用于无义抑制的化合物及其使用方法

专利名称：用于无义抑制的化合物及其使用方法
技术领域：
本发明涉及通过给予本发明的化合物或组合物而用于治疗或预防与mRNA无义突变相关的疾病的方法和化合物或组合物。更具体地，本发明涉及用于抑制与mRNA无义突变相关的翻译提前终止的方法和化合物或组合物。
背景技术：
细胞内的基因表达取决于依次的转录和翻译过程。这些过程一起从其相应基因的核苷酸序列产生蛋白。
转录包括通过RNA聚合酶从DNA合成mRNA。转录从基因的启动子区开始并继续直至例如通过新生RNA中干环结构的形成或rho基因产物的结合诱导终止。
然后蛋白通过在tRNA、tRNA合成酶及多种其它种类蛋白和RNA的帮助下在核糖体上进行的翻译过程从mRNA产生。翻译包括起始、延伸和终止三阶段。翻译以起始复合物形成开始，所述起始复合物由识别mRNA上指导翻译机器开始在mRNA上进行翻译的信号的蛋白因子、mRNA、tRNA、辅因子和核糖体亚单位组成。一旦形成起始复合物，则多肽链的增长通过核糖体的肽基转移酶活性以及tRNA和tRNA合成酶经氨基酸的重复添加进行。核糖体A部位的三个终止密码子(UAA、UAG、UGA)之一的存在发出信号使多肽链释放因子(RFs)结合并识别终止信号。然后，位于核糖体P部位的tRNA的3′核苷酸与新生多肽链之间的酯键水解，释放出完整的多肽链，核糖体亚单位再循环用于另一轮翻译。
其中碱基数发生改变的DNA序列的突变分类为插入或缺失突变(例如移码突变)并能导致基因组的主要破坏。将一个碱基变为另一个碱基并导致氨基酸替代的DNA突变描述为错义突变。将碱基替代细分为转换类(一个嘌呤变为另一嘌呤，或者一个嘧啶变为另一嘧啶)和颠换类(嘌呤变为嘧啶，或者嘧啶变为嘌呤)。
转换突变和颠换突变可能导致将氨基酸密码子变为三种终止密码子之一的无义突变。因翻译提前终止这些提前终止密码子可能在细胞中产生异常蛋白。必要基因中的无义突变可能是致死的并且还可能导致多种人疾病如癌症、溶酶体贮积症、肌营养不良、囊性纤维化和血友病等。
在人癌症中人p53基因是最常见的突变基因(Zambetti，G.P.和Levine，A.，FASEB 7855-865(1993))。在遗传性和自发性癌症中均发现，超过50种不同类型的人癌症含有p53突变并且全部人癌症的50-55％发生该基因的突变(Hollstein，M.等，Nucleic Acids Res.223551-55(1994)；International Agency forResearch on Cancer(IARC)database)。大约70％的直肠癌、50％的肺癌和40％的乳癌含有突变体p53(Koshland，D.，Science 2621953(1993))。p53的异常形式与不佳的预后、更具侵袭性的肿瘤、转移以及低于5年的存活率(Id.)有关。认为p53因DNA损伤而在诱导细胞生长停滞和/或细胞凋亡中的作用对于获得生长优势的突变细胞的破坏是必要的。此外，p53使快速分裂的细胞对调亡信号敏感。在报道的15000多种p53基因突变中，大约7％为无义突变。因此，针对p53无义突变需要安全有效的治疗。
在具有无义突变的细菌和真核菌株中，无义突变的抑制可以通过以下发生tRNA分子之一的使得突变体tRNA能识别无义密码子的突变，参与翻译过程的蛋白的突变，核糖体(核糖体RNA或核糖体蛋白)突变，或者加入已知的改变翻译过程的化合物(例如环己酰亚胺或者氨基糖苷抗生素)。结果是氨基酸将在无义突变位点掺入多肽链中，并且翻译将不在无义密码子处提前终止。插入的氨基酸将不一定与野生型蛋白的原始氨基酸相同，但是许多氨基酸替代对蛋白结构或功能没有很大的影响。因此，通过抑制无义突变产生的蛋白将可能具有与野生型蛋白接近的活性。该方案提供了通过抑制无义突变而避免翻译提前终止以治疗与无义突变有关的疾病的机会。
氨基糖苷抗生素促进真核终止密码子连读的能力已经引起了对作为由无义突变引起的人疾病的可能治疗剂的这些药物的兴趣。该治疗策略对其可能是可行的一种疾病是典型的晚婴儿型神经元蜡样质脂褐素沉积病(late infantileneuronal ceroid lipofuscinosis，LINCL)，其是目前没有有效治疗的致死性幼年神经变性疾病。编码溶酶体三肽基肽酶1(TPP-I)的基因CLN2中的提前终止密码子突变与大约一半的诊断患有LINCL的儿童的疾病有关。已检测了氨基糖苷庆大霉素恢复LINCL细胞系TPP-I活性的能力。在一个来自患者的常见无义突变(Arg208Stop)和不同的罕见无义突变的双重杂合子的细胞系中，用庆大霉素治疗最大恢复大约7％的TPP-I正常水平。这些结果表明通过氨基糖苷或功能类似的药物从药理学抑制无义突变可能对LINCL具有治疗潜能(Sleat等，Eur.J.Ped.Neurol.5Suppl A 57-62(2001))。
在于囊性纤维化跨膜转导调节子(CFTR)基因中具有提前终止密码子的培养细胞中，用氨基糖苷治疗导致产生全长CFTR(Bedwell等，Nat.Med.31280-1284(1997)；Howard等Nat.Med.2467-469(1996))。在杜兴氏肌营养不良的小鼠模型中，观察到硫酸庆大霉素在提前终止密码子处抑制翻译终止，导致全长抗肌萎缩蛋白产生(Barton-Davis等，J.Clin.Invest.104375-381(1999))。全长抗肌萎缩蛋白的量的小的增加在mdx小鼠中提供对收缩诱导的损伤的保护。在这些研究中没有确定在无义密码子部位插入的氨基酸。
因此，通过调解无义密码子的误读而抑制翻译提前终止的小分子治疗或预防对于多种疾病的治疗将是有用的。可为公众引入可用于抵抗由无义突变引起的疾病的广谱选择性治疗或预防的小分子药物，特别是口服可生物利用的药物的发现才刚开始。
Clitocine(6-氨基-5-硝基-4-(β-D-呋喃核糖基氨基)嘧啶)为首先从蘑菇卷边杯伞(Clitocybe inversa)中分离的天然存在的外环氨基核苷(Kubo等，Tet.Lett.274277(1986))。还报道了clitocine的全合成(Moss等，J.Med.Chem.31786-790(1988)和Kamikawa等，J.Chem.Soc.Chem.Commun.195(1988))。已经报道clitocine具有杀虫活性和针对白血病细胞系的细胞抑制活性(Kubo等，Tet.Lett.274277(1986)和Moss等，J.Med.Chem.31786-790(1988))。但是至今还没有公开clitocine作为用于与无义突变有关的疾病的治疗剂的应用。也没有报道开发出具有作为用于与无义突变有关的癌症或疾病的治疗剂的效用的clitocine类似物或衍生物。
因此，还需要开发、表征和优化用于开发用于治疗或预防与mRNA无义突变有关的疾病的新药物的先导分子。因此，本发明的目的是提供这样的化合物。
本文提及的所有文献均引入本申请作为参考，如同在本文中全部阐述一样。

发明内容
根据本发明，鉴定了抑制与mRNA中无义突变相关的翻译提前终止的化合物并提供了其使用方法。
根据本发明的一方面，提供式(1)的化合物或所述式1的化合物的药学可接受的盐、水合物、溶剂合物、包合物、外消旋物、立体异构体或多晶型物，所述化合物可用于抑制与mRNA中无义突变相关的翻译提前终止并可用于治疗与mRNA中无义突变相关的疾病
其中X、Y和Z独立地选自N、S、O和C，其中至少X、Y或Z之一为杂原子；R1为氢、C1-C6烷基或Na+或Mg2+；R2独立地不存在；或独立地为氢；-CH＝N-OH基；氰基；任选被羟基取代的C1-C6烷基；或任选被氢、羟基或C1-C4烷氧基取代的羰基；R3独立地不存在，或独立地为卤素、羟基、C1-C6烷基、C1-C4烷氧基或硝基；R4独立地不存在，或独立地为氢、C1-C6烷基，或者当与W一起时，R4可以是键，且W与R4和W连接的杂环形成11-13元杂三环环结构；W选自(a)任选被苯基取代的C2-C6炔基；(b)任选被一个或多个以下独立选择的基团取代的C1-C8直链或支链烷基C1-C6烷基；卤素；-C(＝O)-NH-苯基，其中苯基任选被一个或多个独立选择的卤素或C1-C4烷基取代；5-6元杂环；任选被一个或多个独立地选自羟基、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4烷氧基或任选被一个或多个C1-C4烷基取代的氨基取代的C6-C8芳基；任选被一个或多个以下独立选择的基团取代的芳氧基羟基、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4烷氧基或任选被一个或多个C1-C4烷基取代的氨基；(c)C2-C8烯基；(d)任选被C1-C6烷基取代的C3-C8环烷基；(e)任选被一个或多个以下独立选择的基团取代的C6-C8芳基羟基；卤素；任选被一个或多个独立选择的卤素或羟基取代的C1-C4直链或支链烷基；任选被一个或多个独立选择的卤素或苯基取代的C1-C4烷氧基；任选被一个或多个独立选择的C1-C4烷基取代的C3-C8环烷基；任选被一个或多个独立选择的C1-C4烷基取代的C6-C8芳基；任选被一个或多个以下独立选择的基团取代的芳氧基羟基、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4烷氧基或任选被一个或多个独立选择的C1-C4烷基取代的氨基；任选被一个或多个独立选择的C1-C4烷基、氧代或任选被一个或多个以下独立选择的基团取代的C6-C8芳基取代的5-6元杂环羟基、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4烷氧基或任选被一个或多个独立选择的C1-C4烷基取代的氨基；任选被氨基或氨基烷基或烷氧基取代的萘基；-C(O)-NRxRy基；-C(O)-Rx基；异吲哚-1，3-二酮基；硝基；氰基；-SO3H基；烷硫基；烷基磺酰基；-NRx-C(O)-Rz基；-NRxRy基；-NRx-SO2-Rz基；-NRx-C(O)-NRxRy基；-NRx-C(O)O-Rz基；(f)任选被一个或多个独立选择的卤素、氨基或氨基烷基或烷氧基取代的C10-C14芳基；(g)-C(O)-NRxRy基；(h)5-6元杂环，其任选被一个或多个独立选择的氧代基团；卤素；C1-C4烷基；C1-C4烷氧基；C1-C4卤代烷基；C1-C4卤代烷氧基；芳氧基；-NRxRy基；烷硫基；-C(O)-Rx基；或任选被一个或多个独立选择的卤素、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基取代的C6-C8芳基取代；(i)具有2-3个环结构的杂环基团，其任选被一个或多个独立选择的卤素、氧代基团、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基或C1-C4烷氧基取代；(j)或W与R4，包括其中R4为键，及R4和W连接的杂环一起形成11-13元杂三环环结构；其中Rx为氢、C1-C6烷基，或Rx和Ry与它们连接的原子一起形成4-7元碳环或杂环；Ry为氢、C1-C6烷基、任选被一个或多个独立选择的C1-C4烷基取代的芳基，或者Rx和Ry与它们连接的原子一起形成4-7元碳环或杂环；且Rz为任选被芳基或卤素取代的C1-C6烷基；或任选被卤素、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基取代的芳基。
根据本发明的另一方面，提供一种用于抑制与无义突变相关的翻译提前终止的方法，以及用于预防或治疗与mRNA无义突变相关的疾病的方法。这些疾病包括但不限于由与无义突变相关的翻译提前终止引起的基因疾病如CNS疾病、炎症性疾病、神经变性疾病、自身免疫性疾病、心血管病或肺病；更优选所述疾病为癌症(或其它增生性疾病)、淀粉样变、阿尔茨海默氏病、动脉粥样硬化、巨人症、侏儒症、甲状腺功能减退、甲状腺功能亢进、囊性纤维化、衰老、肥胖症、帕金森氏病、尼曼-皮克病、家族性高胆固醇血症、视网膜色素变性、马方综合征、溶酶体贮积症、肌营养不良、囊性纤维化、血友病或典型的晚婴儿型神经元蜡样质脂褐素沉积病(LINCL)。
在一个实施方案中，本发明涉及用于抑制与mRNA无义突变相关的翻译提前终止的方法，其包括对有此需要的个体给予无义抑制量的至少一种本发明的化合物。
在另一个实施方案中，提供用于治疗癌症、溶酶体贮积症、肌营养不良、囊性纤维化、血友病或典型的晚婴儿型神经元蜡样质脂褐素沉积病的方法，其包括给予有此需要的患者治疗有效量的至少一种本发明的化合物。
参照以下优选的实施方案和具体描述，本发明的这些和其它方面将变得更容易被理解。
某些实施方案1.一种治疗或预防由体细胞突变引起的疾病的方法，其包括给予有此需要的患者有效量的式1的化合物或所述式1的化合物的药学可接受的盐、水合物、溶剂合物、包合物多晶型物、外消旋物、立体异构体或多晶型物。
2.实施方案1的方法，其中所述化合物或其药学可接受的盐、水合物、溶剂合物、包合物、外消旋物、立体异构体或多晶型物作为含有所述化合物和药学可接受的载体或稀释剂的组合物给予。
3.实施方案1的方法，其中所述给予为静脉内给予。
4.一种治疗或预防自身免疫性疾病、血液病、胶原病、糖尿病、神经变性疾病、心血管病、肺病、炎症性疾病或中枢神经系统疾病的方法，其包括给予有此需要的患者有效量的式1的化合物或其药学可接受的盐、水合物、溶剂合物、包合物、外消旋物、立体异构体或多晶型物。
5.实施方案4的方法，其中所述给予为静脉内给予。
6.实施方案4的方法，其中所述自身免疫性疾病为类风湿性关节炎或移植物抗宿主疾病。
7.实施方案4的方法，其中所述炎症性疾病为关节炎。
8.实施方案4的方法，其中所述中枢神经系统疾病为多发性硬化、肌营养不良、杜兴氏肌营养不良、阿尔茨海默氏病、神经变性疾病或帕金森氏病。
9.实施方案4的方法，其中所述血液病为血友病、血管性血友病(VonWillebrand disease)、共济失调性毛细血管扩张症、β地中海贫血症或肾结石。
10.实施方案4的方法，其中所述胶原病为成骨不全或硬化。
11.一种治疗或预防家族性红细胞增多症、免疫缺陷、肾脏疾病、囊性纤维化、家族性高胆固醇血症、视网膜色素变性、淀粉样变、血友病、阿尔茨海默氏病、泰-萨克斯病(Tay Sachs disease)、尼曼-皮克病、帕金森氏病、动脉粥样硬化、巨人症、侏儒症、甲状腺功能亢进、衰老、肥胖症、杜兴氏肌营养不良或马方综合征的方法，其包括给予有此需要的患者有效量的式1的化合物或其药学可接受的盐、水合物、溶剂合物、包合物、外消旋物、立体异构体或多晶型物。
12.实施方案11的方法，其中所述给予为静脉内给予。
13.一种治疗或预防人癌症的方法，其包括给予有此需要的人有效量的式1的化合物或其药学可接受的盐、水合物、溶剂合物、包合物、外消旋物、立体异构体或多晶型物。
14.实施方案13的方法，其中所述给予为静脉内给予。
15.实施方案13的方法，其中所述癌症为头和颈、眼、皮肤、口、咽喉、食管、胸、骨、血、肺、结肠、乙状结肠、直肠、胃、前列腺、乳房、卵巢、肾、肝、胰腺、脑、肠、心脏或肾上腺的癌症。
16.实施方案13的方法，其中所述化合物或其药学可接受的盐、水合物、溶剂合物、包合物、外消旋物、立体异构体或多晶型物包含药学可接受载体或稀释剂。
17.实施方案13的方法，其中所述癌症为实体瘤。
18.实施方案13的方法，其中所述癌症为肉瘤、癌、纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤因氏瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胰腺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝癌、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎性癌、维尔姆斯瘤、子宫颈癌、睾丸肿瘤、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、胶质瘤、星形细胞瘤、髓母细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、卡波西肉瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质瘤、脑膜瘤(menangioma)、黑色素瘤、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、血液源性肿瘤(blood-born tumor)或多发性骨髓瘤。
19.实施方案13的方法，其中所述癌症为急性成淋巴细胞性白血病、急性B淋巴细胞性白血病、急性T淋巴细胞性白血病、急性粒细胞性白血病、急性早幼粒细胞性白血病、急性成单核细胞性白血病、急性红白血病(acuteerythroleukemic leukemia)、急性成巨核细胞白血病、急性粒单核细胞性白血病、急性非淋巴细胞性白血病、急性未分化细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、毛细胞性白血病或多发性骨髓瘤。
20.一种治疗或预防与p53基因突变相关的疾病的方法，其包括给予有此需要的患者有效量的式1的化合物或其药学可接受的盐、水合物、溶剂合物、包合物、外消旋物、立体异构体或多晶型物。
21.实施方案20的方法，其中所述给予为静脉内给予。
22.实施方案20的方法，其中所述疾病为肉瘤、癌、纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤因氏瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胰腺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝癌、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎性癌、维尔姆斯瘤、子宫颈癌、睾丸肿瘤、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、胶质瘤、星形细胞瘤、髓母细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、卡波西肉瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质瘤、脑膜瘤、黑色素瘤、神经母细胞瘤或视网膜母细胞瘤。
23.一种抑制癌细胞生长的方法，其包括使癌细胞与有效量的式1的化合物或其药学可接受的盐、水合物、溶剂合物、包合物、外消旋物、立体异构体或多晶型物接触。
24.一种在哺乳动物中选择性产生蛋白质的方法，其包括在哺乳动物中转录含有无义突变的基因；和将有效量的本发明的化合物提供给所述哺乳动物，其中所述蛋白质由所述哺乳动物产生。


图1提供用于评价无义突变抑制的荧光素酶基测定用构建体的示意图示；图2提供基因工程化以在荧光素酶蛋白的N-末端带有一个或多个表位标签的荧光素酶构建体的示意图示；图3提供用于评价连读效率的荧光素酶基测定用构建体的示意图示；图4提供来自mdx小鼠细胞和肌肉的结果。
具体实施例方式
翻译提前终止可能产生可能是致死的或可能引起多种疾病的异常蛋白质，所述多种疾病作为非限制性实例包括癌症、溶酶体贮积病、肌肉萎缩、囊性纤维化和血友病。根据本发明，已经鉴定出了抑制无义突变的化合物并提供了它们的使用方法。
A.本发明的化合物根据本发明的一方面，提供可用于抑制无义突变的本发明的化合物。在某些实施方案中，本发明的化合物特定地抑制无义突变，而在其它实施方案中，本发明的化合物抑制无义突变以及治疗疾病，所述疾病作为非限制性实例包括癌症、溶酶体贮积病、肌营养不良、囊性纤维化和血友病。
可用于抑制无义突变的本发明的优选化合物包括如下所示的式(1)的化合物或所述式1的化合物的药学可接受的盐、水合物、溶剂合物、包合物、外消旋物、立体异构体或多晶型物，
其中X、Y和Z独立地选自N、S、O和C，其中至少X、Y或Z之一为杂原子；R1为氢、C1-C6烷基或Na+或Mg2+；R2独立地不存在；或独立地为氢；-CH＝N-OH基；氰基；任选被羟基取代的C1-C6烷基；任选被氢、羟基或C1-C4烷氧基取代的羰基；R3独立地不存在，或独立地为卤素、羟基、C1-C6烷基、C1-C4烷氧基或硝基；R4独立地不存在，或独立地为氢、C1-C6烷基，或者当与W一起时，R4可以是键，且W与R4和W连接的杂环形成11-13元杂三环环结构；W选自(a)任选被苯基取代的C2-C6炔基；(b)任选被一个或多个以下独立选择的基团取代的C1-C8直链或支链烷基C1-C6烷基；卤素；-C(＝O)-NH-苯基，其中苯基任选被一个或多个独立选择的卤素或C1-C4烷基取代；5-6元杂环；任选被一个或多个独立地选自羟基、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4烷氧基或任选被一个或多个C1-C4烷基取代的氨基取代的C6-C8芳基；任选被一个或多个以下独立选择的基团取代的芳氧基羟基、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4烷氧基或任选被一个或多个C1-C4烷基取代的氨基；(c)C2-C8烯基；(d)任选被C1-C6烷基取代的C3-C8环烷基；(e)任选被一个或多个以下独立选择的基团取代的C6-C8芳基羟基；卤素；任选被一个或多个独立选择的卤素或羟基取代的C1-C4直链或支链烷基；任选被一个或多个独立选择的卤素或苯基取代的C1-C4烷氧基；任选被一个或多个独立选择的C1-C4烷基取代的C3-C8环烷基；任选被一个或多个独立选择的C1-C4烷基取代的C6-C8芳基；任选被一个或多个以下独立选择的基团取代的芳氧基羟基、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4烷氧基或任选被一个或多个独立选择的C1-C4烷基取代的氨基；任选被一个或多个独立选择的C1-C4烷基、氧代或任选被一个或多个以下独立选择的基团取代的C6-C8芳基取代的5-6元杂环羟基、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4烷氧基或任选被一个或多个独立选择的C1-C4烷基取代的氨基；任选被氨基或氨基烷基或烷氧基取代的萘基；-C(O)-NRxRy基；-C(O)-Rx基；异吲哚-1，3-二酮基；硝基；氰基；-SO3H基；烷硫基；烷基磺酰基；-NRx-C(O)-Rz基；-NRxRy基；-NRx-SO2-Rz基；-NRx-C(O)-NRxRy基；-NRx-C(O)O-Rz基；(f)任选被一个或多个独立选择的卤素、氨基或氨基烷基或烷氧基取代的C10-C14芳基；(g)-C(O)-NRxRy基；(h)5-6元杂环，其任选被一个或多个独立选择的氧代基团；卤素；C1-C4烷基；C1-C4烷氧基；C1-C4卤代烷基；C1-C4卤代烷氧基；芳氧基；-NRxRy基；烷硫基；-C(O)-Rx基；或任选被一个或多个独立选择的卤素、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基取代的C6-C8芳基取代；(i)具有2-3个环结构的杂环基团，其任选被一个或多个独立选择的卤素、氧代基团、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基或C1-C4烷氧基取代；(j)或W与R4，包括其中R4为键，及R4和W连接的杂环一起形成11-13元杂三环环结构；其中Rx为氢、C1-C6烷基，或Rx和Ry与它们连接的原子一起形成4-7元碳环或杂环；Ry为氢、C1-C6烷基、任选被一个或多个独立选择的C1-C4烷基取代的芳基，或者Rx和Ry与它们连接的原子一起形成4-7元碳环或杂环；且R2为任选被芳基或卤素取代的C1-C6烷基；或任选被卤素、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基取代的芳基。
在另一个实施方案中，可用于抑制无义突变的本发明的化合物包括式1的化合物或所述式1的化合物的药学可接受的盐、水合物、溶剂合物、包合物、外消旋物、立体异构体或多晶型物，其中X、Y和Z独立地选自N、S、O和C，其中至少X、Y或Z之一为杂原子；R1为氢或C1-C6烷基；或Na+或Mg2+；R2独立地不存在；或独立地为氢；任选被羟基取代的C1-C6烷基；任选被羟基或C1-C4烷氧基取代的羰基；-CH＝N-OH；或氰基；R3不存在，或为卤素、羟基、C1-C6烷基、C1-C4烷氧基或硝基；R4不存在；为C1-C6烷基；或者与W及R4和W连接的杂环一起形成11-13元杂三环环结构；W选自任选被一个或多个以下基团取代的C1-C8直链或支链烷基C1-C6烷基；卤素；5-6元杂环；任选被一个或多个以下基团取代的C6-C8芳基羟基、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4烷氧基或任选被一个或多个C1-C4烷基取代的氨基；任选被一个或多个以下基团取代的芳氧基羟基、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4烷氧基或任选被一个或多个C1-C4烷基取代的氨基；C2-C8烯基；任选被C1-C6烷基取代的C3-C8环烷基；任选被一个或多个以下基团取代的C6-C8芳基羟基；卤素；任选被一个或多个独立选择的卤素或羟基取代的C1-C4直链或支链烷基；任选被一个或多个独立选择的卤素或苯基取代的C1-C4烷氧基；任选被一个或多个独立选择的C1-C4烷基取代的C3-C8环烷基；任选被一个或多个独立选择的C1-C4烷基取代的C6-C8芳基；任选被一个或多个以下基团取代的芳氧基羟基、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4烷氧基或任选被一个或多个C1-C4烷基取代的氨基；任选被一个或多个独立选择的C1-C4烷基、氧代或任选被一个或多个以下基团取代的C6-C8芳基取代的5-6元杂环羟基、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4烷氧基或任选被一个或多个C1-C4烷基取代的氨基；任选被氨基或氨基烷基取代的萘基；-C(O)-NRxRy基；-C(O)-Rx基；异吲哚-1，3-二酮基；硝基；氰基；-SO3H基；烷硫基；烷基磺酰基；-NRx-C(O)-Rz基；-NRxRy基；-NRx-SO2-Rz基；-NRx-C(O)-NRxRy基；-NRx-C(O)O-Rz基；-C(O)-NRxRy基；5-6元杂环，其任选被一个或多个氧代基团；卤素；C1-C4烷基；C1-C4卤代烷基；-C(O)-Rx基；和/或任选被一个或多个独立选择的卤素、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、芳氧基、-NRxRy基和/或烷硫基取代的C6-C8芳基取代；具有2-3个环结构的杂环基团，其任选被一个或多个卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基和/或C1-C4烷氧基取代；或W与R4及R4和W连接的杂环一起形成11-13元杂三环环结构；其中Rx为氢、C1-C6烷基，或Rx和Ry与它们连接的原子一起形成4-7元碳环或杂环；Ry为氢、C1-C6烷基、任选取代的芳基，或Rx和Ry与它们连接的原子一起形成4-7元碳环或杂环；且Rz为任选被芳基或卤素取代的C1-C6烷基；或任选被卤素、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基取代的芳基。
在式1的优选的实施方案中，当Y和Z均为N且X为O时，苯环的-C(O)-O-R1基不在间位。在可选实施方案中，当Y和Z均为N且X为O时，苯环的-C(O)-O-R1基在邻位或者对位。
在式1的优选的实施方案中，当W为5或6元任选取代的杂环时，所述杂环可以选自以下基团噻吩基、呋喃基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、哌啶基、吡啶基；且所述杂环可以任选被一个或多个独立选择的氧代基团；卤素；C1-C4烷基；C1-C4卤代烷基；-C(O)-Rx基；和/或任选被一个或多个独立选择的卤素、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、芳氧基、-NRxRy基和/或烷硫基取代的C6-C8芳基取代。
在式1的另一个优选的实施方案中，当W为5或6元任选取代的杂环时，所述任选取代的杂环可以选自以下基团噻吩基；呋喃基；任选被C1-C4烷基取代的吡嗪基；任选被一个或两个氧代基团取代的嘧啶基；任选被一个或两个氧代基团取代的哒嗪基；任选被-C(O)-Rx基取代的哌啶基；和任选被一个或多个以下基团取代的吡啶基卤素；C1-C4烷基；C1-C4卤代烷基；任选被一个或多个独立选择的C1-C4烷基取代的C6-C8芳基；C1-C4烷氧基；芳氧基；-NRxRy基；和烷硫基。
在式1的另一个优选的实施方案中，当W为具有2-3个环结构的任选取代的杂环时，所述杂环可以选自以下基团苯并间二氧杂环戊烯基；任选被一个或多个独立选择的卤素取代的苯并[1，3]二氧杂环己烯基；任选被一个或多个独立选择的C1-C4烷基或C1-C4卤代烷基取代的苯并咪唑基；苯并噻唑基；任选被一个或多个独立选择的C1-C4烷基取代的苯并三唑基；任选被一个或多个独立选择的C1-C4烷基取代的苯并噻吩基；苯并[1，2，5]噁二唑基；2，3-二氢苯并[1，4]二氧杂环己烯基；苯并呋喃基；喹喔啉基；吲哚基；喹啉基；以及选自以下的取代基(*表示连接键)

如本领域技术人员所认识的，本发明的某些化合物可以包括至少一个手性中心，并因此可以以外消旋混合物或以对映体纯组合物存在。本文所用的“对映体纯”是指基本上由单一异构体，优选由90％、92％、95％、98％、99％或100％的单一异构体组成的组合物。
本文所用的术语“烷基”一般指饱和直链、支链或环状结构的烃基，包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、正己基、环己基、正庚基、辛基、正辛基等。在某些实施方案中，烷基取代基可以是C1-C8、C3-C8、C1-C6或C1-C4烷基。在某些实施方案中，烷基可以任选被一个或多个卤素或烷氧基取代。例如，烷基可以包括一个或多个卤素取代基，以形成卤代烷基包括一卤代烷基、二卤代烷基和三卤代烷基。
本文所用的“烯基”一般指具有一个或多个碳碳双键的直链、支链或环状亚烷基，例如C2-C6亚烷基，包括3-丙烯基。
本文所用的“芳基”指碳环芳基环结构。包括在芳基范围内为具有5-20个碳原子的芳环。芳环结构包括具有一个或多个环结构的化合物，如单、双或三环化合物。芳基的实例包括苯基、甲苯基、蒽基、芴基、茚基、薁基、菲基(即菲)以及萘基(即萘)环结构。在某些实施方案中，芳基可以任选被取代。
本文所用的“杂环”指其中环中的一个或多个原子杂原子是除了碳以外的元素的环状环结构。杂原子一般为O、S或N原子。包括在杂环范围内并可独立的是O、N和S杂环环结构。杂环环结构可以包括具有一个或多个环结构的化合物，如单、双或三环化合物，并可以是芳香性的，即所述环结构可以为杂芳基。杂环可以包括苯并稠合杂环环结构。非限制性杂环基的实例包括吗啉基、吡咯烷酮基(pyrrolidinonyl)、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、乙内酰脲基、戊内酰胺基、环氧乙烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢吡啶基、四氢嘧啶基、四氢噻吩基或四氢噻喃基、苯并间二氧杂环戊烯基、苯并噻唑基、二氢苯并二氧杂环己烯基、二氢异吲哚基、二氢苯并咪唑基等。在某些实施方案中，杂环可以任选被取代。本文所用的“杂芳基”指环中的一个或多个原子杂原子为除碳以外的元素的的环状芳环结构。杂原子一般地为O、S或N原子。包括在杂芳基范围内并可独立选择的是O、N和S杂芳基环结构。环结构可以包括具有一个或多个环结构的化合物，如单-、双-或三环化合物。在一些实施方案中，杂芳基可以选自含有两个或更多个杂原子，三个或更多个杂原子或四个或更多个杂原子的杂芳基基团。杂芳基环结构可以选自含有五个或更多个原子，六个或更多个原子，八个或更多个原子的杂芳基环结构。在优选的实施方案中，杂芳基包括5-10个原子。杂芳基环结构的实例包括吖啶、苯并咪唑、苯并噁唑、苯并间二氧杂环戊烯、苯并呋喃、1，3-二嗪、1，2-二嗪、1，2-二唑、1，4-二氮萘、呋喃、呋咱、咪唑、吲哚、异噁唑、异喹啉、异噻唑、噁唑、嘌呤、哒嗪、吡唑、吡啶、吡嗪、嘧啶、吡咯、喹啉、喹喔啉、噻唑、噻吩、1，3，5-三嗪、1，2，4-三嗪、1，2，3-三嗪、四唑和喹唑啉。
本文所用的“烷氧基”一般指具有结构-O-R的基团。在某些实施方案中，R可以为烷基，如C1-C8、C1-C6烷基或C1-C4烷基。在某些实施方案中，烷氧基的R基可以任选被至少一个卤素取代。例如，烷氧基的R基可以为卤代烷基，即卤代烷氧基。
卤素取代基可以独立地选自卤素如氟、氯、溴、碘和砹。
对于本发明的目的，包括优选的实施方案在内，对于一个或多个官能团或取代基加入本发明的化合物中，出现在所公开的化合物的任何位置的各官能团或取代基可以独立地被选择并且可以适当地独立地被取代。另外，对本发明的分子的任何位置所阐述的通称取代基(generic substituent)，应理解该通称取代基可以被更多个具体取代基(specific substutuent)所代替，并且获得的分子也在本发明的分子的范围内。
参照式1，优选的W基团包括下表中所示的基团(*表示连接键)。






在优选的实施方案中，式1的化合物包括式1-A的化合物
参照式1-A，在优选的实施方案中，羧基优选在间位或对位。在另一个优选的实施方案中，羧基优选在对位。此外，R3优选不存在，或优选为卤素、C1-C4烷氧基或硝基。在式1-A的化合物的一个优选实施方案中，W为任选如在式1中取代的C6-C8芳基。在式1-A的另一个实施方案中，优选的W基团如下表中所示。





在另一个优选的实施方案中，式1的化合物包括式1-B的化合物 参照式1-B，在实施方案中，羧基优选在对位。在另一个实施方案中，W优选为任选如在式1中取代的C6-C8芳基；更优选为任选被C1-C4烷基取代的苯基。式1-B的优选化合物如下所示。
在另一个实施方案中，式1的优选化合物包括式1-C的化合物 参照式1-C，在实施方案中，羧基优选在对位。在另一个实施方案中，W优选为任选如在式1中取代的C6-C8芳基。
在另一个实施方案中，优选W基团包括下表所示的基团。
在另一个实施方案中，式1的优选化合物包括式1-D的化合物
参照式1-D，在实施方案中，羧基优选在间位或对位。另外，R1优选为氢或甲基。R3优选在间位。在一个实施方案中，W优选为任选如在式1中取代的C6-C8芳基。在另一个实施方案中，优选的W基团包括下表所示的基团。
在另一个实施方案中，式1的优选化合物包括式1-E化合物
参照式1-E，在实施方案中，羧基优选在间位或对位。另外，在一个实施方案中，R4优选为氢。在一个实施方案中，W优选为任选如在式1中取代的C6-C8芳基。在另一个实施方案中，优选的W基团包括下表所示的基团。
在另一个实施方案中，式1的优选化合物包括式1-F的化合物
参照式1-F，在实施方案中，羧基优选在间位或对位，更优选在间位。在另一个实施方案中，R4优选为氢。在一个实施方案中，W优选为任选如在式1中取代的C6-C8芳基。在另一个实施方案中，优选的W基团包括下表所示的基团。

在另一个实施方案中，式1的优选化合物包括式1-G的化合物 参照式1-G，在实施方案中，羧基优选在间位。在一个实施方案中，W优选为任选如在式1中取代的C6-C8芳基。在另一个实施方案中，优选的W基团包括下表所示的基团。
在另一个实施方案中，式1的优选化合物包括式1-H化合物
参照式1-H，在实施方案中，羧基优选在间位。在另一个实施方案中，R2优选为氢或C1-C4烷基。R3如果存在，则优选在邻位，并优选为羟基。在一个实施方案中，W优选为任选如在式1中取代的C6-C8芳基，更优选为苯基。在另一个实施方案中，式1-H的优选化合物如下所示。
在另一个实施方案中，式1的优选化合物包括式1-I的化合物 参照式1-I，在实施方案中，羧基优选在间位。在另一个实施方案中，R4优选为氢。在式1-I的一个实施方案中，W优选为任选如在式1中取代的C6-C8芳基。在式1-I的另一个实施方案中，W优选为萘基；吡啶基；或者W与R4与R4和W连接的杂环一起形成11-13元杂三环环结构。在式1-I的优选实施方案中，W与R4与R4和W连接的杂环一起形成如下的杂三环环结构，其中*表示与式1-I的苯环的连接键。
在另一个实施方案中，式1-I的化合物的优选W基团包括下表所示的基团。
在另一个实施方案中，式1的优选化合物包括式1-J的化合物
参照式1-J，在实施方案中，羧基优选在间位。在另一个实施方案中，R4优选为氢。在一个实施方案中，W优选为任选如在式1中取代的C6-C8芳基，更优选为任选被C1-C4烷基取代的苯基。在另一个实施方案中，式1-J的优选化合物如下所示。
在另一个实施方案中，式1的优选化合物包括式1-K的化合物 参照式1-K，在实施方案中，羧基优选在间位或对位。在另一个实施方案中，R1优选为氢或甲基。R2如果存在，则优选为氢；任选被羟基取代的C1-C6烷基；任选被羟基或C1-C4烷氧基取代的羰基；-CH＝N-OH基；或氰基。在一个实施方案中，W优选为任选如在式1中取代的C6-C8芳基，或任选如在式1中取代的萘基。在另一个实施方案中，优选的W基包括下表所示的基团。
在另一个实施方案中，式1的优选化合物包括式1-L的化合物 参照式1-L，在实施方案中，羧基优选在间位或对位。在另一个实施方案中，R1优选为氢或C1-C4烷基。R2优选为氢。在一个实施方案中，W优选为任选如在式1中取代的C6-C8芳基，更优选为任选被C1-C4烷基取代的苯基。在另一个实施方案中，优选的W基包括下表所示的基团。
在另一个实施方案中，式1的优选化合物包括式1-M的化合物
参照式1-M，在实施方案中，羧基优选在间位。在另一个实施方案中，R2优选为氢。在一个实施方案中，W优选为任选如在式1中取代的C6-C8芳基，更优选为任选被C1-C4烷基取代的苯基。在另一个实施方案中，式1-M的优选化合物如下所示。
在另一个实施方案中，式1的优选化合物包括式1-N的化合物 参照式1-N，在实施方案中，羧基优选在间位。在另一个实施方案中，R4优选为氢。在一个实施方案中，W优选为任选如在式1中取代的C6-C8芳基，更优选为任选被C1-C4烷基取代的苯基。在另一个实施方案中，式1-N的优选化合物如下所示。
在另一个实施方案中，式1的优选化合物包括式1-O的化合物 参照式1-O，在实施方案中，羧基优选在间位。在另一个实施方案中，R2优选为氢。在一个实施方案中，W优选为任选如在式1中取代的C6-C8芳基，更优选为任选被C1-C4烷基取代的苯基。在另一个实施方案中，式1-J的优选化合物如下所示。
在另一个实施方案中，式1的优选化合物包括式1-P的化合物
参照式1-P，在实施方案中，羧基优选在间位。在另一个实施方案中，R2优选为氢。在一个实施方案中，W优选为任选如在式1中取代的C6-C8芳基，更优选为任选被C1-C4烷基取代的苯基。在另一个实施方案中，式1-P的优选化合物如下所示。
在另一个实施方案中，式1的优选化合物包括式1-Q的化合物 参照式1-Q，在实施方案中，羧基优选在间位。在另一个实施方案中，R2优选为氢。在一个实施方案中，W优选为任选如在式1中取代的C6-C8芳基，更优选为任选被C1-C4烷基取代的苯基。在另一个实施方案中，式1-Q的优选化合物如下所示。

在另一个实施方案中，式1的优选化合物包括式1-R的化合物 参照式1-R，在实施方案中，羧基优选在间位。在另一个实施方案中，R2优选为氢。在一个实施方案中，W优选为任选如在式1中取代的C6-C8芳基，更优选为任选被C1-C4烷基取代的苯基。在另一个实施方案中，式1-R的优选化合物如下所示。
在另一个实施方案中，式1的优选化合物包括式1-S的化合物 参照式1-S，在实施方案中，羧基优选在间位。在另一个实施方案中，R2优选为氢或任选如在式1中取代的羰基。R4优选为氢。在一个实施方案中，W优选为任选如在式1中取代的C6-C8芳基，更优选为任选被C1-C4烷基取代的苯基。在另一个实施方案中，式1-S的优选化合物如下所示。
在另一个优选的实施方案中，式1的优选化合物包括式1-T的化合物 参照式1-T，在实施方案中，羧基优选在间位。在另一个实施方案中，R2优选为任选如在式1中取代的羰基或氢。R4优选为氢。在一个实施方案中，W优选为任选如在式1中取代的C6-C8芳基，更优选为任选被C1-C4烷基取代的苯基。在另一个实施方案中，式1-T的优选化合物如下所示。
在另一个实施方案中，式1的优选化合物包括式1-U的化合物
参照式1-U，在实施方案中，羧基优选在间位。在一个实施方案中，W优选为任选如在式1中取代的C6-C8芳基，更优选为任选被C1-C4烷基取代的苯基。
在另一个实施方案中，式1-U的优选化合物如下所示。
在另一个实施方案中，式1的优选化合物包括式1-V的化合物 参照式1-V，在实施方案中，羧基优选在间位。在一个实施方案中，W优选为任选如在式1中取代的C6-C8芳基，更优选为任选被C1-C4烷基取代的苯基。在另一个实施方案中，式1-V的优选化合物如下所示。
在另一个实施方案中，式1的优选化合物包括式1-W的化合物 参照式1-W，在实施方案中，羧基优选在间位。在另一个实施方案中，R2优选为氢。在一个实施方案中，W优选为任选如在式1中取代的C6-C8芳基，更优选为任选被C1-C4烷基取代的苯基。在另一个实施方案中，式1-W的优选化合物如下所示。
在另一个实施方案中，式1的优选化合物包括式1-X的化合物
参照式1-X，在实施方案中，羧基优选在间位。在另一个实施方案中，R2优选为氢。在一个实施方案中，W优选为任选如在式1中取代的C6-C8芳基，更优选为任选被C1-C4烷基取代的苯基。在另一个实施方案中，式1-X的优选化合物如下所示。
在另一个实施方案中，式1的优选化合物包括式1-Y的化合物 参照式1-Y，在实施方案中，羧基优选在间位。在另一个实施方案中，R4优选为氢。在一个实施方案中，W优选为任选如在式1中取代的C6-C8芳基，更优选为任选被C1-C4烷基取代的苯基。在另一个实施方案中，式1-Y的优选化合物如下所示。
在另一个实施方案中，式1的优选化合物包括式1-Z的化合物 参照式1-Z，在实施方案中，羧基优选在间位。在一个实施方案中，W优选为任选如在式1中取代的C6-C8芳基；吡啶基；或噻吩基。在另一个实施方案中，优选的W基包括下表所示的基团。
本发明的另一方面提供用于抑制与mRNA无义突变相关的翻译提前终止并用于治疗与mRNA无义突变相关的疾病的式(2)的化合物或所述式2的化合物的药学可接受的盐、水合物、溶剂合物、包合物、外消旋物、立体异构体或多晶型物 其中X、Y和Z独立地选自N、S、O和C，其中至少X、Y或Z之一为杂原子；R1为氢、C1-C6烷基或Na+或Mg2+；
R2独立地不存在；或独立地为氢；-CH＝N-OH基；氰基；任选被羟基取代的C1-C6烷基；任选被氢、羟基或C1-C4烷氧基取代的羰基；R3独立地不存在，或独立地为卤素、羟基、C1-C6烷基、C1-C4烷氧基或硝基；R4独立地不存在，或独立地为氢、C1-C6烷基，或者当与W一起时，R4可以是键，且W与与R4和W连接的杂环形成11-13元杂三环环结构；q是0、1或2；W选自(a)任选被苯基取代的C2-C6炔基；(b)任选被一个或多个以下独立选择的基团取代的C1-C8直链或支链烷基C1-C6烷基；卤素；-C(＝O)-NH-苯基，其中苯基任选被一个或多个独立选择的卤素或C1-C4烷基取代；5-6元杂环；任选被一个或多个独立地选自羟基、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4烷氧基或任选被一个或多个C1-C4烷基取代的氨基取代的C6-C8芳基；任选被一个或多个以下独立选择的基团取代的芳氧基羟基、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4烷氧基或任选被一个或多个C1-C4烷基取代的氨基；(c)C2-C8烯基；(d)任选被C1-C6烷基取代的C3-C8环烷基；(e)任选被一个或多个以下独立选择的基团取代的C6-C8芳基羟基；卤素；任选被一个或多个独立选择的卤素或羟基取代的C1-C4直链或支链烷基；任选被一个或多个独立选择的卤素或苯基取代的C1-C4烷氧基；任选被一个或多个独立选择的C1-C4烷基取代的C3-C8环烷基；任选被一个或多个独立选择的C1-C4烷基取代的C6-C8芳基；任选被一个或多个以下独立选择的基团取代的芳氧基羟基、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4烷氧基或任选被一个或多个独立选择的C1-C4烷基取代的氨基；任选被一个或多个独立选择的C1-C4烷基、氧代或任选被一个或多个以下独立选择的基团取代的C6-C8芳基取代的5-6元杂环羟基、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4烷氧基或任选被一个或多个独立选择的C1-C4烷基取代的氨基；任选被氨基或氨基烷基或烷氧基取代的萘基；-C(O)-NRxRy基；-C(O)-Rx基；异吲哚-1，3-二酮基；硝基；氰基；-SO3H基；烷硫基；烷基磺酰基；-NRx-C(O)-Rz基；-NRxRy基；-NRx-SO2-Rz基；-NRx-C(O)-NRxRy基；-NRx-C(O)O-Rz基；(f)任选被一个或多个独立选择的卤素、氨基或氨基烷基或烷氧基取代的C10-C14芳基；(g)-C(O)-NRxRy基；(h)5-6元杂环，其任选被一个或多个独立选择的氧代基团；卤素；C1-C4烷基；C1-C4烷氧基；C1-C4卤代烷基；C1-C4卤代烷氧基；芳氧基；-NRxRy基；烷硫基；-C(O)-Rx基；或任选被一个或多个独立选择的卤素、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基取代的C6-C8芳基取代；(i)具有2-3个环结构的杂环基团，其任选被一个或多个独立选择的卤素、氧代基团、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基或C1-C4烷氧基取代；(j)或W与R4，包括其中R4为键，及R4和W连接的杂环一起形成11-13元杂三环环结构；其中Rx为氢、C1-C6烷基，或Rx和Ry与它们连接的原子一起形成4-7元碳环或杂环；Ry为氢、C1-C6烷基、任选被一个或多个独立选择的C1-C4烷基取代的芳基，或Rx和Ry与它们连接的原子一起形成4-7元碳环或杂环；且Rz为任选被芳基或卤素取代的C1-C6烷基；或任选被卤素、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基取代的芳基。
在式2的实施方案中，式2的优选取代基可以如式1所述进行选择。在式2的优选实施方案中，式2的取代基可以如式1-E所述进行选择。
在式2的优选实施方案中，q为0。在式2的另一个优选实施方案中，q为1或2。在式2的优选实施方案中，q为1。在式2的另一个优选实施方案中，q为2。
在式2的优选实施方案中，R3为氢，q为1且-CH2-COOR1基团相对于含有X、Y和Z取代基的5元环在对位。
在式2的化合物的其它实施方案中，Z为氧，Y为氮，且两个R2基团均不存在。在相关的更优选实施方案中，X为碳，且R4为氢。在前述两个实施方案的任一个中，q优选为1。
在更优选的式2的化合物的实施方案中，W为被一个或多个独立选择的卤素取代的苯环。在其它更优选的实施方案中，Z为氧，Y为氮，两个R2均不存在，X为碳，R4为氢，q为1，且W为被两个独立选择的卤素取代的苯环。在更优选的实施方案中，式2的化合物为 如对式1的化合物所述，式2的化合物可用于药物组合物的制备和治疗方法中。
本发明的优选化合物包括以下表X中的化合物
表X




































































列出上述化合物仅仅是提供可以用于本发明的方法中的实例。基于本发明的公开，本领域技术人员将认识到可用于本文所述方法中的其它化合物也包括在本文所要求保护的发明的范围内。
B.本发明的化合物的制备本发明的化合物可以以本领域公知的任何方式制备。例如，本发明的化合物可以根据以下所述的一般方法制备。例如，式1的某些1，3，4-噁二唑可以按照以下路线A1所示的方法制备 路线A1根据路线A1，结构A1的苄腈通过用例如叠氮化钠处理可以转化为结构A2的四唑。在合适的溶剂中用活性羧酸如酰氯或用脱水剂如二环己基碳二亚胺活化的酸处理四唑A2，得到式1-A的1，3，4-噁二唑化合物。合适的溶剂包括但不限于如甲苯或二氯乙烷。反应通常可在60-150℃的温度范围内进行。
在另一个实施方案中，式1-A的某些1，3，4-噁二唑可以通过以下路线A2的方法制备。
路线A2根据路线A2，结构3的活化的苯甲酸可以与取代酰肼反应，得到结构A4的取代的苯甲酰酰肼。活化基团可以是卤化物(如酰氯或酰溴)或可以用脱水剂如二环己基碳二亚胺处理苯甲酸得到。任选地，可以使用碱如三乙胺。A4型化合物然后可以脱氢，形成式1-A的化合物。通常的脱水剂包括但不限于例如二环己基碳二亚胺或磷酰氯。反应通常在20-120℃范围内进行。
在另一个实施方案中，式1-A的某些1，3，4-噁二唑可以通过以下路线A3的方法制备。
路线A3根据路线A3，可商购的酸不稳定树脂如三苯甲基树脂、2-氯三苯甲基氯树脂、苯乙酰氨基甲基(PAM)树脂以及对烷氧基苄醇树脂可以用于本发明。羧酸化合物A6与三苯甲基树脂A5(此处X＝2-氯三苯甲基氯)的偶联可以在叔胺试剂如二异丙基乙胺或三乙胺存在下在适当的溶剂如二氯甲烷、二甲基甲酰胺或四氢呋喃中进行。可以在六氟磷酸盐(PyBOP)或等价物如二异丙基碳二亚胺、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(benzotriazole-1-yl-oxy-tris-pyrrolidino-phosphonium hexafluorophosphate，PyBOP)、三吡咯烷基溴化鏻六氟磷酸盐(PyBrOP)或1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)存在下用酰肼处理树脂结合酯A7，得到酰基酰肼A8。或者，酰肼树脂A10可以在通常的酰胺键形成反应下使用二异丙基碳二亚胺或等价物如六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(PyBOP)、三吡咯烷基溴化鏻六氟磷酸盐(PyBrOP)或1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)在有或没有在二甲基甲酰胺中的二异丙基乙胺下方便地从A7制备。或者，树脂结合酰肼树脂A10可以使用二异丙基碳二亚胺或等价物如六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(PyBOP)、三吡咯烷基溴化鏻六氟磷酸盐(PyBrOP)或1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)与羧酸反应，形成A8。树脂结合A8的环合反应可以在惰性溶剂如二氯甲烷、四氢呋喃、二噁烷或二甲基甲酰胺中用碱如二异丙基乙胺或三乙胺处理2-氯-1，3-二甲基氯化咪唑烷鎓(2-chloro-1，3-dimethylimidazolidinium chloride)实现，获得1，3，4-噁二唑化合物A9。树脂结合噁二唑化合物A9在酸性条件下如于二氯甲烷中的2N氟乙酸或于二氯甲烷中的3N乙酸下裂解，获得所需的式1-A的化合物。
式1-B的某些1，3，4-噻二唑可以通过以下路线B的方法制备 路线B根据路线B，在合适的非活性有机溶剂如甲苯或二噁烷中在50-120℃的温度下用硫化剂如Lawesson试剂或五硫化二磷处理苯甲酰酰肼B1可以得到式1-B的1，3，4-噻二唑化合物。
式1-C的某些1，2，4-噻二唑可以通过以下路线C1的方法制备
路线C1根据路线C1，通过用羟氨或盐酸羟氨处理可以将苄腈化合物C1转化为羟脒C2。与盐酸羟氨的反应通常在碱例如三乙胺、碳酸钾或二异丙基乙胺存在下进行。反应可以在溶剂如甲醇、乙醇、叔丁醇、四氢呋喃或二甲基甲酰胺中并在室温至所选溶剂的回流温度下进行。羟脒化合物C2用酰基衍生物C3进行酰化，得到化合物C4，其中基团L表示一些离去基团，例如卤素、咪唑基或对硝基苯酚等。反应通常在溶剂如二氯甲烷、四氢呋喃或二甲基甲酰胺中用碱如三乙胺或二异丙基乙胺进行。在另一种方法中，酰化可在通常的酯键形成反应下使用二异丙基碳二亚胺或等价物如六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷、三吡咯烷基溴化鏻六氟磷酸盐或1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐在有或没有二异丙基乙胺下方便地进行，其中基团L表示羟基。酰化化合物C4的环合可以在有或没有碱例如三乙胺或二异丙基乙胺下在溶剂如二氯甲烷、四氢呋喃、甲苯或二甲基甲酰胺中并在室温至所选溶剂的回流温度下完成。
式1-C的某些1，2，4-噁二唑化合物也可以通过上述方法使用以下路线C2的固相化学制备
路线C2根据路线C2，可商购的酸不稳定树脂C5如三苯甲基树脂、2-氯三苯甲基氯树脂、苯乙酰氨基甲基(PAM)树脂以及对烷氧基苄醇树脂可以用于该实施例。苯甲酸化合物C6与三苯甲基树脂(此处X＝2-氯三苯甲基氯)的偶联可以在适当的溶剂如二氯甲烷、二甲基甲酰胺或甲苯中在叔胺试剂如二异丙基乙胺或三乙胺存在下进行。树脂结合氰基苯甲酸酯C7可以在惰性溶剂如乙醇、四氢呋喃、二噁烷或二甲基甲酰胺或其混合物在有或没有二异丙基乙胺下用羟胺处理，得到羟脒化合物C8。树脂结合羟脒化合物C8可以用试剂(WCOY)酰化，其中基团Y表示一些离去基团如卤素、咪唑基、对硝基苯酚等。该反应一般在碱如二异丙基乙胺或三乙胺存在下在惰性溶剂如二氯甲烷、四氢呋喃或二甲基甲酰胺或其混合物中进行。或者，酰化用其中基团Y表示羟基的试剂(WCOY)使用二异丙基碳二亚胺或等价物六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷、三吡咯烷基溴化鏻六氟磷酸盐或1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐在没有或有在二甲基甲酰胺中的二异丙基乙胺下方便地进行。树脂结合酰化化合物C9在酸性条件如于二氯甲烷中的2N三氟乙酸或于二氯甲烷中的3N乙酸下裂解，得到所需的中间体化合物C10。游离酸化合物C10的环合反应可以通过在惰性溶剂如甲苯、四氢呋喃、二噁烷或二甲基甲酰胺或其混合物在有或没有碱试剂如二异丙基乙胺、三乙胺或氟化四丁基铵下加热实现，得到式1-C的1，2，4-噁二唑化合物。
式1-D的某些1，2，4-噁二唑可以通过以下路线D1的方法制备 路线D1根据路线D1，结构D1的酰氯可以在碱如N-甲基吗啉、N，N-二异丙基乙胺或三乙胺存在下在惰性溶剂如二氯甲烷、四氢呋喃或二甲基甲酰胺或其混合物中用羟脒试剂D2处理。羟脒化合物D2可以在惰性溶剂如乙醇、二噁烷或四氢呋喃中用羟胺处理腈来方便地制备。化合物D3的环合可以通过在惰性溶剂如甲苯、四氢呋喃、二噁烷或二甲基甲酰胺或其混合物中在有或没有碱试剂如二异丙基乙胺、三乙胺或氟化四丁基铵下加热实现，得到式1-D的1，2，4-噁二唑化合物。
式1-D的某些1，2，4-噁二唑化合物也可以通过上述方法使用以下路线D2的固相化学制备
路线D2根据路线D2，可商购的酸不稳定树脂D4如三苯甲基树脂、2-氯三苯甲基氯树脂、苯乙酰氨基甲基(PAM)树脂或对烷氧基苄醇树脂可以用于该实施例。苯甲酸化合物D5与三苯甲基树脂(此处X＝2-氯三苯甲基氯)的偶联可以在适当的溶剂如二氯甲烷、二甲基甲酰胺或甲苯中在叔胺试剂如二异丙基乙胺或三乙胺存在下进行，获得酰化树脂D6。在另一种方法中，酰化树脂D6可通过标准酯键形成条件使用二异丙基碳二亚胺(对于苯乙酰氨基甲基树脂和对烷氧基苄醇树脂)或等价物如六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(PyBOP)、三吡咯烷基溴化鏻六氟磷酸盐(PyBrOP)或1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐在没有或有在二甲基甲酰胺中的二异丙基乙胺下方便地制备。树脂结合羧基苯甲酸酯D6可以在惰性溶剂如二氯甲烷、二噁烷、四氢呋喃或二甲基甲酰胺中用氰脲酰氟和叔胺碱如N-甲基吗啉、三乙胺或N，N-二异丙基乙胺处理，得到酰氟化合物D7。
组合化学方法可以使用多反应管，其中各个管内使用不同的试剂组合以提供目标化合物库。树脂结合酰氟化合物D7在碱如N-甲基吗啉、N，N-二异丙基乙胺或三乙胺存在下在惰性溶剂如二氯甲烷、四氢呋喃或二甲基甲酰胺或其混合物中用结构D8的试剂处理，得到化合物D9。羟脒D8可以通过在惰性溶剂如乙醇、二噁烷或四氢呋喃中用羟胺处理腈来方便地制备。树脂结合酰化化合物D9可以在酸性条件如于二氯甲烷中的2N三氟乙酸或于二氯甲烷中的3N乙酸下裂解，得到所需的化合物D10。游离酸化合物D10的环合可以通过在惰性溶剂如甲苯、四氢呋喃、二噁烷或二甲基甲酰胺或其混合物中在有或没有碱试剂如二异丙基乙胺、三乙胺或氟化四丁基铵存在下加热实现，得到式1-D的1，2，4-噁二唑化合物。
式1-E的某些噁唑可以通过以下路线E1的方法制备 路线E1根据路线E1，结构E1的α-溴酮可以用诸如乌洛托品等试剂转化为结构E2的α-氨基酮。α-氨基酮E2与E3型活性酸在碱存在下的反应可以得到结构E4的化合物。活性酸E3可以是酰氯或acyl imidazolide。中间体E4用试剂如五氧化二磷或磷酰氯在室温至120℃的温度下脱水，得到式1-E的噁唑。
式1-E的某些噁唑可以通过以下路线E2的方法制备 路线E2根据路线E2，其中一个羧基活化作酰氯或类似活化基团的羧酸E5可以在碱如三乙胺存在下与E6型乙胺反应，得到二氢噁唑E7。E7与N-溴琥珀酰亚胺在具有催化量的自由基引发剂如偶氮二异丁腈的回流的四氯化碳中反应，产生溴噁唑E8。溴噁唑E8可以与芳基硼酸E9在钯催化剂例如但不限于四(三苯基膦)钯(0)或二氯双(三苯基膦)钯(II)和碱如氟化铯或碳酸钾以及溶剂如甲苯、二甲基甲酰胺或二甲氧基乙烷存在下反应，产生式1-E的噁唑化合物。
式1-F的某些噁唑可以通过以下路线F的方法制备 路线F
根据路线F，结构F1的酯和氢氧化铵的酰胺形成可以在适当的溶剂如水、四氢呋喃、二噁烷或二甲基甲酰胺或其混合中在加热下进行，产生结构F2的化合物。在惰性溶剂如甲苯、四氢呋喃、二噁烷或二甲基甲酰胺或其混合物中在60-150℃的温度下加热结构F2的化合物和α-溴酮可以得到所需的式1-F的噁唑化合物。
式1-G的某些吡唑可以通过以下路线G1中所述方法或本领域技术人员公知的方法制备。
路线G1根据路线G1，取代二酮G3可以通过在合适的溶剂如四氢呋喃中用氯化钠处理取代苯乙酮G2以及随后与G1型氰基苯甲酸酯反应制备。按照一锅微波顺序，结构G3的1，3-二酮可以与1.1当量的无水肼在质子溶剂如乙醇中在功率为300W且温度不超过100℃下反应，产生G4型吡唑苄腈，该G4型吡唑苄腈随后与6当量的1N NaOH水溶液在同一微波条件下反应，得到式1-G的吡唑酸。
式1-G的某些吡唑也可以通过以下路线G2的方法制备
路线G2根据路线G2，G5型酯与G6型取代的苯乙酮在碱如氢氧化钠存在下在合适的溶剂如四氢呋喃中反应可以产生结构G7的1，3-二酮。酯的水解产生结构G8的羧酸。该酸然后与肼在质子溶剂如乙醇中在回流下反应，产生式1-G的吡唑。
式1-I的某些噻唑可以通过以下路线I的方法制备。
路线I根据路线I，结构I1的苄腈通过在惰性溶剂如水、四氢呋喃、二噁烷或二甲基甲酰胺或其混合物中在回流温度下用二硫代磷酸二乙酯处理而转化为结构I2的硫代酰胺化合物。或者，可以使用硫化氢气体将腈转化为硫代酰胺。硫代酰胺I2与α-溴酮I3在惰性溶剂如甲苯、四氢呋喃、二噁烷或二甲基甲酰胺或其混合物中在加热下反应产生所需的式1-I的噻唑化合物。
式1-J的某些噻唑可以通过以下路线J中所示方法制备
路线J根据路线J，结构J1的α-氨基酮可以与J2型活性羧酸衍生物如酰氯或acylimidazolide在适当的非活性有机溶剂中任选在碱如三乙胺存在下反应，产生结构J3的化合物。在溶剂如吡啶存在下加热J3型化合物和五硫化二磷，可以产生式1-J的噻唑。
式1-K的某些异噁唑可以通过以下路线K中所示方法制备
路线K根据路线K，结构K2的肟可以使用在质子溶剂如乙醇中的盐酸羟胺和碱如吡啶从结构K1的商购苯甲醛得到。在氯化氢气体催化剂存在下在二甲基甲酰胺中的肟K2与N-氯琥珀酰亚胺的反应可以得到结构K3的α-氯肟。在适当的有机溶剂如二氯甲烷中在0℃至室温下用碱如三乙胺和可商购或由本领域技术人员制备的取代乙炔处理K3可获得式1-K的异噁唑酯。
式1-L的某些异噁唑可以通过以下路线L中所示方法制备。
路线L根据路线L，结构L2的肟可以使用在质子溶剂优选乙醇中的盐酸羟胺和碱如吡啶从结构L1的商购的苯甲醛得到。在氯化氢气体催化剂存在下在二甲基甲酰胺中的肟L2与N-氯琥珀酰亚胺的反应可以获得结构L3的α-氯肟。在适当的有机溶剂如二氯甲烷中在0℃至室温下将L3用碱如三乙胺和取代乙炔L4处理可以获得式1-L的异噁唑，所述取代乙炔L4由本领域技术人员使用两步顺序从相应的碘化物L5制备。或者，也可以使用式L5的其它卤化物如溴化物和氯化物代替碘化物由本领域技术人员进行两步转化得到乙炔L4。
式1-M的某些咪唑可以通过以下路线M中所示方法制备 路线M根据路线M，在非活性溶剂存在下加热结构M1的脒和结构M2的α-溴酮得到式1-M的咪唑。所述脒可以商购获得或者由本领域技术人员根据已知方法例如通过用氨基钠或六甲基二硅氮烷基钠(sodium hexamethyldisilazide)处理适当的腈前体制备。M1和M2之间的反应在室温至150℃的温度下进行。
式1-N的某些咪唑可以通过路线N中所示方法制备。
路线N根据路线N，在非活性溶剂存在下加热结构N1的α-溴酮和结构N2的脒得到式1-N的咪唑。所述脒可商购获得或者由本领域技术人员根据已知方法例如通过用六甲基二硅氮烷基锂或六甲基二硅氮烷基钠处理适当的腈前体制备。N1和N2之间的反应在室温至150℃的温度下进行。
式1-O的某些噻唑可以通过以下路线O所示方法制备
路线O根据路线O，在惰性溶剂如甲苯、四氢呋喃、二噁烷或二甲基甲酰胺或混合物中在加热下硫代酰胺O1与α-溴酮O2反应，得到所需的式1-O的噻唑化合物。所述硫代酰胺可商购获得，从酰胺和试剂如Lawesson试剂或五硫化二磷制备或者从腈和试剂如硫化氢或二硫代磷酸二乙酯制备。
式1-P的某些噻唑可以通过以下路线P1中所示方法制备 路线P1
根据路线P1，结构P1的α-溴酮可以用例如乌洛托品转化为结构P2的α-氨基酮。结构P2的α-氨基酮与P3型的羧酸衍生物在碱存在下的反应产生结构P4的化合物。中间体P4与试剂如五硫化二磷在室温至120℃温度下硫-脱水和伴生环化(concominant cyclization)产生式1-P的噻唑。
式1-P的某些噻唑也可以通过以下路线P2中所示方法制备 根据路线P2，α-氨基酮P5(如路线R中所示制备)可以与活性羧酸衍生物(P6)如酰氯或acyl imidazolide在适当的溶剂中任选在碱如三乙胺存在下反应，产生结构P7的化合物。P7与试剂如五硫化二磷或Lawesson试剂在室温至120℃的温度下硫脱水，产生式1-P的噻唑化合物。
式1-Q的某些噁唑可以通过以下路线Q中所示方法制备
路线Q根据路线Q，可商购的结构Q1的甲酰胺或由可商购的酰氯或羧酸制备的甲酰胺可以与结构Q2的α-溴酮反应，产生式1-Q的噁唑化合物。该反应可在惰性溶剂如甲苯、四氢呋喃、二噁烷或二甲基甲酰胺或其混合物中在60-150℃的温度下进行。
式1-R的某些噁唑可以通过以下路线R中所示方法制备 路线R根据路线R，可以通过用叠氮化钠初始替代将结构R1的α-溴酮转化为α-氨基酮，以产生α-叠氮酮R2。转化为α-氨基酮R3可以通过在酸如盐酸存在下经催化氢化将α-叠氮酮还原来进行。还原可以在1-4个大气压下在质子或非质子溶剂存在下进行。活性催化剂可以为例如炭载铂或钯金属。α-氨基酮R3然后可以与活性羧酸衍生物(R4)例如酰氯或acyl imidazolide在适当的溶剂中任选在碱如三乙胺存在下反应，产生结构R5的化合物。在室温至120℃的温度下中间体R5与试剂如五氧化二磷或磷酰氯的脱水产生式1-R的噁唑。
式1-T的某些呋喃可以通过路线T中所示方法制备。
路线T根据路线T，结构T1的酮基酯和结构T2的α-溴酮之间的反应产生结构T3的中间体化合物。酮基酯T1可以通过本领域技术人员公知的多种方法获得。在有利于脱水的条件下加热中间体化合物T3可以得到其中R2为酯基的式1-T的呋喃化合物。该反应可以在酸如盐酸或对甲苯磺酸存在下进行，或者在试剂如磷酰氯或五氧化二磷存在下加热以进行脱水和环化。
中间体T3的脱羧产生T4型化合物。脱羧反应的条件可以包括在非活性溶剂如于H2O-DMSO中的氯化钠或于吡啶中的LiI中与亲核试剂一起加热或选择性水解，如果要脱羧的酯为叔丁酯则三氟乙酸或如果要脱羧的酯为苄酯则催化还原。在有利于脱水的条件下加热所得中间体化合物T4可以产生式1-T的呋喃化合物。该反应可在酸如盐酸或对甲苯磺酸存在下进行，或者在试剂如磷酰氯或五氧化二磷存在下加热以进行脱水和环化。
式1-U的某些1，2，4-噻二唑可以通过路线U的方法制备。
路线U根据路线U，将结构U1的酰胺化合物与硫化剂如三氯甲基亚磺酰氯(U2)一起加热可以产生氧杂噻唑中间体化合物U3。该反应通常在非活性溶剂如甲苯或二甲苯中进行且在80-150℃下加热。如此形成的氧杂噻唑化合物与结构U4的腈在高温下的反应可以产生式1-U的1，2，4-噻二唑化合物。
式1-V的某些1，2，4-噻二唑可以通过路线V中所示方法制备。
路线V根据路线V，将结构V1的伯酰胺化合物与硫化剂如三氯甲基亚磺酰氯(V2)加热可以产生噻唑中间体化合物V3。反应通常在非活性溶剂如甲苯或二甲苯中进行且在80-150℃下加热。如此形成的噻唑化合物与结构V4的腈在高温下的反应可以产生式1-V的1，2，4-噻二唑化合物。
式1-W的某些噻吩可以通过路线W的方法制备。
路线W2，4-二溴或二碘噻吩W1可以与硼酸化合物W2在合适的催化剂如四(三苯基膦)钯(0)、双(三苯基膦)二氯化钯(II)或乙酸钯以及加入的膦配体下反应，生成结构W3的化合物。这些反应在合适的溶剂如DMF、甲苯、二甲氧基乙烷或二噁烷中在室温至150℃的温度下在加入的碱存在下进行。该偶联反应一般在活性更高的卤素处发生，该活性更高的卤素一般位于噻吩的2-位。然后与硼酸W4进行第二次偶联反应，硼酸W4与剩余的溴或碘在类似条件下反应生成式1-W的化合物。
式1-X的某些噻吩可以通过如上所述的类似方法制备。这在路线X中描述了。
路线X根据路线X，2，4-二溴或二碘噻吩X1可以与硼酸化合物X2在合适的催化剂如四(三苯基膦)钯(0)、双(三苯基膦)二氯化钯(II)或乙酸钯以及加入的膦配体下反应，生成结构X3的化合物。这些反应在合适的溶剂如DMF、甲苯、二甲氧基乙烷或二噁烷中在室温至150℃的温度下在加入的碱存在下进行。该偶联反应一般在活性更高的卤素处发生，该活性更高的卤素一般在噻吩的2-位。然后与硼酸X4进行第二次偶联反应，硼酸X4与剩余的溴或碘在类似条件下反应生成式1-X的化合物。
式1-Y的某些噻吩可以通过路线Y中所示方法制备。
路线Y根据路线Y，如上述实施例所述，2，4-二溴或二碘噻吩Y1可以与硼酸化合物Y2在合适的催化剂如四(三苯基膦)钯(0)、双(三苯基膦)二氯化钯(II)或乙酸钯以及加入的膦配体下反应，生成结构Y3的化合物。然后与硼酸Y4进行第二次偶联反应，硼酸Y4与剩余的溴或碘在类似条件下反应生成式1-Y的化合物。
式1-Z的某些1，2，4-三唑可以通过路线Z所示方法制备。
路线Z根据路线Z，结构Z1的氰基苯甲酸可以通过用于甲醇中的盐酸在冷如0℃下处理Z1转化为甲氧基亚氨酸酯Z2。Z2与取代酰肼(Z3)在碱和合适的非活性溶剂下反应产生中间体，然后将其在合适的溶剂(如二噁烷)或溶剂的混合物中在60-150℃的温度下加热，产生所需的式1-Z的环化化合物。
在某些优选的实施方案中，可以使用本领域已知的任何方法将本发明的化合物拆分成对映异构体纯的组合物或合成作对映异构体纯的组合物。例如，本发明的化合物可以通过对映异构体混合物的直接结晶、通过对映异构体的非对映异构体盐的形成、通过非对映异构体的形成和分离或者通过外消旋混合物的酶促拆分来拆分。
如本领域技术人员所认识的，这些和其它反应方法可以用于制备本发明的化合物。对上述路线和方法的各种改变对于本领域技术人员而言是清楚的，本发明并不被制备本发明的化合物的方法所具体限制。
C.本发明的方法本发明的另一方面提供用于抑制与无义突变相关的翻译提前终止的的方法以及用于预防或治疗疾病的方法。在优选的实施方案中，所述疾病与mRNA的突变，特别是无义突变相关。疾病的实例包括但不限于癌症、溶酶体贮积症、肌营养不良、囊性纤维化、血友病、大疱性表皮松解症以及典型的晚婴儿型神经元蜡样质脂褐素沉积病。在该实施方案中，提供了用于治疗癌症、溶酶体贮积症、肌营养不良、囊性纤维化、血友病或典型的晚婴儿型神经元蜡样质脂褐素沉积病的方法，其包括对有此需要的个体给予治疗有效量的至少一种本发明的化合物。
在一个实施方案中，本发明涉及用于增加一种或多种特定的功能性蛋白的表达的方法。本发明的任何化合物能够用于特别地增加功能性蛋白的表达。在另一个实施方案中，当通过给予有此需要的个体治疗有效量的至少一种本发明的化合物来抑制翻译提前终止时，发生功能性蛋白的表达特异性增加。在优选的实施方案中，翻译提前终止与mRNA的无义突变相关。在另一个实施方案中，当患者中mRNA降解减少时，发生功能性蛋白的表达特异性增加。在优选的实施方案中，患者异常由突变介导的mRNA降解(decay)引起。在特别优选的实施方案中，突变介导的mRNA降解为无义突变的结果。本发明的方法不被任何特殊的理论所限制。
本发明包括通过抑制患者中翻译提前终止、无义介导的mRNA降解或翻译提前终止且无义介导的mRNA降解来治疗和预防疾病或改善病症的方法，所述方法包括给予需要该治疗或预防的患者治疗有效量的本发明的化合物。
在一个实施方案中，本发明包括与表现翻译提前终止、无义介导的mRNA降解或翻译提前终止且无义介导的mRNA降解的基因相关的任何疾病的治疗或预防。在一个实施方案中，所述疾病部分地归因于由提前终止密码子引起的基因的表达缺乏或降低。可能表现翻译提前终止和/或无义介导的mRNA降解的基因以及与翻译提前终止和/或无义介导的mRNA降解相关的疾病的特定实例参见2001年6月21日提交的题目为“Methods For Identifying SmallMolecules That Modulate Premature Translation Termination And NonsenseMediated mRNA Decay”的美国临时专利申请60/390,747以及于2003年6月23日提交的国际申请PCT/US03/19760，这两篇文献以其全部内容引入本文作为参考。
通过抑制翻译提前终止、无义介导的mRNA降解或翻译提前终止且无义介导的mRNA降解而改善的疾病包括但不限于遗传疾病、躯体疾病(somaticdiseases)、癌症、自身免疫性疾病、血液病、胶原病、糖尿病、神经变性疾病、增生性疾病、心血管病、肺病、炎症性疾病或中枢神经系统疾病。
在一个实施方案中，通过对有此需要的患者给予治疗有效量的本发明的化合物来治疗或预防的疾病包括但不限于淀粉样变、血友病、阿尔茨海默氏病、泰-萨克斯病、尼曼-皮克病、动脉粥样硬化、巨人症、侏儒症、甲状腺功能减退、甲状腺功能亢进、衰老、肥胖症、帕金森氏病、囊性纤维化、肌营养不良、心脏病、肾结石、共济失调性毛细血管扩张症、家族性高胆固醇血症、视网膜色素变性、杜兴氏肌营养不良、大疱性表皮松解症和马方综合征。在一个实施方案中，所述疾病与无义突变相关。
在一个实施方案中，本发明的化合物可用于治疗或预防自身免疫性疾病。在一个实施方案中，所述自身免疫性疾病与无义突变相关。在优选的实施方案中，所述自身免疫性疾病为类风湿性关节炎或移植物抗宿主疾病。
在另一个实施方案中，本发明的化合物可用于治疗或预防血液病。在一个实施方案中，所述血液病与无义突变相关。在优选的实施方案中，所述血液病为血友病、血管性血友病、β地中海贫血症。
在另一个实施方案中，本发明的化合物用于治疗或预防胶原病。在一个实施方案中，所述胶原病与无义突变相关。在优选的实施方案中，所述胶原病为成骨不全或硬化。
在另一个实施方案中，本发明的化合物用于治疗或预防糖尿病。在一个实施方案中，所述糖尿病与无义突变相关。
在另一个实施方案中，本发明所述化合物用于治疗或预防炎症性疾病。在一个实施方案中，所述炎症性疾病与无义突变相关。在优选的实施方案中，所述炎症性疾病为关节炎、类风湿性关节炎或骨关节炎。
在另一个实施方案中，本发明的化合物用于治疗或预防中枢神经系统疾病。在一个实施方案中，所述中枢神经系统疾病与无义突变相关。在一个实施方案中，所述中枢神经系统疾病是神经变性疾病。在优选的实施方案中，所述中枢神经系统疾病为多发性硬化、肌营养不良、杜兴氏肌营养不良、阿尔茨海默氏病、泰-萨克斯病、尼曼-皮克病、晚婴儿型神经元蜡样质脂褐素沉积病(LINCL)或帕金森氏病。
在另一个实施方案中，本发明的化合物用于治疗或预防癌症，特别是人癌症。在优选的实施方案中，所述癌症为头和颈、眼、皮肤、口、咽喉、食管、胸、骨、血、肺、结肠、乙状结肠、直肠、胃、前列腺、乳房、卵巢、肾、肝、胰腺、脑、肠、心脏或肾上腺的癌症。在一个实施方案中，所述癌症为实体瘤。在一个实施方案中，所述癌症与无义突变相关。在另一个实施方案中，所述癌症与遗传性无义突变相关。在另一个实施方案中，所述癌症与体细胞突变相关。不受任何理论所限制，本发明的化合物的抗癌用途可能与其抗p53基因突变的作用有关。
在一个实施方案中，所述癌症不是血液癌。在另一个实施方案中，所述癌症不是白血病。在另一个实施方案中，所述癌症不是多发性骨髓瘤。在另一个实施方案中，所述癌症不是前列腺癌。
在另一个优选的实施方案中，本发明的化合物用于治疗或预防与肿瘤抑制基因突变有关的癌症。所述基因包括但不限于PTEN、BRCA1、BRCA2、Rb和p53基因。在一个实施方案中，所述突变为遗传突变。在另一个实施方案中，所述突变为体细胞突变。本发明的方法特别用于治疗或预防与肿瘤抑制基因的无义突变相关的癌症。在优选的实施方案中，本发明的方法特别用于治疗或预防与p53基因相关的癌症，这归因于p53在凋亡中的作用。不受任何理论所限制，认为通过使细胞与有效量的本发明的化合物接触，导致无义突变的抑制，进一步使得产生全长p53从而能够诱导凋亡。无义突变已经在p53基因中确定，并且参与癌症。p53基因中的几个无义突变已被确定(参见例如Masuda等，2000，Tokai J Exp Clin Med.25(2)69-77；Oh等，2000，Mol Cells 10(3)275-80；Li等，2000，Lab Invest.80(4)493-9；Yang等，1999，Zhonghua Zhong Liu Za Zhi21(2)114-8；Finkelstein等，1998，Mol Diagn.3(1)37-41；Kajiyama等，1998，DisEsophagus.11(4)279-83；Kawamura等，1999，Leuk Res.23(2)115-26；Radig等，1998，Hum Pathol.29(11)1310-6；Schuyer等，1998，Int J Cancer 76(3)299-303；Wang-Gohrke等，1998，Oncol Rep.5(1)65-8；Fulop等，1998，J Reprod Med.43(2)119-27；Ninomiya等，1997，J Dermatol Sci.14(3)173-8；Hsieh等，1996，CancerLett.100(1-2)107-13；Rail等，1996，Pancreas.12(1)10-7；Fukutomi等，1995，Nippon Rinsho.53(11)2764-8；Frebourg等，1995，Am J Hum Genet.56(3)608-15；Dove等，1995，Cancer Surv.25335-55；Adamson等，1995，Br J Haematol.89(1)61-6；Grayson等，1994，Am J Pediatr Hematol Oncol.16(4)341-7；Lepelley等，1994，Leukemia.8(8)1342-9；Mclntyre等，1994，J Clin Oncol.12(5)925-30；Horio等，1994，Oncogene.9(4)1231-5；Nakamura等，1992，Jpn J Cancer Res.83(12)1293-8；Davidoff等，1992，Oncogene.7(1)127-33以及Ishioka等，1991，Biochem Biophys Res Commun.177(3)901-6；这些文献以其全部内容引入本文作为参考)。与编码翻译提前密码子的p53基因相关的任何疾病，包括但不限于上述引用参考文献中所述的无义突变，均能够被本发明的化合物所治疗或预防。
在其它的实施方案中，通过对有此需要的患者给予有效量的本发明的化合物来治疗或预防的疾病包括但不限于实体瘤，诸如肉瘤、癌、纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤因氏瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胰腺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝癌、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎性癌、维尔姆斯瘤、子宫颈癌、睾丸肿瘤、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、胶质瘤、星形细胞瘤、髓母细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、卡波西肉瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质瘤、脑膜瘤、黑色素瘤、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、血液源性肿瘤或多发性骨髓瘤。
在另一个实施方案中，通过对有此需要的患者给予有效量的本发明的化合物来治疗或预防的疾病包括但不限于血液源性肿瘤如急性成淋巴细胞性白血病、急性B淋巴细胞性白血病、急性T淋巴细胞性白血病、急性粒细胞性白血病、急性早幼粒细胞性白血病、急性成单核细胞性白血病、急性红白血病、急性成巨核细胞白血病、急性粒单核细胞性白血病、急性非淋巴细胞性白血病、急性未分化细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、毛细胞性白血病或多发性骨髓瘤。参见例如，Harrison′s Principles of InternalMedicine，Eugene Braunwald等，eds.，pp.491-762(15th ed.2001)。
在另一个实施方案中，本发明包括对患有实体瘤或血液肿瘤的人的治疗。
在优选的实施方案中，本发明包括治疗或预防疾病的方法，其通过调节翻译提前终止、无义介导的mRNA降解或翻译提前终止且无义介导的mRNA降解来改善疾病，或改善一种或多种与之相关的症状，该方法包括使细胞与治疗有效量的本发明的化合物接触。本发明的方法包括的细胞包括动物细胞、哺乳动物细胞、细菌细胞以及病毒感染的细胞。在一个实施方案中，所述无义突变是遗传突变(即无义密码子存在于祖DNA中)。在另一个实施方案中，所述无义突变是体细胞突变(即无义密码子自发或通过诱变产生)。
在一些实施方案中，本发明的化合物作为对抗与翻译提前终止、无义介导的mRNA降解或翻译提前终止且无义介导的mRNA降解相关的疾病的预防措施给予个体，所述个体包括但不限于植物、爬行动物、鸟类、两栖动物或优选哺乳动物，更优选人。
在优选的实施方案中，首先确定患者患有与翻译提前终止和/或无义介导的mRNA降解相关的疾病。在另一个实施方案中，患者经过筛选过程以确定无义突变的存在，所述筛选过程包括通过可接受的无义突变筛选测定法筛选个体或从个体中提取的细胞的步骤。在优选的实施方案中，能够通过对患者的DNA测序或进行DNA印迹、聚合酶链式反应(PCR)、应用短串联重复(STR)或限制性片段长度多态性(RFLP)分析来确定是否在患者的DNA中存在无义突变。在一个实施方案中，通过与祖DNA比对确定所述无义突变是遗传突变还是体细胞突变。或者，能够通过蛋白质印迹或其它免疫测定法来确定是否无义突变引起改变的蛋白水平的表达。在另一个实施方案中，患者为在子宫内接受无义突变存在的筛选的未出生的孩子。本发明的化合物既可以在出生前也可以在出生后给予。在相关的实施方案中，所述治疗被个体化，在于用无义突变筛选测定法筛选患者并且通过给予本发明的一种或多种化合物来治疗；特别地，可以用特别适于例如依照疾病类型、细胞类型以及有问题的基因而定的有问题突变的化合物治疗所述患者。所述方法为本领域技术人员公知。
在另一个实施方案中，用例如如上所述的方法(即能够通过对细胞的DNA测序或进行DNA印迹、聚合酶链式反应(PCR)、应用短串联重复或限制性片段长度多态性分析以确定是否在细胞的DNA中存在无义突变；可以对细胞的RNA进行定量实时PCR以测定转录丰度)筛选翻译提前终止和/或无义介导的mRNA降解的细胞(例如动物细胞、哺乳动物细胞、细菌细胞、植物细胞以及病毒感染的细胞)。
本发明的特定方法还包括给予另外的治疗剂(即不同于本发明的化合物的治疗剂)。在本发明的某些实施方案中，本发明的化合物可以与至少一种其它治疗剂组合使用。治疗剂包括但不限于非阿片样物质镇痛药、非甾族抗炎剂、类固醇、止吐剂、β-肾上腺素阻滞剂、抗惊厥药、抗抑郁药、Ca2+-通道阻滞剂、抗癌剂和抗生素以及它们的混合物。
在某些实施方案中，本发明的化合物可以与抗癌剂组合给予或配制。合适的抗癌试剂包括但不限于烷化剂、氮芥、叶酸拮抗剂、嘌呤拮抗剂、嘧啶拮抗剂、纺锤体毒剂、拓扑异构酶抑制剂、凋亡诱导剂、血管生成抑制剂、鬼臼毒素、亚硝基脲、顺铂、卡铂、干扰素、天冬酰胺酶、三苯氧胺、亮丙瑞林、氟他米特、甲地孕酮、丝裂霉素C、，争光霉素、阿霉素、伊立替康和紫杉醇。
在某些实施方案中，本发明的化合物可以与抗生素组合给予或配制。在某些实施方案中，所述抗生素为氨基糖苷类(例如妥布霉素)、头孢菌素(例如头孢氨苄、头孢拉定、头孢呋新、头孢丙烯、头孢克洛、头孢克肟或头孢羟氨苄)、克拉仙霉素(例如克拉仙霉素)、大环内酯(例如红霉素)、青霉素(例如青霉素V)或喹诺酮(例如氧氟沙星、环丙沙星或诺氟沙星)。在优选的实施方案中，所述抗生素针对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)具有活性。
不受理论所限制，认为本发明的方法通过抑制无义突变的机制的组合起作用。在优选的实施方案中，本发明的方法包括给予治疗有效量的至少一种本发明的化合物，例如式1的化合物。本发明的化合物的相对活性可以通过本领域公知的任何方法测定，包括本文实施例2中描述的测定法。
本发明的化合物可以用体外荧光素酶无义突变抑制测定来表征。荧光素酶测定包括在本发明的方法中。荧光素酶可以用作功能报告基因测定(只有蛋白有功能才产生光)，并且荧光素酶极其灵敏(光密度在nM范围内与荧光素酶浓度成比例)。在一个实施方案中，本发明的测定为细胞基荧光素酶报告测定。在优选的细胞基荧光素酶报告测定中，含有提前终止密码子(UGA、UAA或UAG)的荧光素酶报告构建体稳定转染入293人胚胎肾细胞中。
在本发明的另一个测定中，优选的测定为由兔网织红细胞裂解物和含无义密码子的荧光素酶报告子mRNA组成的生物化学测定。在本发明的另一个测定中，所述测定为由制备并优化的细胞提取物组成的生物化学测定(Lie &Macdonald，1999，Development 126(22)4989-4996和Lie & Macdonald，2000，Biochem.Biophys.Res.Commun.270(2)473-481)。在生物化学测定中，含有提前终止密码子(UGA、UAA或UAG)的mRNA在使用补充有tRNA、氯高铁血红素、肌酸激酶、氨基酸、KOAc、Mg(OAc)2以及磷酸肌酸的兔网织红细胞裂解物的体外翻译反应中用作报告子。mRNA的翻译在病毒来源的引导序列中起始，病毒来源的引导序列由于不需要加帽的RNA因此显著降低了测定成本。使用T7启动子和MegaScript体外转录试剂盒(Ambion，Inc.；Austin，Texas)在体外制备合成的mRNA。在本发明的测定中，庆大霉素的添加导致增强的荧光素酶活性并能用作内标，庆大霉素是一种已知使提前终止密码子连读的氨基糖苷。本发明的测定可用于高处理量筛选中。无数的化合物能够在本发明的细胞基生物化学测定中筛选。在优选的方面，功能性细胞基测定与所述的测定类似。
本发明的化合物包括能够从含有提前终止密码子的mRNA分子提高特异性功能蛋白表达的化合物。在一个实施方案中，本发明的化合物能优先抑制翻译提前终止。例如，如果突变产生UAA，本发明的化合物能抑制该无义突变；但是如果所述突变产生UAG，本发明的化合物不能抑制该无义突变。能存在另一种非限制性实例，如果突变产生UAA并且在+1位置紧接符合读框的胞嘧啶，本发明的化合物能够抑制无义突变，但是如果突变产生UAA并且在+1位置紧接符合读框的腺嘌呤，本发明的化合物不能抑制无义突变。
可以用测试化合物处理带有含UGA无义荧光素酶基因的稳定细胞系。在这一方面，细胞可以在补充有1％青霉素-链霉素(P/S)和10％胎牛血清(FBS)的标准培养基中生长至70％汇合，在处理前一天1∶1分开。第二天，细胞用胰蛋白酶消化，并且以每孔40000个细胞加入96孔组织培养皿中。制备每一化合物的系列稀释液，以产生跨越2个log(30μM至0.3μM)的六点剂量反应曲线。DMSO溶剂的终浓度保持每孔1％的常量。用1％DMSO处理的细胞作为本底标准，而用庆大霉素处理的细胞作为阳性对照。
为阐述无义抑制化合物对特定遗传疾病中改变的mRNA的作用，可以用本发明的化合物处理在氨基酸1282位(W 1282X)具有无义密码子的支气管上皮细胞系，并用SPQ测定法监测CFTR作为cAMP激活的氯离子通道的功能(Yang等，Hum.Mol.Genet.2(8)1253-1261(1993)以及Howard等，Nat.Med.2(4)467-469(1996))。与用cAMP处理的细胞以及未处理的细胞的SPQ荧光相比，用本发明的化合物处理的细胞中SPQ荧光增加。细胞中SPQ荧光的增加与CFTR介导的卤素离子外流的刺激以及无义密码子的连读增加一致。用本发明的化合物处理后该含无义等位基因的全长CFTR表达表明，当用本发明的化合物处理时囊性纤维化细胞系增加了氯离子通道活性。
D.本发明的化合物的代谢物本文所述的化合物在体内的代谢产物也落入本发明的范围。主要是由于酶促处理，这些产物可以因所给予的化合物的例如氧化、还原、水解、酰胺化、酯化等而产生。因此，本发明包括通过以下方法产生的化合物使本发明的化合物与哺乳动物组织或哺乳动物接触一段足以产生该化合物的代谢产物的时间。这些化合物通常通过以下来鉴定制备放射性标记(例如C14或H3)的本发明的化合物，将其以可检测的剂量(例如多于约0.5mg/kg)给予诸如大鼠、小鼠、豚鼠、猴等哺乳动物或者给予人，使得可以发生代谢的足够的时间(通常约为30秒至30小时)，以及从尿、血或其它生物学样品中分离其转化产物。这些产物由于它们被标记而容易被分离(通过使用能够结合代谢产物中存在的表位的抗体来分离其它物质)。所述代谢物的结构以常规的方式例如通过MS或NMR分析来确定。一般而言，代谢物的分析可以以与本领域技术人员公知的常规药物研究相同的方法完成。所述转化产物，只要它们不是体内存在，即使它们本身不具有生物学活性，也可用于本发明的化合物的治疗定量(dosing)的诊断测定中。
E、本发明的药物组合物虽然可能将本发明的化合物以纯物质给予，但是可以优选配制该化合物成药物组合物。因此，本发明另一方面提供了用于本发明的方法中的药物组合物。本发明的药物组合物可以与药学可接受的赋形剂例如载体、溶剂、稳定剂、辅剂、稀释剂等一起配制，其取决于具体的给药方式以及剂型。所述药物组合物一般应当配制成达到生理学相容的pH，取决于制剂以及给药途径，pH可以为pH约3至pH约11，优选pH约3至pH约7。在另一个实施方案中，本发明的药物组合物的pH可以调节至pH约4至pH约7。在可选的实施方案中，优选调节pH为pH约5至pH约8。
更特别地，本发明的药物组合物包含治疗或预防有效量的至少一种本发明的化合物和一种或多种药学可接受的赋形剂。任选地，本发明的药物组合物可以包含本发明的化合物的组合，或可以包含用于治疗癌症、糖尿病性视网膜病变、渗出性黄斑变性的第二种活性成分。
例如用于肠胃外或口服给予的本发明的制剂大多通常为固体剂、液体溶液剂、乳剂或混悬剂，而用于肺给予的可吸入制剂一般为液体剂或散剂，散剂通常优选。本发明优选的药物组合物还可以配制成冻干固体剂，在给予前用生理学可接受的溶剂复制。或者，本发明的药物组合物可以配制成糖浆剂、乳膏、软膏剂、片剂等。
本发明的药物组合物可以通过本领域已知的任何药物递送途径给予个体。特定的给药途径的实例包括口、眼(ocular)、直肠、口含、局部、鼻、眼(ophthalmic)、皮下、肌内、静脉内(推注和输注)、大脑内、经皮以及肺给予。
术语“药学可接受的赋形剂”是指用于给予药物剂如本发明的化合物的赋形剂。该术语指任何可以给予而没有异常毒性的药物赋形剂。药学可接受的赋形剂部分地由要给予的具体组合物以及用于给予该组合物的具体方法所决定。因此，本发明的药物组合物存在多种适合的制剂(参见例如Remington′sPharmaceutical Sciences，18thEd.，Mack Publishing Co.，1990)。
合适的赋形剂可以是载体分子，其包括大的代谢慢的大分子例如蛋白质、多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、多聚氨基酸、氨基酸共聚物以及灭活病毒颗粒。其它赋形剂的实例包括抗氧化剂如抗坏血酸；螯合剂如EDTA；碳水化合物如糊精、羟烷基纤维素、羟烷基甲基纤维素、硬脂酸；液体如油、水、生理盐水、甘油和乙醇；润湿剂或乳化剂，pH缓冲物质等。脂质体也包括在药学可接受的赋形剂的定义内。
本发明的药物组合物可以配制成适于欲用给药方法的任何制剂形式。当欲用于口服使用时，可以制备成例如片剂、锭剂、糖锭、水混悬剂或油混悬剂、非水溶液、可分散性散剂或颗粒剂(包括微粒化颗粒或纳米微粒)、乳剂、硬胶囊或软胶囊、糖浆剂、酏剂。欲用于口服使用的组合物可以根据本领域已知的任何用于制备药物组合物的方法制备，并且这些组合物可以含有一种或多种包括甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂在内的试剂以提供可口的制品。
特别适合用于与片剂结合使用的药学可接受的赋形剂包括例如惰性稀释剂，例如纤维素、碳酸钠或碳酸钙、乳糖、磷酸钠或磷酸钙；崩解剂，例如交联羧甲基纤维素钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、玉米淀粉或褐藻酸；粘合剂，例如聚乙烯吡咯烷酮、淀粉、明胶或阿拉伯胶；以及润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂可以不包衣，或者用包括微囊法在内的公知技术包衣以延迟崩解和在胃肠道吸收，从而在较长时间内提供持续作用。例如可以单独使用延时物质例如甘油单硬酯酸酯或甘油二硬脂酸酯或将其与蜡一起使用。
口服使用的制剂还可以以硬明胶胶囊提供，在硬明胶胶囊中活性成分与惰性固体稀释剂例如纤维素、乳糖、磷酸钙或高岭土混合，或者以软明胶胶囊提供，在软明胶胶囊中活性成分与非含水介质或油介质例如甘油、丙二醇、聚乙二醇、花生油、液体石蜡或橄榄油混合。
在另一个实施方案中，本发明的药物组合物可以配制成混悬剂，其包含本发明的化合物和至少一种适于制备混悬剂的药学可接受的赋形剂。在另一个实施方案中，可以通过加入适宜的赋形剂将本发明的药物组合物配制成适于制备成悬浮液的可分散性散剂和颗粒剂。
适合用于与悬浮液组合的赋形剂包括助悬剂例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍树胶、阿拉伯胶；分散剂或润湿剂例如天然磷脂(如卵磷脂)、环氧烷与脂肪酸的缩合物(如聚氧乙烯硬脂酸酯)、环氧乙烷与长链脂族醇的缩合物(如十七烷乙烯氧基十六醇)、环氧乙烷与来自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合物(如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯)；以及增稠剂例如卡波姆、蜂蜡、固体石蜡或鲸蜡醇。所述混悬剂还可以含有一种或多种防腐剂例如乙酸、对羟基苯甲酸甲酯和/或正丙酯；一种或多种着色剂；一种或多种调味剂；以及一种或几种甜味剂例如蔗糖或糖精。
本发明的药物组合物还可以为水包油乳剂形式。油相可以为植物油例如橄榄油或花生油，矿物油例如液体石蜡，或者它们的混合物。合适的乳化剂包括天然树胶，例如阿拉伯胶或黄蓍树胶；天然磷脂，例如大豆卵磷脂，得自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯例如脱水山梨糖醇单油酸酯；以及这些偏酯与环氧乙烷的缩合物，例如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。所述乳剂还可以包含甜味剂和调味剂。糖浆剂和酏剂可以用甜味剂例如甘油、山梨糖醇或蔗糖配制。这些制剂还可以含有润滑剂、防腐剂、调味剂或着色剂。
此外，本发明的药物组合物可以为无菌注射制剂例如无菌注射用含水乳剂或油混悬剂。该乳剂或混悬剂可以根据已知技术使用以上提及的合适的分散剂或润湿剂以及助悬剂配制。所述无菌注射制剂也可以是于无毒肠胃外可接受的稀释剂中的无菌注射用溶液或悬浮液，例如于1，2-丙二醇中的溶液。还可以将所述无菌注射用制剂制备为冻干粉末。可以使用的可接受的载体和溶剂包括水、林格氏液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌固定油可以用作溶剂或悬浮介质。对于该目的，可以使用任何温和的固定油，包括合成单酸甘油酯或甘油二酯。此外，脂肪酸例如油酸同样可用于可注射用制剂的制备。
一般而言，可用于本发明的方法中的本发明的化合物基本上不溶于水，微溶于大多数药学可接受的质子溶剂以及植物油。然而，所述化合物通常可溶于中链脂肪酸(例如辛酸和癸酸)或甘油三酯中，并在中链脂肪酸的丙二醇酯中具有高度溶解性。本发明还考虑通过化学或生物化学基团的取代或添加例如通过酯化、糖基化、聚乙二醇化(PEGylation)等而修饰的化合物，所述化学或生物化学基团的取代或添加使所述化合物更适于递送(例如增加溶解性、生物活性、可口性、减少不利反应等)。
在优选的实施方案中，本发明的化合物可以配制在适于低溶解性化合物的脂质基制剂中用于口服给予。脂质基制剂一般能提高这些化合物的口服生物利用度。因此，优选的本发明的药物组合物包含治疗或预防有效量的本发明的化合物、至少一种选自中链脂肪酸或其丙二醇酯(例如可食用脂肪酸如辛酸和癸酸的丙二醇酯)的药学可接受的赋形剂以及药学可接受的表面活性剂例如聚氧乙烯40氢化蓖麻油。
在另外的优选实施方案中，环糊精可以作为水溶性增强剂加入。优选的环糊精包括α-、β-和γ-环糊精的羟丙基、羟乙基、葡糖基、麦芽糖基和麦芽三糖基衍生物。特别优选的环糊精溶解性增强剂为羟丙基-β-环糊精(HPBC)，其可以加入上述的任何组合物中，以进一步提高本发明的化合物的水溶性特性。在一个实施方案中，所述组合物含有0.1％至20％的羟丙基-β-环糊精，更优选1％至15％的羟丙基β-环糊精，甚至更优选2.5％至10％的羟丙基-β-环糊精。使用的溶解性增强剂的量将取决于组合物中本发明的化合物的量。
本文所用的治疗有效量是指本发明的药物组合物用于治疗、改善或缓解已确定的疾病或病况或者显示出可检测的治疗或抑制效果的量。所述效果能够通过例如本发明的测定法检测。所述效果还可以是疾病或病症的预防，其中为个体或高百分率人群预测该疾病或病症。
对于个体的精确有效量将取决于个体的体重、体型(size)以及健康；病症的性质和程度；选择给予的治疗或治疗的组合、蛋白质的半衰期、mRNA的半衰期以及蛋白的定位。对于给定情况的治疗有效量可以通过常规实验测定确定，其在临床医生技能和判断的范围内。
对于任何化合物，治疗有效量最初可以在例如瘤细胞的细胞培养物测定中或在通常为大鼠、小鼠、兔、犬或猪的动物模型中估计。所述动物模型还可以用于测定合适的浓度范围和给药途径。然后这些信息可以被用于确定人中的有效剂量和给药途径。治疗/预防效力和毒性可以通过标准药物操作在细胞培养物或实验动物中确定，例如ED50(在50％群体中治疗有效的剂量)和LD50(50％群体致死的剂量)。毒性作用和治疗效果的剂量比为治疗指数，其可以表示作比值LD50/ED50。优选显示出大的治疗指数的药物组合物。得自细胞培养物测定以及动物研究的数据可以用于计算人用的剂量范围。这些组合物中含有的剂量优选在循环浓度范围内，该循环浓度包括低毒或无毒的ED50。所述剂量可以在该范围内变化，取决于所用的剂型、患者的敏感性以及给药途径。
更具体地，关于本发明的化合物观察到的浓度-生物效果关系表明，初始的血浆靶浓度的范围为从大约5μg/mL至大约100μg/mL，优选为从大约10μg/mL至大约50μg/mL，更优选为大约10μg/mL至大约25μg/mL。为达到这样的血浆浓度，取决于给药途径，本发明的化合物可以以0.1μg至100000mg变化的剂量给予。文献中提供了关于具体的递送剂量和递送方法的指导，并且这些指导对于本领域技术人员而言一般可以获得。一般而言，对于约40kg至约100kg体重的患者(其中对于高于或低于该体重范围的患者，特别是低于40kg的儿童该剂量可以调整)，所述剂量范围为约1mg/天至约10g/天，或者为约0.1g/天至约3g/天，或者为约0.3g/天至约3g/天，或者为约0.5g/天至约2g/天，以单次剂量、分份剂量或连续剂量给予。
然而，在急性或慢性疾病或病况的处理中本发明的特定活性成分的预防或治疗剂量的量值将随疾病或病况的性质和严重程度以及活性成分的给予途径而变化。该剂量以及大概剂量频率也将根据单个患者的年龄、体重和反应而变化。本领域技术人员可以根据对上述因素的适当考虑而容易地选择合适的给药方案。一般而言，对于本文所述的病症，推荐的每日剂量范围为每天约1mg/kg至约150mg/kg。在一个实施方案中，本发明的化合物作为一天一次的剂量给予。在另一个实施方案中，本发明的化合物作为分份剂量在整个一天中给予。更具体地，以单次剂量或相等的分份剂量给予日剂量。优选地，日剂量范围应该为约5mg/kg/天至约100mg/kg/天，更优选为约10mg/kg/天至约90mg/kg/天，甚至更优选为20mg/kg/天至60mg/kg/天。在处理患者中，所述治疗应该以较低剂量开始，大概约200mg/天至300mg/天，如果必要时增加至每天约600mg/天至约4000mg/天，以单次剂量或分份剂量给予，取决于患者的整体反应。在一些情况下，可能必需使用剂量超出本文公开的范围的活性成分剂量，这对本领域普通技术人员而言是清楚的。此外，要注意，结合个体患者的反应，临床医师或治疗内科医师将知道如何以及何时中断、调整或终止治疗。
本文所用的词组“治疗有效量”、“预防有效量”和“治疗或预防有效量”包括上述给药量和给药频率时间表。本领域普通技术人员十分清楚，不同的治疗有效量可以适用于不同的疾病和病况。类似地，足以治疗或预防这些疾病但是不足以引起或足以降低与常规治疗相关的副作用的量也包括在上述给药量和给药频率时间表中。
精确剂量将由专业人员根据与要求治疗的个体相关的因素确定。调整剂量和给药以提供活性剂的足够水平或保持所需的效果。可能考虑的因素包括疾病状态的严重程度、个体的一般健康状态、个体的年龄、体重以及性别、饮食、时间、感兴趣蛋白的半衰期、感兴趣RNA的半衰期、给予频率、药物组合、反应敏感性以及对治疗的耐受/反应。长效药物组合物可以每3至4天、每周或每两周一次给予，取决于具体制剂的半衰期和清除率。
F、联合治疗还可能将本发明的任何化合物与一种或多种本文所述的用于治疗与mRNA无义突变相关的疾病的其它活性成分组合，包括同时或依次给予需要治疗的患者的单一剂型或分开剂型的化合物。当依次给予时，该组合可以以两次或者多次给药来给予。在可选实施方案中，可能以不同的途径给予本发明的一种或多种化合物和一种或多种另外的活性成分。
本领域技术人员将认识到，多种活性成分可以与本发明的化合物组合给予，其可以起到增强或协同增强本发明的化合物的无义突变抑制活性。
根据本发明的方法，活性成分的组合可以(1)共同配制并且以组合制剂形式同时给予或递送；(2)作为单独制剂交替或平行递送；或(3)通过本领域公知的任何其它组合治疗方案。当交替治疗递送时，本发明的方法可以包括依次给予或递送例如于单独的溶液、乳剂、混悬剂、片剂、丸剂或胶囊剂中的活性成分或者通过单独的注射器进行不同的注射来依次给予或递送活性成分。一般而言，在交替治疗中依次即顺次地给予各活性成分的有效剂量，而在同时治疗中两种或多种活性成分的有效剂量一起给予。也可以使用多种顺序的间歇组合治疗。
G.基因治疗本发明的化合物或其它无义化合物可以与基因治疗组合使用。在该实施方案中，可以将基因引入或提供给在目标基因中含有特定无义突变的哺乳动物，优选人。在优选方面，目标基因选自IGFl、EPO、p53、p19ARF、p21、PTEN、EI24和ApoAI。当全长多肽期望时，为得到患者或哺乳动物中该全多肽的表达，将给所述患者或哺乳动物提供有效量的本发明的化合物或其它无义化合物。
主要有两种途径使含有无义突变的核苷酸(任选在载体中含有)到达患者细胞中体内和体外。对于体内递送，通常在要求所述多肽的部位即该多肽的合成部位(如果已知)以及需要所述多肽生物学活性的部位(例如实体瘤)，直接将核苷酸注射给患者。对于体外治疗，取出患者细胞，将核酸引入这些分离的细胞中，并将修饰的细胞直接给予患者，或者例如包封在多孔膜中植入患者中(参见例如US专利4,892,538和5,283,187)。可获得多种技术供将核酸引入活细胞中。所述技术取决于将核酸体外转入培养的细胞中还是体内转入目标宿主的细胞中而变化。适合于体外将核酸转入哺乳动物细胞中的技术包括使用脂质体、电穿孔术、显微注射、转导、细胞融合、DEAE-葡聚糖、磷酸钙沉淀方法等。转导包括复制缺陷重组病毒(优选逆转录病毒)颗粒与细胞报告子结合，然后将含在所述颗粒中的核酸引入细胞。通常用于基因体外递送的载体为逆转录病毒。
目前优选的体内核酸转移技术包括用病毒或非病毒载体(例如腺病毒、慢病毒、单纯疱疹I型病毒或腺伴随病毒(AAV))以及基于脂质系统(对脂质介导的基因转移有用的脂质例如DOTMA、DOPE和DC-Chol；参见例如，Tonkinson等，Cancer Investigation，14(1)54-65(1996))转染。用于基因治疗最优选的载体为病毒，最优选腺病毒、AAV、慢病毒或逆转录病毒。病毒载体例如逆转录病毒载体包括至少一个转录启动子/增强子或基因座定义元件(locus-defining element)或通过其它手段例如可变剪接、核RNA导出或信使的翻译后修饰来控制基因表达的其它元件。此外，病毒载体例如逆转录病毒载体包括一种核酸序列，当转录编码多肽的基因时，该核酸序列可操作地连接于编码序列并作为翻译起始序列。这些载体构建体还包括包装信号、长末端重复序列(LTRs)或其部分以及适合于所用病毒的正义链和反义链引物结合位点(如果这些已经不存在于病毒载体中)。此外，这些载体通常包括用于从多肽所在的宿主细胞中分泌该多肽的信号序列。优选用于此目的的信号序列为哺乳动物信号序列，更优选该多肽的天然信号序列。任选地，所述载体构建体还可以包括指导聚腺苷酸化信号以及一种或多种限制位点和翻译终止序列。例如，这些载体将通常包括5’LTR、tRNA结合位点、包装信号、第二链DNA合成起始点以及3’LTR或其部分。可以使用的其它载体为非病毒载体，例如阳离子脂质、聚赖氨酸和树枝状聚合物(Dendrimer)。
在一些情况下，期望给核酸源提供靶向靶细胞的物质，例如细胞表面膜蛋白或靶细胞特异性抗体、靶细胞上受体的配体等。当使用脂质体时，与细胞表面膜蛋白结合的与内吞相关的蛋白可以用于靶向和/或促进摄取，例如趋向特定细胞类型的衣壳蛋白或其片段、在循环中经历细胞内化的蛋白的抗体，以及靶向细胞内定位并提高细胞内半衰期的蛋白。受体介导(recpto-mediated)的内吞技术例如在Wu等，J.Biol.Chem.2624429-4432(1987)以及Wagner等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，873410-3414(1990)中已描述。对于目前已知的基因标记和基因治疗方案的综述，参见Anderson等，Science 256808-813(1992)，以及参考WO 93/25673及本文引用的文献。
适合的基因治疗以及制备逆转录病毒颗粒和结构蛋白的方法参见例如US专利5,681,746、6,800,604和6,800,731。
包括以下实施例以辅助理解本发明。关于本发明的实验当然不应解释为特定地限制本发明，并且本发明在本领域技术人员范围内的现在已知或以后发展的变化都认为落入本文所述的发明以及所附权利要求的范围内。
实施例参照以下非限制性实施例来更详细地描述本发明，提供这些实施例用于更全面地例示本发明，而不是限制本发明的范围。这些实施例例示了本发明的某些化合物的制备以及这些化合物的体内和/或体外测试。本领域技术人员将理解，这些实施例中所述的技术代表本发明的发明人描述的很好实现本发明的技术，因此这些技术作为实现本发明的优选模式。然而，应理解，根据本发明公开的内容，本领域技术人员应理解在不背离本发明的精神和范围前提下对于公开的具体方法可做许多改变，并且仍获得相同或类似的结果。
实施例1本发明的化合物的制备实施例A3-[5-(4-异丙基苯基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]苯甲酸(化合物编号6)的制备 步骤A将3-氰基苯甲酸甲酯(5.05g，31.4mmol)、叠氮化钠(3.06g，47.0mmol)和盐酸三乙胺(6.47g，47mmol)在60mL甲苯中的悬浮液加热回流12小时，然后冷却至室温。用水将该非均相混合物稀释，并进行相分离。用饱和碳酸氢钠萃取有机层，将水相合并并用EtOAc洗涤。弃去有机层后，用6N盐酸将合并的水相酸化至约pH为2，并用EtOAc(2×)萃取所得粘稠糊状物。用饱和NaCl洗涤合并的有机层，然后干燥并浓缩，得到5.30g(83％)的白色固体3-(1H-四唑-5-基)苯甲酸甲酯熔点180-181℃；MS m/z 205.1[MH+]。
步骤B将3-(1H-四唑-5-基)苯甲酸甲酯(0.41g，2.0mmol)、4-异丙基苯甲酸(0.33g，2.0mmol)和二环己基碳二亚胺(0.41g，2.0mmol)在二氯乙烷(10mL)中的悬浮液加热回流20小时。冷却至室温后，将混合物过滤，所得固体用二氯甲烷洗涤。滤液用饱和碳酸氢钠洗涤，然后干燥并浓缩得到固体。经硅胶闪蒸色谱(EtOAc/CH2Cl2，2-5％)得到0.54g(84％)褐色固体3-[5-(4-异丙基苯基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]苯甲酸甲酯熔点74-77℃，1H NMR(CDCl3)δ8.74(t，J＝1.5，1H)，8.33(dt，J＝1.5，7.8，1H)，8.20(J＝1.5，7.8，1H)，8.06(dt，J＝1.5，8.4，2H)，7.61(t，J＝7.9，1H)，7.39(dd，J＝1.8，8.4，2H)，3.99(s，3H)，3.00(七重峰，J＝6.9，1H)，1.31(d，J＝6.9，6H)；MS m/z 323.2[MH+]。
步骤C将3-[5-(4-异丙基苯基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]苯甲酸甲酯(0.48g，1.49mmol)在THF(10mL)中的溶液用1N NaOH(2.25mL，2.25mmol)处理，并加热回流5小时。冷却至室温后，用饱和碳酸氢钠碱化，用EtOAc萃取水相。然后用碳酸氢钠(2×)萃取有机层。合并水相，酸化至pH为2并用EtOAc(3×)萃取，然后干燥并浓缩，得到白色固体。重结晶(EtOAc/己烷)得到324mg(71％)的白色针状物3-[5-(4-异丙基苯基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]苯甲酸，熔点202-204℃，1HNMR(DMSO-d6)δ8.54(br s，1H)，8.28(d，J＝7.8，1H)，8.12(d，J＝7.8，1H)，7.97(d，J＝8.1，2H)，7.71(t，J＝7.7，1H)，7.43(d，J＝7.7，1H)，2.95(七重峰，J＝6.9，1H)，1.20(d，J＝6.9，6H)；MS m/z 309.2[MH+]，307.2[MH-]。
用类似的方式，使用上述步骤由适当的氰基苯甲酸酯和羧酸作为原料制备以下化合物化合物编号1、2、3、4、5、7、8、85、86、175、222、223、224、225、278、279、283、284、285、286、292、293、315、316、317、318、3 19、401、402、596、601、605、606、610、615、620、621、622、624、626、628。
实施例B3-[5-(4-叔丁基苯基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]苯甲酸(化合物编号29)的制备
步骤A将20g 2-氯三苯甲基氯树脂(Rapp polymere，德国)在无水二甲基甲酰胺(100mL)中搅拌10分钟，然后除去溶剂。将异酞酸(8.0g，48.2mmol)在1％二异丙基乙胺的二甲基甲酰胺(150mL)中的溶液加入树脂中，然后在室温下搅拌4小时。除去溶剂并依次用二氯甲烷(3×200mL×1min)、二甲基甲酰胺(3×200mL×1min)、甲醇(3×200mL×1min)和二氯甲烷(3×200mL×1min)洗涤树脂。树脂在室温下真空干燥4小时。所需产物通过用三乙基硅烷/三氟乙酸/二氯甲烷裂解少量反应后的树脂来进行分析。
步骤B将PyBOP(520mg，1.0mmol)加入上述步骤A中制备的异酞酸树脂(200mg，0.2mmol)在DMF(3mL)中的悬浮液中。在室温下搅拌5min后，将4-叔丁基苯酰肼(1mmol)加入反应混合物中。将反应混合物在室温下搅拌过夜。除去溶剂并用二氯甲烷(3×200mL×1min)、DMF(3×20mL×10min)、MeOH(3×20mL×10min)和二氯甲烷(3×20mL×10min)洗涤树脂。树脂真空干燥4小时。所需产物通过用三乙基硅烷/三氟乙酸/二氯甲烷裂解少量反应后的树脂进行分析。
步骤C将2-氯-1，3-二甲基氯化咪唑烷鎓(CDC，33.6mg，0.2mmol)和三乙胺(56μL，0.4mmol)加入由上述步骤B制备的酰肼树脂(200mg，0.1mmol)在二氯甲烷中的悬浮液中，然后在室温下搅拌过夜。除去溶剂并用二氯甲烷(3×20mL×10min)、DMF(3×20mL×10min)、MeOH(3×20mL×10min)和二氯甲烷(3×20mL×10min)洗涤树脂。用于二氯甲烷(4mL)中的20％TFA在室温下对树脂处理1小时。去除树脂并将滤液减压下浓缩，得到3-[5-(4-叔丁基苯基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]苯甲酸。所需产物通过制备LC/MS纯化。MS m/z 323.1[M+H]+(纯度95％)。
使用上述方法由步骤A中的异酞酸或对酞酸起始，并与适当的肼衍生物反应制备以下化合物化合物编号22、23、24、25、26、27、28、30、31、32、33、34、35、36、37、38、62、63、64、65、66、67、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、226、228、230、232、234、236、239、241、243、245、247、249、250、252、254、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、258、259、260、261、262、263、264、272、161、162、163、170、169、166、173、167、172、168、174、171、164、165、172、265、15、16、17、18、19、21、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、53、54、55、68、69、70、71、72、73、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、294、295、296、297、298、299、300、301、302、303、304、227、229、231、233、235、237、238、240、242、244、246、248、251、253、255、266、267、268、269、270、271、273、274、305、306、307、308、309、160。
实施例C4-{5-[3-(甲苯-4-磺酰氨基)苯基]-[1，3，4]噁二唑-2-基}苯甲酸(化合物编号13)的制备 步骤A将4-[5-(3-硝基苯基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]苯甲酸甲酯(4.04g，12.43mmol)、0.80g 10％Pd-C、THF(200mL)和EtOAc(50mL)装入帕尔瓶中，将混合物在50psi下氢化5小时。然后用饱和碳酸氢钠和EtOAc稀释反应混合物，然后过滤。分离滤液层，水层用另外的EtOAc萃取。用水和饱和NaCl洗涤合并的有机相，然后干燥并浓缩，得到2.34g(64％)的黄色固体4-[5-(3-氨基苯基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]苯甲酸甲酯1H NMR(DMSO-d6)δ8.20-8.14(m，4H)，7.31(t，J＝1.4，1H)，7.22(d，J＝3.3，2H)，6.78(m，1H)，5.53(br s，2H)，3.88(s，3H)。
步骤B将4-[5-(3-氨基苯基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]苯甲酸甲酯(0.30g，1.02mmol)、吡啶(0.12mL，1.53mmol)和对甲苯磺酰氯(0.23g，1.22mmol)在二氯甲烷(10mL)中的悬浮液在室温下搅拌过夜。用水和二氯甲烷稀释所得混合物并过滤，得到0.25g(55％)的白色固体4-{5-[3-(甲苯-4-磺酰氨基)苯基]-[1，3，4]噁二唑-2-基}苯甲酸甲酯，熔点227-228℃；1H NMR(DMSO-d6)δ10.67(s，1H)，8.20-8.13(m，4H)，7.85(br s，1H)，7.76-7.69(m，3H)，7.46(dt，J＝2.7，10.2，1H)，7.36-7.33(m，3H)，3.88(s，3H)，2.30(s，3H)；MS m/z 450.0[MH+]，448.0[MH-]。
步骤C将4-{5-[3-(甲苯-4-磺酰氨基)苯基]-[1，3，4]噁二唑-2-基}苯甲酸甲酯(225mg，0.50mmol)在THF(10mL)和1N NaOH(0.55mL，0.55mmol)中的悬浮液加热回流过夜。冷却至室温后，将反应混合物在EtOAc和饱和碳酸氢钠中分配。进行相分离并用饱和碳酸氢钠(3×)萃取有机层。合并水相并用6N盐酸酸化至pH为2。过滤所得非均相混合物并干燥，得到129mg(59％)的褐色粉末4-{5-[3-(甲苯-4-磺酰氨基)苯基]-[1，3，4]噁二唑-2-基}苯甲酸，熔点＞275℃；1HNMR(DMSO-d6)δ10.62(br s，1H)，8.18-8.11(m，4H)，7.84(t，J＝1.8，1H)，7.76-7.67(m，3H)，7.47(t，J＝7.9，1H)，7.35(7.32(m，3H)，2.30(s，3H)；MS m/z436.0[MH+]，434.0[MH-]。
使用上述步骤B-C并用其它磺酰氯或酰氯代替制备下列化合物化合物编号12和14。
实施例D4-(5-{3-[3-(4-异丙基苯基)脲基]苯基}-[1，3，4]噁二唑-2-基)苯甲酸(化合物编号60)的制备
步骤A将实施例C步骤A的4-[5-(3-氨基苯基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]苯甲酸甲酯(0.30g，1.02mmol)和4-异丙基苯基异氰酸酯(0.20mL，1.22mmol)在二氯乙烷(10mL)中的悬浮液在室温下搅拌3天。将反应混合物过滤并用二氯甲烷洗涤固体，得到0.28g(60％)白色固体4-(5-{3-[3-(4-异丙基-苯基)脲基]苯基}-[1，3，4]噁二唑-2-基)苯甲酸甲酯熔点＞270℃，1H NMR(DMSO-d6)δ8.97(brs，1H)，8.63(br s，1H)，8.33(t，J＝1.8，1H)，8.22-8.13(m，4H)，7.70(dt，J＝1.7，7.5，1H)，7.60-7.47(m，2H)，7.36(d，J＝8.4，2H)，7.14(d，J＝8.4，2H)；2.82(七重峰，J＝6.8，1H)，1.18(d，J＝6.8，6H)；MS m/z 457.2[MH+]，455.3[MH-]。
步骤B将4-(5-{3-[3-(4-异丙基苯基)脲基]苯基}-[1，3，4]噁二唑-2-基]苯甲酸甲酯(0.23g，0.50mmol)在THF(10mL)和1N NaOH(0.56mL，0.56mmol)中的悬浮液加热回流2.5小时。冷却至室温后，将反应混合物用水稀释，用6N盐酸酸化至pH为2并用EtOAc(3×)萃取，干燥并浓缩，得到170mg(77％)灰白色固体4-(5-{3-[3-(4-异丙基苯基)脲基]苯基}-[1，3，4]噁二唑-2-基]苯甲酸甲酯熔点＞270℃，1H NMRδ(DMSO-d6)8.97(br s，1H)，8.63(br s，1H)，8.33(br s，1H)，8.20-8.10(m，4H)，7.70-7.45(m，3H)，7.35(d，J＝7.2，2H)，7.12(d，J＝7.2，2H)，2.81(m，1H)，1.16(d，J＝5.4，6H)；MS m/z 443.2[MH+]，441.2[MH-]。
实施例E3-[5-(4-吗啉-4-基-苯基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]苯甲酸(化合物编号82)的制备
步骤A将Cs2CO3(0.38g，1.17mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(16mg，0.017mmol)、外消旋-BINAP(21mg，0.033mmol)和3-(5-(4-溴苯基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]苯甲酸甲酯(由实施例A步骤B的方法制备)(0.30g，0.83mmol)装入火焰干燥的试管里。用氮气抽空和吹洗后，加入吗啉(0.09mL，1.00mmol)和甲苯(3.6mL)并将反应混合物加热回流24小时后冷却至室温。过滤非均相混合物，用EtOAc洗涤并浓缩。将残留物用硅胶闪蒸色谱(EtOAc/二氯甲烷，5-10％)纯化，得到0.19g(63％)黄色固体3-(5-(4-吗啉-4-基苯基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]苯甲酸甲酯熔点150-151℃，1H NMR(CDCl3)δ8.72(t，J＝1.8，1H)，8.34(d，J＝7.8，1H)，8.19(d，J＝7.8，1H)，8.03(d，J＝8.7，2H)，7.61(t，J＝7.8，1H)6.99(d，J＝8.7，2H)，3.99(s，3H)，3.89-3.87(m，4H)，3.39-3.30(m，4H)。
步骤B将3-(5-(4-吗啉-4-基苯基)-[1，3，4]噁二唑-2-基)苯甲酸甲酯(0.14g，0.38mmol)在THF(10mL)和1N NaOH(0.46mL，0.46mmol)中的溶液加热回流15小时。冷却至室温后，将反应混合物用水稀释，并用EtOAc萃取水相。有机层用饱和碳酸氢钠反萃取。将合并的水相用0.5N磷酸二氢钠酸化至pH为4.5，并用EtOAc(3×)萃取，干燥浓缩后得到0.11g(82％)黄色固体3-(5-(4-吗啉-4-基苯基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]苯甲酸熔点235-237℃，1H NMR(DMSO-d6)δ8.56(br s，1H)，8.32(d，J＝7.5，1H)，8.13(d，J＝7.5，1H)，7.95(d，J＝8.4，2H)，7.73(t，J＝7.8，1H)，7.11(d，J-8.4，2H)，3.76-3.72(m，4H)，3.32-3.27(m，4H)；MS m/z 352.3[MH+]，350.3[MH′]。
用类似的方式，按照上述步骤A-B通过3-[5-(4-溴苯基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]苯甲酸甲酯和合适的胺反应制备下列化合物化合物编号83、84和280。
实施例F3-[5-(3’-甲基联苯-4-基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]苯甲酸(化合物编号281)的制备
步骤A将3-[5-(4-溴苯基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]苯甲酸甲酯(0.40g，1.11mmol)(来自实施例A步骤B)、间甲苯基硼酸(0.21g，1.55mmol)、三-二亚苄基丙酮二钯(10mg，0.011mmol)和KF(0.19g，3.33mmol)装入火焰干燥的试管中。用氮气吹洗试管，然后加入THF(4mL)和0.7M三叔丁基膦在己烷中的溶液(0.08mL，0.027mmol)。将反应物在室温下搅拌15小时，然后加热回流2小时。冷却至室温后，将反应物过滤、用EtOAc洗涤，将滤液用饱和碳酸氢钠洗涤，然后干燥并浓缩。硅胶闪蒸色谱(EtOAc/CH2Cl2，0-2％)得到0.18g(44％)白色固体3-[5-(3’-甲基联苯-4-基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]苯甲酸甲酯熔点147-148℃，1HNMR(CDCl3)δ 8.77(t，J＝3.1，1H)，8.37(dd，J＝1.0，7.5，1H)，8.24-8.20(m，3H)，7.76(d，J＝8.4，2H)，7.64(t，J＝7.8，1H)，7.47-7.44(m，2H)，3.34(t，J＝7.8，1H)，7.22(d，J＝7.2，1H)，4.00(s，3H)，2.46(s，3H)；MS m/z 371.2[MH+]。
步骤B将3-[5-(3’-甲基联苯-4-基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]苯甲酸甲酯(0.15g，0.41mmol)在THF(5mL)和1N NaOH(0.51mL，0.51mmol)和水(1mL)中的溶液加热回流过夜。冷却至室温后，用水将反应混合物稀释，并通过加入磷酸二氢钠和1N盐酸调节pH至4.5-5。将混合物用EtOAc(3×)萃取，然后干燥并浓缩，得到白色固体3-[5-(3’-甲基联苯-4-基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]苯甲酸熔点240-242℃；1H NMRδ(DMSO-d6)8.53(s，1H)，8.27(dt，J＝1.35，8.1，1H)，8.14-8.08(m，3H)，7.80(d，J＝8.1，2H)，7.70(t，J＝7.8，1H)，7.49-7.45(m，2H)，7.32(t，J＝7.8，1H)，7.17(d，J＝7.8，1H)，2.36(s，3H)；MS m/z 357.2[MH+]，355.3[MH-]。
利用上述方法通过用如实施例A步骤B制备的3-[5-(6-溴吡啶-3-基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]苯甲酸甲酯代替制备以下化合物化合物编号282。
实施例G4-[5-(4-异丙基苯基)-[1，3，4]噻二唑-2-基]苯甲酸(化合物编号324)的制备
步骤A用三乙胺(0.62mL)和4-氯羰基苯甲酸甲酯(0.90g，4.51mmol)处理4-异丙基苯酰肼(0.73g，4.10mmol)在THF(20mL)中的0℃溶液。然后将反应物暖至室温并搅拌过夜。之后用水洗涤反应物并用EtOAc(3×)萃取。用水和饱和氯化钠洗涤合并的有机相，然后真空干燥并浓缩固体。使用EtOAc/二氯甲烷(0-15％)作为洗脱液通过硅胶闪蒸色谱进行纯化，得到0.86g(62％)白色固体4-[N’-(4-异丙基苯甲酰基)-肼基羰基]苯甲酸熔点235-237℃；MS m/z 341.2[MH+]，339.2[MH-]。
步骤B将上述步骤A的4-[N’-(4-异丙基苯甲酰基)-肼基羰基]苯甲酸和Lawesson试剂(0.59g，1.47mmol)在二氯甲烷(10mL)中的悬浮液加热回流18小时，然后冷却至室温。将粗反应混合物真空浓缩并用闪蒸色谱(EtOAc/二氯甲烷，0-1％)纯化，得到0.22g(88％)白色固体4-[5-(4-异丙基苯基)-[1，3，4]噻二唑-2-基]苯甲酸甲酯熔点147-151℃，1H NMR(DMSO-d6)δ8.16-8.09(m，4H)，7.93(d，J＝8.1，2H)，7.45(d，J＝8.1，2H)，3.89(s，3H)，2.98(七重峰，J＝6.8，1H)，1.24(d，J＝6.9，6H)；MS m/z 339.2[MH+]。
步骤C用1N NaOH(0.36mL，0.36mmol)和水(0.65mL)处理4-[5-(4-异丙基苯基)-[1，3，4]噻二唑-2-基]苯甲酸甲酯(96mg，0.28mmol)在THF中的溶液，并将双相反应混合物加热回流3小时，然后冷却至室温。用另外的水稀释后，加入足够的6N盐酸直至将pH调整至2，结果形成白色固体沉淀。过滤固体，用水洗涤并干燥，得到60mg(65％)4-[5-(4-异丙基苯基)-[1，3，4]噻二唑-2-基]苯甲酸熔点＞300℃；1H NMR(DMSO-d6)δ.7.99-7.88(m，6H)，7.44(d，J＝8.1，2H)，2.97(七重峰，J＝6.9，1H)，1.24(d，J＝6.9，6H)；MS m/z 325.1[MH+]，323.2[MH-]。
实施例H4-[5-(4-异丙基苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]苯甲酸(化合物编号275)的制备
步骤A将4-氰基苯甲酸甲酯(4.83g，30.0mmol)加入由2.19g(31.5mmol)的盐酸羟胺和1.26g(31.5mmol)的NaOH制备的羟胺在水/乙醇(1/1，50mL)中的溶液中。将反应混合物在90℃下搅拌过夜。然后用乙醇/己烷(9/1，50mL)置换溶剂，并在室温下搅拌0.5小时。通过过滤去除固体，将滤液蒸发至干，得到白色粉末，该白色粉末进一步用乙醇/己烷重结晶，得到白色针状物(4.53g，77.8％)MS m/z 195[MH+]。
步骤B将HOBt(0.28g，2.05mmol)加入上述羟脒(0.39g，2.05mmol)、4-异丙基苯甲酸(0.34g，2.05mmol)和二氯甲烷(10mL)的0℃溶液中，随后加入DCC(0.42g，2.05mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。通过过滤除去沉淀，滤液浓缩，随后进行硅胶色谱，得到4-((Z)-氨基{[(4-异丙基苯甲酰基)氧基]亚氨基}甲基)苯甲酸甲酯(0.60g，77％)MS m/z 341[MH+]。
步骤C将上述制备的中间体(0.48g，1.4mmol)在甲苯(5.0mL)中在130℃下加热过夜，冷却并进行色谱(硅胶，EtOAc/己烷，2/8)，得到白色粉末4-[5-(4-异丙基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基]苯甲酸甲酯(0.41g，91％)MS m/z 323[MH+]。
步骤D在室温下用于二氯甲烷(10mL)中的BBr3(1M，在二氯甲烷中，2.3mL，2.3mmol)处理上述制备的甲酯(0.37g，1.15mmol)过夜。真空除去挥发物，残留物用水处理并用氯仿重结晶粗产物，得到所需产物4-[5-(4-异丙基苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]苯甲酸(0.23g，66％)熔点210-213℃，1HNMR(CDCl3，300MHz)δ1.23(d，6H)，2.89-2.99(m，1H)，7.33(d，2H)，8.03-8.17(m，6H)；MSm/z 307[MH-]。
基本上按照上述步骤在步骤B用适当的羧酸衍生物代替制备以下化合物化合物编号141-407。
实施例I4-[5-(4-氟苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]苯甲酸(化合物编号412)的制备 步骤A将40g 2-氯三苯甲基氯树脂(Rapp polymere，德国)在二甲基甲酰胺(200mL)中搅拌10min并除去溶剂。将4-氰基苯甲酸(12.71g，96.4mmol)在300mL 1％二异丙基乙胺/二甲基甲酰胺中的溶液加入树脂中，并在室温下搅拌4小时。除去溶剂并用二氯甲烷(3×200mL×1min)、二甲基甲酰胺(3×200mL×1min)、甲醇(3×200mL×1min)和二氯甲烷(3×200mL×1min)洗涤树脂。将树脂真空干燥4小时。通过用三乙基硅烷/三氟乙酸/二氯甲烷(10/50/40)裂解少量反应后的树脂对所需产物进行分析MS m/z 148[MH+](纯度97％)。
步骤B将于乙醇(300mL)中的4-氰基苯甲酸树脂在室温下搅拌10min，然后除去溶剂。将二异丙基乙胺(89.3mL，516mmol)加入盐酸羟胺(35.81g，516mmol)在乙醇(200mL)中的溶液中，并将混合物在室温下搅拌5min。将上述反应混合物加入树脂中并在40℃下搅拌24小时。除去溶剂并用二氯甲烷(3×200mL×10min)、二甲基甲酰胺(3×200mL×10min)、甲醇(3×200mL×10min)和二氯甲烷(3×200mL×10min)洗涤树脂。所得树脂真空干燥4小时。通过用三乙基硅烷/三氟乙酸/二氯甲烷(10/50/40)裂解少量反应后的树脂对所需产物进行分析MS m/z 181[MH+](纯度92％)。
步骤C将4-氟苯甲酰氯(95mL，0.8mmol)和二异丙基乙胺(138mL，0.8mmol)加入羟脒树脂(500mg，0.4mmol)在无水二氯甲烷(3mL)中的悬浮液中。反应混合物在室温下搅拌过夜。除去溶剂，并用二氯甲烷(3×10mL×10min)、二甲基甲酰胺(3×10mL×10min)、甲醇(3×10mL×10min)和二氯甲烷(3×10mL×10min)洗涤树脂。所得树脂真空干燥4小时。通过用三乙基硅烷/三氟乙酸/二氯甲烷(10/50/40)裂解少量反应后的树脂对所需产物进行分析MS m/z 303[MH+]。
步骤D将于二氯甲烷(1.5mL)中的50％三氟乙酸加入酰化树脂在无水二氯甲烷(1.5mL)中的悬浮液中。将反应混合物在室温下搅拌2小时。除去树脂，将滤液减压下浓缩。将残留物溶解在甲苯(4mL)中的10％二甲基甲酰胺中，然后在130℃下搅拌2小时。除去溶剂，所得产物4-[5-(4-氟苯基)-[1，2，4]噁二唑-3-苯基]苯甲酸用制备LC/MS纯化MS m/z 285[MH+]。
使用上述方法制备以下化合物化合物编号408、409、410、411、412、413、414、415、416、417、418、419、420、421、422、430、431、432、433、434、435、436、437、438、439、440、441、442、443、445、446、447、448、449、450、451、452、453、444。
实施例J4-[3-(4-异丙基苯基)-1，2，4-噁二唑-5-基]苯甲酸(化合物编号140)的制备 步骤A将4-异丙基苄腈(4.35g，30.0mmol)加入由3.13g(40.5mmol)的盐酸羟胺和1.89g(45mmol)的NaOH制备的羟胺在水/乙醇(1/1，50mL)中的溶液中。将反应混合物在90℃下搅拌过夜。用乙醇/己烷(9/1，50mL)置换溶剂，并在室温下搅拌0.5小时。通过过滤去除固体，将滤液蒸发至干，以定量收率得到无色油状物N’-羟基-4-异丙基苯甲脒(N’-hydroxy-4-isopropylbenzenecarboximidamide)MS m/z 195[MH+]。
步骤B将4-(氯羰基)苯甲酸甲酯(0.32g，1.58mmol)加入以上制备的中间体(0.27g，1.50mmol)、三乙胺(0.18g，0.25mL，1.8mmol)在二氯甲烷(10mL)中的0℃溶液中。然后将混合物在室温下搅拌4小时。然后用水和盐水洗涤混合物，用无水硫酸钠干燥并过滤。用甲苯置换溶剂，在130℃下在密封管中搅拌过夜。除去溶剂后将所得粗产物进行色谱，得到4-[3-(4-异丙基苯基)-1，2，4-噁二唑-5-基]苯甲酸甲酯(0.38g，79％)MS m/z 323[MH+]。
步骤C用在二氯甲烷(10mL)中的BBr3(1M，在二氯甲烷中，2.3mL，2.3mmol)在室温下处理上述制备的甲酯(0.37g，1.15mmol)过夜。真空除去挥发物，用水处理残留物并用氯仿重结晶粗产物，得到所需产物4-[3-(4-异丙基苯基)-[1，2，4]噁二唑-5-基]苯甲酸(0.34g，97％)熔点253-255℃，1H NMR(CDCl3，300MHz)δ1.25(d，6H)，2.90-3.00(m，1H)，7.31(d，2H)，8.01-8.24(m，6H)；MSm/z 307[MH-]。
用类似的方式使用上述步骤通过在上述步骤A中用适当的苄腈代替并在上述步骤B中与3-(氯羰基)苯甲酸甲酯原料反应制备以下化合物化合物编号349、364、394、396、397、398、399、403、404、405和406。
实施例K3-[3-(2-氟苯基)-[1，2，4]噁二唑-5-基]苯甲酸(化合物编号506)的制备 步骤A-C(一锅法)将274μL(4.48mmol，1.12当量)的50％羟胺/水溶液加入2-氟苄腈(484mg，4.00mmol，Aldrich)在3mL t-BuOH中的溶液中。将溶液加热至73℃，保持20小时，加入另一部分50％羟胺/水(100μL，1.60mmol，0.38当量)，并将混合物在73℃下加热2小时。然后将所得粗2-氟-N-羟基苄脒混合物冷却至10℃，用3mL t-BuOH稀释，并用三乙胺(836μL，6mmol)处理，然后用3-氯羰基苯甲酸甲酯(1.19g，6mmol)处理，通过经1-2小时将混合物缓慢暖至室温以形成中间体O-酰化羟基苄脒。然后将该悬浮液加热至90℃，搅拌3天，冷却至室温，用200mL 20％THF/Et2O稀释并过滤。用1N NaOH水溶液(2×50mL)、水(2×50mL)洗涤有机溶液，干燥(硫酸镁)并真空浓缩，得到3-[3-(2-氟苯)-[1，2，4]噁二唑-5-基]苯甲酸甲酯，将其直接用于下一步反应而没有进一步纯化MS m/z 299.33，C16H12FN3O3计算值(MH+)299。
步骤D用40mL 50％THF/H2O稀释步骤3得到的粗固体(纯度＞93％，LC/MS)，加热至65℃，保持5小时，并冷却到室温。通过缓慢加入6N的盐酸水溶液将溶液pH调整至4并过滤。用30％Et2/己烷洗涤所得固体并在70℃下干燥过夜(10托)，得到1.07g(94％，4步)的白色蓬松粉末3-[3-(2-氟苯基)-[1，2，4]噁二唑-5-基]苯甲酸熔点233-234℃，1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.45(m，2H)，7.66(m，1H)，7.79(t，J＝7.7Hz，1H)，8.13(m，1H)，8.24(dt，J＝8.0Hz，1.4Hz，1H)，8.39(dt，J＝8.0，1.6Hz，1H)，8.65(t，J＝1.6Hz，1H)；MS m/z285.26，C15H10FN3O2计算值(MH+)285。
基本按照上述方法用合适的取代腈开始制备以下化合物化合物编号507、508、509、510、511、512、513、559、560、561、562、563、564、565、569、571、572、576、577、578和570。
实施例L3-[5-(4-异丙基苯基)噁唑-2-基]苯甲酸(化合物编号288)的制备 步骤A在0℃将2-溴-1-(对异丙基苯基)乙酮(12g，50mmol)在40mL无水甲苯中的溶液加入六亚甲基四胺(7.0g，50mmol)在70mL无水甲苯中的溶液中。将反应混合物搅拌过夜。过滤除去形成的固体，用20mL甲苯洗涤，然后将固体(六亚甲基四铵盐)加入浓盐酸(8.5mL)在80mL乙醇中的溶液中。将混合物在室温下在暗处搅拌24小时。通过过滤除去白色固体(氯化铵)，并蒸发滤液。用乙醇/乙醚将残留物重结晶，得到2-氨基-1-(对异丙基苯基)乙酮盐酸盐黄色固体(70％)。
步骤B将异酞酸单乙酯(5.2g，27mmol)在20mL亚硫酰氯中的溶液回流3小时，然后浓缩以除去过量的亚硫酰氯。将残留物溶解在无水THF(10mL)中，并在0℃下逐滴加入2-氨基-1-(对异丙基苯基)乙酮盐酸盐(4.7g，22mmol)和吡啶(5mL，61mmol)在无水THF(30mL)中的溶液中。搅拌24小时后，蒸发溶剂。将残留物溶解在10mL水中，用二氯甲烷萃取，用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。真空浓缩后，通过柱色谱纯化残留物，得到N-[2-(4-异丙基苯基)-2-氧代-乙基]异酞酸乙酯棕色固体(5.5g，71％)。
步骤C将上述酯(500mg，1.42mmol)在5mL磷酰氯中的溶液回流2.5小时。蒸发溶剂后，将残留物溶解在20mL浓氨水溶液中，用EtOAc萃取，用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。浓缩溶剂得到粗3-[5-(4-异丙基苯基)-噁唑-2-基]苯甲酸乙酯棕色油状物(340mg，72％)。
步骤D将3-[5-(4-异丙基苯基)-噁唑-2-基]苯甲酸乙酯(150mg，0.45mg)和氢氧化锂(94mg，2.24mmol)在甲醇/水(9mL/3mL)中的混合物搅拌2小时。蒸发溶剂，将残留物溶解在10mL水中，用1g柠檬酸处理，用EtOAc萃取，用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。真空浓缩溶剂，将产物用二氯甲烷/己烷重结晶，得到71mg(52％)3-[5-(4-异丙基苯基)-噁唑-2-基]苯甲酸浅黄色固体熔点150-153℃，1H NMR(CDCl3)δ8.97(br s，1H)，8.33(d，J＝7.6，1H)，8.21(d，J＝7.6，1H)，7.68(d，J＝7.6，2H)，7.62(t，J＝7.8，1H)，7.50(br s，1H)，7.33(d，J＝7.6，2H)，2.97(七重峰，J＝6.8，1H)，1.25(d，J＝6.9，6H)；MS m/z 308.2[MH+]。
实施例M4-[5-(2，4-二氟苯基)噁唑-2-基]苯甲酸(化合物编号548)的制备 步骤A4-(4，5-二氢噁唑-2-基)苯甲酸甲酯在室温下将2-溴乙胺氢溴酸盐(10.25g，50.0mmol)在搅拌下加入4-氯羰基苯甲酸甲酯(10.92g，54.98mmol)的甲苯(200mL)溶液中。当加入三乙胺时在室温下搅拌反应混合物。将反应混合物加热回流15小时，然后冷却到室温。加入水(200mL)，并将混合物用二氯甲烷(4×50mL)萃取。将萃取物用水(2×50mL)、饱和氯化钠水溶液(2×50mL)洗涤，并用硫酸镁干燥，过滤并用旋转蒸发仪浓缩，得到6.86g 4-(4，5-二氢-噁唑-2-基)苯甲酸甲酯褐色固体，收率67％。
步骤B4-(5-溴噁唑-2-基)苯甲酸甲酯将4-(4，5-二氢噁唑-2-基)苯甲酸甲酯悬浮于四氯化碳(335mL)中。加入N-溴琥珀酰亚胺(18.45g，103.7mmol)，随后加入偶氮二异丁腈(50mg)。将反应混合物用氮气(5真空/氮气循环)净化，并加热回流17小时。过滤固体，用四氯化碳洗涤并弃去固体。滤液用饱和Na2S2O3(40mL)溶液洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并用旋转蒸发仪浓缩，得到粗产物。将产物进一步通过硅胶色谱用1-6％乙酸乙酯/己烷洗脱纯化纯化，得到4.42g(47％)4-(5-溴噁唑-2-基)苯甲酸甲酯白色固体。
步骤C4-[5-(2，4-二氟苯基)噁唑-2-基)苯甲酸甲酯将4-(5-溴噁唑-2-基)苯甲酸甲酯(2.23g，7.91mmol)溶解在无水二甲氧基乙烷(26mL)中，并在25℃下搅拌。然后将2，4-二氟苯基硼酸(1.39g，8.80mmol)、氟化铯(2.89g，19.0mmol)和二氯双(三苯基膦)钯(II)(0.281g，0.40mmol)加入。将反应混合物在氮气下加热回流16小时。将反应混合物冷却至室温，过滤固体并用二甲氧基乙烷洗涤，弃去固体。滤液用水稀释至使产物沉淀，过滤产物，用水洗涤并干燥，得到褐色固体粗产物。将产物用硅胶色谱纯化，得到1.16g(47％)4-[5-(2，4-二氟苯基)噁唑-2-基)苯甲酸甲酯浅黄色固体。
步骤D4-[5-(2，4-二氟苯基)噁唑-2-基)苯甲酸将4-[5-(2，4-二氟苯基)噁唑-2-基)苯甲酸甲酯悬浮于叔丁醇(6mL)和水(2mL)的混合物中。加入氢氧化钠(0.24g，6.0mmol)，并将反应混合物加热回流15小时。将反应混合物冷却至室温，通过加入10％盐酸水溶液酸化至pH为3以沉淀出产物。过滤固体，用水洗涤(3×10mL)并干燥，得到1.04g(94％)4-[5-(2，4-二氟苯基)噁唑-2-基)苯甲酸白色固体熔点301-302℃，1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.30(1H，dt，J＝2.4，8.1)，7.52(1H，m)，7.71(1H，d，J＝3.6)，8.03-8.11(m，4H)，8.22(2H，d，J＝6.9)；MS m/z302.32[MH+]。
按照上述方法使用适当的硼酸制备以下化合物化合物编号542、543、544、545、546、547、549、550、553、554、555、556、557、558、579、580、581、582、583、584、585、586、587、588、589、590、591、592、593、594、595、527、528、629、630、631、632、633、634、635、636、637、638、639、640、641、642、643、644、645、646、647、648、649、649和650。
实施例N3-[4-(4-吡咯烷-1-基-苯基)-噁唑-2-基]苯甲酸(化合物编号335)的制备
步骤A将异酞酸甲酯(20g)在氢氧化铵(100mL)中的溶液在120℃下搅拌18小时。减压下除去溶剂，得到所需产物，为白色固体。
步骤B将2-溴-1-(4-吡咯烷-1-基-苯基)乙酮(158mg，0.96mmol)在室温下加入上述间苯二甲氨酸(160mg，.096mmol)在DMF(2mL)中的溶液中。将反应混合物在150℃下搅拌18小时，然后冷却至室温。减压下去除溶剂，通过制备LC-MS纯化所需产物3-[4-(4-吡咯烷-1-基-苯基)噁唑-2-基]苯甲酸(MH+＝355.0)。
使用上述方法通过用适当的溴或氯酮代替制备以下化合物化合物编号351、352、353、354、355、356、357、358、359、360、361、362、363、329、330、331、332、333、334、335、336、337、338、339、340、341、342、343、344、345、346、325和276。
实施例O3-[2-(4-异丙基苯基)噁唑-4-基]苯甲酸(化合物编号313)的制备 步骤A将4-异丙基苯甲酰胺(301mg，1.85mmol)和3-(2-溴乙酰基)苯甲酸甲酯(500mg，1.85mmol)在5mL间二甲苯中的溶液在140-150℃下加热7小时。冷却后将反应物倒入水中，用EtOAc萃取，硫酸镁干燥，并用闪蒸色谱纯化产物，得到161mg(27％)的3-[2-(4-异丙基苯基)噁唑-4-基]苯甲酸甲酯。
步骤B将3-[2-(4-异丙基苯基)噁唑-4-基]苯甲酸甲酯(100mg，0.33mmol)和氢氧化锂(64mg，1.56mmol)在甲醇/水(5mL/1.7mL)中的溶液在室温下搅拌0.5小时。然后将反应混合物加热至45℃，并搅拌3小时。反应完成后，减压除去溶剂。将残留物溶解在10mL水中，中和，用EtOAc萃取，然后用盐水洗涤，硫酸钠干燥并浓缩，得到90mg(94％)3-[2-(4-异丙基苯基)噁唑-4-基]苯甲酸熔点187-189℃；1H NMR(CDCl3)δ8.53(br s，1H)，8.12-8.04(m，5H)，7.56(t，J＝7.6，1H)，7.34(d，J＝7.6，2H)，2.98(七重峰，J＝6.8，1H)，1.30(d，J＝6.8，6H)；MSm/z 308.3[MH+]。
实施例P3-[2-(4-异丙基苯基)-噁唑-5-基]苯甲酸(化合物编号320)的制备 步骤A将3-乙酰基苯甲酸(0.67g，4.1mmol)和催化量的TsOH在50mL甲醇中的溶液回流20小时。蒸发除去溶剂，并将残留物溶解在50mL乙醚中，用20mL 5％碳酸氢钠和20mL盐水洗涤，干燥(硫酸钠)，蒸发，得到3-乙酰基苯甲酸甲酯(0.71g，97％)，为浅黄色油状物。
步骤B将3-乙酰基苯甲酸甲酯(6.6g，37mmol)在乙醚和1，4-二噁烷(V∶V＝10∶1，共57.5mL)的混合物中的溶液在室温下用溴(1.91mL，37mmol)在30分钟内逐滴处理。加入后，将混合物再搅拌40min。然后在冰冷却下用碳酸氢钠水溶液处理混合物，并用EtOAc(2×100mL)萃取。依次用50mL饱和碳酸氢钠、50mL水和50mL盐水洗涤有机层，用无水硫酸镁干燥并蒸发。将残留物通过硅胶柱色谱(石油醚-EtOAc，15∶1)纯化，得到3-(溴乙酰基)苯甲酸甲酯(6.5g，68％)，为白色固体。
步骤C在室温下将叠氮化钠加入3-(溴乙酰基)苯甲酸甲酯(3.8g，14.8mmol)在20Ml DMF中的溶液中，将混合物搅拌35min。将反应混合物用100mL冰水稀释并用乙醚萃取(3×50mL)。依次用水(2×40mL)、盐水(40mL)洗涤合并的有机层，并用硫酸镁干燥，浓缩，得到3-(2-叠氮基乙酰基)苯甲酸甲酯(2.1g，65％)，为灰色固体。
步骤D将3-(2-叠氮基乙酰基)苯甲酸甲酯(1.89g，8.6mmol)、0.4g 10％Pd-C在40mL甲醇和2.5mL浓盐酸中的混合物在室温下在1大气压下氢化。过滤催化剂后，蒸发滤液并干燥，得到胺盐酸盐(1.25g，63.2％)，为白色固体。
步骤E将5mL无水吡啶加入冷却至0℃的3-(2-氨基乙酰基)苯甲酸甲酯(1.2g，5.2mmol)在10mL无水THF中的溶液中。将混合物搅拌30min后，在15min内逐滴加入4-异丙基苯甲酰氯在THF(10mmol，在5mL溶剂中)中的溶液。加入后，将反应混合物搅拌2小时并蒸发。将残留物溶解在10mL EtOAc中，并用水(3×30mL)、盐水(30mL)洗涤，用硫酸钠干燥。将残留物通过硅胶柱色谱(石油醚/EtOAc，3/1)纯化，得到3-[2-(4-异丙基苯甲酰氨基)乙酰基]苯甲酸甲酯(1.2g，67.7％)，为浅黄色固体。
步骤F将3-[2-(4-异丙基苯甲酰氨基)乙酰基]苯甲酸甲酯(0.5g，1.5mmol)在10mL POCl3中的溶液回流6小时并冷却至室温。将100mL冰水加入反应混合物中并用2N NaOH调节pH至10。然后用EtOAc(2×50mL)萃取混合物，用水(2×50mL)、盐水(50mL)洗涤有机层，用硫酸钠干燥并蒸发。将残留物通过硅胶柱色谱(石油醚/EtOAc，3/1)纯化，得到3-[2-(4-异丙基苯基)噁唑-5-基]苯甲酸甲酯(0.4g，84.5％)，为浅黄色固体。
步骤G将在10mL水中的氢氧化锂(0.1g)加入3-[2-(4-异丙基苯基)噁唑-5-基]苯甲酸甲酯(0.4g，12.5mmol)在5mL甲醇中的溶液中，并将反应物加热回流2小时。蒸发除去甲醇，用6N盐酸酸化至pH为3，并搅拌15min。将混合物过滤并用水(3×10mL)、石油醚(10mL)洗涤，干燥，得到3-[2-(4-异丙基苯基)噁唑-5-基]苯甲酸(0.35g，91％)，为灰色固体熔点193-195℃；1H NMR(CDCl3)δ8.46(br s，1H)，8.10-8.05(m，3H)，7.95(d，J＝7.6，2H)，7.58(t，J＝7.6，1H)，7.56(s，1H)，7.37(d，J＝8.4，2H)，2.99(七重峰，J＝6.9，1H)，1.29(d，J＝6.9，6H)；质谱(m/z)308.2[MH+]。
实施例Q3-[5-(4-氟苯基)-1H-吡唑-3-基]苯甲酸(化合物编号552)的制备
步骤A3-[3-(4-氟苯基)-3-氧代丙酰基]苄腈的制备。将4-氟苯乙酮(4-fluoroacetylphenone)(0.86g，6.22mmol)在THF(5mL)中的溶液加入3-氰基苯甲酸甲酯(1.05g，6.52mmol)和氢化钠(0.69g，60％，在己烷中，17.25mmol)在THF(15mL)中的混合物中。将所得混合物在搅拌下加热回流1小时，直至通过TLC判断原料消耗完毕。冷却至室温后，将混合物加入15mL 1N盐酸中，将溶液用EtOAc(2×20mL)萃取。用饱和碳酸氢钠洗涤合并的有机层，然后用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并减压下除去。进一步用闪蒸柱色谱纯化残留物，依次用己烷和于己烷中的50％二氯甲烷洗脱。将分离的固体悬浮于乙醚中，并过滤，得到1.28g(74％)3-[3-(4-氟苯基)-3-氧代丙酰基]苄腈，为白色粉末。通过1HNMR和LC-MS测定，所得化合物的纯度大于95％1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.25(m，1H)，8.20(m，1H)，8.03(m，2H)，7.83(m，1H)，7.64(t，J＝7.8，1H)，7.20(m，2H)，6.79(s，1H)；MS(ES-)266.25。
步骤B3-[5-(4-氟苯基)-1H-吡唑-3-基]苄腈的制备。将无水肼(30mL，0.985mmol)加入3-[3-(4-氟苯基)-3-氧代-丙酰基]苄腈(250mg，0.895mmol)在3mL无水乙醇中的溶液中，将密封的反应混合物在微波中加热至100℃，21min(功率300W，1min升温至100℃，保持20min)，得到3-[5-(4-氟苯基)-1H-吡唑-3-基]苄腈粗溶液MS m/z 264.29，C16H11FN3计算值(MH+)264。
步骤C3-[5-(4-氟苯基)-1H-吡唑-3-基]苯甲酸的制备。将5N氢氧化钠水溶液(1mL，5mmol)加入3-[5-(4-氟苯基)-1H-吡唑-3-基]苄腈的混合物中，并将混合物密封，在微波中加热至100℃，31min(功率300W，1min升温至100℃，维持20min)，得到含有3-[5-(4-氟苯基)-1H-吡唑-3-基]苯甲酸粗溶液，将其冷却至室温。通过缓慢加入2N盐酸水溶液调整溶液pH至4，并过滤。用水(2×50mL)、50％Et2O/己烷(2×5mL)洗涤所得固体，并干燥过夜(50℃，1托)，得到211.5mg 3-[5-(4-氟苯基)-1H-吡唑-3-基]苯甲酸(86％，2步)，为白色粉末熔点270.5-272℃；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.27(m，3H)，7.56(t，J＝7.7Hz，1H)，7.89(m，3H)，8.05(d，J＝7.7Hz，1H)，8.39(m，1H)；MS m/z 283.32，C16H12FN2O2计算值(MH+)283。
采用基本相同的方式制备以下化合物化合物编号551。
实施例R3-[5-(4-异丙基苯基)-2H-吡唑-3-基]苯甲酸(化合物编号287)的制备 步骤A将1-(4-异丙基-苯基)乙酮(4.86g，30mmol)和异酞酸二甲酯(5.83g，30mmol)在20mL THF中的溶液加入氢化钠(1.56g，39mmol，60％，分散在矿物油中)在无水THF(50mL)中的悬浮液中，并在室温下搅拌30min。将混合物加热回流5小时，在冰上冷却，并通过加入3.5mL浓盐酸终止反应物反应，然后浓缩。将粗3-[3-(4-异丙基苯基)-3-氧代-丙酰基]苯甲酸甲酯溶解在二氯甲烷中，用闪蒸色谱使用二氯甲烷/石油醚(1/1)作为洗脱液纯化，得到6.4g中间体(66％)，为油状物。
步骤B将518mg LiOH.H2O一批加入于25mL 4/1甲醇/水中的600mg3-[3-(4-异丙基苯基)-3-氧代-丙酰基]苯甲酸甲酯中，并将反应物加热回流2小时，冷却至室温，并用盐酸水溶液中和。过滤沉淀，用水洗涤，干燥并用乙醇重结晶，得到350mg 3-[3-(4-异丙基苯基)-3-氧代-丙酰基]苯甲酸，为白色固体。
步骤C将0.05mL一水合肼加入310mg 3-[3-(4-异丙基苯基)-3-氧代-丙酰基]苯甲酸在5mL乙醇中。将反应混合物回流24小时并冷却至室温。收集沉淀，用乙醇洗涤并用甲苯重结晶，得到190mg 3-[5-(4-异丙基苯基)-2H-吡唑-3-基]苯甲酸，为白色固体1H NMR(DMSO-d6)δ8.40(br s，1H)，8.04(d，J＝7.2，1H)，7.87(d，J＝7.6，1H)，7.74(d，J＝7.6，2H)，7.54(t，J＝7.6，1H)，7.30(d，J＝7.6，2H)，7.19(s，1H)，2.90(七重峰，J＝6.8，1H)，1.21(d，J＝6.8，6H)；MS m/z 308.2[MH+]。
实施例S3-(4-对甲苯基噻唑-2-基)苯甲酸(化合物编号350)的制备 步骤A将二硫代磷酸二乙酯和水(5mL)加入3-氰基苯甲酸(1.2g，8.2mmol)在THF(50mL)中的溶液中，然后将混合物在80℃下搅拌18小时。减压下除去溶剂，得到所需的3-硫代氨甲酰基苯甲酸，为白色固体。
步骤B将2-溴-1-对甲苯基乙酮加入3-硫代氨甲酰基苯甲酸在无水DMF中的溶液中并将反应物在150℃下搅拌18小时。在氮气流下除去溶剂，用制备LC-MS纯化所需产物3-(4-对甲苯基噻唑-2-基)苯甲酸。
使用上述方法制备以下化合物化合物编号365、366、367、368、369、370、371、372、373、374、375、376、377、378、379、380、381、382、383、384、385、386、387、388、389、390、391、392和393。
实施例T3-[4-(4-异丙基苯基)噻唑-2-基]苯甲酸(化合物编号289)的制备 步骤A将3-氰基苯甲酸乙酯(3.36g，19.2mmol)溶解在10mL无水DMF中并将溶液加热至70-75℃。缓慢将硫化氢鼓入溶液中并加入0.5mL六氢吡啶。2小时后，将反应混合物倒入50mL水中，收集形成的沉淀并真空干燥，得到3g 3-硫代苯甲酰基苯甲酸乙酯。
步骤B将3-硫代苯甲酰基苯甲酸乙酯(0.5g，2.39mmol)和2-溴-1-(4-异丙基苯基)乙酮(576mg，2.39mmol)在2mL无水DMF中的溶液在60-65℃下加热2小时。反应完成后，将反应物倒入水中，用EtOAc萃取，用硫酸镁干燥并通过闪蒸色谱纯化，得到0.7g(84％)3-[4-(4-异丙基苯基)噻唑-2-基]苯甲酸乙酯。
步骤C将3-[4-(4-异丙基苯基)噻唑-2-基]苯甲酸乙酯(92mg，0.26mmol)和LiOH(55mg，1.3mmol)在甲醇/水(5mL/1.7mL)中的溶液在室温下搅拌0.5小时。然后将反应混合物加热至50℃并搅拌3小时。完成后，真空除去溶剂，将残留物溶解在10mL水中，中和，用EtOAc萃取，用盐水洗涤，通过硫酸钠干燥并浓缩，得到82mg(97.6％)3-[4-(4-异丙基苯基)噻唑-2-基]苯甲酸熔点206-208℃；1H NMR(CDCl3)δ8.74(br s，1H)，8.33(d，J＝7.6，1H)，8.17(d，J＝7.6，1H)，7.93(d，J＝8.0，2H)，7.59(t，J＝7.6，1H)，7.48(s，1H)，7.32(d，J＝8.0，1H)，2.97(七重峰，J＝6.9，1H)，1.30(d，J＝6.8，6H)；MS m/z 324.2[MH+]。使用上述方法制备以下化合物化合物编号350、365、366、367、368、369、370、371、372、373、374、375、376、377、378、379、380、381、382、383、384、385、386、387、388、389、390、391、392、393。
实施例U3-[5-(4-异丙基苯基)噻唑-2-基]苯甲酸(化合物编号310)的制备 步骤A将N-[2-(4-异丙基苯基)-2-氧代乙基]间苯二甲氨酸乙酯(得自上述实施例L步骤B，500mg，1.42mmol)和五硫化二磷(1.0g，4.5mmol)在10mL无水吡啶中的混合物回流2小时，冷却后，将混合物倒入冰水(20mL)和饱和氨水溶液(10mL)中。将反应物用EtOAc萃取，用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。浓缩后用柱色谱纯化残留物，得到3-[5-(4-异丙基苯基)-噻唑-2-基]苯甲酸乙酯，为棕色油状物(150mg，30％)。
步骤B将3-[5-(4-异丙基苯基)噻唑-2-基]苯甲酸乙酯(120mg，0.34mmol)和氢氧化锂(94mg，2.24mmol)在甲醇/水(9mL/3mL)中的混合物搅拌2小时。蒸发溶剂后，将残留物溶解在10mL水中，用1g柠檬酸处理，然后用EtOAc萃取。将有机相用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，浓缩并将粗产物用二氯甲烷/己烷重结晶，得到3-[5-(4-异丙基苯基)噻唑-2-基]苯甲酸，为棕色固体(64mg，59％)熔点218-220℃；1H NMR(DMSO-d6)δ8.78(br s，1H)，8.22-8.16(m，2H)，8.07(s，1H)，7.61-7.55(m，3H)，7.30(d，J＝8.0，2H)，2.96(七重峰，J＝6.4，1H)，1.32(d，J＝6.4，6H)；MS m/z 324.3[MH+]。
实施例V3-[2-(4-异丙基苯基)噻唑-4-基]苯甲酸(化合物编号312)的制备 步骤A将4-异丙基苄腈(2.0g，14mmol)溶解在10mL无水DMF中，并将溶液加热至70-75℃。将硫化氢缓慢鼓入溶液中并加入0.5mL六氢吡啶。1.5小时后，将反应混合物倒入50mL水中，收集形成的沉淀并真空干燥，得到1.5g 4-硫代异丙基苯甲酰胺。
步骤B将4-异丙基硫代苯甲酰胺(331mg，1.85mmol)和3-(2-溴乙酰基)苯甲酸乙酯(500mg，1.85mmol)在5mL无水DMF中的溶液在60-65℃下加热。将产物混合物倒入水中，用EtOAc萃取，用硫酸镁干燥并真空浓缩。通过闪蒸色谱纯化，得到468mg(72％)3-[2-(4-异丙基苯基)噻唑-4-基]苯甲酸甲酯。
步骤C将3-[2-(4-异丙基苯基)噻唑-4-基]苯甲酸甲酯(92mg，0.262mmol)和LiOH(55mg，1.3mmol)在甲醇/水(5mL/1.7mL)中的溶液在室温下搅拌0.5小时。然后将反应混合物加热至55℃并搅拌3小时。然后减压下去除溶剂，并将残留物溶解在10mL水中，用酸中和，用EtOAc萃取，然后用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并浓缩，得到92mg 3-[2-(4-异丙基苯基)噻唑-4-基]苯甲酸熔点193-195℃；1H NMR(CDCl3.)δ8.68(br s，1H)，8.29(d，J＝8.0，2H)，8.08，(d，J＝7.6，1H)，7.98(d,J＝8.0，2H)，7.59-7.55(m，2H)，7.33(d，J＝8.0，2H)，2.98(七重峰，J＝6.8，1H)，1.31(d，J＝6.8，6H)；MS m/z 324.3[MH+]。
实施例W3-[2-(4-异丙基苯基)噻唑-5-基]苯甲酸(化合物编号321)的制备
步骤A将3-[2-(4-异丙基苯甲酰氨基)乙酰基]苯甲酸甲酯(实施例P步骤E)(0.6g，1.8mmol)和1g P2S5在5mL吡啶中的溶液回流6小时并冷却至室温。将反应混合物加入100mL冰水中并用2N NaOH调整pH值至10。用EtOAc(2×50mL)萃取混合物，有机层用水(2×50mL)、盐水(50mL)洗涤，用硫酸钠干燥并蒸发溶剂。将残留物用硅胶柱色谱(石油醚/EtOAc，3/1)纯化，得到3-[2-(4-异丙基苯基)噻唑-5-基]苯甲酸甲酯(0.31g，52.0％)，为浅黄色固体。
步骤B将溶解在10mL水中的LiOH(0.1g)加入3-[2-(4-异丙基苯基)噻唑-5-基]苯甲酸甲酯(0.31g，0.92mmol)在5mL甲醇中的溶液中并将反应物加热回流1小时。通过蒸发除去甲醇，用6N盐酸酸化反应物至pH值为3，然后搅拌15min。将混合物过滤，用水(3×10mL)、石油醚(10mL)洗涤并干燥，得到3-[2-(4-异丙基苯基)噻唑-5-基]苯甲酸(0.28g，94％)，为浅黄色固体熔点237-239℃；1H NMR(DMSO-d6)δ8.37(s，1H)，8.17(br s，1H)，7.99-7.88(m，4H)，7.59(t，J＝7.8，1H)，7.39(d，J＝8.0，2H)，2.95(七重峰，J＝7.2，1H)，1.22(d，J＝7.2，6H)；MSm/z 322.0[MH+]。
实施例X3-[5-(4-氯苯基)异噁唑-3-基]苯甲酸(化合物编号479)的制备 步骤A3-(羟基亚氨基甲基)苯甲酸甲酯的制备将盐酸羟胺(2.40g，33.60mmol)和吡啶(4.0mL，49.5mmol)加入3-甲酰基苯甲酸甲酯(5g，30.5mmol，Acros)在50mL无水乙醇中的溶液中。将混合物加热回流2小时，冷却至室温并真空浓缩。将残留物溶解在500mL Et2O中，用1N盐酸水溶液(2×50mL)、水(2×50mL)分配，干燥(硫酸镁)并真空浓缩，得到5.5g(100％)3-(羟基亚氨基甲基)-苯甲酸甲酯为白色粉末熔点107-108℃；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.94(s，3H)，7.46(t，J＝7.5Hz，1H)，7.80(d，J＝7.8Hz，1H)，8.05(d，J＝7.5Hz，1H)，8.20(m，2H)，8.41(s，1H)；MS m/z 178.23[MH+]。
步骤B3-甲酯基苯基肟酰氯(3-carbomethoxyphenyl hydroximoyl chloride)的制备将NCS(4.097g，36.8mmol)加入3-(羟基亚氨基甲基)苯甲酸甲酯(5.5g，30.5mmol)在7mL冷却至0℃的DMF中，随后通过移液管加入1-2mL来自浓盐酸瓶顶气(headgas)的气体HCl。混合物在15min内产生强烈的放热反应，通过使用冰浴控制该反应。将混合物搅拌90min，溶解在200mL 90％Et2O/THF中，用水(4×50mL)、盐水(50mL)洗涤并干燥(硫酸镁)。将溶液真空浓缩至剩下约5mL溶剂，加入150mL己烷以沉淀产物，1-2小时后过滤浆液，得到4.5g(61％)3-甲酯基苯基肟酰氯，为白色粉末。将该物质保持杂于干燥器中的冷柜中，以保持稳定性MS m/z 214.20[MH+]。
步骤C3-[5-(4-氯苯基)异噁唑-3-基]苯甲酸甲酯的制备将Et3N(1.8mL，12.9mmol)加入3-甲酯基苯基肟酰氯(2.0g，9.4mmol)和1-氯-4-乙炔基苯(2.6g，19.9mmol，Aldrich)在冷却至0℃的50mL二氯甲烷中。将反应混合物经1-2小时暖至室温并搅拌24小时。溶液用200mL二氯甲烷稀释，用1N NaOH水溶液(75mL)、水(75mL)洗涤，干燥(硫酸镁)并真空浓缩至剩下～15mL体积。将溶液用8mL甲醇稀释并加入110mL己烷，在室温下缓慢浓缩溶剂至发生明显沉淀。过滤浆液并干燥固体产物(70℃，在10托下)，得到2.25g(77％)3-[5-(4-氯苯基)异噁唑-3-基]苯甲酸甲酯，为白色粉末。对浓缩母液重复沉淀步骤，得到另外310mg(11％)1H NMR(300MHz，丙酮-d6)δ3.95(s，3H)，7.55(s，1H)，7.62(d，J＝8.5Hz，1.4Hz，2H)，7.70(t，J＝7.8Hz，2H)，7.98(d，J＝8.4Hz，2H)，8.13(dm，J＝7.8Hz，1H)，8.20(dm，J＝7.8Hz，1H)，8.54(s，1H)；MS m/z 314.21，C17H13ClNO3计算值(MH+)314。
步骤D3-[5-(4-氯苯基)异噁唑-3-基]苯甲酸的制备将2.56g(8.2mmol)3-[5-(4-氯苯基)异噁唑-3-基]苯甲酸甲酯在56mL 50％THF/H2O中的溶液加热至65℃，保持3小时并冷却至室温。通过缓慢加入6N盐酸水溶液调整溶液pH至4，并过滤。用水、30％Et3O/己烷洗涤所得固体，并在70℃(10托)下干燥过夜，得到1.81g(74％)3-[5-(4-氯苯基)异噁唑-3-基]苯甲酸，为白色蓬松粉末。从母液的沉淀中另外获得376mg(15％)熔点293-295℃；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.65(m，3H)，7.80(s，1H)，7.94(d，J＝8.8Hz，2H)，8.06(dm，J＝8.0Hz，1H)，8.14(dm，J＝7.9Hz，1H)，8.44(m，1H)；MS m/z 300.19，C16H11ClNO3计算值(MH+)300。
使用与上述基本相同的方法并在步骤4用其它乙炔衍生物代替，得到以下化合物化合物编号463、464、465、466、467、467、468、469、470、471、472、473、474、475、476、477、478、480、481、482、483、484、485、486、487、488、489、490、491、521、522、523、524、525、526、529、530、531、532、533、534、566、567、568、573、574和575。
实施例Y3-[3-(4-氯苯基)异噁唑-5-基]苯甲酸(化合物编号503)的制备 步骤A4-氯苯甲醛肟的制备将盐酸羟胺(1.61g，22.5mmol)和吡啶(2.5mL，30.9mmol)加入4-氯苯甲醛(2.83g，20.15mmol，Aldrich)在17mL无水乙醇中的溶液中。将混合物加热回流3小时，冷却至室温并真空浓缩。将残留物溶解在125mL Et3O中，用1N盐酸水溶液(2×30升)、水(2×30mL)进行分配，干燥(硫酸镁)并真空浓缩，得到2.77g(88.4％)4-氯苯甲醛肟，为白色粉末MSm/z 156，C7H7ClNO计算值(MH+)156。关于制备的参考文献请参见Luca，L.D.；Giacomelli，G.；Riu，A.；J.Org.Chem.2001，66(20)，6823-6825。
步骤B4-氯苯基肟酰氯的制备将NCS(1.20g，8.30mmol)加入4-氯苯甲醛肟(1.22g，7.9mmol)在2mL冷却至0℃的DMF中，随后通过移液管加入1-2mL来自浓盐酸瓶顶气的气体HCl。在15min内混合物发生强烈的放热反应，通过使用冰浴控制该反应。将混合物搅拌120min，溶解在125mL Et2O中，用水(3×35mL部分)、盐水(35mL)洗涤并干燥(硫酸镁)。将溶液真空浓缩，得到1.46g(98％)4-氯苯基肟酰氯，为白色粉末。将该物质保持在于干燥器中的冷柜中，以保持稳定性MS m/z 190.2，C7H6Cl2NO计算值(MH+)190。
由3-碘苯甲酸乙酯两步制备3-乙炔基苯甲酸乙酯将三甲基甲硅烷基乙炔(17mL，119.5mmol)和Et3N(25mL，181.1mmol)加入3-碘苯甲酸乙酯(25g，90.6mmol)在43mL DMF中的溶液中。将混合物在氩气下进行多次脱气，加入CuI(175mg，0.92mmol)，然后加入1.04g四(三苯基膦)钯催化剂。将反应混合物加热至50℃，保持24小时，冷却至室温并用400mL 50％Et2O/己烷稀释。将混合物用水(4×75mL部分)分配，干燥(硫酸镁)并浓缩，得到23.29g棕色油状物。将残留物用200g SiO2进行色谱分离(用30％二氯甲烷/己烷洗脱)，得到22.2g(99％)3-三甲基硅烷基乙炔基苯甲酸乙酯，为浅黄色油状物，将其直接用于下一步反应MS m/z 247.12，C14H19SiO2计算值(MH+)247。
将该物质溶解在250mL乙醇中，加入1.25g(9.0mmol)碳酸钾催化剂，将混合物在室温下搅拌5小时并真空浓缩。将残留物用200g SiO2进行色谱分离(用40％二氯甲烷/己烷洗脱)，得到15.7g(100％)3-乙炔基苯甲酸乙酯，为橙色固体(纯度为90％，LC/MS)。将该物质用最低量己烷重结晶，得到12.2g(78％，共2步)，为浅黄色固体熔点36-38℃；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.38(t，J＝7.2Hz，3H)，3.12(s，1H)，4.36(q，J＝7.2Hz，2H)，7.40(t，J＝7.8Hz，2H)，7.63(dt，J＝7.8Hz，1.5Hz，1H)，8.14(t，J＝1.5Hz，1H)；MS m/z 174.98，C11H11O2计算值(MH+)175。
步骤C3-[3-(4-氯苯基)异噁唑-5-基]苯甲酸乙酯的制备将Et3N(0.60g，3.15mmol)加入4-氯苯基肟酰氯(0.60g，3.15mmol)和3-乙炔基苯甲酸乙酯在25mL二氯甲烷中的溶液中，并将混合物搅拌48小时。将溶液用60mL二氯甲烷稀释，用1N NaOH水溶液(30mL)、水(30mL)洗涤，干燥(硫酸镁)并真空干燥。将固体残留物用最低量乙醚/己烷重结晶，得到700mg(68％)3-[3-(4-氯苯基)异噁唑-5-基]苯甲酸乙酯，为白色粉末1H NMR(300MHz，丙酮-d6)δ1.41(t，J＝7.2Hz，3H)，4.41(q，J＝7.2Hz，2H)，7.57(m，3H)，7.72(t，J＝7.8Hz，1H)，7.70(dt，J＝8.4，1.8Hz，2H)，8.15(tt，J＝8.5，1.8Hz，2H)，8.55(t，J＝1.5Hz，1H)；MS m/z 314.21，C18H15ClNO3计算值(MH+)328。
步骤D3-[3-(4-氯苯基)异噁唑-5-基]苯甲酸的制备将678mg(2.1mmol)3-[3-(4-氯苯基)异噁唑-5-基]苯甲酸乙酯在14mL 50％THF/水中的溶液加热至60℃，保持5小时并冷却至室温。通过缓慢加入6N盐酸水溶液调整溶液pH值至4并过滤。所得固体用水、己烷洗涤并在70℃(10托)下干燥过夜，得到594mg(96％)3-[3-(4-氯苯基)异噁唑-5-基]苯甲酸，为白色蓬松粉末熔点265-266℃；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.61(dm，J＝8.7Hz，2H)，7.70(t，J＝7.8Hz，1H)，7.82(s，1H)，7.95(dm，J＝8.7Hz，2H)，8.06(dm，J＝8.0Hz，1H)，8.13(dm，J＝8.0Hz，1H)，8.41(m，1H)；MS m/z 300.16，C16H11ClNO3计算值(MH+)300。
使用基本上与上述相同的方法并在步骤A中用其它苯甲醛衍生物代替，得到以下化合物化合物编号492、493、494、495、496、497、498、499、500、501、502、503、504、505、514、515、516、517、518、519、520、535、536、537、538、539、540和541。
实施例Z3-[2-(4-异丙基苯基)-3H-咪唑-4-基]苯甲酸(化合物编号311)的制备 步骤A将4-异丙基苄脒(356mg，2.20mmol)和514mg(2.00mmol)3-(2-溴乙酰基)苯甲酸甲酯在20mL三氯甲烷中加热回流8小时，冷却至室温并蒸发溶剂。将残留物在碳酸钾水溶液和EtOAc之间分配，分离，有机相用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并蒸发。将残留物用柱色谱纯化，得到210mg(33％)3-[2-(4-异丙基苯基)-3H-咪唑-4-基]苯甲酸甲酯，为黄色固体。
步骤B将120mg LiOH.H2O加入190mg(0.60mmol)3-[2-(4-异丙基苯基)-3H-咪唑-4-基]苯甲酸甲酯在6mL甲醇/水(5/1)中的悬浮液中，并将反应物加热回流1小时，冷却至室温并用乙酸中和。过滤沉淀，用水洗涤并风干。用丙酮将所得白色固体重结晶，得到140mg(76％)3-[2-(4-异丙基苯基)-3H-咪唑-4-基]苯甲酸，为白色固体1H NMR(DMSO-d6)δ8.42(br s，1H)，8.06(d，J＝7.6，1H)，7.91(d，J＝7.6，2H)，7.83(br s，1H)，7.75(d，J＝7.2，1H)，7.47(t，J＝7.2，1H)，7.32(d，J＝8.0，2H)，2.91(七重峰，J＝6.6，1H)，1.22(d，J＝6.6，6H)；MS m/z 307.2[MH+]。
实施例AA3-[5-(4-异丙基苯基)-1H-咪唑-2-基]苯甲酸(化合物编号277)的制备 步骤A将1.05g(5.47mmol)3-甲脒基苯甲酸乙酯加入于50mL三氯甲烷中的1.20g(4.97mmol)2-溴-1-(4-异丙基苯基)乙酮中，将反应物加热回流3小时，然后冷却至室温，并用碳酸钾水溶液碱化。分离有机层并用碳酸钾干燥，过滤并蒸发。将残留物用硅胶闪蒸柱色谱纯化，得到0.85g(51％)3-[5-(4-异丙基苯基)-1H-咪唑-2-基]苯甲酸甲酯，为白色固体。
步骤B将103g LiOH.H2O加入480mg(1.47mmol)3-[5-(4-异丙基苯基)-1H-咪唑-2-基]苯甲酸甲酯在14mL甲醇/水(5/1)中的悬浮液中，并将反应物加热回流1小时，冷却至室温并用乙酸中和。收集沉淀，用水洗涤并风干。用丙酮将所得3-[5-(4-异丙基苯基)-1H-咪唑-2-基]苯甲酸重结晶，得到300mg(63％)，为白色固体熔点296-298℃；1H NMR(DMSO-d6)δ8.56(br s，1H)，8.23(d，J＝8.0，1H)，7.87(d，J＝8.0，2H)，7.56(d，J＝8.0，2H)，7.31(t，J＝8.0，1H)，7.23(br s，1H)，7.10(d，J＝7.6，2H)，2.93(七重峰，J＝6.8，1H)，1.11(d，J＝6.8，6H)。
实施例BB2-(3-羧基苯基)-4-(4-异丙基苯基)呋喃-3-羧酸(化合物编号314)的制备
步骤A将680mg(2.90mmol)3-(2-甲氧羰基乙酰基)苯甲酸甲酯、30mL丙酮、4.0g碳酸钾和780mg(3.24mmol)2-溴-1-(4-异丙基苯基)乙酮的混合物加热回流30min。然后减压下除去溶剂，将残留物在盐酸水溶液和EtOAc之间分配。有机相用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并蒸发。将残留物通过柱色谱纯化，得到660mg(57％)3-[4-(4-异丙基苯基)-2-甲氧羰基-4-氧代-丁酰基]苯甲酸甲酯，为黄色油状物。
步骤B将15mL 6N盐酸加入480mg(1.21mmol)3-[4-(4-异丙基苯基)-2-甲氧羰基-4-氧代-丁酰基]苯甲酸甲酯在10mL甲醇中，将反应物加热回流5小时。将反应混合物冷却至室温并用EtOAc萃取。用水、盐水洗涤合并的有机相，用硫酸钠干燥，过滤，然后蒸发溶剂。将残留物用柱色谱纯化，得到260mg(57％)5-(4-异丙基苯基)-2-(3-甲氧羰基苯基呋喃-3-羧酸甲酯，为黄色油状物。
步骤C将160mg LiOH.H2O加入于12mL 5∶1甲醇/水中的260mg(0.69mmol)5-(4-异丙基苯基)-2-(3-甲氧羰基苯基)-呋喃-3-羧酸甲酯中，并将反应物加热回流1小时，冷却至室温并用乙酸中和。收集沉淀，用水洗涤并干燥。用丙酮将粗产物重结晶，得到140mg(58％)2-(3-羧基苯基)-5-(4-异丙基苯基)呋喃-3-羧酸，为黄色固体熔点236-239℃；1H NMR(DMSO-d6)δ13.0(br s，1H)，8.60(br s，1H)，8.28(d，J＝7.6，1H)，7.98(d，J＝7.6，1H)，7.74(d，J＝7.6，2H)，7.74(t，J＝8.0，1H)，7.33(d，J＝8.0，2H)，7.25(s，1H)，2.91(七重峰，J＝6.6，1H)，1.21(d，J＝6.6，6H)；MS m/z 349.0[MH-]。
实施例CC3-[5-(4-异丙基苯基)呋喃-2-基]苯甲酸(化合物编号322)的制备
步骤A将3-(3-甲氧羰基苯基)-3-氧代-丙酸乙酯(1.8g，7.2mmol)和碳酸钾粉末(4g，29mmol)和4-(溴乙酰基)异丙基苯(1.8g，7.5mmol)在无水丙酮中的悬浮液回流2小时。蒸发除去溶剂，将残留物加入50mL冰水中，用6N盐酸酸化至pH值为4，并用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。用30mL水和30mL盐水洗涤有机相，用无水硫酸钠干燥，蒸发，并用硅胶柱色谱(石油醚/乙酸乙酯，6/1)纯化，得到3-[2-乙氧羰基-4-(4-异丙基苯基)-4-氧代丁酰基]苯甲酸甲酯(1.5g，51％)，为浅黄色油状物。
步骤B将3-[2-乙氧羰基-4-(4-异丙基苯基)-4-氧代丁酰基]苯甲酸甲酯(1.5g，3.7mmol)、0.29g氯化钠和0.15mL水在20mL DMSO中的混合物加热至140-150℃，并搅拌3.5小时。将混合物冷却至室温并加入50mL冰水中。然后用乙醚(3×50mL)萃取混合物并用水(2×50mL)、盐水(50mL)洗涤合并的有机层，然后用硫酸钠干燥并蒸发。将残留物用硅胶柱色谱纯化，得到3-[4-(4-异丙基苯基)-4-氧代-丁酰基]苯甲酸甲酯(0.7g)，为浅黄色固体。
步骤C将3-[4-(4-异丙基苯基)-4-氧代-丁酰基]苯甲酸甲酯(0.7g)和催化量的TsOH在10mL无水甲苯中的溶液回流过夜。将反应混合物用100mL EtOAc稀释并用水(2×50mL)、盐水(50mL)洗涤，然后用硫酸钠干燥并蒸发。将残留物用硅胶柱色谱纯化，得到3-[5-(4-异丙基苯基)呋喃-2-基]苯甲酸甲酯(0.3g)，为浅黄色油状物。
步骤D将溶解在15mL水中的LiOH(0.2g)加入3-[5-(4-异丙基苯基)呋喃-2-基]苯甲酸甲酯(0.3g)在5mL THF中的溶液中，并将反应物搅拌2小时。将反应混合物冷却至室温并用乙醚(2×30mL)萃取。有机层用水(2×30mL)、盐水(30mL)洗涤，硫酸钠干燥并蒸发。将残留物用制备HPLC纯化，得到3-[5-(4-异丙基苯基)呋喃-2-基]苯甲酸(7mg，0.62％，3步)，为白色固体，熔点172-176℃；1H NMR(CDCl3)δ8.46(s，1H)，7.99(t，J＝7.8，2H)，7.70(d，J＝8，2H)，7.53(t，J＝7.8，1H)，7.29，J＝8.0，2H)，6.84(d，J＝3.6，1H)，6.71(d，J＝3.6，1H)，2.95(七重峰，6.8，1H)，1.29(d，J＝6.8，6H)。
实施例DD3-[5-(4-异丙基苯基)-[1，2，4]噻二唑-5-基]苯甲酸(化合物编号325)的制备
步骤A将间苯二甲氨酸甲酯(1.0g，5.6mmol)和三氯甲基亚磺酰氯(1.039g，5.6mmol，0.6mL)在10mL无水甲苯中的溶液在氮气下加热回流过夜。将混合物冷却至室温并加入水终止反应物反应。将残留物在水和EtOAc之间分配。有机层用盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤并蒸发。通过闪蒸色谱纯化残留物，得到274mg(21％)3-(2-氧代-[1，3，4]-噁噻唑-5-基)苯甲酸甲酯。
步骤B将3-(2-氧代-[1，3，4]-噁噻唑-5-基)苯甲酸甲酯(260mg，1.1mmol)分3等份以5min的间隔加入190℃的4-异丙基苄腈(795mg，5.5mmol)中。将反应物再搅拌30min。将混合物冷却至室温，并将残留物在水和EtOAc之间分配。有机层用盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤并蒸发。通过闪蒸色谱纯化残留物，得到11mg(3％)3-[5-(4-异丙基苯基)-[1，2，4]噻二唑-3-基]苯甲酸甲酯。
步骤C将7mg LiOH.H2O加入11mg上述酯在4mL 3/1甲醇/水中的溶液中。将混合物在40-50℃下搅拌过夜，冷却至室温，并用3N盐酸中和。将混合物用EtOAc萃取，用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。除去溶剂后，得到8mg(79％)3-[5-(4-异丙基苯基)-[1，2，4]噻二唑-3-基]苯甲酸熔点165-167℃；1H NMR(CDCl3)δ8.75(br s，1H)，8.33-8.27(m，4H)，7.67(t，J＝7.8，1H)，7.37(d，J＝7.6，2H)，3.00(七重峰，J＝6.8，1H)，1.31(d，J＝6.8，6H)；MS m/z 325.1[MH+]。
实施例EE3-[3-(4-异丙基苯基)-[1，2，4]噻二唑-5-基]苯甲酸(化合物编号326)的制备 步骤A将4-异丙苯甲酰胺(1.0g，6.1mmol)和三氯甲基亚磺酰氯(1.14g，6.1mmol)在10mL无水甲苯中的溶液加热回流过夜。将混合物冷却至室温并加入水终止反应物反应。将残留物在水和EtOAc之间分配，有机层用盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤并蒸发。通过闪蒸色谱纯化残留物，得到250mg(18％)5-(4-异丙基苯基)-[1，3，4]噁噻唑-2-酮。
步骤B将5-(4-异丙基苯基)-[1，3，4]噁噻唑-2-酮(250mg，1.1mmol)分3等份以5min的间隔加入190℃的3-氰基苯甲酸乙酯(2.77g，15.8mmol)中。将反应物再搅拌30min。将混合物冷却至室温，并将残留物在水和EtOAc之间分配。有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并蒸发。通过闪蒸色谱纯化残留物，得到12mg(3％)3-[3-(4-异丙基苯基)-[1，2，4]噻二唑-5-基]苯甲酸乙酯。
步骤C将7mg LiOH.H2O加入12mg上述酯在4mL 3/1甲醇/水中的溶液中。将混合物在40-50℃下搅拌过夜，冷却至室温，并用3N盐酸中和。将混合物用EtOAc萃取，用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。除去溶剂后，得到6mg(54％)3-[3-(4-异丙基苯基)-[1，2，4]噻二唑-5-基]苯甲酸熔点166-168℃；1H NMR(CDCl3)δ8.74(br s，1H)，8.33-8.25(m，5H)，7.67(t，J＝8.0，1H)，7.37(d，J＝8.0，2H)，3.00(七重峰，J＝6.8，1H)，1.31(d，J＝6.8，6H)；MS m/z 325.1[MH+]。
实施例FF3-[4-(4-异丙基苯基)-噻吩-2-基]苯甲酸(化合物编号327)的制备 步骤A将568mg碳酸钠加入2，4-二溴噻吩(433mg，1.8mmol)和3-(乙氧羰基)苯基硼酸(347mg，1.8mmol)在乙醇/甲苯/水(10mL/5mL/3mL)中的溶液中。脱气两次后，在氮气氛下加入催化量的四(三苯基膦)钯。将反应混合物在80℃下搅拌过夜。将混合物冷却至室温，过滤并蒸发。将残留物在水和EtOAc之间分配。然后有机层用盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤并蒸发。通过闪蒸色谱纯化残留物，得到350mg(63％)3-(4-溴噻吩-2-基)苯甲酸乙酯。
步骤B将358mg碳酸钠加入3-(4-溴噻吩-2-基)苯甲酸乙酯(350mg，1.1mmol)和4-异丙基苯基硼酸(187mg，1.1mmol)在乙醇/甲苯/水(10mL/5mL/3mL)中的溶液中。脱气两次后，在氮气氛下加入催化量的四(三苯基膦)钯。将反应混合物在80℃下搅拌直至TLC分析表明反应完成。将混合物冷却至室温，过滤并蒸发。将残留物在水和EtOAc之间分配。然后将有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并蒸发。通过闪蒸色谱纯化残留物，得到150mg(38％)3-[4-(4-异丙基苯基)噻吩-2-基)苯甲酸乙酯。
步骤C将30mg LiOH.H2O加入50mg 3-[4-(4-异丙基苯基)噻吩-2-基]苯甲酸乙酯在4mL 3/1甲醇/水中的溶液中。将混合物在40-50℃下搅拌直至TLC分析表明反应完成。将混合物冷却至室温，并用3N盐酸中和。将混合物用EtOAc萃取，用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。除去溶剂后，得到30mg(65％)3-[4-(4-异丙基苯基)噻吩-2-基]苯甲酸熔点220-222℃；1H NMR(CDCl3)δ8.35(br s，1H)，8.02(d，J＝8.0，1H)，7.83(d，J＝8.0，1H)，7.60-7.57(m，3H)，7.52(t，J＝8.0，1H)，7.45(s，1H)，7.29(s，1H)，2.95(七重峰，J＝6.8，1H)，1.28(d，J＝6.8，6H)；MSm/z 323.1[MH+]。
实施例GG3-[5-(4-异丙基苯基)噻吩-3-基]苯甲酸(化合物编号348)的制备 步骤A将657mg碳酸钠加入2，4-二溴噻吩(500mg，2.1mmol)和4-异丙基苯基硼酸(339mg，2.1mmol)在乙醇/甲苯/水(10mL/5mL/3mL)中的溶液中。脱气两次后，在氮气氛下加入催化量的四(三苯基膦)钯。将反应混合物在80℃下搅拌过夜。将混合物冷却至室温，过滤并蒸发。将残留物在水和EtOAc之间分配。有机层用盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤并蒸发。通过闪蒸色谱纯化残留物，得到207mg(36％)4-溴-2-(4-异丙基苯基)噻吩。
步骤B将234mg碳酸钠加入4-溴-(4-异丙基苯基)噻吩(207mg，0.7mmol)和3-(乙氧酰基)苯基硼酸(143mg，0.7mmol)在乙醇/甲苯/水(10mL/5mL/3mL)中的溶液中。脱气两次后，在氮气氛下加入催化量的四(三苯基膦)钯。将反应混合物在80℃下搅拌直至TLC分析表明反应完成。将混合物冷却至室温，过滤并蒸发。将残留物在水和EtOAc之间分配。有机层用盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤并蒸发。通过闪蒸色谱纯化残留物，得到180mg(70％)3-[5-(4-异丙基苯基)噻吩-3-基]苯甲酸乙酯。
步骤C将65mg LiOH.H2O加入100mg 3-[5-(4-异丙基苯基)噻吩-3-基]苯甲酸乙酯在4mL 3/1甲醇/水中的溶液中。将混合物在40-50℃下搅拌过夜，冷却至室温，并用3N盐酸中和。将混合物用EtOAc萃取，用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。除去溶剂后，得到80mg(87％)3-[5-(4-异丙基苯基)噻吩-3-基]苯甲酸熔点208-209℃；1H NMR(CDCl3)δ8.37(br s，1H)，8.01(d，J＝7.2，1H)，7.87(d，J＝7.6，1H)，7.66(d，J＝1.6，1H)，7.56(d，J＝8.0，2H)，7.51(t，J＝8.0，1H)，7.40(d，J＝1.6，1H)，7.29(d，J＝8.0，2H)，2.95(七重峰，J＝7.2，1H)，1.28(d，J＝7.2，6H)；MSm/z(m/z)323.2[MH+]。
实施例HH3-[5-(4-异丙基苯基)噻吩-2-基]苯甲酸(化合物编号400)的制备 步骤A将于50mL甲苯中的溴(23g，142mmol)尽可能快速地加入0℃的噻吩(5.94g，71mmol)在等体积甲苯中的搅拌溶液中，并继续搅拌0.5小时。然后加入5g氢氧化钠。将混合物在水和EtOAc之间分配，用硫酸钠干燥并蒸发。通过蒸馏对残留物2，5-二溴噻吩进行纯化。
步骤B将1.32g碳酸钠加入1，5-二溴噻吩(1.0g，4.0mmol)和3-(乙氧羰基)苯基硼酸(793mg，4.0mmol)在乙醇/甲苯/水(10mL/5mL/3mL)中的溶液中。脱气两次后，在氮气氛下加入催化量的四(三苯基膦)钯。将反应混合物在80℃下搅拌过夜。将混合物冷却至室温，过滤并蒸发。将残留物在水和EtOAc之间分配。有机层用盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤并蒸发。通过闪蒸色谱纯化残留物，得到456mg(36％)3-(5-溴噻吩-2-基)苯甲酸乙酯。
步骤C将204mg碳酸钠加入3-(5-溴噻吩-2-基)苯甲酸乙酯(200mg，0.6mmol)和4-异丙基苯基硼酸(105mg，0.6mmol)在乙醇/甲苯/水(10mL/5mL/3mL)的溶液中。脱气两次后，在氮气氛下加入催化量的四(三苯基膦)钯。将反应混合物在80℃下搅拌直至TLC分析表明反应完成。将混合物冷却至室温，过滤并蒸发。将残留物在水和EtOAc之间分配。有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并蒸发。通过闪蒸色谱纯化残留物，得到154mg(69％)3-[5-(4-异丙基苯基)噻吩--2-基)苯甲酸乙酯。
步骤D将46mg LiOH.H2O加入100mg 3-[5-(4-异丙基苯基)噻吩-2-基]苯甲酸乙酯在4mL 3/1甲醇/水中的溶液中。将混合物在40-50℃下搅拌过夜，冷却至室温，并用3N盐酸中和。将混合物用EtOAc萃取，用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。除去溶剂后，得到78mg(85％)3-[5-(4-异丙基苯基)噻吩-2-基]苯甲酸熔点233-235℃；1H NMR(CDCl3)δ8.16(s，1H)，7.80(d，J＝7.8，1H)，7.65(d，J＝8.1，1H)，7.42(d，J＝8.1，2H)，7.32(t，J＝7.8，1H)，7.22(d，J＝3.6，1H)，7.13(d，J＝3.6，1H)，7.11(d，J＝8.4，2H)，2.80(七重峰，6.8，1H)，1.14(d，J＝6.9，6H)；MS m/z 321.5[MH-]。
实施例II3-[5-(4-甲氧基-苯基)-2H-[1，2，4]三唑-3-基]-苯甲酸(化合物编号424)的制备 步骤A间甲氧羰基亚氨基苯甲酸甲酯盐酸盐(m-Methoxycarbonyimidoylbenzoic acid methyl ester hydrochloride)将乙酰氯(12mL)在0℃下逐滴加入3-氰基苯甲酸甲酯(0.65g，4.03mmol)在甲醇(15mL)中的溶液中。加入后，将反应混合物在0℃至室温下搅拌6小时。除去溶剂后得到白色固体，将其用乙醚洗涤纯化，并直接用于下一步。
步骤B3-(5-(4-甲氧基苯基-2H-[1，2，4]三唑-3-基)苯甲酸甲酯将甲醇钠(0.5N，在甲醇中)(8.5mL，4.25mmol)在无水乙醇(30mL)中的溶液在室温下加入间甲氧羰基亚氨基苯甲酸甲酯盐酸盐在乙醇(10mL)中的溶液中。在室温下将乳状浆液搅拌30min，然后过滤。将滤液浓缩至1/4体积，向其中加入4-甲氧基苯酰肼(0.55g，3.31mmol)和二噁烷(10mL)。将所得混合物加热回流15小时。加入1N盐酸得到白色固体(0.66g，收率71.0％)，通过过滤收集，并用水，然后水/乙醇(1/5)洗涤。用LC-MS测定所得化合物的纯度＞90％；MS m/z 310[MH+]。
步骤C3-(5-4-甲氧基-苯基-2H-[1，2，4]三唑-3-基)苯甲酸将3-(5-(4-甲氧基苯基-2H-[1，2，4]三唑-3-基)苯甲酸甲酯(0.32g，1.04mmol)在1N NaOH(3.0mL，3.00mmol)/THF(1∶1)中的混合物在回流下搅拌6小时，直至通过TLC测定原料全部消耗。真空除去THF。加入1N盐酸沉淀出白色固体。所需产物(0.26g，收率85.2％)通过过滤收集，并依次用水、乙醚洗涤熔点287-289℃；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ13.20(1H，s)，8.64(1H，s)，8.27(1H，dd，J＝7.7，0.8Hz)，8.01(3H，m)，7.60(1H，t，J＝1.2Hz)，7.61(2H，m)，2.49(3H，s)；MS m/z 296[MH+]。
本发明某些优选化合物的熔点和质谱数据显示在下表1中。






















实施例2无义抑制活性基于荧光素酶介导的化学发光的细胞基翻译的功能测定(2003年7月23日提交的国际申请PCT/US2003/023185，该文献以其全部内容引入作为参考)可以定量评价无义抑制的水平。在含有胎牛血清(FBS)的培养基中培养人胚胎肾细胞(293细胞)。这些细胞可以用在氨基酸第190位含有提前终止密码子的荧光素酶基因稳定转染。代替荧光素酶基因在该位点正常存在的苏氨酸密码子(ACA)，通过定点诱变引入3个可 能的无义密码子(TAA、TAG或TGA)之一核在所述无义密码子之后的对此重要的下游+1位的4个可能的核苷酸(腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶或鸟嘌呤)之一。因此，在含有提前终止密码子的荧光素酶基因中的氨基酸190为TAA、TAG或TGA。对于每一个终止密码子，含有提前终止密码子的荧光素酶基因的氨基酸190之后的核苷酸可以被腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶或鸟嘌呤(A、T、C、G)之一代替，以使得这些突变不改变荧光酶基因的读框。在图1中显示了这些构建体的示意图。
由如上所述的本发明的细胞基荧光素酶报告子测定法获得的无义抑制活性显示在下表(表2)中。人胚肾293细胞用荧光素酶报告子构建体稳定转染，该构建体在190位含有UGA无义突变，并在其后接着符合读框的腺苷酸核苷酸。
表2中的活性测量由含有UGA提前终止密码子的本发明构建体的细胞基荧光素酶报告子测定法测定。使用已知允许提前终止密码子连读的氨基糖苷抗生素庆大霉素作为内标。活性测量基于在细胞内产生给定蛋白所需的化合物最小浓度与在该浓度下细胞产生的蛋白的量的定性比。发现其具有非常高效价或非常高蛋白质合成效能以及具有非常高效价和非常高蛋白质合成效能的化合物归类为“*****”。发现其具有中等效价和/或蛋白质合成效能的化合物归类为“****”、“***”或“**”。类似地，发现其具有较低效价和/或蛋白质合成效能的化合物归类为“*”。
本发明的某些优选化合物的活性如下表所示























对于在190位具有UAG无义突变且其后接着符合读框的腺苷酸(UAGA)的构建体；以及在190位具有UAA无义突变且其后接着符合读框的腺苷酸(UAAA)的构建体，如上所述测定中的无义抑制活性显示在下表3中。“POS WB”指当本发明的化合物用于本发明的测定中时在蛋白质印迹上产生阳性信号。“ND”指没有检测结果。



实施例3连读测定基于荧光素酶介导的化学发光的细胞基翻译的功能测定(于2003年7月23日提交的国际申请PCT/US2003/023185，该文献以其全部内容引入作为参考)可以评价mRNA中正常终止密码子的翻译连读。在含有胎牛血清(FBS)的培养基中培养人胚胎肾细胞(293细胞)。这些细胞用在氨基酸190位含有提前终止密码子的荧光素酶基因稳定转染。代替荧光素酶基因在该位点正常存在的苏氨酸密码子(ACA)，通过定点诱变引入3个可能的无义密码子(TAA、TAG或TGA)之一和在所述无义密码子之后的对此重要的下游+1位的4个可能的核苷酸(腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶或鸟嘌呤)之一。因此，在含有提前终止密码子的荧光素酶基因中的氨基酸190为TAA、TAG或TGA。对于每一个终止密码子，含有提前终止密码子的荧光素酶基因的氨基酸190之后的核苷酸被腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶或鸟嘌呤(A、T、C、G)之一代替，以使得这些突变不改变荧光酶基因的读框。在图1中显示了这些构建体的示意图。
本发明的另一测定可以评价促进无义突变抑制的化合物。将图1中以上描述的荧光素酶构建体工程化以在荧光素酶蛋白的N-末端含有两个表位标签。基于荧光素酶蛋白的产生，这些构建体定性地评价翻译连读的水平。提前终止密码子的抑制而产生的全长荧光素酶蛋白的存在通过被抑制的荧光素酶蛋白的免疫沉淀(使用针对His标签的抗体)以及之后的使用针对第二表位(XpressTM表位；Invitrogen；Carlsbad，California)的抗体的蛋白质印迹来测定。这些构建体在图2中显示。
具有图2的构建体的细胞当用本发明的化合物处理时，显示全长蛋白产生的增加。在处理20小时后，收集含有图2的构建体的细胞，并使用识别His表位的抗体免疫沉淀荧光素酶蛋白。免疫沉淀后，使用抗XpressTM表位(Invitrogen；Carlsbad，California)的抗体进行蛋白质印迹以检测截短的荧光素酶(当没有无义抑制发生时产生)，并检测全长蛋白(由无义密码子抑制产生)。用被测化合物处理的细胞产生全长蛋白，并且不产生连读蛋白(参见图3)。如果正常终止密码子的抑制发生时，产生连读蛋白。本发明的化合物抑制提前终止密码子即无义突变，但并不抑制荧光素酶mRNA中的正常终止密码子。
本发明的化合物选择性地作用于哺乳动物中的提前终止密码子，而不作用于正常终止密码子。
通过管饲(口服)给予大鼠和犬高剂量的化合物(达1800mg/kg)，每日一次，共14天。治疗之后，收集组织，制备裂解物，并进行蛋白质印迹。对用于评价正常终止密码子连读的蛋白的选择主要基于相应的在3’-UTR中具有第二终止密码子、正常终止密码子符合读框的mRNA。在该两个终止密码子之间，每个所选的蛋白都具有核苷酸插入序列，该序列在第一个终止密码子的核糖体连读事件中为蛋白的延伸编码。如果化合物具有诱导非特异的核糖体连读能力，则使用蛋白质印迹将延伸的蛋白与野生型蛋白区分开。收集大鼠的组织，并分析波形蛋白mRNA中正常终止密码子(UAA)的抑制。看起来没有抑制的证据。收集用本发明的化合物治疗的犬的组织。没有证据表明具有UAG终止密码子的β-肌动蛋白的正常终止密码子受抑制。
在健康人志愿者中，口服给予单次剂量(200mg/kg)的本发明的化合物。收集来自女性和男性受试者的血液样品，制备血浆，并用血浆样品进行蛋白质印迹。使用具有UGA终止密码子的C-反应性蛋白(CRP)检测用本发明的化合物治疗的受试者是否导致了CRP mRNA中正常终止密码子的抑制。荧光素酶测定结合提前终止测定证明，提前终止密码子而不是正常终止密码子的选择性抑制。
实施例4动物模型动物模型系统还可以用于证明本发明的化合物的安全和有效。使用用于目标疾病、病症或综合症的动物模型测试本发明的化合物的生物学活性。这些包括工程化以含有与功能性读出系统偶联的靶RNA元件的动物，例如转基因小鼠。
囊性纤维化囊性纤维化的动物模型实例包括但不限于cftr(-/-)小鼠(参见例如Freedman等，2001，Gastroenterology 121(4)950-7)、cftr(tm1HGU/tm1HGU)小鼠(参见例如Bernhard等，2001，Exp Lung Res 27(4)349-66)、伴有缺陷的cAMP介导的Cl(-)转导的囊性纤维化跨膜转导调节因子缺陷小鼠(参见例如Stotland等，2000，Pediatr Pulmonol 30(5)413-24)以及C57BL/6-Cftr(m1UNC)/Cftr(m1UNC)敲除小鼠(参见例如Stotland等，2000，Pediatr Pulmonol 30(5)413-24)。
肌营养不良肌营养不良的动物模型实例包括但不限于小鼠、仓鼠、猫、犬及秀丽线虫(C.elegans)。肌营养不良的小鼠模型实例包括但不限于dy-/-小鼠(参见例如Connolly等，2002，J Neuroimmunol 127(1-2)80-7)、伴有肌炎的肌营养不良(mdm)小鼠突变(参见例如Garvey等，2002，Genomics 79(2)146-9)、mdx小鼠(参见例如Nakamura等，2001，Neuromuscul Disord 11(3)251-9)、utrophin-抗肌萎缩蛋白敲除(dko)小鼠(参见例如Nakamura等，2001，Neuromuscul Disord 11(3)251-9)、dy/dy小鼠(参见例如Dubowitz等，2000，Neuromuscul Disord 10(4-5)292-8)、mdx(Cv3)小鼠模型(参见例如Pillers等，1999，Laryngoscope 109(8)1310-2)以及肌强直ADR-MDX突变小鼠(参见例如Kramer等，1998，Neuromuscul Disord8(8)542-50)。肌营养不良的仓鼠模型实例包括但不限于肌聚糖-缺陷仓鼠(参见例如Nakamura等，2001，Am J Physiol Cell Physiol 281(2)C690-9)以及BIO14.6营养不良仓鼠(参见例如Schlenker & Burbach，1991，J Appl Physiol71(5)1655-62)。肌营养不良的猫模型实例包括但不限于肥大性猫肌营养不良模型(参见例如Gaschen & Burgunder，2001，Acta Neuropathol(Berl)101(6)591-600)。肌营养不良的犬模型实例包括但不限于金毛猎犬肌营养不良(参见例如Fletcher等，2001，Neuromuscul Disord 11(3)239-43)和犬X-连锁肌营养不良(参见例如Valentine等，1992，Am J Med Genet 42(3)352-6)。肌营养不良的秀丽线虫模型在Chamberlain & Benian，2000，Curr Biol 10(21)R795-7以及Culette & Sattelle，2000，Hum Mol Genet 9(6)869-77中描述。
家族性高胆固醇血症家族性高胆固醇血症的动物模型实例包括但不限于缺乏功能性低密度脂蛋白受体报告基因的小鼠(参见例如Aji等，1997，Circulation 95(2)430-7、Yoshida大鼠(参见例如Fantappie等，1992，Life Sci 50(24)1913-24)、JCRLA-cp大鼠(参见例如Richardson等，1998，Atherosclerosis 138(1)135-46)、猪(参见例如Hasler-Rapacz等，1998，Am J Med Genet 76(5)379-86)以及Watanabe遗传性高脂血症兔(参见例如Tsutsumi等，2000，Arzneimittelforschung 50(2)118-21；Harsch等，1998，Br J Pharmacol 124(2)227-82；和Tanaka等，1995，Atherosclerosis 114(1)73-82)。
人癌症人癌症动物模型实例一般包括但不限于伙伴动物的自发性肿瘤(参见例如Vail & MacEwen，2000，Cancer Invest 18(8)781-92)。肺癌的动物模型实例包括但不限于Zhang & Roth(1994，In Vivo 8(5)755-69)描述的肺癌动物模型以及干扰p53功能的转基因小鼠(参见例如Morris等，1998，J La State Med Soc 150(4)179-85)。乳癌的动物模型实例包括但不限于过度表达细胞周期蛋白D1的转基因小鼠(参见例如Hosokawa等，2001，Transgenic Res 10(5)471-8)。结肠癌的动物模型实例包括但不限于TCRβ和p53双敲除小鼠(参见例如Kado等，2001，Cancer Res 61(6)2395-8)。胰腺癌的动物模型实例包括但不限于转移性Panc02鼠胰腺腺癌模型(参见例如Wang等，2001，Int J Pancreatol 29(1)37-46)以及产生皮下胰腺肿瘤的裸鼠(参见例如Ghaneh等，2001，Gene Ther 8(3)199-208)。非何杰金氏淋巴瘤的动物模型实例包括但不限于重度联合免疫缺陷症(″SCID″)小鼠(参见例如Bryant等，2000，Lab Invest 80(4)553-73)以及IgHmu-HOX11转基因小鼠(参见例如Hough等，1998，Proc Natl Acad Sci USA 95(23)13853-8)。食管癌的动物模型实例包括但不限于人乳头瘤病毒16 E7癌基因型转基因小鼠(参见例如Herber等，1996，J Virol 70(3)1873-81)。结肠直肠癌的动物模型实例包括但不限于Ape小鼠模型(参见例如Fodde & Smits，2001，Trends Mol Med7(8)369-73和Kuraguchi等，2000，Oncogene 19(50)5755-63)。神经纤维瘤的动物模型实例包括但不限于突变型NF1小鼠(参见例如Cichowski等，1996，SeminCancer Biol 7(5)291-8)。视网膜母细胞瘤的动物模型实例包括但不限于在视网膜内表达猴病毒40T抗原的转基因小鼠(参见例如Howes等，1994，InvestOphthalmol Vis Sci 35(2)342-51和Windle等，1990，Nature 343(6259)665-9)以及近交大鼠(参见例如Nishida等，1981，Curr Eye Res 1(1)53-5和Kobayashi等，1982，Acta Neuropathol(Berl)57(2-3)203-8)。维尔姆斯瘤的动物模型实例包括但不限于WT1敲除小鼠(参见例如Scharnhorst等，1997，Cell Growth Differ 8(2)133-43)、具有肾母细胞瘤高发病率的大鼠亚系(参见例如Mesfin & Breech，1996，Lab Anim Sci 46(3)321-6)和具有维尔姆斯瘤的Wistar/Furth大鼠(参见例如Murphy等，1987，Anticancer Res 7(4B)717-9)。
视网膜色素变性视网膜色素变性的动物模型实例包括但不限于Royal College of Surgeons大鼠(“RCS”)(参见例如Vollrath等，2001，Proc Natl Acad Sci USA98(22)；12584-9和Hanitzsch等，1998，Acta Anat(Basel)162(2-3)119-26)、视紫红质敲除小鼠(参见例如Jaissle等，2001，Invest Ophthalmol Vis Sci 42(2)506-13)以及Wag/Rij大鼠(参见例如Lai等，1980，Am J Pathol 98(1)281-4)。
肝硬化肝硬化的动物模型实例包括但不限于四氯化碳接触的大鼠(参见例如Kloehn等，2001，Horm Metab Res 33(7)394-401)以及细菌细胞成分或结肠炎引发的啮鼠动物模型(参见例如Vierling，2001，Best Pract Res Clin Gastroenterol15(4)591-610)。
血友病血友病的动物模型实例包括但不限于血友病A的啮鼠动物模型(参见例如Reipert等，2000，Thromb Haemost 84(5)826-32；Jarvis等，.1996，ThrombHaemost 75(2)318-25；以及Bi等，1995，Nat Genet 10(1)119-21)、血友病A的犬模型(参见例如Gallo-Penn等，1999，Hum Gene Ther 10(11)1791-802以及Connelly等，1998，Blood 91(9)；3273-81)、血友病B的鼠模型(参见例如Snyder等，1999，Nat Med 5(1)64-70；Wang等，1997，Proc Natl Acad Sci USA94(21)11563-6；以及Fang等，1996，Gene Ther 3(3)217-22)、血友病B的犬模型(参见例如Mount等，2002，Blood 99(8)2670-6；Snyder等，1999，Nat Med5(1)64-70；Fang等，1996，Gene Ther 3(3)217-22)；以及Kay等，1994，Proc NatlAcad Sci USA 91(6)2353-7)以及血友病B的猕猴模型(参见例如Lozier等，1999，Blood 93(6)1875-81)。
血管性血友病血管性血友病的动物模型实例包括但不限于近交小鼠品系RIIIS/J(参见例如Nichols等，1994，83(11)3225-31和Sweeney等，1990，76(11)2258-65)、注射美洲矛头蝮毒蛋白(botrocetin)的大鼠(参见例如Sanders等，1988，Lab Invest59(4)443-52)以及血管性血友病的猪模型(参见例如Nichols等，1995，Proc NatlAcad Sci USA 92(7)2455-9；Johnson & Bowie，1992，J Lab Clin Med120(4)553-8)；和Brinkhous等，1991，Mayo Clin Proc 66(7)733-42)。
β地中海贫血症β地中海贫血症的动物模型实例包括但不限于球蛋白基因突变的鼠模型(参见例如Lewis等，1998，Blood 91(6)2152-6；Raja等，1994，Br J Haematol86(1)156-62；Popp等，1985，445432-44；和Skow等，1983，Cell 34(3)1043-52)。
肾结石肾结石的动物模型实例包括但不限于遗传性高钙尿大鼠(参见例如Bushinsky等，1999，Kidney Int 55(1)234-43和Bushinsky等，1995，Kidney Int48(6)1705-13)、化学处理的大鼠(参见例如Grases等，1998，Scand J Urol Nephrol32(4)261-5；Burgess等，1995，Urol Res 23(4)239-42；Kumar等，1991，J Urol146(5)1384-9；Okada等，1985，Hinyokika Kiyo 31(4)565-77；和Bluestone等，1975，Lab Invest 33(3)273-9)、高草酸尿大鼠(参见例如Jones等，1991，J Urol145(4)868-74)、单侧逆行性软性肾镜检的猪(参见例如Seifmah等，2001，57(4)832-6)以及上泌尿道梗阻的兔(参见例如Itatani等，1979，Invest Urol17(3)234-40)。
共济失调性毛细血管扩张症共济失调性毛细血管扩张症的动物模型实例包括但不限于共济失调性毛细血管扩张症鼠模型(参见例如Barlow等，1999，Proc Natl Acad Sci USA96(17)9915-9和Inoue等，1986，Cancer Res 46(8)3979-82)。
溶酶体贮积症溶酶体贮积症的动物模型实例包括但不限于粘多糖增多症VII型小鼠模型(参见例如Brooks等，2002，Proc Natl Acad Sci USA.99(9)6216-21；Monroy等，2002，Bone 30(2)352-9；Vogler等，2001，Pediatr Dev Pathol 4(5)421-33；Vogler等，2001，Pediatr Res.49(3)342-8；以及Wolfe等，2000，Mol Ther.2(6)552-6)、异染性脑白质营养不良小鼠模型(参见例如Matzner等，2002，Gene Ther.9(1)53-63)、桑德霍夫病小鼠模型(参见例如Sango等，2002，Neuropathol ApplNeurobiol 28(1)23-34)、粘多糖增多症IIIA型小鼠模型(参见例如Bhattacharyya等，200 1，Glycobiology ll(1)99-10和Bhaumik等，1999，Glycobiology9(12)1389-96.)、酰基硫酸酯酶A(ASA)缺陷小鼠(参见例如D′Hooge等，1999，Brain Res.847(2)352-6和D′Hooge等，1999，Neurosci Lett.273(2)93-6)、天冬氨酰葡糖胺尿症突变小鼠(参见例如Jalanko等，1998，Hum Mol Genet.7(2)265-72)、粘多糖增多症VI型猫模型(参见例如Crawley等，1998，J Clin Invest.101(1)109-19和Norrdin等，1995，Bone 17(5)485-9)、尼曼-皮克病C型猫模型(参见例如March等，1997，Acta Neuropathol(Berl).94(2)164-72)、神经磷脂酶缺陷小鼠(参见例如Otterbach & Stoffel，1995，Cell 81(7)1 053-6)和甘露糖苷贮积症牛(参见例如Jolly等，1975，Birth Defects Orig Arctic Ser.11(6)273-8)。
结节性硬化症结节性硬化症的动物模型实例包括但不限于TSC1小鼠模型(参见例如Kwiatkowski等，2002，Hum Mol Genet.11(5)525-34)、Tsc1(TSC1同系物)敲除小鼠(参见例如Kobayashi等，2001，Proc Natl Acad Set USA.2001 Jul17；98(15)8762-7)、TSC2基因突变型(Eker)大鼠模型(参见例如Hino 2000，Nippon Rinsho 58(6)1255-61；Mizuguchi等，2000，J Neuropathol Exp Neurol.59(3)188-9；和Hino等，1999，Prog Exp Tumor Res.3595-108)以及Tsc2(+/-)小鼠(参见例如Onda等，1999，J Clin Invest.104(6)687-95)。
实施例5mdx小鼠动物模型研究已证明在mdx小鼠中引起427kDa抗肌萎缩蛋白多肽翻译提前终止的突变是在外显子23中第3185位的C到T的转换(Sicinski等，Science244(4912)1578-1580(1989))。按照以前(Barton-Davis等，J.Clin.Invest.104(4)375-381(1999))所述制备来自1日龄mdx小鼠的鼠原代骨骼肌培养物。将细胞在本发明的化合物存在下培养10天。每四天更换细胞培养基，并且通过以前所述的免疫染色法(Barton-Davis等，J.Clin.Invest.104(4)375-381(1999))测定成肌细胞培养物中抗肌萎缩蛋白的存在。抗肌萎缩蛋白C-末端的第一单克隆抗体以未稀释使用，结合抗鼠IgG的罗丹明用作第二抗体。所述抗体检测通过抑制无义密码子产生的全长蛋白。用Leica DMR显微镜、数码相机并联合图像软件观察染色。
如以前(Barton-Davis等，J.Clin.Invest.104(4)375-381(1999)所述，通过在麻醉的小鼠皮下植入Alzet渗透泵来递送化合物。本发明的化合物给予两个剂量。庆大霉素作为阳性对照，而只装有溶剂的泵作为阴性对照。泵中装载适当量的化合物，以使组织接触的计算剂量为10mM和20mM。计算庆大霉素的浓度以达到组织接触约200mM。在初始实验中，治疗小鼠14天，之后用氯胺酮麻醉动物并放血处死。然后切除实验动物的胫骨前肌(TA)肌肉，冷冻，并用于抗肌萎缩蛋白掺入横纹肌的免疫荧光分析。通过以前所述的免疫染色(Barton-Davis等，J.Clin.Invest.104(4)375-381(1999))检测TA肌肉中抗肌萎缩蛋白的存在。
蛋白质印迹分析使用可商购的抗肌萎缩蛋白抗体，通过蛋白质印迹分析得自用本发明的化合物治疗4周的mdx小鼠的四头肌。野生型小鼠四头肌提取的蛋白作为阳性对照。观察治疗的小鼠中全长抗肌萎缩蛋白的产生。产生的全长抗肌萎缩蛋白的量大约是野生型表达水平的10％，全长抗肌萎缩蛋白的产生由无义抑制导致但不限于此理论。
免疫荧光用本发明的不同化合物(对于每种化合物至少n＝2)治疗雄性mdx小鼠(9-11周龄)。每日一次以25mg/kg注射这些化合物，注射两周。治疗两周后，处死小鼠，切除肌肉以检测抗肌萎缩蛋白的连读效率。
使用抗肌萎缩蛋白抗体，在10μM冰冻切片上进行免疫荧光(IF)。该抗体识别存在于mdx小鼠中的提前终止突变的C-末端表位。图像分析以同样的方式在所有切片上进行。分析治疗或未治疗小鼠的图像，信号强于未治疗对照上的信号认为阳性，表示提前终止密码子抑制在抗肌萎缩蛋白mRNA中发生。
肌肉力学离体整体肌肉力学在动物的EDL肌肉上进行。最适肌肉长度(Lo)定义为产生最大颤搐张力的长度。Lo的最大强直性张力使用120Hz、500毫秒脉冲在超大电压下测量。监测对通过一系列5个偏心强直性收缩诱导的机械损伤的保护。这些测量利用700毫秒刺激间期进行，在该期间内肌肉最初500毫秒保持等长收缩，然后以0.5Lo/秒的速率伸长8％或10％Lo。对机械损伤的保护在80赫兹刺激频率下评定。损伤测定作第一次和最后一次偏心收缩之间的力的损失。
实施例6p53基因中的无义突变抑制对于动物模型系统，将CAOV-3细胞(1×107)注射到裸/裸鼠的侧腹。12天后，将小鼠随机分组(每组10只小鼠)，并用3mg/kg本发明的化合物皮下治疗(每周5天)，或用30mg/kg本发明的化合物腹膜内治疗(每周1天)。每周测量肿瘤体积。本发明的化合物对p53基因中的无义突变抑制能够抑制体内癌症生长。
实施例7本发明的化合物能够改变对28S rRNA的特异性核苷酸的接近以前的研究已经证明降低翻译保真性的庆大霉素以及其它氨基糖苷成员与16SrRNA的A位点结合。通过化学足迹法、紫外交联以及核磁共振已证明庆大霉素在rRNA的A位点(包括核苷酸1400-1410和1490-1500，E.coli编号)的核苷酸1406、1407、1494和1496(Moazed & Noller，Nature 327(6121)389-394(1978)；Woodcock等，EMBO J.10(10)3099-3103(1991)；以及Schroeder等，EMBOJ.191-9(2000))处结合。
将从HeLa细胞制备的核糖体与这些小分子(在100mM浓度下)一起温育，然后用化学修饰剂(硫酸二甲酯(DMS)和乙氧丁酮醛(KE))处理。化学修饰后，rRNA用酚-氯仿提取，并用乙醇沉淀，使用与三种rRNA的不同区域杂交的末端标记的寡聚核苷酸在引物延伸反应中分析，并在6％聚丙烯酰胺凝胶上分离。引物延伸的探针覆盖整个18S(7个寡聚核苷酸引物)、28S(24个寡聚核苷酸引物)和5S(一个引物)rRNA。这些实验中的对照包括DMSO(DMSO诱导的rRNA可接近性变化的对照)、巴龙霉素(用于18S rRNA结合的标记物)以及茴香霉素(用于28S rRNA结合的标记物)。
本文引用的所有出版物以及专利申请以相同的程度引入作为参考，如同每个单个出版物或专利申请被特别且单个地指出引入本文作为参考。
虽然某些实施方案已在上文详细描述，但是本领域普通技术人员将清楚地理解，在不背离这些实施方案教导的前提下所述实施方案中可能有许多修改。所有这些修改也意欲包括在本发明的权利要求之内。
权利要求
1.一种治疗或预防由体细胞突变引起的疾病的方法，其包括给予有此需要的患者有效量的式1的化合物或所述式1的化合物的药学可接受的盐、水合物、溶剂合物、包合物、外消旋物、立体异构体或多晶型物，其中X、Y和Z独立地选自N、S、O和C，其中至少X、Y或Z之一为杂原子；R1为氢、C1-C6烷基或Na+或Mg2+；R2独立地不存在；或独立地为氢；-CH＝N-OH基；氰基；任选被羟基取代的C1-C6烷基；或任选被氢、羟基或C1-C4烷氧基取代的羰基；R3独立地不存在，或独立地为卤素、羟基、C1-C6烷基、C1-C4烷氧基或硝基；R4独立地不存在，或独立地为氢、C1-C6烷基，或者当与W一起时，R4可以是键，且W与R4和W连接的杂环形成11-13元杂三环环结构；W选自(a)任选被苯基取代的C2-C6炔基；(b)任选被一个或多个以下独立选择的基团取代的C1-C8直链或支链烷基C1-C6烷基；卤素；-C(＝O)-NH-苯基，其中苯基任选被一个或多个独立选择的卤素或C1-C4烷基取代；5-6元杂环；任选被一个或多个独立地选自羟基、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4烷氧基或任选被一个或多个C1-C4烷基取代的氨基取代的C6-C8芳基；任选被一个或多个以下独立选择的基团取代的芳氧基羟基、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4烷氧基或任选被一个或多个C1-C4烷基取代的氨基；(c)C2-C8烯基；(d)任选被C1-C6烷基取代的C3-C8环烷基；(e)任选被一个或多个以下独立选择的基团取代的C6-C8芳基羟基；卤素；任选被一个或多个独立选择的卤素或羟基取代的C1-C4直链或支链烷基；任选被一个或多个独立选择的卤素或苯基取代的C1-C4烷氧基；任选被一个或多个独立选择的C1-C4烷基取代的C3-C8环烷基；任选被一个或多个独立选择的C1-C4烷基取代的C6-C8芳基；任选被一个或多个以下独立选择的基团取代的芳氧基羟基、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4烷氧基或任选被一个或多个独立选择的C1-C4烷基取代的氨基；任选被一个或多个独立选择的C1-C4烷基、氧代或任选被一个或多个以下独立选择的基团取代的C6-C8芳基取代的5-6元杂环羟基、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4烷氧基或任选被一个或多个独立选择的C1-C4烷基取代的氨基；任选被氨基或氨基烷基或烷氧基取代的萘基；-C(O)-NRxRy基；-C(O)-Rx基；异吲哚-1，3-二酮基；硝基；氰基；-SO3H基；烷硫基；烷基磺酰基；-NRx-C(O)-Rz基；-NRxRy基；-NRx-SO2-Rz基；-NRx-C(O)-NRxRy基；-NRx-C(O)O-Rz基；(f)任选被一个或多个独立选择的卤素、氨基或氨基烷基或烷氧基取代的C10-C14芳基；(g)-C(O)-NRxRy基；(h)5-6元杂环，其任选被一个或多个独立选择的氧代基团；卤素；C1-C4烷基；C1-C4烷氧基；C1-C4卤代烷基；C1-C4卤代烷氧基；芳氧基；-NRxRy基；烷硫基；-C(O)-Rx基；或任选被一个或多个独立选择的卤素、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基取代的C6-C8芳基取代；(i)具有2-3个环结构的杂环基团，其任选被一个或多个独立选择的卤素、氧代基团、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基或C1-C4烷氧基取代；(j)或W与R4，包括其中R4为键，及R4和W连接的杂环一起形成11-13元杂三环环结构；其中Rx为氢、C1-C6烷基，或Rx和Ry与它们连接的原子一起形成4-7元碳环或杂环；Ry为氢、C1-C6烷基、任选被一个或多个独立选择的C1-C4烷基取代的芳基，或者Rx和Ry与它们连接的原子一起形成4-7元碳环或杂环；且Rz为任选被芳基或卤素取代的C1-C6烷基；或任选被卤素、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基取代的芳基。
2.权利要求1的方法，其中所述化合物或其药学可接受的盐、水合物、溶剂合物、包合物多晶型物、外消旋物、立体异构体或多晶型物作为含有所述化合物和药学可接受的载体或稀释剂的组合物给予。
3.权利要求1的方法，其中所述给予为静脉内给予。
4.一种治疗或预防自身免疫性疾病、血液病、胶原病、糖尿病、神经变性疾病、心血管病、肺病、炎症性疾病或中枢神经系统疾病的方法，其包括给予有此需要的患者有效量的式1的化合物或其药学可接受的盐、水合物、溶剂合物、包合物、外消旋物、立体异构体或多晶型物。
5.权利要求4的方法，其中所述给予为静脉内给予。
6.权利要求4的方法，其中所述自身免疫性疾病为类风湿性关节炎或移植物抗宿主疾病。
7.权利要求4的方法，其中所述炎症性疾病为关节炎。
8.权利要求4的方法，其中所述中枢神经系统疾病为多发性硬化、肌营养不良、杜兴氏肌营养不良、阿尔茨海默氏病、神经变性疾病或帕金森氏病。
9.权利要求4的方法，其中所述血液病为血友病、血管性血友病、共济失调性毛细血管扩张症、β地中海贫血症或肾结石。
10.权利要求4的方法，其中所述胶原病为成骨不全或硬化。
11.一种治疗或预防家族性红细胞增多症、免疫缺陷、肾脏疾病、囊性纤维化、家族性高胆固醇血症、视网膜色素变性、淀粉样变、血友病、阿尔茨海默氏病、泰-萨克斯病、尼曼-皮克病、帕金森氏病、动脉粥样硬化、巨人症、侏儒症、甲状腺功能亢进、衰老、肥胖症、杜兴氏肌营养不良或马方综合征的方法，其包括给予有此需要的患者有效量的式1的化合物或其药学可接受的盐、水合物、溶剂合物、包合物、外消旋物、立体异构体或多晶型物。
12.权利要求11的方法，其中所述给予为静脉内给予。
13.一种治疗或预防人癌症的方法，其包括给予有此需要的人有效量的式1的化合物或其药学可接受的盐、水合物、溶剂合物、包合物、外消旋物、立体异构体或多晶型物。
14.权利要求13的方法，其中所述给予为静脉内给予。
15.权利要求13的方法，其中所述癌症为头和颈、眼、皮肤、口、咽喉、食管、胸、骨、血、肺、结肠、乙状结肠、直肠、胃、前列腺、乳房、卵巢、肾、肝、胰腺、脑、肠、心脏或肾上腺的癌症。
16.权利要求13的方法，其中所述化合物或其药学可接受的盐、水合物、溶剂合物、包合物、外消旋物、立体异构体或多晶型物包含药学可接受载体或稀释剂。
17.权利要求13的方法，其中所述癌症为实体瘤。
18.权利要求13的方法，其中所述癌症为肉瘤、癌、纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤因氏瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胰腺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝癌、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎性癌、维尔姆斯瘤、子宫颈癌、睾丸肿瘤、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、胶质瘤、星形细胞瘤、髓母细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、卡波西肉瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质瘤、脑膜瘤、黑色素瘤、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、血液源性肿瘤或多发性骨髓瘤。
19.权利要求13的方法，其中所述癌症为急性成淋巴细胞性白血病、急性B淋巴细胞性白血病、急性T淋巴细胞性白血病、急性粒细胞性白血病、急性早幼粒细胞性白血病、急性成单核细胞性白血病、急性红白血病、急性成巨核细胞白血病、急性粒单核细胞性白血病、急性非淋巴细胞性白血病、急性未分化细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、毛细胞性白血病或多发性骨髓瘤。
20.一种治疗或预防与p53基因突变相关的疾病的方法，其包括给予有此需要的患者有效量的式1的化合物或其药学可接受的盐、水合物、溶剂合物、包合物、外消旋物、立体异构体或多晶型物。
21.权利要求20的方法，其中所述给予为静脉内给予。
22.权利要求20的方法，其中所述疾病为肉瘤、癌、纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤因氏瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胰腺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝癌、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎性癌、维尔姆斯瘤、子宫颈癌、睾丸肿瘤、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、胶质瘤、星形细胞瘤、髓母细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、卡波西肉瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质瘤、脑膜瘤、黑色素瘤、神经母细胞瘤或视网膜母细胞瘤。
23.一种抑制癌细胞生长的方法，其包括使所述癌细胞与有效量的式1的化合物或其药学可接受的盐、水合物、溶剂合物、包合物、外消旋物、立体异构体或多晶型物接触。
24.一种在哺乳动物中选择性产生蛋白质的方法，其包括在哺乳动物中转录含有无义突变的基因；和将有效量的本发明的化合物提供给所述哺乳动物，其中所述蛋白质由所述哺乳动物产生。
25.一种制备含有式1的化合物的药物组合物的方法，所述药物组合物用于治疗或预防有治疗或预防需要的患者的疾病的方法中，所述药物组合物能够给予有此需要的患者治疗有效量的式1的化合物或所述式1的化合物的药学可接受的盐、水合物、溶剂合物、包合物、外消旋物、立体异构体或多晶型物。
26.式1的化合物或所述式1的化合物的药学可接受的盐、水合物、溶剂合物、包合物、外消旋物、立体异构体或多晶型物 其中X、Y和Z独立地选自N、S、O和C，其中至少X、Y或Z之一为杂原子；R1为氢、C1-C6烷基或Na+或Mg2+；R2独立地不存在；或独立地为氢；-CH＝N-OH基；氰基；任选被羟基取代的C1-C6烷基；任选被氢、羟基或C1-C4烷氧基取代的羰基；R3独立地不存在，或独立地为卤素、羟基、C1-C6烷基、C1-C4烷氧基或硝基；R4独立地不存在，或独立地为氢、C1-C6烷基，或者当与W一起时，R4可以是键，且W与R4和W连接的杂环形成11-13元杂三环环结构；W选自(a)任选被苯基取代的C2-C6炔基；(b)任选被一个或多个以下独立选择的基团取代的C1-C8直链或支链烷基C1-C6烷基；卤素；-C(＝O)-NH-苯基，其中苯基任选被一个或多个独立选择的卤素或C1-C4烷基取代；5-6元杂环；任选被一个或多个独立地选自羟基、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4烷氧基或任选被一个或多个C1-C4烷基取代的氨基取代的C6-C8芳基；任选被一个或多个以下独立选择的基团取代的芳氧基羟基、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4烷氧基或任选被一个或多个C1-C4烷基取代的氨基；(c)C2-C8烯基；(d)任选被C1-C6烷基取代的C3-C8环烷基；(e)任选被一个或多个以下独立选择的基团取代的C6-C8芳基羟基；卤素；任选被一个或多个独立选择的卤素或羟基取代的C1-C4直链或支链烷基；任选被一个或多个独立选择的卤素或苯基取代的C1-C4烷氧基；任选被一个或多个独立选择的C1-C4烷基取代的C3-C8环烷基；任选被一个或多个独立选择的C1-C4烷基取代的C6-C8芳基；任选被一个或多个以下独立选择的基团取代的芳氧基羟基、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4烷氧基或任选被一个或多个独立选择的C1-C4烷基取代的氨基；任选被一个或多个独立选择的C1-C4烷基、氧代或任选被一个或多个以下独立选择的基团取代的C6-C8芳基取代的5-6元杂环羟基、卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基、C1-C4烷氧基或任选被一个或多个独立选择的C1-C4烷基取代的氨基；任选被氨基或氨基烷基或烷氧基取代的萘基；-C(O)-NRxRy基；-C(O)-Rx基；异吲哚-1，3-二酮基；硝基；氰基；-SO3H基；烷硫基；烷基磺酰基；-NRx-C(O)-Rz基；-NRxRy基；-NRx-SO2-Rz基；-NRx-C(O)-NRxRy基；-NRx-C(O)O-Rz基；(f)任选被一个或多个独立选择的卤素、氨基或氨基烷基或烷氧基取代的C10-C14芳基；(g)-C(O)-NRxRy基；(h)5-6元杂环，其任选被一个或多个独立选择的氧代基团；卤素；C1-C4烷基；C1-C4烷氧基；C1-C4卤代烷基；C1-C4卤代烷氧基；芳氧基；-NRxRy基；烷硫基；-C(O)-Rx基；或任选被一个或多个独立选择的卤素、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基取代的C6-C8芳基取代；(i)具有2-3个环结构的杂环基团，其任选被一个或多个独立选择的卤素、氧代基团、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基或C1-C4烷氧基取代；(j)或W与R4，包括其中R4为键，及R4和W连接的杂环一起形成11-13元杂三环环结构；其中Rx为氢、C1-C6烷基，或Rx和Ry与它们连接的原子一起形成4-7元碳环或杂环；Ry为氢、C1-C6烷基、任选被一个或多个独立选择的C1-C4烷基取代的芳基，或Rx和Ry与它们连接的原子一起形成4-7元碳环或杂环；且Rz为任选被芳基或卤素取代的C1-C6烷基；或任选被卤素、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基取代的芳基。
27.权利要求26的化合物，其中所述式1的化合物选自式1A至式1Z的化合物。
28.权利要求26的化合物，其中所述式1的化合物为表X中列出的化合物。
29.一种药物组合物，其含有式1的化合物。
30.权利要求29的药物组合物，其进一步含有一种或多种其它的式1的化合物。
31.具有下式的化合物(化合物编号1)
全文摘要
本发明涉及通过给予本发明的化合物或组合物而用于治疗或预防与mRNA无义突变相关的疾病的方法、化合物和组合物。更具体地，本发明涉及用于抑制与mRNA无义突变相关的翻译提前终止的方法、化合物和组合物。
文档编号F28G3/00GK101076703SQ200580042743
公开日2007年11月21日 申请日期2005年10月13日 优先权日2004年10月13日
发明者N·阿尔姆斯戴德, 陈光明, G·M·卡普, E·韦尔奇, R·怀尔德, J·A·坎贝尔 申请人:Ptc医疗公司