一种应用于磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯回收利用的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种应用于磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯回收利用 的方法。 技术背景
[0002] 在逆境条件下（旱、盐碱、热、冷、冻），植物体内脯氨酸（proline，Pro)的含量显 著增加。植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性。植物脯氨酸含量测定是 植物生理学实验的常用方法，广泛用于作物、牧草、园艺植物、园林植物等各种植物科学研 宄。磺基水杨酸法是测定植物体内脯氨酸含量的常用方法，在实验室产生的甲苯废液量大， 直接倒掉对环境污染严重，试验成本高。
【发明内容】
[0003] 本发明是为了解决目前磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量时甲苯废液量大， 直接倒掉对环境污染严重，试验成本高的技术问题，而提供一种应用于磺基水杨酸法测定 植物体内脯氨酸含量的甲苯回收利用的方法。
[0004] 本发明的一种应用于磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯回收利用的 方法是按以下步骤进行的：
[0005] -、脱色：向用磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯废液中加入活性炭， 用震荡仪震荡2min，得到溶液I ;所述的用磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯 废液的体积与活性炭的质量比为ImL: 0.0 lg ;
[0006] 二、过滤：将步骤一得到的溶液I采用中速定性滤纸进行过滤1次，得到甲苯回收 液。
[0007] 磺基水杨酸法是测定植物体内脯氨酸含量的方法：
[0008] L标准曲线的绘制
[0009] (1)在分析天平上精确称取25mg脯氨酸，倒入小烧杯内，用少量蒸馏水溶解，然 后倒入250mL容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，得到标准溶液，此标准液中每mL含脯氨酸 100 μ g ；
[0010] ⑵系列脯氨酸浓度的配制：取6个50mL容量瓶，分别盛入步骤I (1)得到的标准 溶液〇. 5mL，1.0 mL，I. 5mL，2. OmL，2. 5mL及3. OmL，用蒸馏水定容至刻度，摇勾，各瓶的脯氨 酸浓度分别为 I U g/mL，2 μ g/mL，3 μ g/mL，4 μ g/mL，5 μ g/mL 和 6 μ g/mL ;
[0011] (3)取6支试管，向6支试管中分别加入2mL步骤I (2)得到的6种浓度的系列标 准浓度的脯氨酸溶液、2mL冰醋酸和2mL酸性茚三酮溶液，每支试管在沸水浴中加热30min， 自然冷却至室温，向各试管中准确加入4mL甲苯，振荡30S，静置片刻，使色素全部转至甲苯 溶液；
[0012] (4)用注射器轻轻吸取各试管中的上层脯氨酸甲苯溶液至比色杯中，以纯净的甲 苯溶液为空白对照，于520nm波长处进行比色；
[0013] (5)标准曲线的绘制：先求出吸光度值（Y)依脯氨酸浓度（X)而变的回归方程式， 再按回归方程式绘制标准曲线，计算2mL测定液中脯氨酸的含量（μ g/2ml)。
[0014] 2.样品的测定：
[0015] (1)脯氨酸的提取：准确称取待测植物叶片0. 5g，置大管中，然后向管中加入5mL 质量分数为3%的磺基水杨酸溶液，在沸水浴中提取lOmin，（提取过程中要经常摇动），冷 却后过滤于干净的试管中，滤液即为脯氨酸的提取液；
[0016] (2)吸取2mL步骤2(1)得到的脯氨酸的提取液于另一干净的带玻塞试管中，加入 2mL冰醋酸和2mL的酸性茚三酮试剂，在沸水浴中加热30min，溶液即呈红色；
[0017] (3)冷却后加入4mL甲苯，摇荡30S，静置片刻，取上层液至IOmL离心管中，在转速 为3000rpm下离心5min ;
[0018] (4)用吸管轻轻吸取上层脯氨酸红色甲苯溶液于比色杯中，以甲苯为空白对照，在 分光光度计上520nm波长处比色，得到甲苯废液，求得吸光度值。
[0019] 磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的原理：用磺基水杨酸提取植物样品时， 脯氨酸便游离于磺基水杨酸的溶液中，然后用酸性茚三酮加热处理后，溶液即成红色，再用 甲苯处理，则色素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。在520nm波长 下比色，从标准曲线上查出（或用回归方程计算）脯氨酸的含量。
[0020] 本发明优点：
[0021] 一、本发明可以减少应用于磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯废液对 环境的污染，提高了有机溶剂的利用率，降低实验成本；
[0022] 二、本发明具有操作简单、处理量大、易于人工掌握等特点，对进行植物生理特性 研宄具有一定应用价值；
[0023] 三、本发明方法能够回收磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量测定用甲苯萃取 液，甲苯回收率：85% ;活性炭回收利用次数：8次，并且适用于大量样品的处理。
【具体实施方式】：
【具体实施方式】 [0024] 一：本实施方式是一种应用于磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含 量的甲苯回收利用的方法，具体是按以下步骤进行的：
[0025] -、脱色：向用磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯废液中加入活性炭， 用震荡仪震荡2min，得到溶液I ;所述的用磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯 废液的体积与活性炭的质量比为ImL: 0.0 lg ;
[0026] 二、过滤：将步骤一得到的溶液I采用中速定性滤纸进行过滤1次，得到甲苯回收 液。
[0027] 本实施方式优点：
[0028] 一、本发明可以减少应用于磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯废液对 环境的污染，提高了有机溶剂的利用率，降低实验成本；
[0029] 二、本发明具有操作简单、处理量大、易于人工掌握等特点，对进行植物生理特性 研宄具有一定应用价值；
[0030] 三、本发明方法能够回收磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量测定用甲苯萃取 液，甲苯回收率：85% ;活性炭回收利用次数：8次，并且适用于大量样品的处理。
[0031] 采用下述试验验证本发明效果：
[0032] 试验一：本试验为一种应用于磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯回收 利用的方法，具体是按以下步骤进行的：
[0033] -、脱色：向用磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯废液中加入活性炭， 用震荡仪震荡2min，得到溶液I ;所述的用磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯 废液的体积与活性炭的质量比为ImL: 0.0 lg ;
[0034] 二、过滤：将步骤一得到的溶液I采用中速定性滤纸进行过滤1次，得到甲苯回收 液。
[0035] 三、将步骤二得到的甲苯回收液作为磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲 苯萃取液，最后又得到甲苯废液。
[0036] 再重复步骤一至三7次，测试用磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量时使用不 同回收次数的甲苯回收液后在波长为~ 2(|的吸光度，如表1所示，随着回收次数的增加，吸 光度变化规律不明显，但增加幅度不大，在8次回收以内，增加幅度均极小，可以应用于磺 基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯。
[0037] 回收次数为0指的是用市售的甲苯应用于磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含 量；回收次数为1指的是试验一步骤二中得到的甲苯回收液应用于磺基水杨酸法测定植物 体内脯氨酸含量。
[0038] 表 1
[0039]
【主权项】
1. 一种应用于磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯回收利用的方法，其特征 在于应用于磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯回收利用的方法是按以下步骤 进tx的： 一、 脱色：向用磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯废液中加入活性炭，用震 荡仪震荡2min，得到溶液I;所述的用磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯废液 的体积与活性炭的质量比为ImL: 0.Olg; 二、过滤：将步骤一得到的溶液I采用中速定性滤纸进行过滤1次，得到甲苯回收液。
【专利摘要】一种应用于磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯回收利用的方法，涉及一种应用于磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯回收利用的方法。本发明是为了解决目前磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量时甲苯废液量大，直接倒掉对环境污染严重，试验成本高的技术问题。本发明：一、脱色；二、过滤。本发明优点：本发明可以减少应用于磺基水杨酸法测定植物体内脯氨酸含量的甲苯废液对环境的污染，提高了有机溶剂的利用率，降低实验成本，并且操作简单、处理量大、易于人工掌握等特点，对进行植物生理特性研究具有一定应用价值；本发明的甲苯回收率：85％；活性炭回收利用次数：8次，并且适用于大量样品的处理。
【IPC分类】G01N21-78, G01N21-31, C02F9-02
【公开号】CN104692551
【申请号】CN201510116226
【发明人】张玉霞, 于华荣, 郭园, 周立业, 包金花, 王乐
【申请人】内蒙古民族大学
【公开日】2015年6月10日
【申请日】2015年3月17日