一株多粘类芽孢杆菌及其应用
【专利摘要】本发明涉及植物病害的生物防治，属于植物保护学科中的生物防治研究与应用领域。本发明公开了一株拮抗多种植物病原真菌的多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)JY1?5，菌株保藏的编号为CGMCC No.12410。该菌株能有效抑制蔬菜灰霉病菌，防治番茄灰霉病的效果明显优于常规化学药剂速克灵，比速克灵的防效提高57.3％，并具有防治多种植物病害的潜力。增加生物药剂、减少化学药剂使用有利于环境保护、减少农药残留、农业可持续发展。CGMCC No.1241020160428
【专利说明】
一株多粘类芽孢杆菌及其应用
技术领域
[0001]本发明涉及植物病害的生物防治，属于植物保护学科中的生物防治研究与应用领域。
【背景技术】
[0002]植物病害是制约植物安全生长的主要障碍之一，目前防治方法主要是喷施化学药剂。蔬菜作物生长期短，频繁使用化学药剂存在农药残留的风险，研制和使用生物农药能减少化学药剂的使用量。对植物病原菌具有拮抗作用的微生物是研制生物农药的主要来源，这类微生物种类繁多、分布广泛，即使同一种微生物由于分布于不同地区，其拮抗作用强弱或机制也有一定差异。挖掘生防微生物资源，首先是用目标病菌广泛筛选拮抗菌，这是生物防治研究领域的基础工作。
[0003]对拮抗菌的基础研究包括拮抗性强弱、抑菌谱宽度、拮抗性能的稳定性、拮抗机理、抗菌物质种类与代谢等。研制生物农药包括拮抗菌的发酵条件优化、助剂使用、剂型研制等。生物农药田间应用包括防治病害的最适时间、防治方法、使用剂量与次数等。所有这些都必须建立在获得拮抗性能较好的生防微生物菌株的基础上。
[0004]本发明中从土壤中筛选获得多粘类芽孢杆菌JY1-5菌株，经前期初步研究，JY1-5具有较好的拮抗植物病原真菌的性能。对其进一步研究，具有研发新型生物农药的可能。
【发明内容】
[0005]针对防治蔬菜病害化学药剂使用量大、次数多、容易引起农药残留问题，应该减少化学药剂使用，增加生物防治措施。
[0006]本发明公开了一种多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)JYl_5，其菌株保藏编号为CGMCC N0.12410。
[0007]多粘类芽孢杆菌(PaenibaciIIuspolymyxa)JY1-5可作为措抗多种植物病原真菌的生防细菌。
[0008]本发明还公开了多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)JTl_5在防治蔬菜灰霉病中的应用。
[0009]JY1-5菌株是以番茄灰霉病菌为目标真菌，从土壤中筛选得到。经分子生物学方法鉴定为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa) JY1-5能有效抑制蔬菜灰霉病菌(Botrytis c inerea )生长，对其它病菌如黄瓜枯萎病菌(Fusar i um oxy sporumf.sp.cucumerinum)、桃褐腐病菌(Moni I ia fructicola)、水稻稻痕病菌(Pyricu I ariaoryzae)等也有较好的措抗作用。转移十代后测定，其措抗性能稳定。田间防治番前灰霉病试验显示，该菌株的发酵产物对番茄灰霉病有较好的防治作用，防效明显优于化学药剂速克灵，防治效果比速克灵提高了53.7%。
【附图说明】
[0010]图1为多粘类芽孢杆菌JY1-5对多种植物病原真菌的拮抗效果。图中第一行从左到右依次是水稻稻瘟病菌、水稻纹枯病菌、黄瓜枯萎病菌；第二行从左到右依次是桃褐腐病菌、辣椒疫霉和番茄灰霉病菌。
[0011]图2为JY1-5培养十代后抑菌能力测定。
[0012]图3为JY1-5基于16SrDNA的系统发育进化树。
[0013]本发明所述JY1-5菌株于2016年4月28日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，(北京市朝阳区北辰西路I号院3号，中国科学院微生物研究所)，分类命名为多粘类芽抱杆菌(Paenibacillus polymyxa)，保藏编号为CGMCC N0.12410。
【具体实施方式】
[0014]实施例1:菌株分离与鉴定
[00?5]菌株分离与措抗性测定:(I)分别取不同地区土样Ig，加水制成一定浓度的土壤悬浮液，再进行梯度稀释13?15倍，取10ul稀释液涂板，置28度培养箱中培养481!。(2)挑取单菌落保存。(2)以灰霉病菌为目标真菌，用对峙培养法测定分离菌株的拮抗性，25度培养4-5天，测定拮抗圈大小。(3)对拮抗效果较好的菌株，同样方法测定其拮抗谱。(4)将拮抗作用较强的菌株在牛肉膏蛋白胨培养液中继代培养十代后，通过对峙培养检测菌株拮抗作用的稳定性。
[0016]筛选出的菌株命名为JY1-5。图1培养皿中部为各种病原真菌菌落，左右两孔滴加了JY1-5菌液，在其周围形成了明显的空白圈即抑菌圈，说明JY1-5菌株发酵过程中能产生抑制物质使周围的病菌不能生长。jn-5继代培养十代后仍保持较强的抑菌活性(图2)。
[0017]菌株种类鉴定:(I )CTAB法提取细菌基因组，用Nanodrop测定基因组浓度和纯度。
(2)以提取的基因组为模板，用16S rDNA通用引物进行PCR扩增，对扩增产物测序。(3)将测得的序列在GenBank中比对分析，利用Mega软件构建系统发育进化树，明确JY1-5为多粘类芽抱杆菌(PaenibaciIIus polymyxa)(图3)。
[0018]实施例2:田间试验
[0019](I)将试验菌株JY1-5用牛肉膏蛋白胨培养液震荡培养5?7天，获得细菌悬浮液。
[0020](2)选择果实已发病的番茄生长田块，除去所有病果，喷施菌液于果实表面，以防治番茄灰霉病常用药剂速克灵(河北沧州中天化工有限责任公司)为化学药剂对照，喷清水为未防治对照，每7天喷施一次。每小区4m2，重复三次。
[0021]对番茄灰霉病防病实验中，对照的病情指数为36.57%，速克灵为30.09%，JYl-5为23.61%;对照的发病率为37.56%，速克灵为33.43%，JYl-5为23.61%。其中速克灵对灰霉病的防效为17.73% JY1-5的防效为40.59%，可见JY1-5的防病效果明显高于速克灵。
【主权项】
1.一株多粘类芽孢杆菌(Paenibaci I Ius po lymyxa) JY1-5，其保藏编号为CGMCCN0.12410。2.权利要求1所述多粘类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa)JY1-5作为措抗多种植物病原真菌的生防细菌的应用。3.权利要求1所述多粘类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa)JY1-5在防治蔬菜灰霉病中的应用。
【文档编号】A01N63/00GK106085905SQ201610422377
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月13日 公开号201610422377.5, CN 106085905 A, CN 106085905A, CN 201610422377, CN-A-106085905, CN106085905 A, CN106085905A, CN201610422377, CN201610422377.5
【发明人】张清霞, 童蕴慧, 何玲玲, 陈夕军
【申请人】扬州大学