 0H-3，），7.10-7.20 (m, 2H, H-5, HP-ph)，7.31-7.45 (m, 4H, H0-phX2, H?-phX2), 7.61-7.69 (m, 2H, Hffl-ph), 7.73 (t, 1H, 5/ = 7.42 Hz, H^ph), 7.85 (d, 1H, 3 J = 8.98 Hz, NH-B0C), 7.93-8.04 (m, 3H, H^phX2, H-6), 10.86 (br s, 1H, NH)〇
[0061] 13C NMR (100.56 MHz, DMSO-c/i；): δ = 9.8 (CH3), 13.5 (CH2CH2CH2CH3)，13.6 (CH3), 18.4 (CH2CH2CH2CH3)，19.7 (COCH2CH2CH2⑶），20.7 (CH3)，22.4 (OAc)，26.4 (CH3)，28.1 (i-BOC，primary), 30.2 (CH2CH2CH2CH3)，32.1 (COCH2CH2CH2⑶），32.3 (COCH2CH2CH2CO), 34.7 (CH2), 36.4 (CH2), 42.9, 45.9 (CH), 55.1 (CH), 57.0, 62.8 (CH2-5'), 65.1 (CH2CH2CH2CH3), 70.1 (t, 2 J (c-f) = 23.0 Hz, CH-3'), 70.7 (CH), 71.2 (CH), 73.7 (CH), 74.8 (CH), 75.0 (CH), 75.4 (CH2), 76.8, 77.9 (CH-4'), 78.5, 80.3 (t -B0C, quaternary), 83.7 (CH), 84.5 (br s, CH-Γ), 95.2 (CH-5), 122.5 (t, 1 J (c-f) = 259.2 Hz, C-2'), 127.3 (CH0-ph), 128.0 (CHP-ph), 128.5 (CH?-ph), 128.6 (CH?-ph), 129.5 (CH0-ph), 130.0，133.3 (CHP-ph)，135.9，136.9， 137.5， 144.9 (CH-6)， 153.1 (NHC00)， 153.9 (C0Ar)， 155.1 (NHC00)， 163.5 (C-4)， 165.3 (COO), 169.0 (COO), 169.5 (COO), 171.8 (COCH2CH2CO), 172.1 (COCH2CH2CO), 209.3 (CO)〇
[0062] LC/MS(ESI) [M+H]+理论值：1267 · 5，实测值：1267 · 8。
[0063] (实施例2~实施例9) 各实施例的制备方法与实施例1基本相同，不同之处在于步骤S1中采用的氯甲酸烷基 酯、步骤S3中采用的二酸酐以及最后得到的新型紫杉类化合物，具体见表1。
[0064] 表 1 _____
[0065](实施例10) 本实施例为含有实施例1的新型紫杉类化合物Z1的药物组合物的制备方法。
[0066] 其中，注射剂型以冻干粉针剂为例，包括：30g的新型紫杉类化合物Z1、甘露醇 (20%，W/v)300g、缓冲剂二水合磷酸二氢钠7g、表面活性剂泊洛沙姆188(F68)4.0g。
[0067] 将按照上述处方量准确称取的二水合磷酸二氢钠、泊洛沙姆188(F68)、甘露醇 (20%，w/v)加入300g预冷至10°C以下的注射用水中溶解后，用0 · lmol/L的NaOH调节溶液pH 值为7.3~7.5 ;再向上述溶液中加入30g的新型紫杉类化合物ΖΓ混合均匀，用0 . lmol/L的 NaOH溶液或0. lmol/L的HC1调节pH值为7.3±0.2(本实施例为7.5);加水至2000g，溶液用 0.22μπι微孔滤膜过滤除菌;按每瓶2.0g将滤液分装于管制瓶中，半加塞后置于冷冻干燥机 中冻干，待干燥后真空压塞，乳盖，贴标签，即得冻干粉针剂1〇〇〇支，保存在2~8°C温度下。
[0068] 除了上述冻干粉针剂即注射用无菌粉末外，本发明的新型紫杉类化合物还可制备 成其他形式的注射剂型，如溶液型注射剂、混悬型注射剂、乳剂型注射剂。
[0069] 药物组合物的适用剂型除了上述涉及的片剂形式外，还可以被制成口服的散剂、 颗粒剂、胶囊剂、微丸制剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、糖浆剂或者酏剂，或者是口服形式的缓释 及控释制剂，或者是其他口服形式的药物组合物，这些口服剂型含有常见的相应的辅料(根 据不同的作用分为添加剂、附加物等），如添加剂有药物等级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸 镁、糖精盐、纤维素或硫酸镁等。
[0070] 在实现上述口服剂型中，可以选择药学上的附加物作为药物活性组分的载体，包 括已有技术成熟的物质，例如:惰性固体稀释液、水溶剂、脂质体、微球体或/和无毒有机溶 剂等;优选的附加物有:加湿剂、乳化剂、pH缓冲液、人血清白蛋白、抗氧化剂、防腐剂、抑菌 剂、葡萄糖、蔗糖、海藻糖、麦芽糖、卵磷脂、甘氨酸、山梨酸、丙烯醇、聚乙烯、鱼精蛋白、硼 酸、氯化钠、或者氯化钾、矿物油、植物油等;可从中选择一种或几种组合作为药物载体。 [0071 ]本发明的药物组合物的靶肿瘤包括血液瘤或者恶性实体瘤。具体的，靶肿瘤包括 结肠癌、直肠癌、胃癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、肝癌、食道癌、脑肿瘤、卵巢癌、子宫 癌、肾癌、头颈癌、皮肤癌、膀胱癌、外阴癌、睾丸瘤、绒毛癌、生殖细胞瘤、恶性淋巴瘤、白血 病和多发性骨髓瘤，并且甚至更优选的靶肿瘤可包括结肠癌、直肠癌、胃癌、肺癌、胰腺癌、 肝癌、卵巢癌、肾癌、恶性淋巴瘤、乳腺癌以及白血病，但本发明不限于此。
[0072] (应用例1、单次腹腔给药新型紫杉类化合物在ICR小鼠的最大耐受量实验） 本应用例是研究实施例1的新型紫杉类化合物Z1单次腹腔给药对ICR小鼠的毒性反应， 以确其最大耐受量(maximal tolerance dose，MTD)〇
[0073] 最大耐受量是指动物不会发生死亡，动物的体重降低不会超过10%(与Day 0相 比），或者不产生明显毒副作用的剂量。
[0074] 1、受试物的配制。
[0075]受试物溶解所用溶剂来源如下： 无水乙醇，批号10009218,厂商：国药集团化学试剂有限公司。
[0076] Cremophor EL，批号27963,厂商：Sigma。
[0077] 0.9%生理盐水，批号13083004,厂商:华裕制药有限公司。
[0078]称取定量对应的受试物于5mL玻璃试管中，在5mm的磁力搅拌子搅拌下溶解于乙醇 中，全部溶解后加入Cremophor EL，保持搅拌，临用前加入标示量的生理盐水搅拌均匀，配 置时乙醇、Cremophor EL、生理盐水的体积比为5:5:90。
[0079] 2、实验动物。
[0080] 品种和品系：ICR小鼠。
[0081] 级别：SPF。
[0082] 性别：雌性。
[0083]来源:上海斯莱克实验动物有限公司。
[0084]合格证号：0130749。
[0085]实验开始动物体重：18_20g。
[0086] 数量和性别:41只。
[0087] 适应环境时间：5_7天，与实验时相同饲养条件。
[0088] 动物房环境保持温度18-26°C，相对湿度30-70%，12小时光照。
[0089] 实验动物用水采用过滤灭菌水，动物自由饮食及饮水。
[0090] 3、实验方法。
[0091 ]给药方式：IP。如动物死亡则减低剂量，直至动物存活，如无动物死亡，则增加剂 量;如在给给定高剂量下动物正常存活则实验结束。最终根据实验结果确定小鼠对受试物 的MTD;急性给药后连续观察动物7天。
[0092] 实验过程中所有动物，对所有的受试动物进行详细临床观察，给药后每天两次(上 10:00、下午16:00各一次），连续观察14天，观察包括但不仅限于:皮肤，毛，眼，耳，鼻，口腔， 胸腔，腹部，外生殖器，四肢和脚，呼吸道及循环系统，自主效应（如流涎），神经系统（如震 颤，抽搐，应激反应以及反常行为）。
[0093] 给药前称重动物的体重，随后每天在同一时间称量动物的体重并记录。
[0094] 每天详细记录观察结果、动物体重以及给药一周后动物存活情况。
[0095] 4、实验结果。
[0096]新型紫杉类化合物Z1的MTD剂量为250mg/kg。
[0097](应用例2、单次腹腔注射新型紫杉类化合物对肿瘤的生长抑制作用） 本应用例是研究单次腹腔注射实施例1的新型紫杉类化合物Z1对结肠癌HCT-116荷瘤 裸小鼠移植瘤的生长抑制作用。
[0098] 1、受试物的配制。
[0099]受试物溶解所用溶剂来源如下： 无水乙醇，批号10009218,厂商：国药集团化学试剂有限公司。
[0100] Cremophor EL，批号27963,厂商：Sigma。
[0101] 0.9%生理盐水，批号13083004,厂商:华裕制药有限公司。
[0102]称取定量对应的受试物于5mL玻璃试管中，在5mm的磁力搅拌子搅拌下溶解于乙醇 中，全部溶解后加入Cremophor EL，保持搅拌，临用前加入标示量的生理盐水搅拌均匀，配 置时乙醇、Cremophor EL、生理盐水的体积比为5:5:90。
[0103] 2、实验动物。
[0104] 品种和品系：Balb/c Nude小鼠。
[0105] 级别：SPF。
[0106] 性别:雌性。
[0107] 来源:上海西普尔-毕凯实验动物有限公司。
[0108] 动物合格证号：0123627。
[0109] 实验开始时动物年龄:7_9周龄。
[0110] 实验开始时动物体重：18-22克。
[0111] 适应环境时间：5-7天，与实验时相同饲养条件。
[0112] 动物房环境保持温度23±2°C，湿度40-70%，12小时明暗交替。
[0113] 动物饲料(SLAC-M01)购自北京科澳协力有限公司。
[0114] 实验动物用水采用过滤灭菌水，动物自由饮食和饮水。
[0115] 3、实验方法。
[0116] 3.1、肿瘤细胞:结肠癌HCT-116细胞，购于中科院细胞生物研究所。用F-12培养基 (含10%的FBS)培养在37°C，饱和湿度，含体积分数为5%C0 2、95%空气的二氧化碳培养箱内。 接种前取对数生长期细胞，以〇 . 25%胰蛋白酶消化后，PBS洗涤1次，PBS重新悬浮计数，用不 含血清的培养基重新悬浮细胞，调整细胞浓度至约3 X 107cel 1/mL。
[0117] 3.2、动物接种及分组:每个裸鼠在无菌状态下，右侧后肢皮下接种O.lmL细胞悬液 (3X 106cell/mouse)。待肿瘤长至体积60-150mm3左右时，选出肿瘤体积相近、形状较好的裸 鼠（形状尽量为单一圆球形，无不规则的形状或多个肿瘤聚在一起），每组6只。
[0118] 3.3、动物给药和观察。
[0119] (1)观察各组裸鼠接种部位肿瘤的形成状况，每周3次用圆洞尺测量肿瘤结节的直 径(D)，并按如下公式计算肿瘤结节的体积(V): V =3/43i(D/2)3〇
[0120] (2)抗肿瘤活性的评价指标为肿瘤生长抑制率TGI(%)，其计算公式为： TGI(%) = (Vcontrol_VTreatment)/Vcontrol) X 100%〇
[0121] 每周3次称量小鼠体重。
[0122] 3.4、临床症状。
[0123] 在实验开始和实验过程中每个动物所有的临床症状都应记录。观察应在每天的同 一时间进行。
[0124] 给予受试物后如出现体重减低>20%，濒死动物或肿瘤体积超过2800mm3，则C0 2处 死，分离肿瘤并称重，尸检，肉眼观察是否有病变器官并记录。
[0125] 3.5、数据统计。
[0126] 实验数据除特别指出外，均以Mean土SEM表示;两组间数据采用非配对T检验，P< 0.05认为有显著性差异。
[0127] 4、实验结果。
[0128] 新型紫杉类化合物Z1对人结肠癌HCT-116荷瘤小鼠肿瘤的生长抑制率(TGI%)为 85.69%〇
【主权项】
1. 一种新型紫杉类化合物，其特征在于其结构如通式(I)所示;通式（I)中，Ri为Cl~C6烷基或取代烷基;η为0~6。2. 根据权利要求1所述的新型紫杉类化合物，其特征在于:通式（I)中，Ri为乙基、正下基 或者正己基;η为0~2。3. 根据权利要求2所述的新型紫杉类化合物，其特征在于:通式（I)中，Ri为正下基;η为 1〇4. 权利要求1至3之一所述的新型紫杉类化合物的制备方法，其特征在于具有W下步 骤： S1:先对吉西他滨中的两个径基进行保护，然后与氯甲酸烷基醋进行缩合反应，接着脱 除径基保护基团，得到中间体G1; S2:先对步骤S1制得的中间体G1其中一个径基进行保护，然后再对另一个径基进行保 护，接着脱除第一个径基脱保基团，得到中间体G2; S3:将7，10-二(Ξ氯乙氧基甲酯)多西他赛与二酸酢反应得到中间体D1; S4:将步骤S3制得的中间体D1与步骤S2制得的中间体G2进行缩合反应得到中间体D2; S5:对步骤S4制得的中间体D2进行径基脱保护得到目标产物。5. 根据权利要求1所述的新型紫杉类化合物的制备方法，其特征在于:步骤S1中所述的 氯甲酸烷基醋为氯甲酸正下醋。6. 根据权利要求1所述的新型紫杉类化合物的制备方法，其特征在于:步骤S3中所述的 二酸酢为戊二酸酢。7. 根据权利要求1所述的新型紫杉类化合物的制备方法，其特征在于:步骤S1中采用的 径基保护试剂为六甲基二娃氮烧;步骤S2中第一个径基保护采用的保护试剂为叔下基二甲 基氯硅烷，第二个径基保护采用的保护试剂为氯甲酸-2，2，2-Ξ氯乙醋。8. 权利要求1至3之一所述的新型紫杉类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。9. 根据权利要求8所述的应用，其特征在于:所述肿瘤包括结肠癌、直肠癌、胃癌、肺癌、 乳腺癌、前列腺癌、膜腺癌、肝癌、食道癌、脑肿瘤、卵巢癌、子宫癌、肾癌、头颈癌、皮肤癌、膀 脫癌、外阴癌、睾丸瘤、绒毛癌、生殖细胞瘤、恶性淋己瘤、白血病和多发性骨髓瘤。10. 根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述肿瘤包括结肠癌、直肠癌、胃癌、肺 癌、膜腺癌、肝癌、卵巢癌、肾癌、恶性淋己瘤、乳腺癌W及白血病。
【文档编号】A61P35/00GK106083960SQ201610426133
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月15日
【发明人】达丽亚杨, 王慧娟
【申请人】内蒙古普因医药科技有限公司