制备Romidepsin的制作方法
【专利摘要】本发明提供了制备romidepsin的改进方法。所述方法包括在防止形成不希望的加合物的条件下生产、纯化或储存romidepsin。已经发现，在小于约6.0的表观pH(例如4.0至6.0的表观pH)下纯化romidepsin，防止了romidepsin的二硫键的还原以及随后二聚、低聚或聚合加合物的形成。本发明还提供了不含有二聚、低聚或聚合加合物的单体romidepsin的药物组合物。
【专利说明】制备 Rom i deps i n
[0001]本申请是申请号为“200780051928.0”，发明名称为“制备Romid印sin”的发明专利申请的分案申请。
[0002]相关申请
[0003]按照35U.S.C.§ 119(e)，本申请要求 U.S.临时专利申请 U.S.S.N.60/882，712 的优先权，该临时专利申请是于2006年12月29日提交的，其引入本文以供参考。
[0004]发明背景
[0005]Romidepsin 是一种天然产物，是由 Fujisawa Pharmaceuticals 从紫色色杆菌(Chromobacterium violaceum)中分离出来的。参见出版的日本专利申请Hei7 (1995)-64872 ;于1990年12月11日公布的U.S.专利4，977，138，其分别引入本文以供参考。其由4个氨基酸残基(D-缬氨酸、D-半胱氨酸、dehydrobutyrine和L-缬氨酸)和一种新的酸(3-羟基-7-巯基-4-庚烯酸)组成的二环肽。Romid印sin是含有酰胺和酯键的酯肽。除了使用发酵由紫色色杆菌(C.violaceum)生产以外,romidepsin还可以通过合成或半合成方法来制备。Kahn等人报道的romidepsin的全合成涉及14个步骤,并且以18%的总收率获得了 romidepsin。J.Am.Chem.Soc.118:7237-7238,1996。romidepsin 的
结构如下所示:
【权利要求】
1.制备romidepsin的方法,所述方法包括以下步骤: 从发酵肉汤中分离romidepsin ;和 纯化romidepsin,其中至少一部分纯化步骤是在约4.0至约6.0的表观pH下进行的。
2.权利要求1的方法，其中所述纯化步骤包括分批色谱、柱色谱、重结晶或其组合。
3.制备romidepsin的方法,所述方法包括以下步骤: 发酵产生romidepsin的微生物； 从发酵肉汤中分离romidepsin ;和 纯化romidepsin,其中至少一部分纯化步骤是在约4.0至约6.0的表观pH下进行的。
4.权利要求3的方法,其中所述纯化步骤包括通过柱色谱纯化romidepsin的步骤。
5.权利要求3的方法,其中所述纯化步骤包括通过重结晶纯化romidepsin的步骤。
6.制备romidepsin的方法,所述方法包括以下步骤: 发酵产生romidepsin的微生物； 从发酵肉汤中分离romidepsin ； 通过柱色谱纯化romidepsin ;和 重结晶 romidepsin。`
7.权利要求6的方法，其中所述发酵步骤包括发酵紫色色杆菌。
8.权利要求6的方法,其中所述纯化步骤包括使用非离子吸附树脂纯化romidepsin。
9.权利要求6的方法，其中所述纯化步骤包括使用选自SEPABEDSSP850、DIAIONHP20SS或DIAION HP20的苯乙烯-二乙烯基苯树脂纯化romid印sin。
10.权利要求6的方法,其中所述纯化步骤包括使用氧化招纯化romidepsin。
11.权利要求6的方法，其中所述纯化步骤包括通过依次使用SEPABEADSSP850苯乙烯-二乙烯基苯树脂的柱或批，DIAION HP20SS苯乙烯-二乙烯基苯树脂的柱，DIAION HP20苯乙烯-二乙烯基苯树脂的柱，以及氧化招的柱的柱色谱来纯化romidepsin。
12.权利要求6的方法，其中所述重结晶步骤包括使用甲醇来重结晶romid印sin。
13.权利要求6的方法，其中所述重结晶步骤包括使用85%丙酮水溶液来重结晶romidepsin。
14.制备romidepsin的方法,所述方法包括以下步骤: 发酵产生romidepsin的微生物； 从发酵肉汤中分离romidepsin ;和 纯化romidepsin,其中所述纯化步骤包括从85%丙酮水溶液中结晶romidepsin,其中将85%丙酮水溶液的表观pH调节至约4.0到约6.0。
15.权利要求1、3、6或14任一项的方法，其中使用有机酸来调节表观pH。
16.权利要求15的方法，其中所述有机酸是乙酸。
17.权利要求1、3、6或14任一项的方法，其中romidepsin是大于98%的单体romidepsin。
18.权利要求17的方法，其中romidepsin是大于99%的单体romidepsin。
19.权利要求18的方法，其中romidepsin是大于99.5%的单体romidepsin。
20.权利要求19的方法，其中romidepsin是大于99.95%的单体romidepsin。
【文档编号】B01D15/20GK103497238SQ201310294226
【公开日】2014年1月8日 申请日期:2007年12月28日 优先权日:2006年12月29日
【发明者】G.L.韦丁, N.H.弗罗利克 申请人:细胞基因公司