本申请涉及微球,具体地,涉及一种羧基化多孔微球的制备方法。
背景技术:
1、多孔微球是生物试剂检测中常用的一种原料,尤其是用于核酸的分离和提纯,因此要求多孔表面具有活性官能团,比如羟基、羧基、氨基等,可以提高多孔微球的亲水性以及与核酸结合性,提高核酸的分离和提纯效果。
2、羧基官能化多孔微球通常采用羧基化试剂,比如油酸、十一烷酸等长链烷基羧酸对微球进行处理,但由于是物理性结合,而且长链烷基羧酸的分子量较小,羧基化后稳定性不够高或者羧基基团无法有效的存在在多孔微球的表面,导致羧基官能化多孔微球的性能无法有效体现,对于核酸提取和纯化的应用效果不佳。
3、基于此,羧基化多孔微球的技术还需要进行改进。
技术实现思路
1、为了解决上述技术问题,提高羧基官能化多孔微球对核酸提取和纯化的应用效果,本申请提供一种羧基化多孔微球的制备方法。
2、本申请采用如下的技术方案:
3、一种羧基化多孔微球的制备方法,步骤包括:
4、s1、将生物相容性聚合物、丙烯酸共聚物和油溶性乳化剂加入到有机溶剂中溶解,配制成分散相;
5、s2、将水溶性乳化剂和/或保护胶体加到水中,配制成连续相;
6、s3、将步骤s1中所述分散相和步骤s2中所述连续相混合,获得乳液,持续搅拌至出现沉淀,收集沉淀,清洗,干燥,获得所述羧基化多孔微球。
7、优选的,步骤s1中所述生物相容性聚合物和所述丙烯酸共聚物的重量比为1:0.01-0.2。
8、优选的,步骤s1中所述丙烯酸共聚物中丙烯酸的重量比例为1-50%。
9、优选的,步骤s1中所述有机溶剂在1个大气压下的沸点不超过120℃。
10、优选的,步骤s1中所述分散相的浓度为1-60wt%。
11、优选的,步骤s1中所述油溶性乳化剂重量为所述分散相重量的1-10%。
12、优选的,步骤s2中所述水溶性乳化剂和/或保护胶体在所述连续相中的重量含量为0.5-10wt%。
13、优选的,步骤s3中所述分散相和所述连续相的重量比为0.1-1:1。
14、优选的,步骤s3中所述持续搅拌至出现沉淀,在持续搅拌开始时从底部持续的通入气体。
15、优选的,步骤s3中所述持续搅拌至出现沉淀,在持续搅拌开始时加入羧基交联剂。
16、综上所述,本申请具有以下有益效果:
17、1、本申请采用乳化的方法制备微球,并且在乳液搅拌过程中,随着分散相(油相)中有机溶剂的挥发,微球表面产生多孔,同时微球沉淀并析出。采用丙烯酸共聚物为多孔微球提供羧基,并且丙烯酸共聚物分子量较大,与生物相容性聚合物的结合作用较高,而且不会像油酸等小分子脂肪酸对生物相容性聚合物起到塑化作用,可以提供较为稳定的羧基含量和分布,更有利于核酸的提取和纯化。
18、2、本申请中,乳液搅拌、有机溶剂挥发过程中,同时不断的从底部鼓气,一是可以加快有机溶剂的挥发,有利于形成更多更大的微孔,同时加快微球沉淀析出,二是鼓气可以避免微球形成过程中过早的沉淀到容器底部,导致微球还未完全固化定型时由于重力作用而发生变形,无法获得圆度较高的多孔微球。圆度高的多孔微球在核酸提取时,与核酸的接触面更为均匀,更有利于核酸的提取和纯化。
19、3、本申请中,乳液搅拌、有机溶剂挥发过程中,同时加入适量的羧基交联剂,可以在搅拌过程中逐渐对丙烯酸共聚物中的部分羧基进行交联,部分交联的丙烯酸共聚物与生物相容性聚合物形成半互穿聚合物网络结构,可以提高微球的稳定性,同时可以使得丙烯酸共聚物中剩余的羧基更加稳定的分布在多孔微球的表面,更有利于核酸的提取和纯化。
1.一种羧基化多孔微球的制备方法,其特征在于,步骤包括:
2.根据权利要求1所述的羧基化多孔微球的制备方法,其特征在于,步骤s1中所述生物相容性聚合物和所述丙烯酸共聚物的重量比为1:0.01-0.2。
3.根据权利要求1所述的羧基化多孔微球的制备方法,其特征在于,步骤s1中所述丙烯酸共聚物中丙烯酸的重量比例为1-50%。
4.根据权利要求1所述的羧基化多孔微球的制备方法,其特征在于,步骤s1中所述有机溶剂在1个大气压下的沸点不超过120℃。
5.根据权利要求1所述的羧基化多孔微球的制备方法,其特征在于,步骤s1中所述分散相的浓度为1-60wt%。
6.根据权利要求1所述的羧基化多孔微球的制备方法,其特征在于,步骤s1中所述油溶性乳化剂重量为所述分散相重量的1-10%。
7.根据权利要求1所述的羧基化多孔微球的制备方法,其特征在于,步骤s2中所述水溶性乳化剂和/或保护胶体在所述连续相中的重量含量为0.5-10wt%。
8.根据权利要求1所述的羧基化多孔微球的制备方法,其特征在于,步骤s3中所述分散相和所述连续相的重量比为0.1-1:1。
9.根据权利要求1所述的羧基化多孔微球的制备方法,其特征在于,步骤s3中所述持续搅拌至出现沉淀,在持续搅拌开始时从底部持续的通入气体。
10.根据权利要求1所述的羧基化多孔微球的制备方法,其特征在于,步骤s3中所述持续搅拌至出现沉淀,在持续搅拌开始时加入羧基交联剂。