一种快速脱除叶绿素的方法

本发明属于提取物纯化，具体涉及一种快速脱除叶绿素的方法。

背景技术：

1、目前天然产物提取分离领域中，叶绿素对其他目标组分常常会造成干扰，从而影响提取物的纯度和含量测定。发明人在进行普通金花茶叶、四季金花茶叶、阿拉伯婆婆纳地上部分分离时，通过化学反应显色时发现，上述几种植物中主要含有黄酮类、萜类、香豆素类成分。tlc分析时，黄酮类成分在uv254nm、365nm下可见黄色明亮斑点；萜类成分通过10％硫酸-甲醇、110℃加热后，可见光下可见紫-紫红色斑点；香豆素类通过喷洒三氯化铁溶液，可见光下可见蓝色斑点。

2、在进行对上述植物进行系统性提取分离纯化时，出现叶绿素类化合物干扰，具体表现在提取物的中等极性馏分各部位均为绿色-墨绿色，tlc分析时在可见光下斑点展开后从tlc板原点到前锋，均呈现绿色色带，uv365nm从tlc板原点到前锋，均呈现红色，因其在紫外及可见光下出现深色带状色带，干扰了其他物质的检识(可见光检识、紫外检识、化学反应显色检识)。且常规除叶绿素类化合物需多次反复使用硅胶柱层析，将导致其它非叶绿素类物质不可逆吸附在硅胶填料中，造成损失。

3、通过本脱除叶绿素的方法后，发明人从普通金花茶叶、四季金花茶叶中分离、纯化得到了高纯度的槲皮素、根皮素、多羟基二氢黄酮等黄酮类成分；octyloleanolate、α-spinasterol、camellenodiol等三萜类成分；loliolide、iso-loliolide、dethdrovomofoliol等倍半萜类成分。

技术实现思路

1、为了解决上述技术问题，本发明提出了一种快速脱除叶绿素的方法。

2、本发明的技术方案为：

3、一种快速脱除叶绿素的方法，包括以下步骤：

4、(1)制备净化柱：将四烷基硅烷键合硅胶固相萃取柱、八烷基硅烷键合硅胶固相萃取柱和层析硅胶固相萃取柱自上而下依次串联，得到净化柱；

5、(2)脱色：取待脱色液，上步骤(1)的净化柱脱除叶绿素，收集流出液，即得到脱色提取物。

6、进一步地，步骤(1)中，所述四烷基硅烷键合硅胶固相萃取柱、八烷基硅烷键合硅胶固相萃取柱和层析硅胶固相萃取柱的柱长的比值为3:(3-5):3。

7、进一步地，步骤(1)中，所述层析硅胶固相萃取柱中，硅胶填料的粒径为300-400目。

8、进一步地，步骤(2)中，上柱前，先使用有机溶剂润洗净化柱1-2次。

9、进一步地，所述叶绿素为132-hydroxypheophorbideaethylester、pheelophyll-α、17c-ethoxyphaeophorbidea中的一种或多种。

10、进一步地，所述待脱色液包括植物的乙醇提取物、二氯甲烷提取物或乙酸乙酯提取物。

11、进一步地，所述待脱色液的制备方法包括以下步骤：取金花茶叶依次浸泡于体积浓度为95％、80％、50％乙醇中，收集合并所有浸提液，低温减压蒸馏得到总浸膏；总浸膏依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，减压浓缩，分别得到石油醚提取物、乙酸乙酯提取物；取乙酸乙酯提取物，采用硅胶柱层析法，以不同体积比的石油醚、乙酸乙酯混合液为洗脱剂进行梯度洗脱，得到不同馏分，取其中深绿色馏分作为待脱色液。

12、进一步地，所述石油醚、乙酸乙酯混合液中，石油醚和乙酸乙酯的体积比为40:1-0:1。

13、进一步地，所述待脱色液的制备方法包括以下步骤：取金花茶叶依次浸泡于体积浓度为95％、80％、50％乙醇中，收集合并所有浸提液，低温减压蒸馏得到总浸膏；总浸膏依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯萃取，分别得到石油醚提取物、二氯甲烷提取物、乙酸乙酯提取物；取二氯甲烷提取物，采用硅胶柱层析法，以不同体积比的石油醚、二氯甲烷、甲醇混合液为洗脱剂进行梯度洗脱，得到不同馏分，取其中深绿色馏分作为待脱色液。

14、进一步地，所述石油醚、二氯甲烷、甲醇混合液中，所石油醚、二氯甲烷、甲醇的体积比为20:1:0-0:10:1。

15、本发明的有益效果为：

16、(1)本发明采用串联技术将将四烷基硅烷键合硅胶固相萃取柱、八烷基硅烷键合硅胶固相萃取柱和层析硅胶固相萃取柱自上而下依次串联，实现了一步法净化，从而大大缩短净化时间，可大幅提高前处理速率和效率。

17、(2)本发明对叶绿素类物质特异性去除较高，克服了传统活性炭吸附叶绿素等方法对非叶绿素类物质造成损失。

技术特征：

1.一种快速脱除叶绿素的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的一种快速脱除叶绿素的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述四烷基硅烷键合硅胶固相萃取柱、八烷基硅烷键合硅胶固相萃取柱和层析硅胶固相萃取柱的柱长的比值为3:(3-5):3。

3.如权利要求1所述的一种快速脱除叶绿素的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述层析硅胶固相萃取柱中，硅胶填料的粒径为300-400目。

4.如权利要求1所述的一种快速脱除叶绿素的方法，其特征在于：步骤(2)中，上柱前，先使用有机溶剂润洗净化柱1-2次。

5.如权利要求1所述的一种快速脱除叶绿素的方法，其特征在于：所述叶绿素为132-hydroxypheophorbide a ethyl ester、pheelophyll-α、17c-ethoxyphaeophorbide a中的一种或多种。

6.如权利要求1所述的一种快速脱除叶绿素的方法，其特征在于：所述待脱色液包括植物的乙醇提取物、二氯甲烷提取物或乙酸乙酯提取物。

7.如权利要求1所述的一种快速脱除叶绿素的方法，其特征在于：所述待脱色液的制备方法包括以下步骤：取金花茶叶依次浸泡于体积浓度为95％、80％、50％乙醇中，收集合并所有浸提液，低温减压蒸馏得到总浸膏；总浸膏依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，减压浓缩，分别得到石油醚提取物、乙酸乙酯提取物；取乙酸乙酯提取物，采用硅胶柱层析法，以不同体积比的石油醚、乙酸乙酯混合液为洗脱剂进行梯度洗脱，得到不同馏分，取其中深绿色馏分作为待脱色液。

8.如权利要求7所述的一种快速脱除叶绿素的方法，其特征在于：所述石油醚、乙酸乙酯混合液中，石油醚和乙酸乙酯的体积比为40:1-0:1。

9.如权利要求1所述的一种快速脱除叶绿素的方法，其特征在于：所述待脱色液的制备方法包括以下步骤：取金花茶叶依次浸泡于体积浓度为95％、80％、50％乙醇中，收集合并所有浸提液，低温减压蒸馏得到总浸膏；总浸膏依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯萃取，分别得到石油醚提取物、二氯甲烷提取物、乙酸乙酯提取物；取二氯甲烷提取物，采用硅胶柱层析法，以不同体积比的石油醚、二氯甲烷、甲醇混合液为洗脱剂进行梯度洗脱，得到不同馏分，取其中深绿色馏分作为待脱色液。

10.如权利要求9所述的一种快速脱除叶绿素的方法，其特征在于：所述石油醚、二氯甲烷、甲醇混合液中，所述石油醚、二氯甲烷、甲醇的体积比为20:1:0-0:10:1。

技术总结
本发明属于提取物纯化技术领域，具体涉及一种快速脱除叶绿素的方法，包括以下步骤：(1)制备净化柱：将四烷基硅烷键合硅胶固相萃取柱、八烷基硅烷键合硅胶固相萃取柱和层析硅胶固相萃取柱自上而下依次串联，得到净化柱；(2)脱色：取待脱色液，上步骤(1)的净化柱脱除叶绿素，收集流出液，即得到脱色提取物。本发明采用串联技术将将四烷基硅烷键合硅胶固相萃取柱、八烷基硅烷键合硅胶固相萃取柱和层析硅胶固相萃取柱自上而下依次串联，实现了一步法净化，从而大大缩短净化时间，可大幅提高前处理速率和效率。

技术研发人员：杨克迪,马思远,梁淑燕,谭璐,葛利
受保护的技术使用者：广西大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12