专利名称：具有用于调节施加试剂的屏障的测定装置的制作方法
目录表为了方便起见，提供下面的目录表发明背景概述附图简述说明定义I、屏障控制的测定装置A、方法的原理B、本发明装置所共有的组件1、层析介质2、吸收体3、其它一些载带流体的部件4、过滤用多孔物质5、可相对(opposable)的组件6、基本上不能渗透流体的屏障7、被标记的组份C、采用垂直/横向流动的测定装置1、采用垂直/横向流动的基本测定装置2、具有邻接屏障的涂药器的、一个组件的测定装置3、在第一可相对的组件上具有涂药器的、两个组件的装置4、在第二可相对的组件上具有涂药器的、两个组件的装置5、具有过滤用多孔物质以便去除颗粒状物质的装置a、在引入再溶解的被标记的特异性结合对后在流体路线中具有过滤用多孔物质的装置b、在引入再溶解的被标记的特异性结合对前在流体路线中具有过滤用多孔物质的装置6、用于萃取拭子的装置7、用于竞争性免疫测定的装置D、各向异性流动的装置E、采用被分析物直接吸收到层析介质的装置II、顺序免疫层析法III、放大了的免疫层析法A、银放大的原理B、采用银放大的装置1、具有装在第二可相对的组件上的涂药器中的银盐的装置2、具有两个区段的涂药器以便提供清洗的装置3、具有基板和插入件的装置IV、酶免疫层析法A、酶标记的原理1、酶和底物的选择2、酶和特异性结合对成员的耦合B、适用于酶免疫层析法的装置例1——表明没有与对于贾第虫呈阴性的样品反应的例子例2——表明对贾第虫呈阳性的检测的试验例3——用于链球菌A的测定装置例4——用于酶免疫层析法的装置本发明的优点发明背景本发明针对用于确定样品特性的检验装置、成套的外壳、以及装有该检验装置和外壳的试剂盒，并针对采用该检验装置和外壳确定样品特性的方法。
在许多用于检测和/或确定被分析物的分析系统中，特别是在用于检测和/或确定生物学上感兴趣的被分析物的许多分析系统中，有层析测定系统。常常采用这样的一些系统测定的那些被分析物中有(1)荷尔蒙，例如，人类绒毛膜促性腺激素(hCG)，常被测定为人受孕的一种标志；(2)抗原，特别是对细菌、病毒及原生动物的病原体(例如链球菌、肝炎病毒及贾第虫)特异性的抗原；(3)抗体，特别是因病原体传染所导致的抗体，例如，对于细菌幽门螺杆细菌(Helicobacter pylori)以及对于人类免疫缺乏病毒(HIV)的抗体；(4)其它一些蛋白质，例如，血红蛋白，常在测定便潜血时测定这些蛋白质，便潜血是一些胃肠病症(例如，结肠癌)的一种早期指示；(5)酶，例如，天冬氨酸转氨酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酯酶、和谷氨酸脱氢酶，常作为生理功能和组织损伤的标志而被测定；(6)药物，包括治疗用药物，例如，抗生素、镇静剂和抗惊厥剂，还包括滥用的非法药物，例如，柯卡因、海洛因及大麻；(7)环境污染物，例如，杀虫剂和芳香烃；以及(8)维生素。
医生和医疗技术人员常采用这样的一些层析系统，用于在室内快速诊断和治疗监控各种各样的病症。越来越多的病人自己在家中使用它们来监控这样的一些病症。
在最重要的这样一些系统中，有“薄层”系统，在“薄层”系统中，溶剂横穿过一种薄的、平的吸收介质。可用这样的一些薄层系统进行的最重要的检测中，有免疫测定，免疫测定依赖于抗原或不全抗原和一种相应抗体之间的特异性相互作用。相当长的一段时间以来就已知道采用免疫测定作为检验有临床重要性的一些分子的存在和/或量的一种方法。早在1956年，J.M.Singer就报道了采用一种基于免疫的胶乳凝集试验用于检测与风湿性关节炎有关的一种因子(Singer等人，Am.J.Med.22888-892(1956))。
在用于免疫测定的那些层析技术中，有一种方法叫作免疫层析法(immunochromatography)。一般说来，这种技术采用一种显示试剂(disclosing reagent)或粒子，这种试剂或粒子已经与待测定的分子的一种抗体耦合，形成一种共轭物。然后，将这种共轭物与某种样品混合，而且，如果在这种样品中有待测定分子的话，则与上述显示试剂耦合了的那些抗体与待测定的分子结合，由此，指明有待测定的分子存在。可以通过颜色、磁性质、放射性、与另外的分子的特异反应性、或者其它物理或化学性质来鉴别上述显示试剂。所采用的特异性反应随被测定分子的性质和要待检样品的性质而变化。
免疫层析测定根据要检测的抗原——抗体配合物的性质和产生该配合物所要求的那些反应的顺序分为两个主要类别“夹层(sandwich)”免疫层析测定和“竞争性”免疫层析测定。要检测的抗原本身可以是一种抗体，例如，在对于幽门螺杆细菌特异性抗体的血清学测定中。在这样一些情况下，要检测的抗体可与一种特异性抗原结合。或者也可采用将第一抗体结合到要检测的被分析物上的一种被标记的第二抗体，来间接检测要检测的抗原。
一般说来，夹层免疫层析方法要求把可能含有要测定的被分析物的样品与被分析物的抗体混合。这些抗体是可动的，并且一般与一种标记物或一种显示试剂耦合，例如，已染色的胶乳、一种胶体金属溶胶或一种放射性同位素。然后，把这种混合物施加给一种层析介质，这种层析介质含有固定了的感兴趣的被分析物抗体的条带或区域。所述层析介质常常是类似于测杆的长条形状。当要测定的分子和被标记的抗体的配合物到达层析介质中的固定抗体的区域时，就发生结合，而且，结合了的被标记抗体就定位在所述区域。这表明存在有要测定的分子。这种技术可用来获得定量或半定量的结果。
Grubb等人的美国专利USP 4,168,146和Tom等人的美国专利USP4,366,241中，都说明了在试验条上所进行的夹层免疫测定的一些例子，在此引用这两篇专利作为参考。
在竞争性免疫测定中，标记物一般是一种被标记的被分析物或被分析物的类似物，这种被标记的被分析物或被分析物的类似物与存在于样品中的任何未被标记的被分析物竞争，以和抗体结合。竞争性免疫测定一般用于检测诸如不全抗原那样的被分析物，每种不全抗原都是单价的，并且只能结合一个抗体分子。Deutsch等人的美国专利USP 4,235,601、Liotta的美国专利USP 4,442,204以及Buechler等人的美国专利USP 5,208,535都公开了一些竞争性免疫测定装置的例子，此处引用所有这些文献作为参考。
目前可资利用的那些采用试验条的层析技术尽管有效，但还是有许多缺点。许多样品(例如粪便样品)包含可能堵塞层析介质孔的颗粒状物质，这大大妨碍了免疫层析过程。其它一些样品(例如血液)含有细胞和带颜色的组份，使得难于识别检验结果。既使样品不产生干扰，用现有的层析检验装置也常常难以把样品施加给层析介质，以便使样品向前均匀穿过层析介质，从而保证该样品到达以一种均匀、直线的方式出现结合的区域。由于待测定样品的性质或待进行测定的性质，目前可资利用的那些试验条中还有其它一些问题。在目前可资利用的许多试验条中，样品从施加点到经过固相上的特异性俘获带的通道的通过时间常导致在获得结果时所不希望有的时间延迟。此外，贵重的样品和试剂可能会损失在通往俘获区域途径中的那些组件的死角里。另外，目前可资利用的那些免疫层析试验条构造不适于进行酶免疫测定，因为这样的一些构造一般在试验条上留下活性酶的本底(background)，这在加入底物时可在试验条中产生强的本底，并可干扰检测被分析物，特别是在低浓度的情况下更是如此。
采用目前可资利用的那些构造，也不能进行清洗步骤，而该清洗步骤又常常是必需的，以便改善灵敏度并减弱本底。在装置中进行预培养步骤也是困难的，且在许多情况下还是不可能的。此外，还需要对于大量抗原的一种有效测定，例如，衣原体沙眼脂多糖(LPS)抗原，该抗原与在试验条中通常作为固相用的那些材料强有力地且非特异性地结合。
目前可资利用的那些用于免疫层析的装置和技术有样品制备和产生废物这样的一些其它问题。由感染了的血液和血液成份所传播的疾病(例如，艾滋病和肝炎)的更加流行使这些问题更加严重。几乎不可能给层析介质直接施加样品(例如粪便)或取样装置(例如，一个咽喉拭子)。在样品可被施加到层析介质前，通常需要几种萃取和预处理反应。通常由医生或技术人员在几个诸如试管或需要用转移装置(例如，移液管)的去除微粒(microfuge)管那样的小容器中进行试验来进行这些反应。然后，这些装置的每一个都被污染了，并且必须用专门的预防措施来处理，以便使工作者或可能不小心而接触了上述废弃物的人不受污染。对于目前可资医生或技术人员利用的那些层析装置，还有另外的限制，这就是它们不能进行双向和两维的层析法。长久以来就已知道这些技术是强有力的分析工具，但是，相对于简单的单向层析法来说，它们的复杂性已使得难于把它们在医生办公室或临床实验室中应用于试验条装置。
因此，需要一种改进的能处理广泛范围的层析测定的测定装置。这样的一种装置应该能处理所有类型的免疫测定，这包括夹层和免疫测定，以及采用层析法的其它类型的测定。这样的一种装置应该能直接容纳一种可能被污染过的样品或一个样品制备装置，以便不再需要萃取容器和转移装置。这样的一种装置优选为一个试验条形式，还应该能对带色的样品或含有颗粒状物质的样品进行免疫层析测定而不会有干扰，并且能把样品均匀平坦地传送到层析介质，以便改善试验的准确性和精度。此外，这样一种改进的试验条当在临床实验室或医生办公室使用时，应该能进行双向或两维层析法。而且，这样的一种试验条应该使进行测定所经历的时间耗费最少，并且使死体积最少，以便最为经济地使用样品和试剂。最后，这样的所改进的试验条应该为酶免疫测定提供较弱的本底。
概述我已开发出一种满足了这些需要的测定装置，并且为生物学上感兴趣的那些被分析物提供了改进的、重复性更好的测定，同时使测定简化。这种装置能进行所有类型的免疫测定，包括夹层免疫测定和竞争性免疫测定。这种装置还能进行放大了的免疫测定，在这种免疫测定中，通过酶反应或使用银来放大信号，以便放大由金标记物所产生的信号。这种装置还能用来测定直接与层析介质结合的被分析物，例如，脂多糖。
本发明的测定装置可由一个组件构成，但最好由两个或更多个可相对(opposable)的组件构成。当由两个或更多个可相对的组件构成时，测定装置利用压力把流体从一个可相对的组件转移到另一个可相对的组件，并且还驱使流体穿过层析介质和诸如过滤用多孔物质那样的部件。采用压力不仅加速该装置的操作，而且使得在单个装置内能进行其它一些步骤(例如萃取步骤)以便去除干扰性颗粒状物质组份。通过用连接器，例如在每个可相对的组件上的一些连锁部件，把那些可相对的组件放置在一起来产生压力。最好施加一个预定大小的压力，以便保证测定方法每个步骤性能最优化。
具有两个或更多个可相对的组件的装置可另外带有一个插入件，用于施加试剂。这种构造在进行放大了的免疫测定时特别有用。
另外，该装置能进行其它类型的特异性结合测定，例如(1)基于特异性结合蛋白质或糖蛋白的亲和性的测定，例如，基于植物凝血素、荷尔蒙受体、或对于它们的特异性配位体的病毒受体的亲和性的那些测定；(2)基于一些酶对于它们相应的底物或抑制剂的亲和性的测定；或者(3)按照Watson——Crick碱基配对规则，基于核酸(DNA或RNA)片段对于一种互补的核酸片段的亲和性的测定。
适于进行夹层免疫测定的、一种基本的单个组件形式的、本发明的一种装置包括(1)一种层析介质，这种层析介质具有一个第一端、一个第二端、以及第一和第二表面，并且在一个检测区域中具有对于固定到那里的被分析物的一种特异性结合对；(2)至少一个与上述第一和第二端中的至少一个可操作地接触(operable contact)的吸收体；以及(3)一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的屏障(barrier)，屏障至少有一个孔贯穿其中，用于把液体施加给上述层析介质，所述屏障至少部分地阻挡把液体施加给上述层析介质。
上述层析介质、吸收体、屏障和孔这样成形，使得通过上述至少一个吸收体穿过上述层析介质抽取施加给所述屏障的液体，从而使一种被分析物和用于该被分析物的检测试剂能在上述层析介质上的所述检测区域处形成一种三元配合物。
这种装置可用于检测被分析物的方法中，这种方法包括(1)使样品与用于上述被分析物的某种被标记的检测试剂的水溶液混合，以形成一种含有所述样品和上述被标记的检测试剂的溶液；(2)把上述含有所述样品和上述被标记的检测试剂的溶液施加给测定装置的所述孔；(3)使得上述含有所述样品和上述用于所述被分析物的被标记的检测试剂的溶液能够流过至少所述层析介质包括上述检测区域的那个部分；以及(4)通过观察和/或测定在上述检测区域处所结合的所述被标记的检测试剂来检测和/或确定在上述检验样品中的所述被分析物。
一种类似的一个组件的装置包括一个另外的部件，即一个邻接屏障的涂药器(applicator)。这个涂药器含有用于被分析物的一种被标记的检测试剂。检测试剂为这样的形式，即向涂药器中加入含水液体后它可以再溶解。该涂药器这样定位，使得上述屏障位于该涂药器和层析介质之间，并使得在再溶解特异性结合对之后穿过上述孔抽取施加到该涂药器上的样品，而且，然后通过上述至少一个吸收体穿过所述层析介质抽取所述施加给该涂器的样品，从而使上述被分析物和用于该被分析物的所述检测试剂可在上述层析介质中的检测区域处形成三元配合物。类似的工作原理用于包括一个组件和包括两个组件的本发明的其它装置。可按照需要，改变上述那些步骤的顺序，以便使得上述样品和其它一些试剂，例如，用于上述被分析物的被标记的特异性结合对，能被施加给所述层析介质并迁移穿过所述层析介质。
一种基本的、两个组件形式的装置包括(1)一个第一可相对的组件，该组件包括(a)一种层析介质，这种层析介质具有一个第一端、一个第二端、以及第一和第二表面，并且在一个检测区域中具有对于固定在其中的被分析物的一种特异性结合对；(b)与上述层析介质的第一和第二端中的至少一个可操作地接触的至少一个吸收体；以及(c)一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的屏障，此屏障有一个孔，用于把液体施加给所述层析介质，该屏障至少部分地阻挡把液体施加给所述层析介质；以及(2)一个第二可相对的组件，以便把至少一种反应物直接或间接地通过上述孔施加给所述层析介质。所述第一和第二可相对的组件这样成形，使得把该第一和第二可相对的组件相对即导致该第二可相对的组件把至少一种反应物通过上述孔直接或间接地施加给所述层析介质。
这样一种两个组件的测定装置的一种更完善的改型包括(1)一个第一可相对的组件，该组件包括(a)一种层析介质，这种层析介质具有一个第一端、一个第二端、以及第一和第二表面，并且在一个检测区域中具有对于固定在其上的被分析物的一种特异性结合对；(b)至少一个与上述层析介质的第一和第二端中的至少一个可操作地接触的吸收体；(c)一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的屏障，该屏障有一个孔，用于把液体施加给所述层析介质，所述屏障至少部分地阻挡把液体施加给上述层析介质；以及(d)一个邻接上述屏障的涂药器，这个涂药器含有用于被分析物的被标记的检测试剂，检测试剂具有这样的形式经向涂药器加入含水液体可被再溶解；以及(2)一个包括一个样品制备区域的第二可相对的组件。
涂药器这样定位，使得屏障位于该涂药器和层析介质之间，并使得在再溶解检测试剂后，穿过孔抽取施加给该涂药器的含水液体，而且，然后，通过至少一个吸收体穿过上述层析介质抽取所述施加给该涂药器的含水液体，从而使在上述层析介质上的检测区域处，被分析物和被标记的检测试剂形成一种三元配合物。第一和第二可相对的组件这样成形，使得把该第一和第二可相对的组件相对即导致样品制备区域与所述涂药器接触，从而使在该样品制备区域中的样品施加到所述涂药器，以再溶解上述可再溶解的检测试剂，并通过上述层析介质进行层析处理。
在一种类似的装置中，把涂药器转移给第二可相对的组件，样品施加给这个第二可相对的组件。
本发明的两个组件的装置的另一种改型装有过滤用多孔物质，用于去除与第一可相对的组件上的基本上不能渗透流体的屏障邻接的颗粒状物质，并且具有一个涂药器，这个涂药器含有用于在第二可相对的组件上的被分析物的一种可再溶解的被标记的特异性结合对。在一种可供选择的结构中，该涂药器可位于第一可相对的组件上，而且，过滤用多孔物质这样定位，使得施加到第一可相对的组件的样品在到达所述涂药器之前穿过上述过滤用多孔物质。
上述装置的另一种改型装有一个邻接涂药器的第一部分的基本上不能渗透流体的第二屏障以及一个分配膜，这个分配膜邻接该第二屏障，并与不邻接的该涂药器的第二部分可操作地接触，从而使流体可围绕该第二屏障从所述分配膜流到上述涂药器中。在装置的这种改型中，第二可相对的组件包括一个用于含有检验样品的一个拭子(swab)的插座(receptacle)。
在适于容纳一个在第二可相对的组件上的一个拭子的、上述装置的另一种改型中，第一可相对的组件包括一个邻接基本上不能渗透流体的第一屏障的分配膜，以便把流体引导到在基本上不能渗透流体的第一屏障中的第一孔，该第一可相对的组件还包括一个邻接上述分配膜的中央部分的、基本上不能渗透流体的第二屏障、一个涂药器以及一个表面屏障，这个涂药器含有可以再溶解形式的对于被分析物的一种被标记的特异性结合对，并定位于邻接屏障膜，从而使流体能从这个涂药器围绕上述第二屏障流到所述基本上不能渗透流体的第二屏障并不直接邻接的上述分配膜的部分，表面屏障中有一个第二孔贯穿其中，用于把液体施加给上述涂药器。
本发明的、适于进行夹层免疫测定的、一种两个组件的装置的另一种改型采用各向异性流动。这种装置包括(1)一个第一可相对的组件，该组件包括(a)一种层析介质，这种层析介质具有一个第一端、一个第二端、以及第一和第二表面，并在其中独立、离散且不重叠的区域中固定有(i)对于被分析物的一种特异性结合对的检测区域；和(ii)一个被分析物或被分析物类似物的对照区域；上述检测区域位于离开所述层析介质端点处的一点和所述层析介质的第一端之间，而所述对照区域位于离开上述层析介质的端点处的一点和所述层析介质的第二端之间；(b)一个与所述层析介质的第二端可操作地接触的吸收体；(c)一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的第一屏障，所述第一屏障有一个面积实际上比所述层析介质的面积小的第一施加面，第一施加面位于离开上述层析介质的端点处的某处，上述第一屏障至少部分地阻挡把液体施加给所述层析介质；(d)一个邻接上述第一屏障的涂药器，这个涂药器含有对于被分析物的一种被标记的特异性结合对，所述特异性结合对具有这样的形式，即通过向涂药器加入一种含水液体而可再溶解，该涂药器这样定位使得在上述第一施加而把液体施加给所述层析介质；以及(e)一个邻接上述涂药器的、基本上不能渗透流体的第二屏障，这个第二屏障这样定位，以便至少部分地阻挡把液体施加给该涂药器，并使得能穿过一个第二施加面把液体施加给该涂药器，这个第二施加面实际上比所述层析介质的面积小，并且定位在距上述层析介质的第二端比距所述层析介质的第一端更近；以及(2)一个包括一个样品制备区域的第二可相对的组件。
在这种装置中，第一和第二可相对的组件这样成型，使得把该第一和第二可相对的组件相对即导致样品制备区域与第二屏障接触，并与第二施加面接触，从而使在该样品制备区域中的样品穿过该第二施加面施加给涂药器，并基本上横过该涂药器的整个长度，以把所述样品和再溶解的被标记的特异性结合对穿过上述第一施加面施加给层析介质。
本发明的一种测定装置的另一种改型适于对被分析物进行免疫测定，例如，对直接与层析介质结合的脂多糖进行免疫测定。这样的一种装置可包括(1)一个第一可相对的组件，该组件包括(a)一种层析介质，这种层析介质具有一个第一端、一个第二端、以及第一和第二表面，所述层析介质对被分析物所具有的亲和性足以把被分析物从含有该被分析物的含水溶液中固定到这种层析介质上；(b)一个与上述层析介质的第一端可操作地接触的涂药器，这个涂药器含有对于上述被分析物的一种被标记的特异性结合对，所述特异性结合对具有这样的形式，即通过给涂药器加入一种含水液体而可以再溶解；(c)一个与上述层析介质的第二端可操作地接触的吸收体；以及(d)一个邻接上述层析介质的第一表面的，基本上不能渗透流体的屏障，这个屏障有一个孔用于把液体施加给所述层析介质，所述屏障至少部分地阻挡把液体施加给所述层析介质；以及(2)一个包括一个样品制备区域的第二可相对的组件。
在这种装置中，第一和第二可相对的组件这样成形，使得把该第一和第二可相对的组件相对即导致样品制备区域与屏障接触，从而使得在该样品制备区域中的样品施加给层析介质，并且使在检验样品中的被分析物至少在孔附近固定在所述层析介质上。
本发明的测定装置还有另一种改型特别适用于进行顺序免疫测定(sequential immunoassay)，其中，在开始标记步骤前完成俘获步骤(capture step)。这样的一种装置可包括(1)一个第一可相对的组件，该组件包括(a)一种层析介质，这种层析介质具有一个第一端、一个第二端、以及第一和第二表面，并且在一个检测区域中具有固定在其上的一种特异性结合对；(b)一个与上述层析介质的第一端可操作地接触的样品制备区域；(c)一个与上述层析介质的第二端可操作地接触的第一吸收体；以及(d)一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的屏障，这个屏障有一个孔用于把液体施加给所述层析介质，所述屏障至少部分地阻挡把液体施加给上述层析介质；以及(2)一个第二可相对的组件，该组件包括(a)一个涂药器，这个涂药器含有对于被分析物的一种被标记的特异性结合对，所述特异性结合对具有这样的形式，即通过给所述涂药器加入一种含水液体而可以再溶解；该涂药器这样定位，使得当把所述第一和第二可相对的组件相对时，该涂药器与上述屏障接触，从而使再溶解的被标记的特异性结合对穿过上述屏障中的孔施加给所述层析介质；以及(b)第二和第三吸收体，它们这样定位，使得当把上述第一和第二可相对的组件相对时，该第二吸收体和第三吸收体与上述层析介质的一些部分可操作地接触，从而使该第二和第三吸收体从所述层析介质中去除流体。
本发明的测定装置的另一种改型适于进行其中用银放大一种金标记物的免疫测定。这样的一种装置可包括(1)一个第一可相对的组件，该组件包括(a)一种层析介质，这种层析介质具有一个第一端、一个第二端、以及第一和第二表面，并且在一个检测区域中具有对于固定在其上的被分析物的一种特异性结合对；(b)一个与上述层析介质的第二端可操作地接触的吸收体；(c)一个与上述层析介质的第一端可操作地接触的导体；(d)一个共轭物区域，这个共轭物区域含有对于用一种金溶胶标记的上述被分析物的一种特异性结合对，所述特异性结合对具有这样的形式，即通过给所述共轭物区加入一种含水液体而可以再溶解；这个共轭物区域与上述导体直接接触，并与上述层析介质的第一端间接接触；(e)一个用于施加一种检验样品的样品制备区域，这个样品制备区域与上述共轭物区域直接接触，上述导体、共轭物区域及样品制备区域这样定位，使得该共轭物区域接通所述样品制备区域和上述导体；以及(f)一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的屏障，此屏障有一个孔用于把液体施加给上述层析介质，该屏障至少部分地阻挡把液体施加给所述层析介质；以及(2)一个第二可相对的组件，该组件包括(a)一个涂药器，这个涂药器含有通过给涂药器加入一种含水液体而可以再溶解形式的(A)一种可溶解的银盐，和(B)一种还原剂，该涂药器这样定位，使得当把上述第一和第二可相对的组件相对时，该涂药器与上述屏障接触，从而使被再溶解的银盐和还原剂穿过上述屏障中的孔施加给所述层析介质；以及(b)第二和第三吸收体，该第二和第三吸收体这样定位，使得当把上述第一和第二可相对的组件相对时，该第二吸收体和第三吸收体与上述层析介质的一些部分可操作地接触，从而使该第二和第三吸收体从所述层析介质中去除流体。
在一种类似的装置中，第二可相对的组件包括含有两个区段的一个涂药器，第一区段用于容纳一种含水液体，而第二区段含有可以再溶解形式的一种可溶解的银盐和一种还原剂。在这种装置中，所述涂药器这样定位，使得当把第一和第二可相对的组件相对时，该涂药器的第一区段与上述屏障中的孔直接接触，而该涂药器的第二区段与所述孔间接接触，从而使所述含水液体首先施加给层析介质，以便提供清洗，随后，把含水的银盐和上述还原剂施加给所述层析介质。
本发明适于进行银放大的免疫测定的测定装置的另一种改型装有一个基板(base panel)和一个插入件(insert)。这种装置可包括(1)一个基板，这个基板包括(a)一个第一可相对的组件，这个组件包括(i)一种层析介质，这种层析介质具有一个第一端、一个第二端以及第一和第二表面，并且在一个检测区域中具有对于固定在其上的被分析物的一种特异性结合对；(ii)一个共轭物区域，这个共轭物区域含有通过向该共轭物区加入一种含水液体而可以再溶解形式的对于用一种金溶胶标记的上述被分析物的一种特异性结合对，该共轭物区域与上述层析介质的第一端可操作地接触；(iii)一个与上述共轭物区域可接触地接触的导体，该共轭物区域接通上述层析介质的第一端和所述导体；以及(iv)一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的屏障，这个屏障有一个孔用于把液体施加以所述层析介质，该屏障至少部分地阻挡把液体施加给所述层析介质；(b)一个第二可相对的组件，该组件包括(i)一个用于含有某种检验样品的一个拭子的第一插座；(ii)一个用于给上述拭子添加至少一种萃取试剂的井(well)；以及(iii)一个与上述插座和井分开的第一吸收体；以及(c)一个第二插座，这个第二插座用于稳固插入件，避免插入件表面的相对运动以及上述第一和第二可相对的组件的相对运动；以及(2)一个插入件，此插入件包括(a)一个涂药器，这个涂药器含有通过给涂药器加入一种含水液体而可以再溶解形式的(A)一种可溶解的银盐，和(B)一种还原剂；(b)一个第二吸收体；(c)一个第三吸收体；以及(d)一个用于插入到上述基板的第二插座中的凸出物(protrusion)。
第一和第二可相对的组件这样成形，使得当把它们相对时，使第一吸收体与层析介质的一部分接触，并使插座与导体接触。插入件这样成形，使得当把凸出物插入基板的第二插座中时，涂药器与孔可操作地接触，以便把该涂药器的所含之物穿过所述孔施加给上述层析介质，而且，第二和第三吸收体各自都与所述层析介质的一部分可操作地接触，以便从所述层析介质中抽取流体。
一种类似的装置可进行酶放大的免疫测定。在这种装置中，插入件的涂药器含有可以再溶解形式的用于一种酶标记物的底物，这种酶标记物与对于被分析物的一种特异性结合对结合。该酶标记物通过催化涉及所述底物的一种反应来产生一种不溶解的可检测的产物。
本发明的测定装置的其它一些改型适于进行竞争性免疫测定。一般说来，适于进行竞争性免疫测定的改型包括(1)一种层析介质，这种层析介质具有一个第一端、一个第二端以及第一和第二表面，并在一个检测区域中具有固定在其上的一种辅助的特异性结合对(Secondary specific binding partner)，这种辅助的特异性结合对能够结合对被分析物缺少亲和性的一对特异性结合对的一个成员；(2)至少一个与上述层析介质的第一和第二端中的至少一个可操作地接触的吸收体；(3)一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的屏障，该屏障至少有一个孔用于把液体施加给所述层析介质，所述屏障至少部分地阻挡把液体施加给所述层析介质；以及(4)一个邻接上述屏障的亲和性膜，该亲和性膜含有对于固定到其上的被分析物的一种特异性结合对。上述层析介质、吸收体、屏障、孔和亲和性膜这样成形，使得通过上述至少一个吸收体穿过所述层析介质抽取施加到亲和性膜的液体，从而，如果样品中有被分析物的话，一种被标记的检测试剂结合在上述层析介质中的检测区域处。
可通过包括一个第二组件来使这种装置完善，这个第二组件包括一个涂药器，该涂药器含有通过向涂药器中加入一种含水流体而可以再溶解形式的一种被分析物的类似物，这种被分析物的类似物包括被分析物，该被分析物与对于此被分析物缺少亲和性的特异性结合对的一个成员共价结合，并且可被该特异性结合对结合，所述被分析物的类似物用一种可检测的标记物标记。
附图简述参照下面的说明、所附的权利要求书及附图将会更好地了解本发明的这些和其它特征、情况及优点，其中
图1画出了本发明的一种基本的单个组件的测定装置的侧视图；图2画出了装有邻接屏障的涂药器的一种单个组件的装置的侧视图；图3A是本发明的一种两个组件的测定装置的图，显示了各个独立的组件；在第一个组件上有层析介质、屏障、和涂药器，在第二个组件上有一个样品制备装置；图3B画出了图3A的两个组件的测定装置的第一个组件的侧视图，示出了屏障、孔和涂药器；图4A是本发明的一种两个组件的测定装置图，这种测定装置在第一个组件上具有层析介质、屏障和孔在第二个组件上有一个涂药器；图4B是穿过图4A的两个组件的测定装置的第一个组件的线B——B’的剖面图，显示了屏障和孔；图5A是本发明的一种两个组件的测定装置的图，这种测定装置在第一个组件上具有层析介质、屏障、孔和过滤用多孔物质膜，而在第二组件上有一个涂药器；图5B是穿过图5A的两个组件的测定装置的第一个组件的线C——C’的剖面图，显示了屏障、孔和过滤用多孔物质膜；图6A是本发明的另一种两个组件的测定装置的图，这种测定装置在第一个组件上具有层析介质、屏障、孔、涂药器和过滤用多孔物质膜，而在第二个组件上具有一个样品制备区域；图6B是穿过图6A的两个组件的测定装置的第一个组件的线D——D’的剖面图，显示了屏障、孔、涂药器和过滤用多孔物质膜；图7A是本发明的、适于在一个拭子上的样品的、另一种两个组件的测定装置的图，这种测定装置在第一个组件上具有层析介质、一个第一屏障、一个孔、一个涂药器、一个第二屏障、和一个分配膜，而在第二个组件上具有用于拭子的插座；图7B是穿过图7A的两个组件的测定装置的第一个组件的E——E’线的剖面图，显示了第一屏障、孔、涂药器、第二屏障和分配膜；图8A是本发明的、适于采用在一个拭子上的样品进行夹层免疫测定的一种两个组件的测定装置的图，这种测定装置具有一个涂药器，该涂药器邻接一个屏障膜并含有对于被分析物的可再溶解的、被标记的特异性结合对；图8B是沿着线F——F’、穿过图8A的两个组件的测定装置的第一个组件和层析介质的剖面图，显示了层析介质、第一屏障和孔、分配膜、第二屏障、涂药器以及表面屏障和孔；图9A是本发明的、适于进行竞争性免疫测定的、一种两个组件的测定装置的图，这种测定装置装有层析介质、一个屏障、一个孔和一个亲和性膜；图9B是沿着图9A的两个组件的测定装置的第一个组件的线G——G’的剖面图，显示了层析介质、屏障、孔和亲和性膜的细节；图10A是本发明的、在几个部件中采用各向异性流动的、一种两个组件的测定装置的图，这种测定装置装有两个屏障、一个涂药器和一种层析介质；图10B是沿着图10A的两个组件的测定装置的第一个组件的一个侧视图的线H——H’的剖面图，显示了层析介质、两个屏障和涂药器的细节；图11A是本发明的一种两个组件的测定装置的图，这种测定装置适于测定直接与层析介质直接结合的被分析物，例如，脂多糖；图11B是沿着图10A的两个组件的测定装置的第一个组件的线I——I’的剖面图，显示了层析介质、涂药器、吸收体、屏障和孔的细节；图12A是本发明的、适于顺序测定某种被分析物的、一种两个组件的测定装置的图，在这种测定装置中，在进行标记步骤之前，进行待测定的抗原的固定抗体的俘获；图12B是沿着图12A的两个组件的测定装置的第一个组件的线J——J’的剖面图，显示了层析介质、涂药器、吸收体、屏障和孔的细节；图13A是本发明的、适于进行被分析物的一种放大了的测定的、一种两个组件的测定装置的图，在这种测定装置中，通过用金标记来检测所述被分析物，并且用银来放大金标记物的信号；图13B是沿着图13A的两个组件的测定装置的第一个组件的线K——K’的剖面图，显示了层析介质、与所述层析介质直接或间接接触的那些部件、屏障和孔的细节；图14A是本发明的、适于采用银放大进行被分析物测定的、一种两个组件的测定装置的图，在这种测定装置中，在银放大步骤前，提供清洗；图14B是沿着图14A的两个组件的测定装置的第一个组件的L——L’线的剖面图，显示了层析介质、与所述层析介质直接或间接接触的那些部件、屏障和孔的细节；图15A是本发明的一种测定装置的图，这种测定装置采用了一种两个组件的基板和一个插入件，并且适于采用一种金标记物对被分析物进行银放大的测定；图15B是沿着图15A的测定装置的基板的第一个组件的M——M’线的剖面图，显示了层析介质、与所述层析介质直接或间接接触的那些部件、屏障和孔的细节；图16A是本发明的一种测定装置的图，这种测定装置采用了一种两个组件的基板和一个插入件，并且适于采用一种酶标记的抗体来进行酶免疫测定，且采用一种形成某种不溶解的产物的底物；图16B是沿着图15A的测定装置的基板的第一个组件的线N——N’的剖面图，显示了层析介质、与所述层析介质直接或间接接触的那些部件、屏障和孔的细节；图17A是本发明的一种测定装置的图，这种测定装置采用了一种两个组件的基板和一个适于酶免疫层析法的插入件，并且在该装置的基板的第一个组件上装有对于用一种酶标记的被分析物的一种特异性结合对；图17B是沿着16A的测定装置的基板的第一个组件的线O——O’的剖面图，显示了层析介质、与所述层析介质直接或间接接触的那些部件、屏障和孔的细节；以及图18是图7A和7B所示的装置的一种简化了的改型的剖面图，且这种简化了的改型装置用于检测下面实施例2中的寄生虫贾第虫。
说明定义在本公开文本的范围内，如无另外指明，则按如下定义下述术语特异性结合对一对分子的一个成员，这对分子借助特异性的非共价相互作用而互相作用，这些相互作用取决于所涉及的那些分子的三维结构。一些特异性结合对的典型配对包括抗原——抗体、不全抗原——抗体、荷尔蒙——受体、核酸链——互补的核酸链、底物——酶、抑制剂——酶、碳水化合物——植物凝血素、生物素——抗生物素蛋白以及病毒——细胞受体。可操作地接触两个固体组件当以这样一种方式直接或间接接触时叫作可操作地接触，即一种含水液体可通过毛细管作用或其他作用可从两个组件之一基本上不间断地流到另一个组件。“直接接触”是指两个部件进行直接的物理接触，例如，边对边或正面对背面的接触。一般来说，当两个组件直接接触时，它们有约0.5mm到约3mm的搭接部分重叠。不过，可用一些对接的边来放置这些组件。“间接接触”是指两个组件没有直接接触，但用一个或多个导体接通。有限容积当一个吸收体在其所的装置中进行正常测定期间，被容纳的液体饱和时，该吸收体具有有限容积。此时，该吸收体能释放附加的所吸收的液体(additional liquid absorbed)，并至少部分变得有传导性。被分析物术语“被分析物”包括待测定的实际分子以及该分子的一些类似物和衍生物，后一种情况是在这样的一些类似物和衍生物以一种实际上等效于被分析物本身的方式与用于测定的另一种分子结合时的情况。抗体术语“抗体”包括适宜特异性的完整抗体分子和抗体碎片(包括Fab、F(ab’)和F(ab’)2碎片)以及化学改性的完整抗体分子和抗体碎片，包括通过体外亚单元的重新结合所组成的混合抗体。辅助的特异性结合对当一对特异性结合对相互作用时，与这对特异性结合对的一个成员结合的另一种特异性结合对就叫作辅助的特异性结合对。例如，一对特异性结合对可包括贾第虫抗原和兔抗贾第虫抗体。在这种情况下，辅助的特异性抗体可以是山羊抗兔IgG抗体。辅助的特异性结合对可以对于它所结合的一种抗体特异性结合对的种、类或子类有特异性。或者当那些特异性结合对中的一个用生物素标记时，辅助的特异性结合对可包括与抗生物素蛋白共轭的一种分子。I、屏障控制的测定装置本发明的一个方面是可用于免疫测定和其它依赖于特异性结合相互作用的一些测定的屏障控制的测定装置。本发明的装置特别适用的两种类型的测定是夹层免疫测定和竞争性免疫测定。A、方法的原理本发明的所有装置都具有层析介质，一个基本上不能渗透流体的屏障邻接这种层析介质。该屏障至少部分地阻挡把液体施加给所述层析介质。所述屏障有一个孔贯穿其中，用于把液体施加到所述层析介质。一般来说，所述孔实际上小于上述屏障；它的形状最好是一条线或狭缝。
在某些情况下，打算使流体在测定步骤进行过程期间通过孔施加给层析介质。当层析介质的两端都结合有吸收体时就是这种情况。在另外一些情况下，液体可通过层析介质端部之一并通过孔进入所述层析介质。在所有情况下，打算使液体能在一个近似垂直于层析介质平面的方向上从上述孔流入所述层析介质。这种并非在一个层析介质平面内的流动是本发明的测定装置的一个特性。这些流动特性导致在本发明的装置中更有效的流动以及更有效地利用试剂。
尽管本发明的基本原理可用于一种单个组件的测定装置，一般来说，最好还是用来构造那些包含两个或更多可相对的组件的测定装置，这些可相对的组件用一个合叶(hinge)连接，并可用诸如锁扣那样的一些连接器固定。这使得能给组件施加压力，以便驱动流体从一个组件到另一个组件，并加快流速。在另外一些情况下，装置包括两个可相对的组件，其中一个组件具有一个定位插入件的插座。这种构造特别适用于酶免疫层析测定及涉及信号放大的那些测定，例如，用银放大的金溶胶标记的测定。B、本发明装置所共有的组件有大量的组件对于本发明的测定装置是共同的，为方便起见，这里作些讨论。1、层析介质层析介质为一个条。一般来说，这个条基本上是平面形状的，尽管并不要求在所有的应用中都是这样。它一般是矩形形状，具有第一和第二端以及第一和第二表面。本发明书从头至尾，术语“第一端”是指液体首先施加给层析介质的那端，而术语“第二端”是指所述层析介质的对面的那个端点。施加在层析介质的第一端处或其附近的液体可以是，但并非必须是一种样品或一种被处理过的样品。层析介质由适用作被分析物及被分析物——抗体共轭物的薄层层析法的介质的材料构成，例如，硝化纤维、耐纶、人造纤维、纤维素、纸或二氧化硅。可按照需要对层析介质进行预处理或进行改性。层析介质一般是半透明的，从而可从每一侧都能见到在其上所呈现的带颜色的区域。2、吸收体在本发明的许多装置中，吸收体与层析介质的一端或两端可操作地接触。吸收体可由任何吸水材料制成，该材料会足够地保持一种含水液体，以使液体能穿过层析介质被抽取，并聚集在所述吸收体中。典型的材料包括但并不限于滤纸。3、其它一些载带流体的部件如下所述，在本发明的一些特定的装置中，其它一些载带流体的部件也可用作样品制备区域、涂药器、分配膜和/或导体。用亲水性介质制备这些部件，这种介质使一些含水流体通过，而基本上不会吸收它们。这种材料在本领域中众所周知。在某些情况下，这些部件可在其中装有一个干燥形式的组件，这个组件可通过给其加入一种含水液体而可以再溶解。4、过滤用多孔物质本发明的某些装置至少装有一种过滤用多孔物质的部件，以便去除存在于粪便物质或其它一些样品中的那些颗粒状物质组份。可以选择地，过滤用多孔物质可去除孔隙度为0.22μm或0.45μm的整个细胞或细菌。选择适当的过滤用多孔物质材料对于一个本领域普通技术人员来说是熟知的；可采用各种多孔或微孔材料，这些材料包括包某些干酪用的那种纱布、纸、棉花、纤维素、硝化纤维或适当性能的醋酸纤维素。5、可相对的组件本发明的测定装置的许多实施方案均包括两个可相对的组件。这些可相对的组件的主体最好用叠层纸板制成，该叠层纸板足以防潮，以便在进行所述装置所的测定时含有所涉及的那些液体。还可采用一些其它基于纤维素的材料，例如，纸板或固态漂白的亚硫酸酯(SBS)。可以选择地，可相对的组件的主体可由防潮的塑料制成。一种合适的塑料是聚碳酸酯塑料，例如，LexanSM。
最好用一种由某种不能渗透含水液体的材料制成的合叶来连接那些可相对的组件，例如，可与用于第一和第二可相对的组件的材料相容地连接的或与该材料相同的某种塑料。6、基本上不能渗透流体的屏障本发明的所有装置都装有至少一个基本上不能渗透流体的屏障。这种基本上不能渗透流体的屏障可由塑料、纸板或纸制成，例如由一种具有粘合剂的背衬的纸条制成。一般来说，基本上不能渗透流体的屏障比那些可相对的组件薄。基本上不能渗透流体的屏障只需在测定期间基本上不能渗透流体，一般约一分钟到约十分钟。7、被标记的组份对于打算用于进行夹层免疫测定的那些测定装置，被标记的组份一般是对于被分析物的一种被标记的特异性结合对。标记物最好是一种可目视检测的标记物，例如，一种胶体金属标记物。胶体金属标记物优选是金、银、青铜、铁或锡；最好是金。在“Immunocy to chemistryModern methods and applications”(J.M.Polak和S.Van Noorden，eds.，Wright，Bristol，England，1986，ch.8，pp.115～145，)中，在J.DeMey的“The Preparation and Use of GoldProbes”中说明了制备金标记的抗体和抗原，此处引用这篇文献作为参考。用胶体金标记的抗体可从市场上买到，例如，从Missouri的St.Louis的Sigma化学公司可买到。
也可以选用其它胶体标记物，例如，一种胶体硫标记物或一种染料——二氧化硅标记物。在一个比较不可取的、可供选择的例子中，可目视检测的标记物可以是一种胶体胶乳标记物。还可以采用其它一些标记物，例如，一种放射性标记物。
本发明的一个特定的实施方案采用了一些酶标记的组份。下面讨论这些内容。C、采用垂直/横向流动的测定装置1、采用垂直/横向流动的基本测定装置本发明的、在一个单个组件中采用垂直/横向流动的一种装置包括(1)一种层析介质，这种层析介质具有一个第一端、一个第二端以及第一和第二表面，并且在一个检测区域中具有对于固定到其上的被分析物的一种特异性结合对；(2)至少一个与上述第一和第二端中的至少一个可操作地接触的吸收体；以及(3)一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的屏障，屏障至少有一个孔贯穿其中，用于把液体施加给所述层析介质，所述屏障至少部分地阻挡把液体施加给所述层析介质。
在这种装置中，上述层析介质、吸收体、屏障和孔这样成形，使得通过上述至少一个吸收体穿过所述层析介质抽取施加给上述屏障的液体，从而使一种被分析物和用于这种被分析物的一种检测试剂可在所述层析介质上的检测区域处形成一种三元配合物。
一般说来，测定装置包括至少两个吸收体，一个吸收体与层析介质的第一端可操作地接触，一个与所述层析介质的第二端可操作地接触。检测区域最好实际上小于上述层析介质的面积，而所述层析介质最好还包括固定到那里的被分析物或被分析物类似物的一个对照区域，这个对照区域的面积实际上比上述层析介质小，并且不与所述检测区域重叠。在这种结构中，对于孔和那些吸收体而言，这样定位所述对照和检测区域，使得该检测区域在所述孔和上述那些吸收体中之一之间，而该对照区域是在所述孔和另一个吸收体之间。
一般说来，测定装置还包括一个邻接层析介质的第二表面的、基本上透明的衬底，即邻接不与屏障和孔邻接的那个表面的、基本上透明的衬底。这就使得能观察所述层析介质、结合到那里的用于检测被分析物的那些试剂的带或区。所述屏障和在该装置的使用者视线中的其它一些组件也可用透明材料制作。
在一种优选的结构中，孔的面积实际上小于屏障，而且对于层析介质这样定位该屏障，使液体只能穿过上述孔进入邻接该屏障的所述层析介质的区域。
一般说来，层析介质和至少一个吸收体基本上是平面形状的，且屏障位于基本上平行于所述层析介质平面的一个第二平面中。
图1中画出了一种基本的、单个组件的装置。装置10有一种平面层析介质12，层析介质12有一个第一端14、一个第二端16、以及第一表面18和第二表面20。层析介质12在一个检测区域22中具有对于固定在其上的被分析物的一种特异性结合对，检测区域22实际上比层析介质12的面积小。层析介质12最好还包括固定到那里的被分析物或被分析物的类似物的一个对照区域24，对照区域24的面积比层析介质12实际上要小，并且不与检测区域22重叠。
装置10还有一个第一吸收体26和一个第二吸收体28，第一吸收体与层析介质12的第一端14可操作地接触，而第二吸收体28与层析介质12的第二端16可操作地接触。
装置10还有一个邻接层析介质12第一表面18的、基本上不能渗透流体的屏障30。屏障30有一个孔32贯穿其中，用于把液体施加给层析介质12。孔32的面积实际上小于屏障30，从而使液体可只穿过孔32进入邻接屏障30的层析介质12的区域。
层析介质12和吸收体26及28最好实际上在一个平面内，而屏障30最好位于一个基本上平行于由层析介质10以及吸收体26和28所确定的平面的第二平面中。对照区域24和检测区域22关于孔32和吸收体26及28这样定位，使得检测区域22在孔32和所述吸收体中的一个之间，而对照区域24是在孔32和所述吸收体中的另一个之间。在这种装置中，在层析介质12中的流动关于穿过屏障30中的孔32所施加的流体是各向同性的。
测定装置10还可包括一个邻接层析介质12的第二表面20的、基本上透明的衬底34。
在工作时，要被测定的样品与对于要被测定被分析物的一种被标记的特异性结合对的一种含水溶液混合，以便形成一种含有所述样品和被标记的特异性结合对的溶液。把该含有上述样品和被标记的特异性结合对的溶液施加给孔32，并使所述含有上述样品和被标记的特异性结合对的溶液能至少穿过包括检测区域22及对照区域24(如果有的话)的层析介质12的那个部分流动。然后，通过观察和/或测定在检测区域22中的上述被标记的特异性结合对来检测和/或确定上述被分析物。对于该被分析物的所述被标记的特异性结合对，与在对照区域24中的该被分析物或类似物结合，表明试验进行得正确。从孔32到对照区域22和检测区域34的流动方向不同，这是本发明的测定装置的一个特征。这样，含有上述样品和被标记的特异性结合对的同样流体并不与检测区域22和对照区域24这两者接触。
用于这种测定装置的典型的样品体积是5μl到100μl，更典型地，是10μl到40μl。一般说来，在约30秒到约5分钟的范围，在层析介质中出现流动，这取决于所述层析介质的尺寸和制作所述层析介质的材料，更典型地在约1分钟到2分钟的范围内。测定一般在室温进行，但如果需要的话，且如果试剂足够稳定，可在升高了的温度37℃进行测定，以便加速层析和反应。如果需要的话，还可在低至约4℃的较低温度进行测定，以增强所用试剂的稳定性。2、具有邻接屏障的涂药器的、一个组件的测定装置本发明的测定装置的一种进一步的发展是一种具有邻接屏障的涂药器的、一个组件的测定装置。该涂药器含有通过向涂药器加入一种含水液体而可以再溶解形式的对于被分析物的一种被标记的特异性结合对。这样就不需要制备样品和一种被标记的特异性结合对的一种单独的溶液、并把该溶液施加给所述装置。
这种装置包括(1)一种平面形的层析介质，这种层析介质具有一个第一端、一个第二端以及顶面和底面，并且如上所述，在一个检测区域中具有对于固定在其上的被分析物的一种特异性结合对；(2)至少一个与上述层析介质的那些端点中的至少一个可操作地接触的吸收体；(3)一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的屏障，屏障有一个孔贯穿其中，用于如上所述把液体施加给所述层析介质；以及(4)一个邻接所述屏障的涂药器，这个涂药器含有通过向涂药器加入一种含水液体而可以再溶解形式的对于被分析物的一种被标记的特异性结合对。
涂药器这样定位，使得屏障位于该涂药器和层析介质之间，并且使得在再溶解特异性结合对之后穿过孔抽取施加给该涂药器的一种样品，且然后通过那些吸收体穿过上述层析介质抽取施加给该涂药器的那种样品，从而使被分析物和对于该被分析物的上述被标记的特异性结合对在所述层析介质上的检测区域处形成一种三元配合物。这种三元配合物是夹层免疫测定的特征。
当采用上述装置时，这种装置最好包括一个在层析介质上的对照区域、一个第二吸收体，从而使在所述层析介质两端都有吸收体，且该装置最好还包括一个邻接层析介质的第二表面的、基本上透明的衬底，即邻接不与屏障邻接的那个表面的、基本上透明的衬底。
图2画出了这种装置。装置40有一种平面层析介质42，层析介质42具有一个第一端44和一个第二端46以及第一表面48和第二表面50。层析介质42在一个检测区域52中具有对于被固定了的被分析物的一种特异性结合对，并且最好还具有一个对照区域54。该装置有一个第一吸收体56和一个第二吸收体58，第一吸收体56与层析介质42的第一端44可操作地接触，而第二吸收体58与层析介质42的第二端46可操作地接触。
上述装置还具有邻接层析介质42的第一表面48的、基本上不能渗透流体的屏障60。屏障60有一个孔62贯穿其中，用于把液体施加给层析介质42。如上所述，孔62的面积实际上比屏障60小。
装置40还有一个邻接屏障60的涂药器64。涂药器64含有通过向涂药器64加入一种含水液体而可以再溶解形式的一种被标记的特异性结合对。涂药器64这样定位，使得屏障60在涂药器64和层析介质42之间。在再溶解上述特异性结合对后，穿过孔62抽取施加给涂药器64的一种样品，并且，然后通过第一和第二吸收体56和58穿过层析介质42抽取样品。这种结构使得在上述样品中的被分析物和对于该被分析物的被标记的特异性结合对能在层析介质42上的检测区域52处形成一种三元配合物。这种结构还使对于上述被分析物的所述被标记的特异性结合对能在对照区域54中与该被分析物或被分析物的类似物结合，以便表明测定进行得正确。
上述装置还有一个邻接层析介质42的第二表面50的基本上透明的衬底66。
在使用时，把样品施加涂药器64，并使该样品能在涂药器64中再溶解被标记的特异性结合对，以便形成含有一种样品和所述被再溶解的被标记的特异性结合对的一种溶液。然后，使这种含有所述样品和被再溶解的被标记的特异性结合对的溶液能穿过孔62且之后至少流过包括检测区域52和区域54(如果有的话)的层析介质42的一部分。然后，通过观察在检测区域52和/或对照区域54处有一些可视的带，进行检测和/或确定上述被分析物。3、在第一可相对的组件上具有涂药器的、两个组件的装置本发明的装置的进一步的发展是一种至少具有两个组件的装置，用一种合叶来连接第一和第二可相对的组件。
至少装有两个可相对的组件的装置的实施方案包括(1)一个第一可相对的组件，该组件包括(a)一种层析介质，这种层析介质具有一个第一端、一个第二端以及第一和第二表面，并在一个检测区域中具有对于固定在其上的被分析物的一种特异性结合对；(b)至少一个与上述层析介质的第一和第二端中的至少一个可操作地接触的吸收体；以及(c)一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的屏障，此屏障有一个孔用于把液体施加给所述层析介质，该屏障至少部分地阻挡把液体施加给所述层析介质；以及(2)一个可相对的第二组件，以便穿过上述孔把至少一种反应物直接或间接地施加给所述层析介质。
在这种装置中，第一和第二可相对的组件这样成形，使得把该第一和第二可相对的组件相对即导致所述第二可相对的组件把至少一种反应物穿过上述孔施加给层析介质。
最好能使第一和第二可相对的组件保持相对，从而使压力便于把至少一种反应物穿过上述孔施加给层析介质。
在本发明的、采用两个可相对的组件的装置的一个优选实施方案中，第一可相对的组件具有一种层析介质、一个屏障以及一个含有对于被分析物的一种特异性结合对的涂药器。第二可相对的组件具有一个样品制备区域，样品施加给这个样品制备区域。这种装置还具有使所述这些可相对的组件相对并向那里施加压力的装置。该压力足以使流体从一个可相对的组件沿一个基本上垂直该可相对的组件的方向转移到另一个可相对的组件，从而使被转移的流体施加给上述屏障或基本上平行于该屏障的另一个部件。所施加的压力大大增加了流体转移的速率和效率，并使在含有流体的部件中留有试剂的任何死角最少。
这种装置包括(1)一个第一可相对的组件，该组件包括一种层析介质，至少一个吸收体、一个具有一个贯穿孔的基本上不能渗透流体的屏障、以及一个邻接该屏障的涂药器；以及(2)包括一个样品制备区域的、一个第二可相对的组件。
第一和第二可相对的组件这样成形，使得把该第一和第二可相对的组件相对即导致样品制备区域与涂药器接触，从而使在该样品制备区域中的样品施加给所述涂药器，用于再溶解可再溶解的特异性结合对，并穿过层析介质进行层析。
这个样品制备区域可至少含有一种用于处理样品的试剂。可存在于该样品制备区域中的那种试剂或那些试剂随要被施加给该样品制备区域中的样品以及待测定的被分析物而变化。它们可包括但并不限于调节pH值的一些酸或碱、稳定pH值的一些缓冲剂、螯合金属的一些螯合剂(例如，EDTA或EGTA)、溶解动物细胞的细胞膜或细菌细胞壁的一些水解酶、以释放被分析物、酶的一些底物或辅酶等。一种特别有用的萃取试剂是亚硝酸钠和乙酸的一种混合物，以便产生亚硝酸。亚硝酸钠可以干燥的形式存在于上述样品制备区域中，而乙酸可在加入样品后加入所述样品制备区域。
图3A和3B中画出了这种装置。图3A中示出了两个组件的构造，而图3B中示出了沿着线A——A’的第一个组件的剖面，示出了屏障和孔的细节。装置70具有用一个合叶76连接起来的一个第一可相对的组件72和一个第二可相对的组件74。第一和第二可相对的组件72和74最好还包括确保可相对的组件72和74相对固定的一些连接器。这些连接器可包括锁扣，例如，当使第一可相对的组件72和第二可相对的组件74相对时啮合在一起的锁扣78和80。为了防止样品或试剂渗漏，围绕第一和第二可相对的组件72和74的周边安置一个密封隆起物或密封垫82。
第一可相对的组件72包括一种平面层析介质84，层析介质84具有一个第一端86和一个第二端88，以及第一表面90和第二表面92。层析介质84包括一个检测区域94，而且最好还包括一个对照区域96。第一可相对的组件72包括一个第一吸收体98和一个第二吸收体100，第一吸收体98和层析介质84的第一端86可操作地接触，而第二吸收体100与层析介质84的第二端88可操作地接触。
装置70具有一个邻接层析介质84的、基本上不能渗透流体的屏障102。屏障102有一个孔104贯穿其中，用于把流体施加给层析介质84。
第一可相对的组件72还包括一个邻接屏障102的涂药器106。涂药器106以含有可再溶解形式的对于被分析物的一种被标记的特异性结合对。涂药器106这样定位，使得屏障102是在涂药器106和层析介质84之间。
第一可相对的组件72还包括一个孔108，以便使得能观察层析介质84。
第二可相对的组件74包括一个样品制备区域110，样品制备区域110可至少含有一种用于在把样品施加给涂药器106之前处理该样品的试剂。可由操作者在样品制备区域110上放置样品，或可选择地，放置一种取样装置，例如，一个咽喉拭子或一个多微孔的过滤器；如果需要的话，可加入一些其它试剂。
在工作时，把一种样品施加给样品制备区域110。如果需要的话，可在样品制备区域110中培养该样品，从而使至少一种用于处理该样品的试剂能与此样品反应，以便产生一种被处理过的样品。然后，使第一和第二可相对的组件72和74相对，从而使上述样品从样品制备区域110转移到涂药器106。然后，使得被转移给涂药器106的样品能在涂药器106中再溶解被标记的特异性结合对，并且如同在上述单个组件的装置中那样进行被分析物的层析和检测。4、在第二可相对的组件上具有涂药器的、两个组件的装置本发明的另一种两个组件的装置类似于图3中所画出的装置，但在第二可相对的组件上有涂药器。该涂药器以可以再溶解的形式含有对于被分析物的被标记的特异性结合对，并且还可含有一种或多种用于处理样品的试剂。
这种装置包括(1)一个第一可相对的组件，该组件包括一种平面层析介质，这种层析介质具有一个第一端、一个第二端以及第一和第二表面，并且如上所述具有对于固定在其上的被分析物的一种特异性结合对，该组件还包括至少一个与所述层析介质的那些端点中的至少一个可操作地接触的吸收体，而且，该组件还包括一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的屏障，屏障有一个孔贯穿其中，如上所述，用于把液体施加给上述层析介质；以及(2)一个第二可相对的组件，这个组件包括一个用于向其施加样品的涂药器，这个涂药器含有通过加入一种含水液体而可以再溶解形式的对于被分析物的一种被标记的特异性结合对。
图4A和4B中画出了这种装置。图4A中示出了两个组件的构造，而图4B中示出了沿第一个组件B——B’线的一个剖面，显示了屏障和孔的细节。装置120具有用一个合叶126连接的一个第一可相对的组件122和第二可相对的组件124。第一和第二可相对的组件122和124最好还包括锁扣128和130，以及一个密封隆起物或密封垫132，当把第一和第二可相对的组件122和124相对时，锁扣128和130啮合。
第一可相对的组件包括一种平面层析介质134，层析介质134具有一个第一端136、一个第二端138以及第一个和第二表面140和142。层析介质134在一个检测区域144中具有对于固定在其上的被分析物的一种特异性结合对，检测区域144实际上比层析介质134的面积小，而且，层析介质134最好还有一个被分析物或被分析物的类似物的对照区域146。
第一可相对的组件122还有一个第一吸收体148和一个第二吸收体150，第一吸收体148与层析介质134的第一端136可操作地接触，而第二吸收体150与层析介质134的第二端138可操作地接触。第一可相对的组件122还有一个邻接层析介质134第一表面140的、基本上不能渗透流体的屏障152。屏障152有一个孔154贯穿其中，用于把液体施加给层析介质134。孔154的面积实际上比屏障152小，从而使液体只能穿过孔154进入邻接屏障152的层析介质134的那个区域。所述层析介质以及吸收体148和150基本上是平面形状的，而屏障152位于一个第二平面内，这个第二平面基本上平行于由层析介质134以及吸收体148和150所确定的平面。对照区域146和检测区域144关于孔154以及吸收体148和150这样定位，使得检测区域144在孔154和所述那些吸收体中的一个之间，而对照区域146是在孔154和所述那些吸收体的另一个之间。第一可相对的组件122还包括一个窗口156，用于观察至少一部分层析介质134。
第二可相对的组件124有一个涂药器158，样品施加给涂药器158，而涂药器158含有对于被分析物的一种可再溶解的被标记的特异性结合对。涂药器156还可至少含有一种用于处理干燥形态样品的试剂。
在使用时，样品施加给涂药器156，以便可再溶解对于被分析物的被标记的特异性结合对。如果需要的话，可在涂药器156中培养所述样品，以确保用于处理样品的任何试剂与该样品反应。然后，使第一和第二可相对的组件132和134相对，从而使上述样品和被再溶解的被标记的特异性结合对能穿过孔154施加给层析介质134。如上所述，通过观察结合在层析介质134上的检测区域144处的被标记的特异性结合对，来对被分析物进行层析和检测。5、具有过滤用多孔物质以去除题粒状物质的装置a、在引入被再溶解的被标记的特异性结合对后在流体路线中具有过滤用多孔物质的装置本发明的装置的几种改型装有一种过滤用多孔物质，以便从样品中去除颗粒状物质，例如，从用来检测便潜血的粪便样品中去除粪便物质，这种便潜血是胃肠疾病的一种指示。一种这样的装置在引入被再溶解的特异性结合对后把过滤用多孔物质放置在流体路线中。这种装置在含有可再溶解形式的被标记的特异性结合对的第二可相对的组件上具有一个涂药器。
这种含有一种过滤用多孔物质的装置的改型包括(1)一个第一可相对的组件，该组件包括一种平面层析介质，这种层析介质具有一个第一端、一个第二端以及第一和第二表面，并且具有对于固定在其上的被分析物的一种特异性结合对，该组件还包括至少一个与所述层析介质的那些端点中的一个可操作地接触的吸收体，该组件还包括一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的屏障，屏障有一个孔贯穿其中，用于把液体施加给所述层析介质，且该组件还包括一种过滤用多孔物质，该过滤用多孔物质邻接上述屏障，用于去除颗粒状物质；以及(2)一个第二可相对的组件，此组件包括一个涂药器，用于向其中施加样品。
在这种装置中，层析介质、屏障、和过滤用多孔物质这样定位，使得所述屏障在上述过滤用多孔物质和所述层析介质之间。第一和第二可相对的组件这样成形，使得把该第一和第二可相对的组件相对即导致涂药器与上述过滤用多孔物质接触，从而使在该涂药器中的样品和被再溶解的被标记的特异性结合对施加给所述过滤用多孔物质，且然后穿过孔到上述屏障施加给所述层析介质，用于层析法。
图5A和5B中画出了这种装置。图5A中示出了两个组件的构造，而图5B中示出了沿着第一个组件线C——C’的一个剖面，显示了屏障、孔、和过滤用多孔物质膜的细节。装置170包括用一个合叶176连接的一个第一可相对的组件172和一个第二可相对的组件174。第一和第二可相对的组件172和174最好还包括锁扣178和180以及一个密封隆起物或密封垫182，当使第一和第二可相对的组件172和174相对时，锁扣178和180啮合在一起。
第一可相对的组件172包括一种平面层析介质184，层析介质184具有一个第一端186、一个第二端188以及第一表面190和第二表面192。层析介质184和一个检测区域194中具有对于被固定于其中的被分析物的一种特异性结合时，检测区域194实际上比层析介质184的面积小，而且，层析介质184最好具有一个对照区域196，对照区域196含有固定在层析介质184上的被分析物或被分析物的类似物。第一可相对的组件172还包括一个第一吸收体198和一个第二吸收体200，第一吸收体198与层析介质184的第一端186可操作地接触，而第二吸收体200与层析介质184的第二端188可操作地接触。
第一可相对的组件172还包括一个邻接层析介质184的第一表面190的、基本上不能渗透流体的屏障202。屏障202有一个孔204贯穿其中，用于把液体施加给层析介质184。孔204的面积实际上比屏障202小，从而使液体只能穿过孔204进入邻接屏障202的层析介质184的那个区域。
第一可相对的组件172还包括一种邻接屏障202的过滤用多孔物质206，用于去除颗粒状物质。
第一可相对的组件172还包括一个窗口208，用于观察至少一部分层析介质184。
第二可相对的组件174包括一个涂药器210，涂药器210含有可再溶解形式的一种被标记的特异性结合对。涂药器210还可含有至少一种用于处理样品的试剂。
在工作时，使第一和第二可相对的组件172和174相对即导致涂药器210与过滤用多孔物质206接触，从而使在涂药器210中的样品和被再溶解的被标记的特异性结合对施加给过滤用多孔物质206，而且，在穿过过滤用多孔物质206之后，穿过孔204，并到达层析介质184上，用于如上所述对被分析物进行层析和检测。b、在引入被再溶解的被标记的特异性结合对前在流体路线中具有过滤用多孔物质的装置如果颗粒状物质干扰被标记的特异性结合对的再溶解或干扰被标记的特异性结合对与被分析物的反应，这种改型可能特别有用。
这种改型包括(1)一个第一可相对的组件，该组件包括(a)一种平面层析介质，这种平面层析介质具有一个第一端、一个第二端以及第一和第二表面，并且如上所述具有对于固定在其上的被分析物的一种特异性结合对；(b)至少一个与上述层析介质的那些端点中的至少一个可操作地接触的吸收体；(c)一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的屏障，该屏障有一个孔贯穿其中，用于如上所述把液体施加给上述层析介质；(d)一个邻接上述屏障的涂药器，该涂药器含有可以再溶解形式的对于被分析物的一种被标记的特异性结合对；以及(e)一种过滤用多孔物质，这种过滤用多孔物质邻接上述涂药器，用于去除颗粒状物质；以及(2)一个包括一个样品制备区域的第二可相对的组件。
屏障、涂药器和过滤用多孔物质这样定位，使得涂药器位于该屏障和所述过滤用多孔物质之间，且使该屏障最靠近层析介质定位。第一和第二可相对的组件这样成形，使得把该第一和第二可相对的组件相对即导致样品制备区域与所述过滤用多孔物质接触，从而将样品施加给该过滤用多孔物质，被过滤的样品施加给上述涂药器，以便在该涂药器中再溶解被标记的特异性结合对，以形成一种被过滤过的样品和被标记的特异性结合对的溶液，而且，该被过滤过的样品和被标记的特异性结合对的溶液穿过上述屏障中的孔施加给层析介质。
图6A和6B中画出了这种改型。图6A中示出了两个组件的构造，而图6B中示出了沿第一个组件线D——D’的剖面，显示了屏障、孔、涂药器和过滤用多孔物质膜的细节。装置220具有用一个合叶226连接的一个第一可相对的组件222和一个第二可相对的组件224。第一和第二可相对的组件222和224最好还包括锁扣228和230，当使第一可相对的组件222和第二可相对的组件224相对时，锁扣228和230可啮合在一起。围绕第一和第二可相对的组件222和224的周边，定位一个密封隆起物或密封垫232。第一可相对的组件222有一种层析介质234，层析介质234具有第一和第二端236和238、一个第一表面240以及一个第二表面242。层析介质234有一个检测区域244，而且，最好有一个不与检测区域244重叠的对照区域246。该第一可相对的组件还包括一个第一吸收体248和一个第二吸收体250，第一吸收体248与层析介质234的第一端236可操作地接触，而第二吸收体250与层析介质234的第二端238可操作地接触。
第一可相对的组件222还包括一个邻接层析介质234的第一表面240的、基本上不能渗透流体的屏障252，屏障252有一个孔254贯穿其中，用于把液体施加给层析介质234。孔254的面积实际上比屏障252小，从而使液体只能穿过孔254能进入层析介质254。
第一可相对的组件222还包括一个邻接屏障252的涂药器256。该涂药器含有可以再溶解形式的对于被分析物的一种被标记的特异性结合对。该第一可相对的组件还包括一种过滤用多孔物质258，用于去除邻接涂药器256的颗粒状物质。过滤用多孔物质258、涂药器256、以及屏障252和孔254这样安置，使得转移到第一可相对的组件222的液体首先施加给过滤用多孔物质258，然后施加给涂药器256，并且，最后施加给屏障252中的孔254，用于转移给层析介质234。
第一可相对的组件222最好还包括一个邻接层析介质234的第二表面242的窗口260。
第二可相对的组件224包括一个样品制备区域262，样品制备区域262可至少含有一种用于处理样品的试剂。
在工作时，如果原意的话，样品转移给第二可相对的组件进行培养，且然后使第一和第二可相对的组件222和224相对。基本上如上所述，在层析介质234的检测区域244处对被分析物进行层析和检测。6、用于萃取一个拭子的装置本发明的测定装置的另一种改型适于萃取一个拭子。在许多情况下，生物样品是在拭子上获取的，并且不在萃取容器中进行多次萃取是难以从拭子中萃取样品的。进行这样的多次萃取不仅实际上耗时费力，而且导致产生大量必须处理的废物。由于通过分泌物所传播的诸如艾滋病和肝炎那样的疾病的增加，这已成为一个日益严重的问题。
本发明的适于萃取拭子的、并适于测定包含在拭子中的被分析物的装置可包括(1)一个第一可相对的组件，该组件包括(a)一种平面层析介质，这种平面层析介质具有一个第一端、一个第二端以及第一和第二表面，并且如上所述具有对于固定在其上的的被分析物的一种特异性结合对；(b)至少一个与上述层析介质的那些端点中的一个可操作地接触的吸收体；(c)一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的第一屏障，屏障有一个孔贯穿其中(如上所述)，用于把液体施加给上述层析介质；(d)一个邻接上述第一屏障的涂药器，这个涂药器以含有通过向涂药器加入含水液体而可以再溶解形式的对于被分析物的一种被标记的特异性结合对；(e)一个邻接上述涂药器的中央部分的、基本上不能渗透流体的第二屏障；以及(f)一个分配膜，该分配膜邻接第二屏障，并与上述涂药器的这样一个部分可操作地接触，即上述第二屏障并不邻接的部分，从而使流体可只围绕上述第二屏障从所述分配膜流到上述涂药器；以及(2)一个第二可相对的组件，该组件包括一个用于含有检验样品的一个拭子的插座。
第一和第二可相对的组件这样成形，使得把该第一和第二可相对的组件相对即导致插在插座中的拭子与分配膜接触，从而使在拭子中的样品施加给分配膜，而且，然后在绕过第二屏障并穿过涂药器后，穿过在第一屏障中的孔施加给层析介质。
图7A和7B示出了一种适于萃取拭子的装置。图7A显示了两个组件的构造，而图7B显示了沿着第一个组件线E——E’的剖面，示出了第一屏障、孔、涂药器、第二屏障和分配膜的细节。装置264包括用一个合叶267连接起来的一个第一可相对的组件265和一个第二可相对的组件266。第一和第二可相对的组件265和266最好还包括锁扣268和269，以便把这些可相对的组件保持在一起。当第一和第二可相对的组件265和266相对时密封垫270环绕着它们，以便防止样品或试剂漏出。密封垫270可有一个开口271，以便容纳拭子的窄端，例如，一根木棍或木钉。
第一可相对的组件265有一种层析介质272，层析介质272具有一个第一端273和一个第二端274以及一个第一表面275和一个第二表面276。如上所述，层析介质272带有一个检测区域277和一个对照区域278。第一可相对的组件265还有一个第一吸收体279和一个第二吸收体280，第一吸收体279与层析介质272的第一端273可操作地接触，而第二吸收体280与层析介质272的第二端274可操作地接触。
第一可相对的组件265还包括一个邻接层析介质272的第一表面275的、基本上不能渗透流体的第一屏障281，第一屏障281有一个孔282贯穿其中，如上所述，用于把液体施加给层析介质272。
第一可相对的组件265还包括一个邻接第一屏障281的涂药器283。涂药器283含有可以再溶解形式的对于被分析物的一种被标记的特异性结合对。此外，第一可相对的组件265还具有一个邻接涂药器283的中央部分的、基本上不能渗透流体的第二屏障284。一个分配膜285邻接第二屏障284，并与涂药器283中第二屏障284所不邻接的那个部分可操作地接触。流体可只围绕第二屏障284从分配膜285流到涂药器283。可以选择地，可省略分配膜285，从而使流体直接施加给第二屏障284，并且围绕第二屏障284流到涂药器283。
第一可相对的组件265还包括一个窗口286，以便使得能观察层析介质272。
第二可相对的组件266包括一个插座287，插座287用于含有检验样品的拭子288。使第一和第二可相对的组件265和266相对即导致在插座286中的拭子288与分配膜285可操作地接触。在拭子288中的样品施加给分配膜285，而且，然后，在绕过第二屏障284且穿过涂药器283后，穿过第一屏障281中的孔282施加给层析介质272。在使用时，拭子288插入在第二可相对的组件266中的插座286中。如果需要的话，可把一种萃取试剂或一些试剂加入到在插座286中的拭子288里。在这种情况下，插座286设计成能容纳萃取试剂，并把它们施加给拭子288。然后，使第一和第二可相对的组件265和266相对，如此，如上所述，在拭子288中的样品施加给分配膜285。
本发明的适于萃取拭子、并适于测定该拭子中所含的被分析物的另一种装置可包括(1)一个第一可相对的组件，该组件包括(a)一种层析介质，这种层析介质具有一个第一端、一个第二端以及第一和第二表面，并如上所述具有对于固定在其上的上述被分析物的一种特异性结合对；(b)至少一个与上述层析介质的那些端点中的一个可操作地接触的吸收体；(c)一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的第一屏障，屏障有一个第一孔贯穿其中，用于把液体施加给上述层析介质；(d)一个邻接上述基本上不能渗透流体的第一屏障的分配膜，以引导流体到在所述基本上不能渗透流体的第一屏障中的第一孔；(e)一个邻接上述分配膜的中央部分的基本上不能渗透流体的第二屏障；(f)一个含有可以再溶解形式的对于上述被分析物的特异性结合对的、并邻接上述屏障膜的涂药器，从而使流体可从该涂药器围绕上述第二屏障流到分配膜上、基本上不能渗透流体的第二屏障所不直接邻接的部分；以及(g)一个表面屏障，这个表面屏障有一个第二孔贯穿其中，用于把液体施加给上述涂药器；以及(2)一个第二可相对的组件，该组件包括一个用于含有检验样品的拭子的插座。
第一和第二可相对的组件这样成形，使得把该第一和第二可相对的组件相对即导致插在插座中的拭子与表面屏障及第二孔接触，从而使在拭子中的样品施加给涂药器，而且，在绕过第二屏障并穿过分配膜后，穿过第一屏障中的孔施加给层析介质。
图8A和图8B中示出了这种装置。图8A示出了两个组件的构造，而图8B示出了沿着第一个组件线F——F’的剖面，显示了第一屏障、孔、涂药器、第二屏障及分配膜的细节。装置290包括用一个合叶293连接的一个第一可相对的组件291和一个第二可相对的组件292。第一和第二可相对的组件291和292最好包括锁扣295和296，以把这些可相对的组件保持在一起。当第一和第二可相对的组件291和292相对时，一个密封垫297环绕它们，以便防止渗漏样品和试剂。密封垫297可有一个开口298，以容纳拭子的窄端，例如，一根木棍或木钉。
第一可相对的组件291具有层析介质299，层析介质299具有一个第一端300、一个第二端301、一个第一表面302和一个第二表面303。如上所述，层析介质299带有一个检测区域304和一个对照区域305。第一可相对的组件291还有一个与层析介质299的第二端300可操作地接触的吸收体306。
第一可相对的组件291还包括一个邻接层析介质299的第一表面302的、基本上不能渗透流体的第一屏障307，屏障307有一个第一孔308贯穿其中，如上所述，用于把液体施加给层析介质299。
第一可相对的组件291还包括一个邻接基本上不能渗透流体的第一屏障307的分配膜309，以便把流体引导到第一屏障307中的第一孔308。基本上不能渗透流体的第二屏障310邻接分配膜309的中央部分。第一可相对的组件291还包括一个涂药器311，涂药器311含有可以再溶解形式的对于被分析物的一种特异性结合对，并邻接第二屏障310定位。流体可从涂药器311出发围绕第二屏障310流到分配膜309中、基本上不渗透流体的第二屏障310所不直接邻接的部分。此外，第一可相对的组件291有一个表面屏障312，表面屏障312有一个第二孔313贯穿其中，用于把液体施加给涂药器311。表面屏障312最好基本上与第一可相对的组件291的所述表面设置得平齐；即在表面屏障312下面的那些部件位于第一可相对的组件291的内部。第一可相对的组件291还包括一个或多个出口314，用于卸出压力。
第一可相对的组件291还包括一个窗口315，以便能观察层析介质299。
第二可相对的组件292包括一个插座316，且最好还包括一个井317，插座316用于含有检验样品的拭子，井317用于给该拭子添加一种或多种试剂。
使第一和第二可相对的组件291和292相对即导致在插座316中的拭子与表面屏障312和第二孔313接触。在拭子中的样品施加给涂药器311，而且，然后，在绕过第二屏障310并穿过分配膜309后，施加给层析介质299。在使用时，拭子288插入在第二可相对的组件292中的插座316中，并且，如果需要的话，可给井317加入萃取试剂或一些试剂。然后，使第一和第二可相对的组件291和292相对，以进行测定，并读出结果。7、用于竞争性免疫测定的装置本发明的那些装置可用于竞争性免疫测定以及夹层免疫测定。
一般说来，竞争性免疫测定用于一些单价的被分析物。这些单价的被分析物一般是不全抗原，但同样的原理可用来测定任何单价的被分析物，例如，一种这样的普通多价抗原，在此抗原上另外的结合抗体的部位被封闭或改性。可被测定的被分析物有茶碱、异羟基洋地黄毒甙、双异丙吡胺、利多卡因、普鲁卡因酰胺、萘心安、奎尼丁、氨基羟丁基卡那霉素、青霉素和其它一些β——内酰胺抗菌素、氯霉素、庆大霉素、卡那霉素、乙基西梭霉素硫酸盐、妥布霉素、三环抗抑郁药、乙琥胺柴浪丁、苯巴比妥、安安、苯妥英、脱氧苯比妥、丙戊酸、扑热息痛、乙酰水扬酸、布洛芬、氨甲喋呤，一些滥用的药物，例如，吗啡、可待因、柯卡因、芬太尼、3-甲基芬太尼、苯异丙胺、麦角酸、二乙酰胺、苯环哌啶和海洛英以及它们的一些代谢物、DNP、1-取代的-4-羟基-2-硝基苯、4-取代的2-硝基-三烷基苯胺盐，以及一些环境污染物，例如，苯、甲苯、二甲苯、乙苯、氯丹、DDT及其代谢物、2，4-D、2，4，5-T和阿特拉津。
适于进行这些免疫测定的特异性结合对包括但并不限于一些抗体和一些特异性结合蛋白。后者的一个例子是从嗜脂肪芽孢杆菌分离的青霉素结合蛋白(PBP)。
本发明的装置不像先前的许多适于进行竞争性免疫测定的装置那样，而是具有这样的优点，在样品中存在被分析物就会给出一个阳性的或可检测的结果，例如，在装置的检测区域中的一条带色的线。一般说来，在竞争性免疫测定中，一个可检测的信号的显影表明一个阴性的结果(没有被分析物存在)。这样，在所观察到的结果和检测之间存在一种相反的关系。本发明的装置，在被分析物浓度和可检测的信号之间产生一种直接关系，不太可能产生那些虚假的阴性结果。这些装置还具有一个扩展了的动力范围(dynamic range)。
在本发明的一种竞争性免疫测定的装置中，被标记的组份是一种被分析物的类似物，不是一种抗被分析物抗体，就像典型地进行夹层免疫测定的装置那样。该被分析物的类似物包括一种与一对特异性结合对的一个成员共价结合的被分析物。该对特异性结合对的那个成员对于被分析物缺少亲和性，并且可被在检测区域中固定到层析介质上的一种辅助的特异性结合对结合。这个系统的竞争性方面源于采用了一种亲和性膜，该亲和性膜已经在其上固定了一种用于所述被分析物的特异性结合对。这样，在检测样品中的被分析物(如果有的话)，就与上述被标记的被分析物的类似物竞争，以所述亲和性膜结合，从而在没有被分析物的情况下，所有或几乎所有上述被标记的被分析物的类似物由在所述亲和性膜上的上述特异性结合对结合，而且没有该被标记的被分析物的类似物到达层析介质。如果所述检验样品中有被分析物的话，至少某些上述被标记的被分析物的类似物不能与在亲和性介质上的上述特异性结合对结合，这是因为在所述检验样品中的末被标记的被分析物和所述被分析物的类似物之间有竞争。因此，至少某些所述被标记的被分析物的类似物到达上述层析介质，并且被在检测区域中的上述辅助的特异性结合对结合。在上述检验样品中的被分析物的浓度越大，则到达上述层析介质的被标记的被分析物的类似物的量就越大。
一种用于这样的竞争性免疫测定的合适的装置包括(1)一个第一可相对的组件，该组件包括(a)一种平面层析介质，这种平面层析介质具有一个第一端、一个第二端以及第一和第二表面，并且在检测区域中具有固定在其上的辅助的特异性结合对，这个检测区域实际上比上述层析介质的面积小，该辅助的特异性结合对能够结合对被分析物缺少亲和性的一对特异性结合对的一个成员；(b)至少一个与上述层析介质的那些端点中的一个可操作地接触的吸收体；(c)一个邻接上述层析介质的顶表面的、基本上不能渗透流体的屏障，屏障有一个孔贯穿其中，用于把液体施加给上述层析介质，所述孔的面积实际上比上述屏障小，从而使液体只能穿过所述孔进入上述层析介质；以及(d)一个邻接上述屏障的亲和性膜，该亲和性膜含有对于固定到那里的上述被分析物的特异性结合对；以及(2)一个包括一个涂药器的第二可相对的组件，这个涂药器含有通过向涂药器加入一种含水液体而可以再溶解形式的一种被分析物的类似物，这种被分析物的类似物包含与这样一对特异性结合对的一个成员共价结合的被分析物，这种特异性结合对对所述被分析物缺少亲和性，并且可被上述特异性结合对结合，所述被分析物的类似物用一种可检测的标记物标记。
层析介质、吸收体、屏障和孔这样成形，使得检测区域位于所述孔和上述层析介质的第一端之间。第一和第二可相对的组件这样成形，使得把该第一和第二可相对的组件相对即导致涂药器与亲和性膜接触，以便把样品和被再溶解的被分析物的类似物施加给亲和性膜，而且，然后穿过上述孔施加给所述层析介质。
层析介质还可包括这样的特异性结合对一个成员的对照区域，所述特异性结合对对被分析物或对特异性结合对缺少亲和性，而涂药器还包括一种结合在上述对照区域中的所述那对特异性结合对的那个成员的化合物，所述这对特异性结合对的这个成员用一种与标记被分析物的类似物的标记物可区分开的可检测的第二种标记物标记。所述对照区域位于上述孔和层析介质的第二端之间。如果包括一个对照区域，最好采用第一和第二吸收体，从而使足够的样品施加给该对照区域。
图9A和9B中画出了用于采用一种被标记的被分析物的类似物进行竞争性免疫测定的、一种合适的两个组件的装置。图9A中示出了两个组件的构造，而图9B中示出了沿着第一个组件线G——G’的剖面，显示了层析介质、屏障、孔和亲和性膜的细节。装置320包括用一个合叶326连接起来的第一和第二可相对的组件322和324。第一和第二可相对的组件322和324具有用于啮合的锁扣32 8和3 30，并且具有一个环绕第一和第二可相对的组件322和324的周边的密封垫或隆起物322，以便防止样品或试剂渗漏。第一可相对的组件322还包括层析介质334，层析介质334具有第一和第二端336和338，以及第一和第二表面340和342。层析介质334包括一个检测区域344，且最好包括一个对照区域346。该第一可相对的组件还包括一个第一吸收体348以及一个第二吸收体350，第一吸收体348与上述层析介质的第一端336可操作地接触，并且安置得距检测区域344比距对照区域346更近，而第二吸收体350与层析介质334的第二端338可操作地接触，并且距对照区域346比距检测区域344更近。
第一可相对的组件322还包括一个邻接层析介质334的第一表面340的、基本上不能渗透流体的屏障352，屏障352有一个孔354贯穿其中，如上所述，用于把液体施加给层析介质334。检测区域位于孔354和层析介质334的第一端336之间。如果有的话，对照区域346位于孔354和层析介质334的第二端338之间。
第一可相对的组件322还包括一个邻接屏障352的亲和性膜356。亲和性膜356含有一种对于固定到那里的被分析物的特异性结合对，从而使在检验样品中的被标记的被分析物的类似物和游离的被分析物可与在亲和性膜356中的所述特异性结合对竞争。
第一可相对的组件还包括一个窗口358，用于观察层析介质334。
第二可相对的组件324包括一个涂药器360，涂药器360含有可以再溶解形式的一种被标记的被分析物的类似物。如果在层析介质334上有对照区域346，则涂药器360还包括一种用一种可区分的第二标记物标记的、可结合的第二组份。
在使用时，样品施加给涂药器360，以再溶解被标记的被分析物的类似物，而且，如果有的话，再溶解第二种可结合的组份。然后，使第一和第二可相对的组件322和324相对，把样品和再溶解的被标记的被分析物的类似物施加给亲和性膜356。如果在检验样品中没有被分析物，那么，所有被分析物的类似物结合到亲和性膜356，没有一点到达层析介质334上的检测区域344。如果上述检验样品中有被分析物，它就与被标记的被分析物的类似物竞争在亲和性膜356上的特异性结合对，这样，某些被标记的被分析物的类似物到达层析介质334上的检测区域344，并在那里结合，给出一种可检测的信号。如果在上述层析介质上有对照区域346，而且把一种可结合的第二种物质施加给涂药器，那么，该可结合的第二种物质与它的可区分的标记物一起结合到对照区域346，以指明测定已正确地进行。D、各向异性流动的装置前述所有的装置在每一部件中都采用各向同性的分离流动；也就是说，液体施加给部件的中央，并相同地或基本上相同地在两个方向上向外流动。不过，并非要求这样，还能这样构造本发明的测定装置，即其中，在一个或多个上述那些部件中的流动并非从该部件的中央向两个方向相同地流动，或者，可以选择地，并非从该部件的两端向中央流动，而是从该部件的一端向另一端流动。这可以使得能特别有效地利用试剂，特别是那些可再溶解的试剂，对于这些试剂，希望使液体穿过整个部件流动，以促进完全的再溶解。
本发明的、采用这样的各向异性的流动的一种装置适于进行夹层免疫测定。这种装置包括(1)一个第一可相对的组件，该组件包括(a)一种层析介质，这种层析介质具有一个第一端、一个第二端以及第一和第二表面，并且在一些独立的、离散的且不重叠的区域中，在其上固定有下述这些区域，每个区域的面积实际上小于上述层析介质的面积(i)对于被分析物的一种特异性结合对的检测区域；以及(ii)一个被分析物或被分析物的类似物的对照区域，上述检测区域位于离开所述层析介质端点的一点和所述层析介质的第一端之间，而上述对照区域位于离开所述层析介质端点的一点和所述层析介质的第二端之间；(b)一个与上述层析介质的第一端可操作地接触的吸收体；(c)一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的第一屏障，且这样定位这个第一屏障，使得液体可只穿过一个第一施加面施加给上述层析介质，该第一施加面实际上比所述层析介质的面积小，并位于离开所述层析介质的端点的一个部位；(d)一个邻接上述第一屏障的涂药器，该涂药器含有可以再溶解形式的对于被分析物的一种被标记的特异性结合对，该涂药器延伸过上述屏障，以便在所述第一施加面把液体施加给上述层析介质；以及(e)一个邻接上述涂药器的、基本上不能渗透流体的第二屏障，且这样定位该第二屏障，使得液体只能穿过第二施加面施加给所述涂药器，该第二施加面实际上小于上述层析介质的面积，并邻接所述层析介质的第二端安置；以及(2)一个包括一个第二施加区域的第二可相对的组件。
这样成形第一和第二可相对的组件，使得把该第一和第二可相对的组件相对即导致样品制备区域与第二屏障接触，并与上述第二样品施加面接触。这样，在上述样品制备区域中的样品穿过所述第二施加面施加给涂药器。所述样品实际上横穿过上述涂药器的整个长度，以把该样品和被再溶解的被标记的特异性结合对穿过上述第一施加面施加给层析介质。
图10A和10B中画出了适于夹层免疫测定的、这样的一种各向异性流动的装置。图10A中示出了两个组件的构造，而图10B中示出沿第一个组件线H——H’的剖面，显示了层析介质、第一屏障、涂药器以及第二屏障的细节。装置307包括用一个合叶376连接起来的第一和第二可相对的组件372和374。第一和第二可相对的组件372和374具有锁扣378和380，并且被一个密封垫382环绕。第一可相对的组件372包括一种层析介质384，层析介质384具有第一和第二端386和388，以及第一和第二表面390和392。层析介质384在离散、不重叠的区域中在其上固定有一个检测区域394，并且最好固定有一个对照区域396。检测区域394含有对于被分析物的一种特异性结合对。对照区域396含有上述被分析物或被分析物的类似物。检测区域394位于离开层析介质384的端点的一点397和层析介质384的第一端386之间，而对照区域396位于点397和层析介质384的第二端388之间。一般来说，离开层析介质384的端点的那点397是层析介质384的中点，而检测区域394和对照区域396距所述层析介质的这个中点等距离。不过，并非一定需要这样。
第一可相对的组件372还包括一个与层析介质384的第一端386可操作地接触的第一吸收体398，而且，如果有对照区域的话，一个第二吸收体400可与层析介质384的第二端388可操作地接触。不过，这个第二吸收体并非一定需要，且无需在所有的应用中都有。
第一可相对的组件372还包括一个邻接层析介质384的第一表面390的、基本上不能渗透流体的第一屏障402。第一屏障402这样定位，使流体可只能通过一个第一施加面404施加给层析介质384，第一施加面404实际上比层析介质384的面积小。第一施加面404位于点397处。一般说来，第一施加面404位于层析介质384的中点处。第一可相对的组件372还包括一个邻接第一屏障402的涂药器406，涂药器406延伸过第一屏障402，以在第一施加面404处把液体施加给层析介质384。涂药器406含有可再溶解形式的对于被分析物的一种被标记的特异性结合对。
第一可相对的组件372还包括一个邻接涂药器406的、基本上不能渗透流体的第二屏障408。液体只能通过一个第二施加面410施加给涂药器406，第二施加面410实际上比层析介质384的面积小，其位置邻接层析介质384的第二端388。第一可相对的组件372还包括一个窗口412，以便观察层析介质384。
第二可相对的组件374包括一个样品制备区域414，样品制备区域414可至少含有一种用于处理样品的试剂。
在使用时，把一种样品施加给第二可相对的组件374上的样品制备区域414。然后，使第一和第二可相对的组件372和374相对，从而使检验样品穿过第二施加面410转移给涂药器406。之后，转移给涂药器406的样品再溶解在涂药器406中的被标记的特异性结合对，而且，然后实际上横过涂药器406的整个长度，以把所述样品和被再溶解的被标记的特异性结合对穿过第一施加面404施加给层析介质384。然后，如上所述，对被分析物进行层析和检测。注意在上述层析介质本身中的流动实际上是各向同性的，但在大量的部件中流动不是各向同性的。E、采用将被分析物直接吸到层析介质的装置某些抗原与通常用作免疫测定中的固相的一些材料(例如，耐纶)结合强烈且是非特异性的结合。这些抗原是疏水性的，例如，衣原体沙眼脂多糖(LPS)抗原和其它一些配合物脂类。这样的一些抗原可通过本发明的测定装置与层析介质结合，然后用合适的被标记的特异性结合对来检测，例如，用对于该抗原的一种被标记的抗体来检测。这是单个抗体的免疫测定，而不是一种夹层免疫测定。实际上，上述层析介质本身在一种通常的夹层免疫测定中取代了第一抗体的位置。
本发明的、适于进行其中涉及在层析介质上直接固定被分析物的测定的测定装置包括(1)一个第一可相对的组件，该组件包括(a)一种平面层析介质，这种平面层析介质具有第一和第二端以及第一和第二表面，这种层析介质对被分析物所具有的亲和性足以把该被分析物从含有此被分析物的一种含水溶液中固定到所述层析介质上；(b)一个与上述层析介质的第一端可操作地接触的涂药器，这个涂药器含有通过向涂药器中加入一种含水液体而可以再溶解形式的对于上述被分析物的一种被标记的特异性结合对；(c)一个与上述层析介质的第二端可操作地接触的吸收体；以及(d)一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的屏障，这个屏障有一个孔贯穿其中，用于把液体施加给上述层析介质，所述孔的面积实际上比上述屏障小，从而使液体可只通过所述孔进入由上述屏障所覆盖的上述层析介质区域中；以及(2)一个包括一个样品制备区域的第二可相对的组件。
在这种装置中，第一和第二可相对的组件这样成形，使得把该第一和第二可相对的组件相对即导致样品制备区域与屏障接触，从而使在该样品制备区域中的样品施加给层析介质。在检验样品中的被分析物在所述孔附近固定在上述层析介质上。在这种装置中，不像先前那些本发明的装置，而是在所述层析介质本身中的流动是从该介质的一端到另一端，而不是由离开该介质的端部的一点到每一端。
如果抗原是脂多糖，则层析介质本身可以是耐纶。
图11 A和11B中画出了一种适于涉及被分析物与层析介质结合的测定装置。图11A示出了该装置的两个组件的构造，而图11B示出了沿着第一个组件线I——I’的一个剖面，显示了层析介质、涂药器、屏障和孔的细节。测定装置420具有用一个合叶426连接起来的第一和第二可相对的组件422和424。该第一和第二可相对的组件包含锁扣428和430，而当第一和第二可相对的组件422和424相对时，一个密封垫432环绕它们。第一可相对的组件422具有层析介质434，层析介质434具有一个第一端436和一个第二端438。层析介质434具有一个第一表面440和一个第二表面442。第一可相对的组件422还包括一个涂药器444和一个吸收体446，涂药器444与层析介质434的第一端436可操作地接触，而吸收体446与层析介质434的第二端438可操作地接触。第一可相对的组件422还包括一个邻接上述层析介质的第一表面442的、基本上不能渗透流体的屏障448，屏障448有一个孔450贯穿其中用于把液体施加给层析介质434。该第一可相对的组件最好还包括一个邻接层析介质434的第二表面444的窗口452，用于观察层析介质434。
第二可相对的组件424包括一个样品制备区域454。
在使用时，把样品施加给第二可相对的组件424的样品制备区域454，而把一种含水液体通过再溶解的被标记的特异性结合对加给涂药器444。然后，使第一和第二可相对的组件422和424相对，从而使检验样品穿过屏障448的孔450施加给层析介质434。之后，使得在上述样品中的任何被分析物能在所述孔附近与层析介质434结合。使得再溶解的被标记的特异性结合对能穿过层析介质434从第一端436朝向第二端438迁移。所述被标记的特异性结合对可与和层析介质434结合的被分析物反应，以便检测。在这种情况下，实际上通过被分析物在屏障448中的孔450的附近与层析介质434结合来形成检测区域。II、顺序免疫层析法在某些应用中，特别是在某些血清学测定中，总是希望在标记步骤之前有俘获步骤，即利用对于固定在固体载体上的被分析物的一种特异性结合对。例如，在一种用于检测对于在人类血清中的幽门螺杆细菌的IgG抗体的免疫层析测定中，血清流过固定在固相层析介质上的幽门螺杆细菌抗原带。在血清中的特异性IgG结合固定了的抗原。在抽取含有非特异性的IgG的血清后，然后使得用一种可检测的标记物(例如，一种可视染料(共轭物))标记的抗人类IgG能迁移通过抗原区域，而任何被结合的IgG用上述可检测的标记物标记。
通常的一步线型层析测定并不适于顺序型测定，除非在该方法中带有耗时且不便的清洗步骤。如果不带有这样的一种清洗步骤，大过量的对幽门螺杆细菌非特异的人类IgG将与共轭物反应。这会在层析介质中留下强的标记物本底，并且在它能有机会与结合到被固定的幽门螺杆细菌抗原的抗幽门螺杆细菌抗体反应前，这会耗尽上述共轭物。
希望有一种能进行顺序免疫测定的层析测定装置，从而首先能使要被检测的抗体与固定在层析介质上的相应的被分析物的反应进行得完全。然后，在一个第二步骤中，施加被标记的共轭物，以检测被分析物，例如，抗幽门螺杆细菌抗体。
一种适于进行顺序免疫测定的装置包括(1)一个第一可相对的组件，该组件包括(a)一种如上所述的平面层析介质，这种层析介质在一个检测区域中具有对于固定在其上的被分析物的一种特异性结合对，这个检测区域实际上比所述层析介质的面积小；(b)一个与上述层析介质的第一端可操作地接触的样品制备区域；(c)一个与上述层析介质的第二端可操作地接触的第一吸收体；(d)一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的屏障，屏障有一个孔贯穿其中用于把流体施加给上述层析介质，所述孔的面积实际上比所述屏障小，从而使液体只能通过所述孔进入上述层析介质中为所述屏障所覆盖的区域中；以及(2)一个第二可相对的组件，该组件包括(a)一个含有可再溶解形式的对于被分析物的一种特异性结合对的涂药器，这样定位该涂药器，使得当把第一和第二可相对的组件相对时，该涂药器与上述屏障接触，从而使对于上述被分析物的再溶解的被标记的特异性结合对穿过所述屏障中的孔施加给上述层析介质；以及(b)第二和第三吸收体，这样定位该第二和第三吸收体，使得当把上述第一和第二可相对的组件相对时，该第二吸收体与在上述屏障和所述层析介质的第一端之间的上述层析介质的一部分可操作地接触，而该第三吸收体与在上述屏障和所述层析介质的第二端之间的上述层析介质的一部分可操作地接触，从而使该第二和第三吸收体可从上述层析介质中去除流体。
因此，当使第一和第二可相对的组件相对时，流体的流动是在两个方向上沿着层析介质从屏障中的孔向外流到第二和第三吸收体。
一般说来，测定装置还如上所述包括一个邻接层析介质的第二表面的基本上透明的衬底。
如上所述，样品制备区域可至少含有一种试剂，用于在将样品施加给层析介质前处理所述样品。不像其中样品制备区域在第二可相对的组件上的本发明上述其它那些装置那样，在这种装置中，无需使第一和第二可相对的组件相对，即可使样品施加给层析介质。这样，相应调整任何用于处理样品的试剂的浓度。
层析介质还可包括一个固定在所述层析介质上的被分析物或被分析物的类似物的对照区域，该对照区域的面积实际上比所述层析介质小，并且不与检测区域重叠。当所述层析介质包含一个检测区域和一个对照区域时，该检测区域定位在上述孔和所述层析介质的第一端之间。该对照区域定位在所述孔和上述层析介质的第二端之间。上述检测区域最好定位在所述孔和第二吸收体所接触的所述层析介质的那个部分之间，而上述对照区域最好定位在所述孔和第三吸收体所接触的所述层析介质的那个部分之间，以确保足够量的被再溶解的被标记的特异性结合对到达上述检测和对照区域。
图12A和12B中画出了这种装置。图12A示出了该装置的两个组件的构造，而图12B示出了沿着第一个组件线J——J’的一个剖面，显示了层析介质、涂药器、第一吸收吸体、屏障及孔的细节。测定装置460具有用一个合叶466连接起来的一个第一可相对的组件462和一个第二可相对的组件464。该第一和第二可相对的组件包含锁扣468和470，当使第一和第二可相对的组件462和464相对时有一个密封垫472环绕它们。第一可相对的组件462包括一种基本上平面形状的层析介质474，层析介质474具有一个第一端476、一个第二端478、以及第一和第二表面480和482。所述层析介质还包括一个检测区域484，而且，可任选地，还包括一个对照区域486，检测区域484含有对于被分析物的一种被标记的特异性结合对，而对照区域486含有被固定了的被分析物。
第一可相对的组件462还包括一个与层析介质474的第一端476可操作地接触的样品制备区域488。如上所述，样品制备区域488可至少含有一种用于处理样品的试剂。第一可相对的组件462还包括一个与层析介质474的第二端478可操作地接触的第一吸收体490。
第一可相对的组件462还包括一个邻接层析介质474的第一表面480的、基本上不能渗透流体的屏障492。屏障492有一个孔494贯穿其间，用于把液体施加给层析介质474。孔494的面积实际上小于屏障492的面积，从而使液体只通过孔494进入层析介质474由屏障492覆盖的区域中。不过，在这种装置中，液体还可在第一端476从样品制备区域488进入层析介质474。
第一可相对的组件还包括一个邻接层析介质474的第二表面482的窗口496，用于观察层析介质474。
第二可相对的组件464包括一个涂药器498，涂药器498含有可以再溶解形式的对于被分析物的一种特异性结合对。这样定位涂药器498，使得当把第一和第二可相对的组件462和464相对时，涂药器498与屏障492接触，从而使被再溶解的被标记的特异性结合对穿过屏障492中的孔494施加给层析介质474。第二可相对的组件464还包括第二和第三吸收体500和502，第二和第三吸收体500和502这样定位，使得当把第一和第二可相对的组件462和464相对时，第二吸收体500与在屏障492和层析介质474的第一端476之间的层析介质474的一部分504可操作地接触，而第三吸收体502与在屏障492和层析介质474的第二端478之间的层析介质474的一部分506相对地接触。这使得第二和第三吸收体500和502能从层析介质474中去除流体。
在使用时，样品施加给样品制备区域480，并使得该样品能迁移通过包括检测区域476的层析介质474。然后，把含水液体加给在第二可相对的组件464上的涂药器488，以便再溶解对于被分析物的被标记的特异性结合对。然后，使第一和第二可相对的组件462和464相对，以把被再溶解的被标记的特异性结合对施加给屏障484中的孔486。同时，把第二和第三吸收体490和492施加给层析介质466以便从层析介质466中去除流体。如果检测样品中有被分析物的话，那么，在检测区域476中形成一种三元配合物，用于检测该被分析物。III、放大的免疫层析法本发明的另一个方面是一种用于进行放大的免疫层析的装置。这样的一种装置取决于用银染色的胶体金的放大。A、银放大的原理可以用银来放大胶体金，该胶体金作为一种用于参与一种特异性结合反应的一种化合物的标记物，即作为一种特异性结合对，例如，一种抗原、不全抗原、抗体或抗体碎片。金可催化一种可溶解的银盐还原为金属银，产生一些围绕金标记的银壳层，从而使得可见到更大的区域。这放大了结合在处于检测区域处的三元配合物中的信号。可溶解的银盐最好是乳酸盐。还原剂一般是一种醌，例如，氢醌。B、采用银放大的装置本发明具有两种类型的采用银放大的装置。第一种类型的装置包括一种金溶胶标记的特异性结合对，这种特异性结合对以可再溶解的形式装在邻接一个样品制备区域的第一可相对的组件上。在这种装置中，第二可相对的组件包括一个含有一种可溶解的银盐和一种还原剂的涂药器。第二种类型的装置特别适于确定在拭子上的某种样品中的一种被分析物。在这种装置中，所述拭子插入第二可相对的组件，并且通过一个定位在该装置中的插入件来提供可溶解的银盐和还原剂。1、具有装在第二可相对的组件上的涂药器中的银盐的装置一种采用银放大的前述装置包括在位于第二可相对的组件中的涂药器上的一种可溶解的银盐和一种还原剂。这种装置包括(1)一个第一可相对的组件，该组件包括(a)一种平面层析介质，这种层析介质具有一个第一端、一个第二端以及顶表面和底表面，并且如上所述，在一个检测区域中具有对于固定在其上的被分析物的一种特异性结合对；(b)一个与上述层析介质的第二端可操作地接触的吸收体；(c)一个与上述层析介质的第一端可操作地接触的导体；(d)一个共轭物区域，这个共轭物区域以通过给共轭物区域加入一种含水液体而可以再溶解的形式含有对于用一种金溶胶标记的被分析物的一种特异性结合对，该共轭物区域与上述导体直接接触，并且与上述层析介质的第一端间接接触；(e)一个用于施加某种检验样品的样品制备区域，这个样品制备区域与上述共轭物区域直接接触，所述导体、共轭物区域及样品制备区域这样定位，使得该共轭物区域接通所述样品制备区域和所述导体；以及(f)一个邻接上述层析介质的第二表面的、基本上不能渗透流体的屏障，且有一个孔贯穿这个屏障，用于把液体施加给上述层析介质；以及(2)一个第二可相对的组件，该组件包括(a)一个涂药器，这个涂药器以通过给其加入一种含水液体而可以再溶解的形式含有(i)一种可溶解的银盐，和(ii)一种还原剂，这样定位该涂药器，使得当把所述第一和第二可相对的组件相对时，该涂药器与上述屏障接触，从而使再溶解的银盐和还原剂穿过上述屏障中的孔施加给所述层析介质；以及(b)第二和第三吸收体，这样定位被第二和第三吸收体，使得当把上述第一和第二可相对的组件相对时，该第二吸收体与在上述屏障和所述层析介质的第一端之间的所述层析介质的一部分可操作地接触，而该第三吸收体与在上述屏障和所述层析介质的第二端之间的所述层析介质的一部分可操作地接触，从而使该第二和第三吸收体从所述层析介质中去除流体。
图13A和13B中画出了这种装置。图13A中示出了该装置的两个组件的构造，而图13B示出了沿着第一个组件线K——K’的一个剖面，显示了层析介质、导体、共轭物区域、样品制备区域、第一吸收体、屏障和孔的细节。装置520具有用一个合叶526连接起来的一个第一可相对的组件522和一个第二可相对的组件524。第一和第二可相对的组件522和524具有诸如锁扣528和530那样的连接器，以便当把它们放置得相对时卡住所述这些组件，而且，当把第一和第二可相对的组件522和524相对时，有一个密封垫532环绕它们。
第一可相对的组件522具有一种层析介质534。层析介质534具有第一和第二端536和538、以及第一和第二表面540和542。层析介质534还具有一个检测区域544，检测区域544实际上比层析介质534的面积小。该检测区域包括一种对于固定在其上的被分析物的特异性结合对。
第一可相对的组件522还包括一个吸收体546和一个导体548，吸收体546与层析介质534的第二端538可操作地接触，而导体548与层析介质534的第一端536可操作地接触。
第一可相对的组件522还包括一个共轭物区域550，共轭物区域550以通过向其中加入一种含水液体而可以再溶解的形式含有对于用一种金溶胶标记的被分析物的一种特异性结合对。共轭物区域550与导体548直接接触，并与层析介质534的第一端536间接接触。
第一可相对的组件522还包括一个用于施加某种检验样品的样品制备区域552。样品制备区域552与共轭物区域550直接接触。导体548、共轭物区域550、及样品制备区域552这样定位在第一可相对的组件522上，使得共轭物区域550接通样品制备区域552和导体548。
第一可相对的组件522还包括一个邻接层析介质534的第一表面540的、基本上不能渗透流体的屏障554。有一个孔556贯穿屏障554，用于把液体施加给层析介质534。孔556的面积实际上比屏障554小，从而使液体可在由屏障554覆盖的区域中只穿过孔556进入层析介质534。不过，液体还可穿过导体548进入层析介质534。
第一可相对的组件522还包括一个邻接层析介质534的第二表面542的窗口558，用于观察层析介质534。
第二可相对的组件524包括一个含有一个放大器区域562的涂药器560。放大器区域562以通过给涂药器560加入含水液体而可再溶解的形式含有(1)一种可溶解的银盐，以及(2)一种还原剂。这样定位涂药器560，使得当把第一和第二可相对的组件522和524相对时，涂药器560与屏障554接触，从而使在放大器区域562中的上述再溶解的银盐及所述还原剂穿过屏障554中的孔556施加给层析介质534。第二可相对的组件524还包括第二和第三吸收体564和566。这样定位第二和第三吸收体564和566，使得当把第一和第二可相对的组件522和524相对时，第二吸收体564与在屏障554和层析介质534的第一端536之间的层析介质534的一部分568可操作地接触，而第三吸收体566与在屏障554和所述层析介质的第二端538之间的层析介质534的一部分570可操作地接触。这样，第二和第三吸收体564和566从所述层析介质中去除流体。
在使用时，样品施加给装置520的样品制备区域552。使得该样品能穿过共轭物区域550流动，以便可再溶解在共轭物区域550中的被标记的特异性结合对。然后，使所述样品和被再溶解的被标记的特异性结合对能穿过导体548进入层析介质534，并能至少流过包括检测区域544的层析介质534的一部分。之后，给在第二可相对的组件524上的涂药器560加入一种含水液体，以便可再溶解在放大器区域562中的可溶解的银盐和还原剂。然后，使第一和第二可相对的组件522和524相对，以便能把所述被再溶解的银盐和上述还原剂穿过屏障554中的孔556施加给层析介质534，并能使第二和第三吸收体564和566与层析介质534的部分568和570可操作地接触，以便从层析介质534中抽取流体。之后，使上述被再溶解的银盐和所述还原剂能至少穿过包括检测区域544的层析介质534的一部分流动，以便围绕上述被标记的特异性结合对的金标记物中的金沉积银。这样，在检测区域544处所结合的任何三元配合物都结合有银，以便放大信号。2、具有两个区段的涂药器以便提供清洗的装置本发明的、采用了银放大由金溶胶产生的信号的、一种测定装置的另一种改型具有一种包括两个区段的涂药器，以便在把含水的银盐和还原剂施加给层析介质之前，为所述层析介质提供清洗。
这种装置包括(1)一个第一可相对的组件，该组件包括(a)一种层析介质，这种层析介质具有一个第一端、一个第二端、第一和第二表面以及一个检测区域，如上所述，该检测区域具有对于被分析物的一种特异性结合对；(b)一个与上述层析介质的第二端可操作地接触的吸收体；(c)一个与上述层析介质的第一端可操作地接触的导体；(d)一个共轭物区域，这个共轭物区域以通过给其中加入一种含水液体而可以再溶解的形式含有对于用一种金溶胶标记的被分析物的一种特异性结合对，该共轭物区域与上述导体直接接触，而与所述层析介质的第一端间接接触；(e)一个用于施加一种检验样品的样品制备区域，这个样品制备区域与上述共轭物区域直接接触，这样定位上述导体、共轭物区域及样品制备区域，使得该共轭物区域接通所述样品制备区域和上述导体；以及(f)一个邻接上述层析介质的顶表面的、基本上不能渗透流体的屏障，且如上所述，有一个孔贯穿该屏障，所述孔的面积实际上比上述屏障小；以及(2)一个第二可相对的组件，该组件包括(a)一个包括两个区段的涂药器(i)一个用于容纳含水液体的第一区段；以及(ii)一个以可以再溶解的形式含有一种可溶解的银盐和一种还原剂的第二区段；以及(b)第二和第三吸收体。
这样定位涂药器，使得当把第一和第二可相对的组件相对时，该涂药器的第一区段与屏障中的孔直接接触，而该涂药器的第二区段与所述孔间接接触，从而使含水液体首先施加给层析介质，以便提供清洗，随后使含水的银盐和还原剂施加给所述层析介质。这样定位第二和第三吸收体，使得当把上述第一和第二可相对的组件相对时，该第二吸收体与在上述屏障和所述层析介质的第一端之间的所述层析介质的一部分可操作地接触，而该第三吸收体与在上述屏障和所述层析介质的第二端之间的所述层析介质的一部分可操作地接触，从而使该第二和第三吸收体从所述层析介质中去除流体。
图14A和14B中画出了这种装置。图14A示出了该装置的两个组件的构造，而图14B示出了沿着第一个组件线L——L’的一个剖面，显示了层析介质、与所述层析介质直接或间接接触的那些部件、屏障和孔的细节。层析测定装置580具有用一个合叶586连接起来的一个第一可相对的组件582和一个第二可相对的组件586。第一和第二可相对的组件具有诸如锁扣588和590那样的连接器，以便把所述那些可相对的组件保持在一起。当把第一和第二可相对的组件582和584相对时，一个密封垫592环绕它们。
第一可相对的组件582具有一种层析介质594，层析介质594具有第一和第二端596和598、以及第一和第二表面600和602。层析介质594具有对于固定在其上的被分析物的特异性结合对的一个检测区域604。检测区域604的面积实际上比层析介质594小。
第一可相对的组件582还包括一个吸收体606和一个导体608，吸收体606与层析介质594的第二端598可操作地接触，而导体608与层析介质594的第一端596可操作地接触。第一可相对的组件582还包括一个共轭物区域610，共轭物区域610以可以再溶解的形式含有对于用一种金溶胶标记的被分析物的一种特异性结合对。共轭物区域610与导体608直接接触，并与层析介质594的第一端596间接接触。
第一可相对的组件582还包括一个用于施加某种检验样品的样品制备区域612。样品制备区域612与共轭物区域610直接接触。样品制备区域612可至少含有一种用于处理样品的试剂。这样定位导体608、共轭物区域610及样品制备区域612，使得共轭物区域610接通样品制备区域612和导体608。
第一可相对的组件582还包括一个邻接层析介质594的第一表面600的、基本上不能渗透流体的屏障614。有一个孔616贯穿屏障614，用于把液体施加给层析介质594。孔616的面积实际上比屏障614小，从而使液体可只穿过孔616进入层析介质594邻接屏障614的那个部分。
第一可相对的组件582还包括一个邻接层析介质594的第二表面602的窗口618，用于观察层析介质594。
第二可相对的组件584包括一个涂药器620，涂药器620包括两个区段(1)一个用于容纳含水流体的第一区段622；和(2)一个以可以再溶解的形式含有一种可溶解的银盐和一种还原剂的第二区段624。这样定位涂药器620，使得当把第一和第二可相对的组件582和584相对时，涂药器620的第一区段622与屏障614中的孔616直接接触，而涂药器620的第二区段624与孔616间接接触，从而使上述含水液体首先施加给层析介质594，以便提供清洗，随后，使再溶解的银盐和所述还原剂施加给层析介质594。第二可相对的组件584还包括一个第二吸收体626和一个第三吸收体628。这样定位第二和第三吸收体626和628，使得当把第一和第二可相对的组件582和584相对时，第二吸收体626与在屏障614和层析介质594的第一端596之间的所述层析介质的一部分630可操作地接触，而第三吸收体628与在屏障614和层析介质594的第二端598之间的所述层析介质的一部分632可操作地接触。这使得第二和第三吸收体626和628能从层析介质594中去除流体。
在使用时，样品施加给装置580的样品制备区域610。使得该样品能穿过共轭物区域608流动，以便可在共轭物区域608中再溶解对于被分析物的被标记的特异性结合对。然后，使得所述样品和再溶解的被标记的特异性结合对能穿过导体606进入层析介质592，并能至少穿过包括检测区域602的层析介质592的一部分流动。这在存在于检验样品中的任何被分析物和在检测区域602处被固定的特异性结合对之间形成一种二元配合物。之后，把一种含水液体加给涂药器616的第一和第二区段618和620。这可在涂药器616的第二区段620中再溶解上述可溶解的银盐及所述还原剂。随后，使第一和第二可相对的组件582和584相对，以便把在涂药器616的第一区段618中的上述含水液体作为一种洗涤剂穿过孔614施加给层析介质592，随后，把上述再溶解的银盐和所述还原剂施加给层析介质592。这还使第二和第三吸收体622和624与层析介质592的部分626和628相对地接触，以便从层析介质592中抽取流体。然后，使上述被再溶解的银盐和所述还原剂能至少穿过包括检测区域602的层析介质592的一部分流动，以使银围绕增强信号的金标记物的金而沉积。3、具有基板和插入件的装置适用于进行放大了的免疫层析的本发明的另一种装置分成两个可分离件一个基板和一个插入件。该插入件包括一个用于施加可溶解银盐和还原剂的涂药器。
这装置包括(1)一个基板，这个基板包括(a)一个第一可相对的组件，该组件包括(i)一种具有一个第一端、一个第二端、以及第一和第二表面的平面层析介质，而且如上所述此介质在一个检测区域中具有对于固定在其上的被分析物的某种特异性结合对；(ii)一个以可以再溶解的形式含有对于用金溶胶标记的被分析物的某种特异性结合对的共轭物区域，此共轭物区域与上述层析介质的第一端可操作地接触；(iii)一个与上述共轭物区域可操作地接触的导体；该共轭物区域接触到上述层析介质的第一端和所述导体；(iv)一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的屏障，且如上所述有一个孔贯穿该屏障，用于把液体施加到上述层析介质；(b)一个第二可相对的组件，该组件包括(i)一个用于包含有某种检验样品的拭子的插座；(ii)一个用于给上述拭子添加至少一种萃取试剂的井；以及(iii)与上述插座和井分开的一个第一吸收体；和(c)一个插座，用于使插入件稳定，避免插入件的表面相对运动和上述第一和第二可相对的组件的相对运动；以及(2)一个插入件，该插入件包括(a)一个以可再溶解的形式含有某种可溶解的银盐及还原剂的涂药器；(b)一个第二吸收体；(c)一个第三吸收体；以及(d)用于插入上述基板的插座的凸出物。
这样成形基板的第一和第二可相对的组件，以便当使它们相对时，使第一吸收体与在屏障和层析介质的第二端之间的所述层析介质的一部分接触，而且插座与导体接触。插入件这样成形，使得当插入件的凸出物插进基板的插座时，涂药器与孔可操作地接触，第二吸收体与在上述屏障和层析介质的第一端之间的所述层析介质的一部分可操作地接触，并且第三吸收体与在上述屏障和层析介质第二端之间的所述层析介质的一部分可操作地接触。
用于保持插入件的插座可以在基板的第一或第二可相对的组件中。它也可以位于基板的第一和第二可相对的组件之间，如在上述两个组件装置中那样，一般用一个合叶连接该第一和第二可相对的组件。
图15A和15B中示出了装有一个基板和一个插入件的装置。图15A示出了与插入件在一起的基板的两个组件的配置情况，而图15B示出了沿基板的第一个组件的M——M’线的剖面，显示了层析介质、与所述层析介质直接或间接接触的那些部件、屏障及孔的细节。装置640包括一个基板642和一个插入件644。基板642包括用合叶650连接的一个第一可相对的组件646和一个第二可相对的组件648。
基板642的第一可相对的组件646包括一种层析介质656。层析介质656有第一和第二端658和660、以及第一和第二表面662和664。层析介质656还包括有一个检测区域666，如上所述，检测区域666包含对于固定到那里的被分析物的某种特异性结合对。
基板642的第一可相对的组件646包括一个共轭物区域668，共轭物区域668以可以再溶解的形式含有对于用一种金溶胶标记的被分析物的特异性结合对。共轭物区域668与层析介质656的第一端658可操作地接触。基板642的第一可相对的组件646还包括与共轭物区域668可操作地接触的导体670。共轭物区域668接通层析介质658的第一端和导体670。
第一可相对的组件646还包括一个基本上不能渗透流体的屏障672，屏障672邻接层析介质656的第一表面662，而且有一个孔674贯穿屏障672，用于给层析介质656施加液体。孔674的面积实际上小于屏障672，从而使液体只穿过孔674就能进入层析介质656邻接屏障672的那个区域。
基板642的第一可相对的组件646还包括一个用于观察层析介质656的窗口676。
基板642的第二可相对的组件648包括用于含有某种检验样品的拭子的一个第一插座678、一个用于给所述拭子添加至少一种萃取试剂的井680以及一个与插座678和井680分开的第一吸收体682。基板642的第一和第二可相对的组件646和648这样成形，以便当使它们相对时，使第一吸收体682与在屏障672和层析介质656的第二端660之间的所述层析介质的一部分684接触，并使第一插座678与导体670接触。基板642还包括一个用于插入件644的第二插座686。可用一个连接器688，例如一个可松开的标记物、一个VelcroTM搭扣或其它可逆向连接的搭扣，把第一和第二可相对的组件646和648保持在一起。
插入件644包括一个涂药器690，涂药器690以可再溶解的形式包括一种可溶解的银盐和一种还原剂。插入件644还包括一个第二吸收体692和一个第三吸收体694，还有一个用于插入基板642的第二插座686中的凸出物696。插入件644这样成形，使得当凸出物696插进上述基板的第二插座686中时，涂药器690与孔674可操作地接触，以便穿过孔674给层析介质656施加涂药器690的所含之物。第二吸收体692与在屏障672和层析介质656的第一端658之间的层析介质656的一部分698可操作地接触。第三吸收体694与在屏障672和层析介质656的第二端660之间的所述层析介质的部分682可操作地接触；也就是说，当第一和第二可相对的组件646和648在插入件644插入之前相对时，第三吸收体694与第一吸收体682位于相同位置。
通过把凸出物696以这样一种方式插入第二插座686来插入插入件644，即插入件644的各表面以及基板642的第一和第二可相对的组件646和648保持稳定，而无相对运动。
在使用时，含有某种检验样品的拭子放在装置640的基板642的第二可相对的组件648的第一插座678中。至少一种萃取试剂施加给井680，以便从所述拭子中萃取被分析物。然后使基板642的第一和第二可相对的组件646和648相对。上述在第一插座678中的拭子与导体670接触，以便给导体670施加被萃取了的被分析物。之后，使得被萃取的样品能够穿过共轭物区域668流动，以便可再溶解其中被标记的特异性结合对。然后，使被萃取过的样品和被再溶解的、被标记的特异性结合对能进入层析介质656，并至少穿过包括检测区域666的层析介质656的一部分流动。之后，给插入件644的涂药器688加入一种含水液体，以便再溶解可溶解的银盐和还原剂。把插入件644的凸出物696插进基板642的第二插座686，并这样定位该插入件，使得涂药器688与屏障中的孔674接触，以便给层析介质656施加涂药器686的所含之物到孔674。第二和第三吸收体692和694与层析介质656的一些部分接触。然后，使上述被再溶解的可溶解的银盐和还原剂能至少穿过包括检测区域666的层析介质656的一部分流动，以便放大用于检测被分析物的信号。IV、酶免疫层析法通过特异性结合反应测定被分析物的一种强有力的技术是酶免疫层析法。在这种技术中，在某种特异性结合反应中的那些组份之一，例如，某种抗体、抗原或不全抗原，用一种酶来标记。通过给所述酶提供一种底物并观察由所述酶催化的反应产生的一种可检测的产物，来检测在那种组份和它的特异性结合对之间的配合物。尽管原则上这是一种强有力的技术，但通常的免疫层析法并不适用于酶标记物，因为必须随着酶的迁移加入酶底物。然后，试验条中的残余酶导致本底颜色显影，这使得读取结果如果不是不可能的话也极为困难。不过，如下所述，本发明的装置可适于进行酶免疫层析。A、酶标记的原理在本领域中，酶标记的原理是人所共知且已在文献中公开，例如，在P.Tijssen的“Practice and Theory of Enzymeimmunoassay”(Elsevier，Amsterdam，1985，pp.173-296)中，或在E.Harlow & V.Lane的“AntibodiesA LaboratoryManual”(Cold Spring Harbor，New York，1988，pp.592-599)中，此处引入这两篇文献作为参考。本领域中所熟知的因素有酶和底物的选择以及用于把特异性结合对耦合到所述酶的方法。1、酶和底物的选择大量性质为人熟知的酶用于酶免疫层析法。对于这些酶的每一种，至少可使用一种底物。优选地，底物是这样一种物质，它由于酶所催化的反应而产生一种不溶解产物。这样一种不溶解产物可在检测区域附着于层析介质，以便能够检测。
在这些酶当中，对酶免疫层析法特别有用的是辣根过氧物酶和碱性磷酸酯酶。对于辣根过氧化物酶，适合的底物来自一些不溶解产物，这些不溶解产物包括4-氯-1-萘酚、3-氨基-9-乙基咔唑和二氨基联苯胺(3，3’，4，4’-四氨基联二苯)。在有钴或镍离子的情况下可使用二氨基联苯胺。对于碱性磷酸酯酶，产生某种不溶解产物的一种合适的底物是溴氯吲哚基磷酸盐-氮四唑的一种混合物。本领域中还知道一些其它的适用于免疫层析法的酶和底物。2、酶和特异性结合对成员的耦合在进行免疫层析法时，涉及到被分析物的一对特异性结合对的至少一个成员共价耦合到用来产生可检测的产物的酶。一般地，如果被分析物是一种抗原或不全抗原，特异性地结合该抗原或不全抗原的一种抗体共价地与酶耦合。不过，还可进行免疫层析法以便检测一些抗体，在这种情况下，所述抗体特异性地结合的一种抗原或不全抗原与酶耦合。一些用于使抗体与酶耦合的试剂有高碘酸钠、戊二醛、p-苯醌、N，N’-O亚苯基二马来酰亚胺、双-琥珀酸N-羟基琥珀酸酯、碳化二亚胺、甲代亚苯基2，4-二异氰酸酯、4，4’-二氟-3，3’-二硝基苯砜、4-(N-马来酰亚氨基甲基)-环己烷-1-羧酸N-羟基琥珀酰亚胺酯、m-马来酰亚氨基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯、p-甲酰基苯甲酸的N-羟基琥珀酰亚胺酯以及N-琥珀酰亚氨基-3-(2-吡啶基联硫基)丙酸。本领域中已知其它一些适用于共轭的试剂。
在本领域中，众所周知抗原和不全抗原对于包括酶的一些蛋白质的共轭，并且，例如在P.Tijssen的上述文献的第279至296页中有说明。
简而言之，可通过混合过的酐反应、与一种水溶性的碳化二亚胺的反应、或与N-羟基琥珀酰亚胺的反应，可以耦合含有羧基团或可被羰化的不全抗原或抗原。可通过一些反应来完成羧化作用，例如，用一些卤代酯的氧或氮取代基的烷基取代化，随后是酯的水解，或者是在一些类固醇的羟基或酮基上形成半琥珀酸酯或羧甲基肟。
具有氨基或可还原为氨基的硝基的不全抗原或抗原可转化为某些重氮盐，并且可与用于某些芳香胺的具有碱性pH值的一些蛋白质反应。可通过各种方法使具有某些脂肪胺的不全抗原或抗原与某些蛋白质共轭，这些方法包括与某些碳化二亚胺反应、与同型二官能试剂甲代亚苯基2，4-二异氰酸酯反应或与马来酰亚胺化合物反应。脂肪胺还可通过下述方法转化为芳香胺，所述方法是与p-硝基苯甲酰氯反应，随后还原为p-氨基苯甲酰胺，然后，在重氮化后，p-氨基苯甲酰胺与某些蛋白质耦合。还可用某些双官能酯，例如，二甲基庚二亚氨酸酯、二甲基己二亚氨酸酯或二甲基辛二亚氨酸酯，使含有氨基的不全抗原或抗原与包括某些酶在内的一些蛋白质耦合。
含有硫羟的不全抗原或抗原可与具有马来酰亚胺的蛋白质共轭，例如，与具有4-(N-马来酰亚氨基甲基)-环己烷-1-羧酸N-羟基琥珀酰亚胺酯的蛋白质共轭。
对于具有羟基的不全抗原或抗原，乙醇官能团可转化为半琥珀酸，这引入了可用于共轭的羧基。可以选择地，双官能试剂癸二酰二氯将醇转化为酰氯，酰氯然后与酶反应。
酚可以用重氮化了的p-氨基苯甲酸活化，p-氨基苯甲酸引入羧基，而且，然后通过混合酐反应与蛋白质反应。可通过形成p-硝基苯苷随后把硝基还原为氨基以及重氮化作用的共轭来活化糖。其它一些方法包括通过与高碘酸的反应使糖的连位二醇裂解为醛，随后通过用硼氢化钠进行还原性烷基化与胺耦合。可以选择地，含有羟基的不全抗原或抗原可在通过与碳酰氯反应而转化为氯甲酸酯后被共轭。
对于具有醛基或酮基的不全抗原或抗原，可通过形成O-羧甲基肟来引入羧基。还可用p-肼基苯甲酸来衍生酮基，以产生羧基。含有某些醛的不全抗原或抗原可通过形成席夫(Schiff)碱来直接共轭，席夫碱通过与还原剂(例如，硼氢化钠)反应被稳定。前面所述是概述，而本领域中，一些其它耦合方法是众所周知的，而且可用于特异性抗原或不全抗原。B、适用于酶免疫层析法的装置本发明的免疫层析装置的几种变型都适合用于酶免疫层析法。在这样的装置中，把对于被分析物的酶标记的特异性结合对加到检验样品中，并使得该对于被分析物的酶标记的特异性结合对能穿过层析介质迁移。在该装置中，一个插入件以可再溶解的形式包含用于酶标记物的一种底物。
这种装置包括(1)一个基板，这个基板包括(a)一个第一可相对的组件，该组件包括(i)一种平面层析介质，该介质具有一个第一端、一个第二端、以及第一和第二表面，并如上所述在一个检测区域中具有对于固定在其上的被分析物的一种特异性结合对；(ii)一个与上述层析介质的第一端可操作地接触的导体；以及(iii)一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的屏障，而且有一个孔贯穿该屏障，用于给所述层析介质施加液体，所述孔的面积实际上小于上述屏障；(b)包括一个第一吸收体的一个第二可相对的组件，这样成形所述第一和第二可相对的组件，以便当使它们相对时，使所述第一吸收体与在上述屏障和层析介质的第二端之间的所述层析介质的一部分可操作地接触；以及(c)一个用于插入一个插入件凸出物的插座，以保持插入件的稳定，避免插入件表面的相对运动和上述第一和第二可相对的组件的相对运动；(2)一个插入件，该插入件包括
(a)一个以可再溶解的形式含有一种用于某种酶标记物的底物的涂药器，这种酶标记物与对于被分析物的一种特异性结合对结合，该酶标记物通过催化涉及所述底物的反应产生一种不溶解的、可检测的产物；(b)一个第二吸收体；(c)一个第三吸收体；以及(d)用于插入上述基板的插座的一个凸出物。
插入件这样成形，使得当凸出物插入基板的插座中时，涂药器与孔可操作地接触，以便通过所述孔将该孔的所含之物施加到层析介质，第二吸收体与在屏障和所述层析介质的第一端之间的所述层析介质的一部分可操作地接触，而第三吸收体与在屏障和上述层析介质的第二端之间的所述层析介质的一部分可操作地接触。
图16A和16B中画出了这种装置。图16A示出了与插入件在一起的基板的两个组件的构造，而图16B示出了沿着该基板的第一个组件的N-N’线的剖面，显示了层析介质、直接或间接与该层析介质接触的那些部件、屏障及孔的细节。测定装置720包括一个基板722和一个插入件724。基板722包括由一个合叶730连接在一起的一个第一可相对的组件726和一个第二可相对的组件728。第一可相对的组件726具有一种层析介质736，层析介质736具有第一和第二端738和740、以及第一和第二表面742和742。层析介质736包括一个检测区域746，在检测区域746上固定有对于被分析物的特异性结合对。第一可相对的组件726还包括一个与层析介质736的第一端738可操作地接触的导体748。第一可相对的组件726还包括一个邻接层析介质736的第一表面742的、基本上不能渗透流体的屏障750。有一个孔752贯穿屏障750，用于给层析介质736施加液体。孔752的面积实际上小于屏障750。第一可相对的组件726还包括一个窗口754，以便使得能观察上述层析介质。
第二可相对的组件728包括一个第一吸收体756。这样成形第一和第二可相对的组件706和708，以便当使它们相对时，使第一吸收体756与在屏障750和层析介质736的第二端740之间的层析介质736的第一部分758可操作地接触。基板702还包括一个插座760，以容纳插入件724。可通过某种连接器762，例如，一个可松开的标记物、一个VelcroTM搭扣、或其它可逆向连接的搭扣，把第一和第二可相对的组件726和728保持在一起。
插入件724包括一个涂药器764，涂药器764以可再溶解的形式含有某种用于酶标记物的底物，所述酶标记物与对于被分析物的一种特异性结合对结合。插入件724还包括一个第二吸收体766和一个第三吸收体768以及一个用于插入基板722的插座760的凸出物770。这样成形插入件724，使得当凸出物770插入基板722的插座760中时，涂药器764与孔752可操作地接触，以便穿过该孔将涂药器764的所含之物施加给层析介质736。第二吸收体766与在屏障750和层析介质736的第一端738之间的层析介质736的第二部分772可操作地接触。第三吸收体768与在屏障750和层析介质736的第二端740之间的层析介质736的第一部分758可操作地接触。
在使用中，把对于被分析物的一种酶标记的特异性结合对加到某种含水检验样品中。把含有样品和酶标记物的溶液加到导体748。然后，使基板722的第一和第二可相对的组件726和728相对。使第一吸收体756与在屏障750和层析介质736的第二端740之间的层析介质736的部分758可操作地接触。然后，使样品——标记物溶液能进入层析介质736，并能至少穿过包括检测区域746的层析介质736的一部分流动。把一种含水液体加到插入件724的涂药器764，以便再溶解在涂药器764上的底物。可以在把上述样品——标记物溶液施加给导体748之前，也可以在施加给导体748之后来做到这一点。然后，把插入件724的凸出物770插入基板722的插座760。把插入件724这样定位，使得涂药器764与屏障750中的孔752接触。穿过孔752把涂药器764的所含之物施加给层析介质736。把第二和第三吸收体放置得与层析介质736的部分772和758接触，以便从层析介质736中抽取流体。然后，使再溶解的底物能至少穿过包括检测区域746的层析介质736的那部分流动。酶标记物的酶催化这样的反应，所述反应涉及上述底物并沉积不溶解产物作为标记物的信号。这使得能检测结合到检测区域746处的、被标记了的特异性结合对，以便检测和/或确定被分析物。
本发明的适用于酶免疫层析法的测定装置的另一种改型并不需要预混合用于施加给该装置的某种样品——酶溶液。在这种装置中，基板的第一可相对的组件包括对于用酶标记的被分析物的一种特异性结合对。
这种装置包括
(1)一个基板，这个基板包括(a)一个第一可相对的组件，该组件包括(i)一种平面层析介质，此介质具有一个第一端、一个第二端、以及第一和第二表面，并如上所述在一个检测区域中具有对于固定在其上的被分析物的一种特异性结合对；(ii)一个以可以再溶解的形式含有用一种酶标记的被分析物的某种特异性结合对的共轭物区域，该共轭物区域与上述层析介质的第一端可操作地接触；(iii)一个与上述共轭物区域可操作地接触的导体，所述共轭物区域接通上述层析介质的第一端和所述导体；以及(iv)一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的屏障，而且有一个孔贯穿该屏障，用于给所述层析介质施加液体，如上所述，所述孔的面积实际上小于上述屏障；(b)一个第二可相对的组件，该组件包括(i)一个用于含有检验样品的拭子的第一插座；(ii)用于给上述拭子添加至少一种萃取试剂的一个井；和(iii)与上述第一插座和井分开的一个第一吸收体；以及(c)一个第二插座，用于使插入件稳定，以避免插入件的表面以及上述第一和第二可相对的组件的相对运动；(2)一个插入件，该插入件包括(a)一个以可再溶解的形式包含用于一种酶标记物的某种底物的涂药器，这种酶标记物与对于被分析物的一种特异性结合对结合，所述酶标记物通过催化涉及上述底物的反应产生一种不溶解的、可检测的产物；(b)一个第二吸收体；(c)一个第三吸收体；和(d)一个用于插入上述基板第二插座的缝中的凸出物。
这样成形第一和第二可相对的组件、以便当使它们相对时，使第一吸收体与在屏障和层析介质的第二端之间的所述层析介质的一部分接触，并使第一插座与导体接触。
这样成形插入件，使得当把凸出物插入基板的第二插座时，涂药器与孔可操作地接触，以便穿过该孔给层析介质施加该涂药器所含之物。第二吸收体与在屏障和层析介质的第一端之间的所述层析介质的一部分可操作地接触。第三吸收体与在屏障和层析介质的第二端之间的所述层析介质的一部分可操作地接触。
图17A和17B画出了这种装置。图17A示出了与插入件在一起的基板的两个组件的构造，而图17B示出了沿所述基板的第一个组件的O——O’线的剖面，显示了层析介质、与所述层析介质直接或间接接触的那些部件、屏障以及孔的细节。测定装置780有一个基板782和一个插入件784。基板782包括用一个合叶790连接在一起的一个第一可相对的组件786和一个第二可相对的组件788。可通过一个连接器792，例如，一个可松开的标记物、一个VelcroTM搭扣或其它可逆向连接的搭扣，把第一和第二可相对的组件786和788保持在一起。
第一可相对的组件786上有层析介质794。层析介质794有第一和第二端796和798、一个第一表面800、以及一个第二表面802。层析介质794上还有一个检测区域804，并有一种对于被分析物的特异性结合对固定于其上。第一可相对的部件还包括一个共轭物区域806，共轭物区域806以可以再溶解的形式含有对于用一种酶标记的被分析物的一种特异性结合对。共轭物区域806与层析介质794的第一端796可操作地接触。第一可相对的组件786还包括一个与共轭物区域806可操作地接触的一个导体808。共轭物区域806接通层析介质794的第一端796和导体808。第一可相对的组件786还包括一个邻接层析介质794的第一表面800的、基本上不能渗透流体的屏障810。有一个孔812贯穿屏障810，用于给层析介质794施加液体。孔812的面积实际上小于屏障810。第一可相对的组件786还包括一个窗口814，用于观察层析介质794。
第二可相对的组件788包括一个第一插座816、一个井818、以及一个第一吸收体820，第一插座816用于含有检验样品的拭子，井808用于给所述拭子添加至少一种萃取试剂，而第一吸收体820与第一插座816和井818分开。
基板782还包括一个第二插座822，用于保持插入件784的稳定，避免第一和第二可相对的组件786和788以及插入件784的相对运动。
第一和第二可相对的组件786和788这样成形，以便当使它们相对时，使第一吸收体820与在屏障810和层析介质794的第二端798之间的层析介质794的一部分824接触。使用于保持拭子的第一插座816与导体808接触。
插入件784包括一个涂药器826，涂药器826以可再溶解的形式含有一种用于某种酶标记物的底物，这种酶标记物与对于被分析物的一种特异性结合对结合。这种酶标记物通过催化涉及上述底物的某种反应产生一种不溶解的、可检测的产物。
插入件784还包括一个第二吸收体828、一个第三吸收体830以及一个用于插入基板782的第二插座822的凸出物832。这样成形插入件784，使得当凸出物832插入基板782的第二插座822中时，涂药器826与屏障810中的孔812可操作地接触。穿过孔812，涂药器826的所含之物施加到层析介质794。第二吸收体828与在屏障792和层析介质794的第一端796之间的层析介质794的一部分834可操作地接触。第三吸收体830与在屏障812和层析介质794的第二端798之间的层析介质794的部分824可操作地接触。
在使用中，含有检验样品的拭子插入基板782的第二可相对的组件788的第一插座816中。至少一种萃取试剂施加到井818，以便从所述拭子中萃取被分析物。使第一和第二可相对的组件786和788相对，从而使在第一插座816中的上述拭子与导体808接触，以便给导体808施加被萃取的被分析物。第一吸收体820与在屏障810和层析介质794的第二端798之间的所述层析介质的部分824接触。然后，使得被萃取的样品能够穿过共轭物区域806流动，以便可再溶解在共轭物区域806中的被标记的特异性结合对，并且使得被萃取的样品和被再溶解的被标记的特异性结合对能进入层析介质794，并能至少穿过包括检测区域804的层析介质794的一部分流动。
把一种含水液体加到插入件784的涂药器826，以便可再溶解上述底物。可在使第一和第二可相对的组件786和788相对之前，也可在此之后加入这种含水液体。
然后，使插入件784的凸出物832插入基板782的第二插座822。这样定位插入件784，使得涂药器826与屏障810中的孔812接触，以便穿过孔810给层析介质794施加涂药器826的所含之物。第二和第三吸收体828和830与层析介质794的部分834和824接触，以便从层析介质794中抽取流体。然后，使被再溶解的底物能至少穿过包括检测区域804的层析介质794的部分流动，从而形成一个可检测的信号，该信号用于检测被分析物。
通过下面的实施例子说明本发明。这些实施例子只是用于说明性的目的，而并不以任何方式构成对本发明范围的限制。
实施例实施例1表明没有与对于贾第虫呈阴性的样品反应的例子进行这样的实验，以表明对于粪便寄生虫贾第虫呈阴性的样品不会与含有组装在本发明的测定装置中抗贾第虫抗体线的试验条反应，即一种呈阴性的对照物。在这种装置中，5μm的硝基纤维素用于层析介质(试验条)，而两条抗贾第虫抗体线(从澳大利亚的Cellabs得到)定位在所指定的试验条上。该试验条的长度为0.75英寸。此试验条的宽度是0.25英寸。在所述试验条的每一端上放置长度为0.375英寸的吸收体(Ahlstrom 270，Ahlstrom Filtration，Holly，Springs，PA)。用一种密封的标记物覆盖上述试验条暴露的表面，在上述两条抗体线之间的某个位置留下一个约1/16英寸的缝隙或狭缝，用于第一屏障252和第一屏障252中的孔254。
在上面图3A和3B中所示的一种两个组件的测定装置的一种简化改型中，放置了试验条和密封的标记物，但没有密封垫82以及吸收体98和100。在层析介质(试验条)84和密封的标记物(屏障)102的顶部上，放置一个用具有粉红色的胶体金染料(40nm，EY实验室，San，Mateo，CA)标记的抗贾第虫抗体的共轭物垫(涂药器)106。在该装置的右边的板中，放置一个样品垫(样品制备区域)110。该样品垫由聚酯材料制成。
把一个对于贾第虫呈阴性的粪便样品放到样品垫上并关闭外壳。通过窗口立刻观察到淡粉色的液体从中央施加带在两个方向上散布开来。在30分钟的一段观察期间，根本没有结果线显影。因此，一种阴性的样品给出一个阴性结果。
实施例2表明对贾第虫呈阳性的检测的试验制备一种简化了的测定装置。这种装置基本上类似于上面图7A和7B所示的装置，但有下述变化(1)省略了分配膜285；(2)在第二个组件上，用一个样品制备区域(样品垫)替代用于拭子286的插座288；(3)省略了连接器(锁扣)268和269、密封垫270、和容纳拭子的窄端开口271；以及(4)277和27 8两者都是抗贾第虫抗体的线，而278不是一个对照区域，即一条被分析物或被分析物类似物的线。在这种装置中，在第一屏障281中的孔282的宽度约为1/16英寸。
图18中示出了这种装置的剖面图。装置840有第一和第二可相对的组件841和842。第一可相对的组件841有一种层析介质843，层析介质843有一个第一端844和一个第二端845、以及第一和第二表面846和847。层析介质843上有第一和第二检测区域848和849。第一可相对的组件841有一个窗口850，用于观察层析介质843。一个具有一个孔852的第一屏障851邻接层析介质843的第一表面846。所述第一可相对的组件还包括一个邻接第一屏障851的涂药器853以及一个邻接涂药器853的中央部分的一个第二屏障854。第二可相对的组件842有一个样品垫855。
把对于贾第虫呈阳性的一种粪便样品加到装置840的第二可相对的组件842上的样品垫855上，并关闭装置840，以便把所述样品施加到层析介质843。在一分钟内，通过窗口清楚可见两条结果线。在试验结束时，一打开装置840，就观察到涂药器853(共轭物垫)已经完全清除了粉色的共轭物。换言之，所述测定装置已完全从上述垫上移动并清除了所述共轭物。
实施例3用于链球菌A的测定装置按照本发明构成用于链球菌A的测定装置。这种装置是图8A和8B所示测定装置的一种简化了的改型，但没有密封垫297和开口298。测定装置290的第一可相对的组件291包括一种其中具有俘获抗体304作为检测区域和一个对照区域305的硝基纤维素层析介质299。俘获抗体是抗链球菌A抗体(Binax，Portland，ME)。对照线是抗兔IgG(Binax)。给层析介质299的背面衬托一个透明塑料衬底315，以便能观察所述层析介质。在层析介质299的一端，定位一个吸收体306。用一个第一屏障膜307覆盖层析介质299，第一屏障膜307包含一个约1/16英寸宽的、构成第一孔308的狭缝。一个用作分配膜309的传导膜放置得邻接第一屏障膜307，而一个第二屏障膜310放置得邻接传导膜309，这样定位第二屏障膜310，使得流动可围绕第二屏障膜310的端点到达传导膜309。一个用作涂药器311的共轭物垫邻接第二屏障膜310。涂药器311在上述那些端点处与传导膜309接触。一个构成表面屏障312的不可渗透的标记物覆盖共轭物垫311。不可渗透的标记物312有一个孔为第二孔313，而且样品穿过第二孔313，不可渗透的标记物312还有两个定位在层析介质293的相对端部处的出口314。
测定装置290的第二个组件292有一个用于插拭子的插座316，由覆盖第二组件292的不可渗透的标记物形成所述拭子。第二组件292还包括真空形成的井317，用于给上述拭子添加萃取试剂。插座316和井317位于第二组件292的表面下方，而上述不可渗透的标记物是在第二组件292的所述表面上。
在使用中，把一些生浓链球菌A的生物体(ATCC 12385)加到一个涤纶拭子上。把这个拭子插入到测定装置290的第二可相对的组件292上的插座316中。当完全插入时，所述拭子的头部从第二组件292的表面稍微凸出。给井317加萃取溶液(四滴萃取试剂A(2M亚硝酸钠，5％的吐温20))，随后加四滴萃取试剂B(0.25M的乙酸，5％的吐温20)，从而通过毛细管现象把细菌和细菌萃取物带给上述拭子的头部。萃取一分钟后，通过把第一组件291折叠到第二组件292上来关闭所述装置，由此，使上述拭子的头部与表面屏障312和第二孔313接触。萃取物迁移到共轭物垫311的端部，围绕第二屏障膜310，并到达分配膜309。在通过第一个孔308和第一屏障膜307把混合物施加到硝基纤维素层析介质299之前，分配膜309用来混合共轭物和萃取物。在第一个孔308的对照线的一侧上没有吸收体确保了大多数混合物可通过抗链球菌A抗体的俘获线，吸收体306在该俘获线外。这种装置在不到3分钟的整个检验时间内，可靠地检测了1×104个生物体。呈阴性的那些样品所给出的结果在至少20分钟的一段时间一致保持呈阴性。
实施例4用于酶免疫层析法的装置采用按上面图16A和16B构成的一种装置，对于荷尔蒙人类绒膜促性腺激素进行酶免疫层析法，常把这种激素测定作为受孕试验。在这种装置中，涂药器764并不含有用于酶标记物的可再溶解的底物；而是在检验过程期间加入所述底物。
在硝基纤维素层析介质736上固定一条抗-hCG抗体线作为检测区域746。把单克隆抗-hCG抗体-碱性磷酸酯酶共轭物(Hybritech，SanDiego，CA)与尿(对hCG呈阳性或阴性)混合，并加到层析介质736的第一端738。把在阳性反应中给出某种沉淀物的酶底物(沉淀碱性磷酸酯酶底物，Hybritech，San Diego，CA)加到在插入件724上的涂药器764，并且在5分钟后，把插入件724放在装置720中并关闭装置720。当试验品尿含有hCG时，在检测区域746处显影出一条被沉淀的底物的兰色带。
本发明的优点本发明的层析测定装置的优点在于由可相对的组件构成。采用可相对的组件提供了巨大的通用性，因为它允许以大量不同的顺序进行那些反应。这一点是可能的，因为采用这样可相对的组件使得能把一些试剂准确地送给一个试验条或其它反应组件的一些确定的区域。采用可相对的组件，还通过确保不会由于把一些试剂隔绝在装置的一些死角而浪费掉这些试剂，从而以最少的试剂消耗量而提供了最佳性能。最后，采用可相对的组件，最佳地容纳了可能被污染的血液样品，每种这样的可能被污染的血液样品含有HIV或肝炎病毒。
此外，本发明的层析测定装置使得能快速且准确地检测那些具有临床重要性的被分析物，例如，链球菌A和B抗原、用于测定便潜血的血红蛋白、和对于幽门螺杆细菌的抗体、以及具有临床重要性的不全抗原。装置的构造，以及在一个孔中穿过一个屏障最终把样品和/或一些试剂施加到层析介质，使得能更均匀地把所述样品和试剂施加给层析介质，并且减少了否则会由颗粒状物质或带色的样品所引入的干扰。这种构造还使得能采用一些过滤用多孔物质，以便在样品到达层析介质前去除颗粒状物质。以可以再溶解的形式采用胶体金属标记物提供了标记的极快速的动力学。这还有助于分离污染物，并改进了测定的效能。
本发明的测定装置还可用于连续免疫层析法或酶免疫层析法。在这些应用中，它们提供了较弱的本底和较高的灵敏度的优点。类似地，本发明的测定装置适于进行用银放大以便增强胶体金标记物的、放大了的免疫测定法。
此外，本发明的测定装置适于疏水性被分析物的测定，例如，由被分析物直接吸收到测定装置的层析介质的脂多糖。
可直接在装置中进行萃取生物样品，例如，血液、唾液或粪便，减少必须处理的被污染的材料的量，并减少内科医生、技术人员或公众被这样的被污染的材料偶然传染的可能性。采用本发明的装置的试验方法有广泛的、潜力很大的范围，并且基本上没有虚假的呈阴性，这种虚假的呈阴性可能会出现在其它一些对于高浓度的被分析物的试验方法中。
尽管已经相当详细地说明了本发明，并参考了它的某些优选的改型，但其它一些改型和实施方案也是可能的。这些改型包括由此处所述的那些基本原理所决定的两个组件或三个组件的装置的其它一些构造，并采用穿过一种屏障中的一个孔控制施加至少一种试剂。这些改型包括各种构造的适于竞争性免疫测定以及夹层免疫测定的测定装置。因此，由下面的权利要求书确定本发明的范围。
权利要求
1.一种用于检测和/或确定在某种检验样品中的一种被分析物的测定装置，包括(a)一种层析介质，这种层析介质具有一个第一端、一个第二端、以及第一和第二表面，并在一个检测区域中具有对于固定到那里的所述被分析物的某种特异性结合对(specific binding partner)；(b)至少一个吸收体，该吸收体与上述层析介质的第一和第二端中的至少一个可操作地接触；和(c)一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的屏障，所述屏障至少有一个孔贯穿其中，用于把液体施加给上述层析介质，所述屏障至少部分地阻挡把液体施加给上述层析介质；上述层析介质、吸收体、屏障和孔这样成形，使得施加给所述屏障的液体通过上述至少一个吸收体抽取穿过上述层析介质，从而被分析物和用于这种被分析物的检测试剂可在上述层析介质上的所述检测区域处形成一种三元配合物。
2.如权利要求1所述的测定装置，包括至少两个吸收体，一个吸收体与上述层析介质的第一端可操作地接触，而一个吸收体与上述层析介质的第二端可操作地接触。
3.如权利要求2所述的装置，其中所述检测区域实际上比所述层析介质的面积小，而且其中所述层析介质还包括一个固定到那里的被分析物或被分析物的类似物的对照区域，该对照区域的面积实际上比上述层析介质小，并且不与所述检测区域重叠，所述对照和检测区域关于上述孔和吸收体这样定位，使得所述检测区域在上述孔和上述吸收体中的一个之间，而所述对照区域在上述孔和另一个吸收体之间。
4.如权利要求1所述的测定装置，还包括一个邻接上述层析介质的底表面的基本上透明的衬底。
5.如权利要求1所述的测定装置，其中所述孔的面积实际上比所述屏障小，而且其中所述屏障关于上述层析介质这样定位，从而使液体只能通过所述孔进入邻接上述屏障的所述层析介质的区域。
6.如权利要求1所述的测定装置，其中所述层析介质和所述至少一个吸收体基本上是平面形状的，且所述屏障位于基本上平行于所述层析介质平面的一个第二平面中。
7.一种用于检测和/或确定在检测样品中的一种被分析物的检验试剂盒，该试剂盒在各独立的容器中包括(a)权利要求1的测定装置；以及(b)用于上述被分析物的被标记的检测试剂的水溶液。
8.一种用于检测和/或确定在含水样品中的被分析物的方法，包括(a)使所述样品与用于上述被分析物的被标记的检测试剂的含水溶液混合，形成含有所述样品和被标记的检测试剂的溶液；(b)把含有上述样品和被标记的检测试剂的溶液施加到权利要求1的测定装置的所述孔上；(c)使含有上述样品和用于所述被分析物的被标记的检测试剂的溶液至少流过包括所述检测区域的上述层析介质的部分；以及(d)通过观察和/或测定结合在上述检测区域处的所述被标记的检测试剂，检测和/或确定在上述检验样品中的所述被分析物。
9.一种用于检测和/或确定在检验样品中的被分析物的测定装置，包括(a)一种层析介质，这种层析介质具有一个第一端、一个第二端、以及第一和第二表面，并在一个检测区域中具有对于固定在其上的所述被分析物的某种特异性结合对；(b)至少一个吸收体，该吸收体与上述层析介质的第一和第二端中的至少一个可操作地接触；(c)一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的屏障，且所述屏障至少有一个孔，用于把液体施加给上述层析介质，所述屏障至少部分地阻挡把液体施加给上述层析介质；和(d)一个邻接上述屏障的涂药器，该涂药器以通过给涂药器加入一种含水液体而可以再溶解的形式含有用于上述被分析物的一种被标记的检测试剂，这样定位该涂药器，使得上述屏障位于该涂药器和所述层析介质之间，而且使得在再溶解上述特异性结合对后通过所述孔抽取施加给涂药器的样品，然后通过上述至少一个吸收体穿过上述层析介质抽取施加给该涂药器的样品，从而在上述层析介质上的所述检测区域处，上述被分析物和用于此被分析物的检测试剂可形成一种三元配合物。
10.权利要求9所述的测定装置，包括至少两个吸收体，一个吸收体与上述层析介质的第一端可操作地接触，而一个吸收体与上述层析介质的第二端可操作地接触，其中所述检测区域实际上比上述层析介质的面积小，而且其中所述层析介质还包括一个固定到那里的被分析物或被分析物的类似物的对照区域，该对照区域的面积实际上比上述层析介质的面积小，并且不与所述检测区域重叠，所述对照和检测区域关于上述孔和所述吸收体这样定位，从而使检测区域在上述孔和上述那些吸收体中的一个之间，而所述对照区域在上述孔和另一个吸收体之间。
11.如权利要求9所述的测定装置，其中用于所述被分析物的上述检测试剂是对于该被分析物的一种被标记的特异性结合对。
12.如权利要求11所述的装置，其中所述被标记的特异性结合对的标记物是一种可目视检测的标记物。
13.一种用于检测和/或测定在含水样品中的一种被分析物的方法，包括(a)把所述样品施加给权利要求9的测定装置的涂药器；(b)使得所述样品再溶解上述被标记的检测试剂，以在含有所述样品和被再溶解的被标记的检测试剂的涂药器中形成一种溶液；(c)使含有上述样品和被标记的检测试剂的所述溶液能流过上述孔、且然后至少穿过包括所述检测区域的上述层析介质的部分；(d)通过观察和/或测定结合在上述检测区域处的所述被标记的检测试剂，检测和/或确定在上述检验样品中的所述被分析物。
14.一种用于检测和/或确定在检验样品中的一种被分析物的层析测定装置，包括(a)一个第一可相对的组件，该组件包括(i)一种层析介质，这种层析介质具有一个第一端、一个第二端、以及第一和第二表面，并在一个检测区域中具有对于固定在其上的所述被分析物的特异性结合对；(ii)至少一个吸收体，该吸收体与上述层析介质的第一和第二端中的至少一个可操作地接触；和(iii)一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的屏障，且该屏障有一个孔用于把液体施加给上述层析介质，所述屏障至少部分地阻挡把液体施加给上述层析介质；(b)一个第二可相对的组件，该组件穿过上述孔把至少一种反应物直接或间接地施加给上述层析介质，其中这样成形所述第一和第二可相对的组件，使得把该第一和第二可相对的组件相对即导致第二可相对的组件穿过上述孔直接或间接地施加至少一种反应物给上述层析介质。
15.如权利要求14所述的测定装置，其中可把所述第一和第二可相对的组件相对放置，使得压力便于通过上述孔施加至少一种反应物给所述层析介质。
16.一种用于检测和/或确定在检验样品中的被分析物的层析测定装置，包括(a)一个第一可相对的组件，该组件包括(i)一种层析介质，这种层析介质具有一个第一端、一个第二端、以及第一和第二表面，并在一个检测区域中具有对于固定在其上的所述被分析物的某种特异性结合对；(ii)至少一个吸收体，该吸收体与上述层析介质的第一和第二端中的至少一个可操作地接触；(iii)一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的屏障，且所述屏障有一个孔，用于把液体施加给上述层析介质，所述屏障至少部分地阻挡把液体施加给上述层析介质；和(iv)一个邻接所述屏障的涂药器，该涂药器以通过给涂药器加入一种含水液体而可以再溶解的形式含有用于上述被分析物的一种被标记的检验试剂，这样定位该涂药器，使得上述屏障位于该涂药器和所述层析介质之间，而且使得在再溶解上述检测试剂后穿过所述孔抽取施加给该涂药器的含水液体，且然后通过上述至少一个吸收体穿过上述层析介质抽取施加给涂药器的含水液体，从而在上述层析介质上的所述检测区域处，上述被分析物和用于此被分析物的检测试剂可形成一种三元配合物；以及(b)一个第二可相对的组件，该组件包括一个样品制备区域；其中这样成形所述第一和第二可相对的组件，使得把所述第一和第二可相对的组件相对即导致上述样品制备区域与所述涂药器接触，从而把在所述样品制备区域中的样品施加到上述涂药器，用于再溶解上述可再溶解的检测试剂，并穿过上述层析介质进行层析。
17.权利要求16的测定装置，包括至少两个吸收体，一个吸收体与上述层析介质的第一端可操作地接触，而一个吸收体与上述层析介质的第二端可操作地接触，其中上述检测区域实际上小于所述层析介质的面积，而且其中所述层析介质还包括一个固定在其上的被分析物或被分析物的类似物的对照区域，该对照区域的面积实际上比上述层析介质的面积小，并且不与所述检测区域重叠，所述对照和检测区域关于上述孔和上述吸收体这样定位，从而使该检测区域在上述孔和上述那些吸收体中的一个之间，而所述对照区域是在上述孔和另一个吸收体之间。
18.如权利要求16所述的测定装置，其中上述用于所述被分析物的检测试剂是一种对于该被分析物的一种被标记的特异性结合对。
19.如权利要求18所述的测定装置，其中上述被标记的特异性结合对的标记物是一种可目视检测的标记物。
20.如权利要求16所述的测定装置，其中上述样品制备区域包含至少一种用于处理所述样品的试剂。
21.一种用于检测和/或确定在含水检验样品中的一种被分析物的方法，包括(a)把样品施加到权利要求16的测定装置的样品制备区域；(b)使第一和第二可相对的组件相对，从而使上述样品从所述样品制备区域转移到涂药器；(c)使被转移到涂药器的样品再溶解在该涂药器中的被标记的检测试剂，以在含有所述被转移的样品和被再溶解的被标记的检测试剂的涂药器中形成一种溶液；(d)使上述含有上述样品和被标记的检测试剂的溶液穿过屏障中的孔进入层析介质，且然后至少流动穿过包括所述检测区域的上述层析介质的部分；以及(e)通过观察和/或测定在所述检测区域处结合的上述被标记的检测试剂来检测和/或确定在某种检验样品中的所述被分析物。
22.一种用于检测和/或确定在含水检验样品中的被分析物的方法，包括(a)把所述样品施加到权利要求20的测定装置的样品制备区域；(b)在上述样品制备区域中培养所述样品，从而使至少一种用于处理所述样品的试剂与所述样品反应，以便产生一种被处理过的样品；(c)使第一和第二可相对的组件相对，从而使所述被处理过的样品从上述样品制备区域转移到涂药器；(d)使得转移到所述涂药器的上述被处理过的样品再溶解在该涂药器中的被标记的检测试剂，以在含有所述被转移了的被处理过的样品和再溶解的被标记的检测试剂的涂药器中形成一种溶液；(e)使含有上述被处理过的样品和再溶解的被标记的检测试剂的溶液穿过屏障中的孔进入层析介质，且然后至少流动穿过包括所述检测区域的上述层析介质的部分；(f)通过观察和/或测定在上述检测区域中的所述被标记的检测试剂来检测和/或确定在所述检验样品中的所述被分析物。
23.一种用于检测和/或确定在检验样品中的被分析物的层析装置，包括(a)一个第一可相对的组件，该组件包括(i)一种层析介质，这种层析介质具有一个第一端、一个第二端、以及第一和第二表面，并具有对于固定在其上的所述被分析物的一种特异性结合对；(ii)至少一个吸收体，该吸收体与上述层析介质的第一和第二端中的至少一个可操作地接触；和(iii)一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的屏障，且该屏障有一个孔用于把液体施加给上述层析介质，所述屏障至少部分地阻挡把液体施加给上述层析介质；和(b)一个第二可相对的组件，该组件包括一个用于施加某种样品到该处的涂药器，该涂药器以通过给涂药器加入一种含水液体而可以再溶解的形式含有用于上述被分析物的一种被标记的检测试剂；其中这样成形所述第一和第二可相对的组件，使得把所述第一和第二可相对的组件相对即导致所述涂药器与上述屏障可操作地接触，从而使在所述涂药器中的样品和被再溶解的检测试剂穿过上述屏障中的孔施加到上述层析介质，用于穿过所述层析介质进行层析。
24.权利要求23的测定装置，包括至少两个吸收体，一个吸收体与所述层析介质的第一端可操作地接触，而一个吸收体与所述层析介质的第二端可操作地接触，其中上述检测区域实际上小于所述层析介质的面积，而其中所述层析介质还包括一个固定在其上的被分析物或被分析物的类似物的对照区域，该对照区域的面积实际上比上述层析介质的面积小，并且不与所述检测区域重叠，所述对照和检测区域关于上述孔和上述吸收体这样定位，从而使该检测区域在上述孔和上述那些吸收体中的一个之间，而所述对照区域是在上述孔和另一个吸收体之间。
25.如权利要求23的测定装置，其中上述用于所述被分析物的检测试剂是一种对于该被分析物的被标记的特异性结合对。
26.如权利要求24所述的测定装置，其中上述被标记的特异性结合对的标记物是一种可目视检测的标记物。
27.如权利要求23所述的测定装置，其中所述涂药器至少包含一种用于处理所述样品的一种试剂。
28.如权利要求23所述的测定装置，其中可把所述第一和第二可相对的组件相对放置，使得压力便于穿过上述孔把所述样品和被再溶解的检测试剂施加给上述层析介质。
29.一种用于检测和/或确定在含水检验样品中的被分析物的方法，包括下述步骤(a)把所述样品施加给权利要求23的测定装置的涂药器；(b)使上述样品再溶解所述涂药器中的被标记的检测试剂，以在含有所述样品和被再溶解的检测试剂的上述涂药器中形成一种溶液；(c)使第一和第二可相对的组件相对，从而使上述含有所述样品和被再溶解的被标记的检测试剂的溶液穿过屏障中的孔施加到层析介质；(d)使上述含有所述样品和被标记的检测试剂的溶液流动穿过包括所述检测区域的上述层析介质的至少一部分；以及(e)通过观察和/或测定在上述检测区域处所结合的所述被标记的检测试剂来检测和/或确定在上述检验样品中的所述被分析物。
30.一种用于检测和/或确定在检验样品中的被分析物的测定装置，包括(a)一个第一可相对的组件，该组件包括(i)一种层析介质，这种层析介质具有一个第一端、一个第二端、以及第一和第二表面，并在一个检测区域中具有对于固定在其上的所述被分析物的特异性结合对；(ii)至少一个吸收体，该吸收体与上述层析介质的第一和第二端中的至少一个可操作地接触；和(iii)一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的屏障，且所述屏障有一个孔，用于把液体施加给上述层析介质，所述屏障至少部分地阻拦把液体施加给上述层析介质；以及(iv)一种过滤用多孔物质，用于去除邻接上述屏障的那些颗粒状物质；上述层析介质、屏障和过滤用多孔物质这样定位，使得所述屏障位于所述过滤用多孔物质和层析介质之间；以及(b)一个第二可相对的组件，该组件包括一个用于把样品施加到其中的涂药器，所述涂药器以通过给涂药器加入一种含水液体而可以再溶解的形式含有用于上述被分析物的一种被标记的检测试剂，其中这样成形上述第一和第二可相对的组件，使得把该第一和第二可相对的组件相对即导致上述涂药器与所述过滤用多孔物质可操作地接触，从而使在所述涂药器中的上述样品和被再溶解的被标记的检测试剂施加到上述过滤用多孔物质，且然后穿过上述屏障中的孔到达上述层析介质，用于穿过所述层析介质进行层析。
31.如权利要求30所述的测定装置，包括至少两个吸收体，一个吸收体与上述层析介质的第一端可操作地接触，而一个吸收体与上述层析介质的第二端可操作地接触，其中所述检测区域实际上比所述层析介质的面积小，而且其中所述层析介质还包括一个固定在其上的被分析物或被分析物的类似物的对照区域，该对照区域的面积实际上比上述层析介质的面积小，并且不与所述检测区域重叠，所述对照和检测区域关于上述孔和上述吸收体这样定位，使得该检测区域在上述孔和上述那些吸收体中的一个之间，而所述对照区域是在上述孔和另一个吸收体之间。
32.如权利要求30所述的测定装置，其中上述用于所述被分析物的检测试剂是一种对于该被分析物的被标记的特异性结合对。
33.如权利要求32所述的测定装置，其中上述被标记的特异性结合对的标记物是一种可目视检测的标记物。
34.如权利要求30所述的测定装置，其中所述涂药器至少含有一种用于处理上述样品的试剂。
35.如权利要求30所述的测定装置，其中所述过滤用多孔物质去除粪便物质。
36.如权利要求30所述的测定装置，其中可把所述第一和第二可相对的组件相对放置，从而使压力便于穿过上述孔把所述样品和被再溶解的被标记的检测试剂施加给所述层析介质。
37.一种用于检测和/或确定在含水样品中的被分析物的方法，包括下述步骤(a)施加所述样品到权利要求30的测定装置的涂药器；(b)使所述样品再溶解在上述涂药器中的被标记的检测试剂，以便在含有所述样品和再溶解的被标记的检测试剂的上述涂药器中形成一种溶液；(c)使第一和第二可相对的组件相对，从而使上述含有所述样品和再溶解的被标记的检测试剂的溶液施加到过滤用多孔物质；(d)使上述含有所述样品和被标记的检测试剂的溶液通过上述过滤用多孔物质，以便形成一种过滤过的溶液；(e)使上述过滤过的溶液穿过屏障中的孔进入层析介质，并能至少流动穿过包括检测区域的所述层析介质的那个部分；以及(f)通过观察和/或测定在所述检测区域处所结合的被标记的检测试剂来检测和/或确定在上述检验样品中的所述被分析物。
38.一种用于检测和/或确定在检验样品中的一种被分析物的测定装置，包括(a)一个第一可相对的组件，该组件包括(i)一种层析介质，这种层析介质具有一个第一端、一个第二端、以及第一和第二表面，并在一个检测区域中具有对于固定在其上的所述被分析物的某种特异性结合对；(ii)至少一个吸收体，该吸收体与上述层析介质的第一和第二端中的至少一个可操作地接触；(iii)一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的屏障，且该屏障有一个孔，用于把液体施加给上述层析介质，所述屏障至少部分地阻挡把液体施加给上述层析介质；(iv)一个邻接上述屏障的涂药器，该涂药器以通过给涂药器加入一种含水液体而再溶解的形式含有对于上述被分析物的一种被标记的检测试剂；和(v)一种过滤用多孔物质，用于去除邻接上述涂药器的颗粒状物质，所述层析介质、屏障、涂药器及过滤用多孔物质这样定位，使得所述涂药器位于上述过滤用多孔物质和所述层析介质之间；以及(b)一个包括一个样品制备区域的第二可相的组件；其中这样成形所述第一和第二可相对的组件，使得把该第一和第二可相对的组件相对即导致上述样品制备区域与所述过滤用多孔物质可操作地接触，从而使样品施加到该过滤用多孔物质上，并且使被过滤的样品和被标记的特异性结合对的溶液穿过上述屏障中的孔施加到所述层析介质。
39.权利要求38所述的测定装置，包括至少两个吸收体，一个吸收体与所述层析介质的第一端可操作地接触，而一个吸收体与所述层析介质的第二端可操作地接触，其中上述检测区域实际上比所述层析介质的面积小，而且其中所述层析介质还包括一个固定在其上的被分析物或被分析物的类似物的对照区域，这个对照区域的面积实际上比上述层析介质的面积小，并且不与所述检测区域重叠，所述对照和检测区域关于上述孔和所述吸收体这样定位，使得该检测区域在上述孔和所述那些吸收体中的一个之间，而所述对照区域是在所述孔和另一个吸收体之间。
40.如权利要求38所述的测定装置，其中所述用于上述被分析物的检测试剂是一种对于该被分析物的被标记的特异性结合对。
41.如权利要求39所述的测定装置，其中所述被标记的特异性结合对的标记物是一种可目视检测的标记物。
42.如权利要求38所述的测定装置，其中所述样品制备区域至少包含一种用于处理所述样品的试剂。
43.如权利要求38所述的测定装置，其中所述过滤用多孔物质用于去除粪便物质。
44.如权利要求38所述的测定装置，其中可把所述第一和第二可相对的组件相对放置，从而使压力便于把上述被过滤的样品和被标记的特异性结合对的溶液穿过所述孔施加给上述层析介质。
45.一种用于检测和/或确定在含水检验样品中的被分析物的方法，包括下述步骤(a)把所述样品施加给权利要求38的测定装置的样品制备区域；(b)使第一和第二可相对的组件相对，从而使上述样品从所述样品制备区域转移到过滤用多孔物质；(c)使所述转移到上述过滤用多孔物质的样品穿过该过滤用多孔物质，以便产生过滤过的样品；(d)使所述过滤过的样品进入涂药器，以再溶解该涂药器中被标记的检测试剂，在涂药器中形成一种含有上述过滤过的样品和被再溶解的检测试剂的溶液；(e)使所述含有上述过滤过的样品和被再溶解的被标记的检测试剂的溶液穿过屏障中的孔进入层析介质，并且能至少流动穿过包括检测区域的所述层析介质的那个部分；以及(f)通过观察和/或测定在上述检测区域处所结合的被标记的检测试剂来检测和/或确定在上述检验样品中的所述被分析物。
46.一种用于检测和/或确定在含水检验样品中的一种被分析物的方法，包括下述步骤(a)施加所述样品给权利要求42的测定装置的样品制备区域；(b)在所述样品制备区域中培养上述样品，从而使得用于处理所述样品的至少一种试剂可与该样品反应而形成一种处理过的样品；(c)使第一和第二可相对的组件相对，以将上述处理过的样品从所述样品制备区域转移到过滤用多孔物质；(d)使上述转移到过滤用多孔物质的处理过的样品穿过所述过滤用多孔物质，产生一种过滤过的被处理过的样品；(e)使上述过滤过的被处理过的样品进入涂药器，以再溶解在该涂药器中的被标记的检测试剂，在该涂药器中形成一种含有上述过滤过的被处理过的样品和被再溶解的被标记的检测试剂的溶液；(f)使上述含有过滤过的被处理过的样品和被再溶解的被标记的检测试剂的溶液穿过屏障中的孔进入层析介质，并至少穿过包括检测区域的所述层析介质的那个部分；和(g)通过观察和/或测定在上述检测区域处所结合的所述被标记的检测试剂来检测和/或确定在上述检验样品中的所述被分析物。
47.一种用于检测和/或确定在检验样品中的一种被分析物的测定装置，包括(a)一个第一可相对的组件，该组件包括(i)一种层析介质，这种层析介质具有一个第一端、一个第二端、以及第一和第二表面，并在一个检测区域中具有对于固定在其上的上述被分析物的一种特异性结合对；(ii)至少一个吸收体，该吸收体与上述层析介质的第一和第二端中的至少一个可操作地接触；(iii)一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的第一屏障，该第一屏障有一个孔，用于把液体施加给上述层析介质，该第一屏障至少部分地阻挡把液体施加给上述层析介质；(iv)一个邻接上述第一屏障的涂药器，该涂药器以通过给涂药器加入一种含水液体而可以再溶解的形式含有用于上述被分析物的一种被标记的检测试剂；(v)一个邻接上述涂药器的一个第一部分的、基本上不能渗透流体的第二屏障；以及(v)一个分配膜，该分配膜邻接上述第二屏障，并且与上述涂药器所不邻接的一个第二部分可操作地接触，从而使流体可围绕上述第二屏障从所述分配膜流到涂药器；以及(b)一个第二可相对的组件，该组件包括一个用于含有某种检验样品的拭子的插座，其中这样成形所述第一和第二可相对的组件，使得把该第一和第二可相对的组件相对即导致把样品施加给上述分配膜，且然后施加给上述层析介质。
48.权利要求47的测定装置，包括至少两个吸收体，一个吸收体与上述层析介质的第一端可操作地接触，而一个吸收体与所述层析介质第二端可操作地接触，其中所述检测区域实际上比所述层析介质的面积小，而且其中所述层析介质还包括一个固定在其上的被分析物或被分析物的类似物的对照区域，该对照区域的面积实际上比所述层析介质的面积小，并且不与上述检测区域重叠，所述对照和检测区域关于上述孔和所述吸收体这样定位，使得该检测区域在所述孔和上述那些吸收体中的一个之间，而该对照区域是在所述孔和另一个吸收体之间。
49.如权利要求47所述的测定装置，其中所述用于上述被分析物的被标记的检测试剂是一种对于该被分析物的被标记的特异性结合对。
50.如权利要求49所述的测定装置，其中所述被标记的特异性结合对的标记物是一种可目视检测的标记物。
51.如权利要求47所述的测定装置，其中可把所述第一和第二可相对的组件相对放置，从而使压力便于把所述样品穿过上述孔施加给所述层析介质。
52.一种用于检测和/或确定在含水检验样品中的被分析物的方法，包括下述步骤(a)把含有上述检验样品的拭子放入权利要求47的测定装置的插座中；(b)使上述测定装置的第一和第二可相对的组件相对，从而使上述检验样品从所述拭子转移到分配膜；(c)使所述样品进入涂药器，以再溶解涂药器中的被标记的检测试剂，从而在涂药器中形成一种含有所述样品和被再溶解的被标记的检测试剂的溶液；(d)使上述含有所述样品和被标记的检测试剂的溶液进入层析介质，并且至少流动穿过包括检测区域的所述层析介质的那个部分；以及(e)通过观察和/或测定在上述检测区域处所结合的所述被标记的检测试剂来检测和/或确定在上述检验样品中的所述被分析物。
53.一种用于检测和/或确定在检验样品中的被分析物的测定装置，包括(a)一种层析介质，这种层析介质具有一个第一端、一个第二端、以及第一和第二表面，并且在一个检测区域中具有固定在其上的一种辅助的(Secondary)特异性结合对，该辅助的特异性结合对能结合对于上述被分析物缺少亲和性的一对特异性结合对的一个成员；(b)至少一个吸收体，该吸收体与上述第一和第二端中的至少一个可操作地接触；(c)一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的屏障，该屏障具有至少一个孔，用于把液体施加给上述层析介质，所述屏障至少部分地阻挡把液体施加给所述层析介质；和(d)一个邻接上述屏障的亲和性膜，该亲和性膜含有对于固定到那里的上述被分析物的一种特异性结合对，这样成形上述层析介质、吸收体、屏障、孔和亲和性膜，使得通过上述至少一个吸收体，抽取施加到上述亲和性膜的液体穿过上述层析介质，从而如果上述样品中有被分析物的话，一种被标记的检测试剂结合在上述层析介质上的检测区域处。
54.如权利要求53所述的测定装置，其中可把所述第一和第二可相对的组件相对放置，从而使压力便于把施加到上述亲和性膜的所述液体穿过上述孔施加给所述层析介质。
55.一种用于检测和/或确定在检验样品中的一种被分析物的测定装置，包括(a)一个第一可相对的组件，该组件包括(i)一种层析介质，这种层析介质具有一个第一端、一个第二端、以及第一和第二表面，并且在一个检测区域中具有固定在其上的一种辅助的特异性结合对，这种辅助的特异性结合对能结合对上述被分析物缺少亲和性的一对特异性结合对的一个成员；(ii)一个第一吸收体，该第一吸收体与上述层析介质的第一端可操作地接触；(iii)一个第二吸收体，该第二吸收体与上述层析介质的第二端可操作地接触；(iv)一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的屏障，有一个孔贯穿该屏障，用于把液体施加给上述层析介质，所述孔的面积实际上小于上述屏障，从而使液体只能穿过所述孔进入上述层析介质；这样成形所述层析介质、吸收体、屏障和孔，使得所述检测区域位于上述孔和所述层析介质的第一端之间；以及(v)一个邻接上述屏障的亲和性膜，该亲和性膜含有对于固定到那里的上述被分析物的一种特异性结合对；以及(b)一个第二可相对的组件，该组件包括一个涂药器，该涂药器以通过给涂药器加入含水液体而可以再溶解的形式含有一种被分析物的类似物，该被分析物的类似物包括这样的被分析物，这样的被分析物共价结合到对于上述被分析物缺少亲和性的一对特异性结合对的一个成员，并且能被该特异性结合对结合，用一种可检测的标记物标记上述被分析物的类似物；其中这样成形上述第一和第二可相对的组件，使得把该第一和第二可相对的组件相对即导致上述涂药器与所述亲和性膜可操作地接触。
56.如权利要求55所述的测定装置，其中所述可检测的标记物是一种可目视检测的标记物。
57.如权利要求55所述的测定装置，其中可把所述第一和第二可相对的组件相对放置，从而使压力便于把所述液体穿过上述孔施加给所述层析介质。
58.一种用于检测和/或确定在含水检验样品中的被分析物的方法，包括下述步骤(a)把所述样品施加给权利要求55的测定装置的涂药器；(b)使上述样品再溶解在所述涂药器中的被分析物的类似物，以便在涂药器中形成一种含有所述检验样品和被再溶解的被标记的被分析物的类似物的溶液；(c)使第一和第二可相对的组件相对，从而使含有所述检验样品和被再溶解的被分析物的类似物的所述溶液从上述涂药器转移到亲和性膜；(d)使含有所述检验样品和被再溶解的被分析物的类似物的上述溶液穿过所述亲和性膜，且然后穿过屏障中的孔进入层析介质，并且至少流动穿过包括检测区域的所述层析介质的一部分；以及(e)通过观察和/或测定在上述检测区域处所结合的所述被标记的被分析物的类似物来检测和/或确定在上述检验样品中的所述被分析物，其中所结合的被标记的被分析物的类似物的量直接与在上述检验样品中的被分析物的浓度相关。
59.一种用于检测和/或测定在检验样品中的被分析物的测定装置，包括(a)一个第一可相对的组件，该组件包括(i)一种层析介质，这种层析介质具有一个第一端和一个第二端、以及第一和第二表面，并且在一些独立离散且不重叠的区域上固定有(A)一个对于所述被分析物的一种特异性结合对的检测区域；和(B)一个被分析物或被分析物的类似物的对照区域；所述检测区域位于离开上述层析介质的端点的一点和上述层析介质的第一端之间，而所述对照区域位于离开上述层析介质端点的一点和所述层析介质的第二端之间；(ii)一个与上述层析介质的第一端可操作地接触的吸收体；(iii)一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的第一屏障，且第一屏障有一个第一施加面，此第一施加面实际上比所述层析介质的面积小，并位于离开上述层析介质的端点的一个位置，所述第一屏障至少部分地阻挡把液体施加给上述层析介质；(iv)一个邻接上述第一屏障的涂药器，该涂药器以通过给涂药器加入一种含水液体而可以再溶解的形式含有对于上述被分析物的一种被标记的特异性结合对，该涂药器的位置便于在上述第一施加面处把液体施加给所述层析介质；以及(v)一个邻接上述涂药器的、基本上不能渗透流体的第二屏障，第二屏障这样定位，以至少部分地阻挡把液体施加给上述涂药器，并使得能穿过一个第二施加面把液体施加给该涂药器，所述第二施加面实际上比上述层析介质的面积小，而且位置距上述层析介质的第二端比距所述层析介质的第一端更近；以及(b)一个包括一个样品制备区域的第二可相对的组件；其中这样成形所述第一和第二可相对的组件，使得把该第一和第二可相对的组件相对即导致上述样品制备区域与所述第二屏障接触，并与上述第二施加面接触，从而使在该样品制备区域中的所述样品穿过上述第二施加面施加给所述涂药器，并且实际上横过该涂药器的整个长度，以穿过上述第一施加面把所述样品和被再溶解的被标记的特异性结合对施加给上述层析介质。
60.如权利要求59所述的测定装置，其中所述样品制备区域至少包含一种用于处理上述样品的试剂。
61.如权利要求59所述的测定装置，其中可检测的标记物是一种可目视检测的标记物。
62.如权利要求59所述的测定装置，其中可把所述第一和第二可相对的组件相对放置，从而使压力便于把所述样品穿过孔施加给所述层析介质。
63.一种用于检测和/或确定在检验样品中的被分析物的方法，包括(a)把所述样品施加给权利要求59的测定装置的样品制备区域；(b)使第一和第二可相对的组件相对，从而使所述检验样品穿过第二施加面转移到涂药器；(c)使转移到该涂药器的所述样品在所述涂药器中再溶解被标记的特异性结合对，以形成含有所述样品和被再溶解的被标记的特异性结合对的一种溶液；(d)使含有所述样品和被再溶解的被标记的特异性结合对的上述溶液进入层析介质；并且至少流动穿过包括检测区域和对照区域的所述层析介质的那个部分；以及(e)通过观察和/或测定在所述检测区域处所结合的上述被标记的特异性结合对来检测和/或确定在上述检验样品中的所述被分析物。
64.一种用于检测和/或确定在检验样品中的被分析物的方法，包括(a)把所述样品施加给权利要求60的测定装置的样品制备区域；(b)在所述样品制备区域中培养上述样品，从而使用于处理所述样品的至少一种试剂可与该样品反应，形成一种被处理过的样品；(c)使第一和第二可相对的组件相对，从而使上述被处理过的样品穿过第二施加面转移到涂药器；(d)使被转移到该涂药器的所述被处理过的样品在该涂药器中再溶解被标记的特异性结合对，以形成含有所述被处理过的样品和被再溶解的被标记的特异性结合对的一种溶液；(e)使含有所述被处理过的样品和被溶解的被标记的特异性结合对的上述溶液再进入层析介质，并且至少流动穿过包括检测区域和对照区域的所述层析介质的那个部分；以及(f)通过观察和/或测定在上述检测区域处所结合的所述被标记的特异性结合对来检测和/或确定在上述检验样品中的所述被分析物。
65.一种用于检测和/或确定在检验样品中的被分析物的测定装置，包括(a)一个第一可相对的组件，该组件包括(i)一种层析介质，这种层析介质具有一个第一端、一个第二端、以及第一和第二表面，这种层析介质对于上述被分析物具有足够的亲和性，以把所述被分析物自含有该被分析物的含水溶液中固定到所述层析介质上；(ii)一个与上述层析介质的第一端可操作地接触的涂药器，该涂药器以通过给涂药器加入含水溶液而可以再溶解的形式含有对于上述被分析物的一种被标记的特异性结合对；(iii)一个与上述层析介质的第二端可操作地接触的吸收体；(iv)一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的屏障，且该屏障有一个孔，用于把液体施加给上述层析介质，所述屏障至少部分地阻挡把液体施加给上述层析介质；以及(b)一个包括一个样品制备区域的第二可相对的组件；其中这样成形所述第一和第二可相对的组件，使得把该第一和第二可相对的组件相对即导致上述样品制备区域与所述屏障接触，从而使在所述样品制备区域中的上述样品施加给上述层析介质，而且还使在上述检测样品中的被分析物至少在所述孔附近固定在上述层析介质上。
66.如权利要求65所述的测定装置，其中可检测的标记物是一种可目视检测的标记物。
67.如权利要求65所述的测定装置，其中所述层析介质是耐纶。
68.如权利要求65所述的测定装置，其中抗原是脂多糖。
69.如权利要求65所述的测定装置，其中所述样品制备区域至少包含一种用于处理所述被分析物的试剂。
70.如权利要求65所述的测定装置，其中可把所述第一和第二可相对的组件相对放置，从而使压力便于把所述样品穿过上述孔施加给所述层析介质。
71.一种用于检测和/或确定在检验样品中的被分析物的方法，包括下述步骤(a)把一种含水液体施加给权利要求65的测定装置的涂药器，以再溶解被标记的特异性结合对；(b)把该检验样品施加给样品制备区域；(c)使第一和第二可相对的组件相对，从而使上述检验样品穿过屏障中的孔施加给层析介质；(d)使(i)被分析物至少在上述孔附近与所述层析介质结合，以及(ii)被再溶解的被标记的特异性结合对迁移穿过所述层析介质从上述第一端到上述第二端，从而使所述被标记的特异性结合对与结合到上述层析介质的所述被分析物反应；以及(e)通过观察和/或测定结合到上述层析介质的所述被标记的特异性结合对来检测和/或确定在上述检验样品中的所述被分析物。
72.一种用于检测和/或确定在检验样品中的被分析物的测定装置，包括(a)一个第一可相对的组件，该组件包括(i)一种层析介质，这种层析介质具有一个第一端、一个第二端、以及第一和第二表面，并在一个检测区域中具有固定在其上的一种特异性结合对；(ii)一个与上述层析介质的第一端可操作地接触的样品制备区域；(iii)一个与上述层析介质的第二端可操作地接触的第一吸收体；以及(iv)一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的屏障，且该屏障有一个孔，用于把液体施加给上述层析介质，所述屏障至少部分地阻挡把液体施加给所述层析介质；以及(b)一个第二可相对的组件，该组件包括(i)一个涂药器，该涂药器以通过给涂药器加入一种含水液体而可以再溶解的形式含有对于所述被分析物的一种被标记的特异性结合对，这样定位该涂药器，使得当把上述第一和第二可相对的组件相对时，所述涂药器与上述屏障接触，从而使上述被再溶解的被标记的特异性结合对穿过所述屏障中的孔施加给上述层析介质；和(iii)第二和第三吸收体，这样定位所述第二和第三吸收体，使得当把所述第一和第二可相对的组件相对时，该第二吸收体和第三吸收体与上述层析介质的一些部分可操作地接触，从而使该第二和第三吸收体从所述层析介质中去除流体。
73.如权利要求72所述的测定装置，其中标记物是一种可目视检测的标记物。
74.如权利要求72所述的测定装置，其中所述样品制备区域包含至少一种用于处理所述样品的试剂。
75.如权利要求72所述的测定装置，其中所述层析介质还包括一个固定到那里的被分析物或被分析物的类似物的对照区域，该对照区域的范围不与上述检测区域重叠，该检测区域定位在上述孔和层析介质的第一端之间，而所述对照区域定位在上述孔和层析介质的第二端之间。
76.如权利要求72所述的测定装置，其中可把所述第一和第二可相对的组件相对放置，从而使压力便于把上述被再溶解的被标记的特异性结合对穿过所述孔施加给上述层析介质。
77.一种用于检测和/或确定在检验样品中的被分析物的检验试剂盒，该试剂盒在一些独立的容器中包括(a)权利要求72的测定装置；以及(b)一种用于在涂药器中再溶解被标记的特异性结合对的含水液体。
78.一种用于检测和/或确定在含水检验样品中的被分析物的方法，包括(a)把所述样品施加给权利要求72的测定装置的样品制备区域；(b)使上述样品至少流动穿过包括所述检测区域的层析介质的那个部分；(c)给涂药器中加入一种含水液体，以再溶解对于上述被分析物的、被标记的特异性结合对；(d)使第一和第二可相对的组件相对，以穿过屏障中的孔给上述层析介质施加所述被标记的特异性结合对，并使第二和第三吸收体与所述层析介质可操作地接触，由所述层析介质中抽取流体；(e)使上述被再溶解的被标记的特异性结合对至少流动穿过包括所述检测区域的上述层析介质的那个部分，以便如果上述检验样品中有被分析物的话，在上述检测区域处形成包括被标记的特异性结合对的一种三元配合物；和(f)通过观察和/或测定在上述检测区域处所结合的所述被标记的特异性结合对来检测和/或确定在上述检验样品中的所述被分析物。
79.一种用于检测和/或确定在含水检验样品中的被分析物的方法，包括下述步骤(a)施加所述样品给权利要求74的测定装置的样品制备区域；(b)在上述样品制备区域中培养所述样品，从而使至少一种用于处理该样品的试剂可与所述样品反应，以便产生一种被处理过的样品；(c)使所述被处理过的样品至少流动穿过包括所述检测区域的上述层析介质的那个部分；(d)给涂药器加入一种含水液体，以再溶解对于上述被分析物的所述被标记的特异性结合对；(e)使第一和第二可相对的组件相对，以便穿过所述屏障中的孔给上述层析介质施加所述被再溶解的被标记的特异性结合对，并使第二和第三吸收体与上述层析介质可操作地接触，从而由所述层析介质中抽取流体；(f)使上述被再溶解的被标记的特异性结合对至少流动穿过包括上述检测区域的所述层析介质的那个部分，以便如果在上述检验样品中有被分析物的话，在上述检测区域处形成包括所述被标记的特异性结合对的一种三元配合物；和(g)通过观察和/或测定在上述检测区域处所结合的所述被标记的特异性结合对来检测和/或确定在上述检验样品中的所述被分析物。
80.一种用于检测和/或确定在检验样品中的被分析物的测定装置，包括(a)一个第一可相对的组件，该组件包括(i)一种层析介质，这种层析介质具有一个第一端、一个第二端、以及第一和第二表面，并且在一个检测区域中具有对于固定在其上的上述被分析物的一种特异性结合对；(ii)一个与上述层析介质的第二端可操作地接触的吸收体；(iii)一个与上述层析介质的第一端可操作地接触的导体；(iv)一个共轭物区域，该共轭物区域以通过给共轭物区域加入一种含水液体而可以再溶解的形式含有对于用一种金溶胶标记的被分析物的一种特异性结合对，该共轭物区域直接与上述导体接触并间接与上述层析介质的第一端接触；(v)一个用于施加某种检验样品的样品制备区域，该样品制备区域与上述共轭物区域直接接触，所述导体、共轭物区域及样品制备区域这样定位，使得所述共轭物区域接通上述样品制备区域和导体；以及(vi)一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的屏障，该屏障有一个孔，用于给上述层析介质施加液体，所述屏障至少部分地阻挡把液体施加给上述层析介质；以及(b)一个第二可相对的组件，该组件包括(i)一个涂药器，该涂药器以通过给涂药器加入一种含水液体而可以再溶解的形式含有(1)一种可溶解的银盐，及(2)一种还原剂，这样定位上述涂药器，使得当把上述第一和第二可相对的组分相对时，该涂药器与所述屏障接触，从而使上述被再溶解的银盐及所述还原剂穿过所述屏障中的孔施加给上述层析介质；以及(ii)第二和第三吸收体，这样定位该第二和第三吸收体，使得当把上述第一和第二可相对的组件相对时，所述第二吸收体和第三吸收体与上述层析介质的一些部分可操作地接触，从而使该第二和第三吸收体从所述层析介质中去除流体。
81.如权利要求80所述的测定装置，其中所述样品制备区域至少含有一种用于处理样品的试剂。
82.如权利要求80所述的测定装置，其中所述可溶解的银盐是乳酸银，而所述还原剂是一种醌。
83.如权利要求80所述的测定装置，其中可把所述第一和第二可相对的组件相对放置，从而使压力便于把上述被再溶解的银盐和上述还原剂穿过所述孔施加给上述层析介质。
84.一种用于检测和/或确定在含水检验样品中的被分析物的方法，包括下述步骤(a)把所述样品施加给权利要求80的测定装置的样品制备区域；(b)使所述样品穿过共轭物区域流动，以再溶解在该共轭区域中的被标记的特异性结合对；(c)使上述样品和被再溶解的被标记的特异性结合对流动穿过所述导体进入层析介质，并至少流动穿过包括检测区域的所述层析介质的一部分；(d)给涂药器加入一种含水液体，以再溶解可溶解的银盐和还原剂；(e)使第一和第二可相对的组件相对，以便穿过屏障中的孔把被再溶解的银盐及所述还原剂施加给上述层析介质，并能使第二和第三吸收体与所述层析介质可操作地接触，以便从所述层析介质中抽取流体；(f)使上述被再溶解的银盐和所述还原剂至少流动穿过包括检测区域的所述层析介质的那个部分，从而使银围绕着在上述检测区域处所结合的被标记的特异性结合对的金标记物中的金而沉积，以增强由所述标记物产生的信号；以及(g)通过观察和/或测定在所述检测区域处所结合的上述被标记的特异性结合对来检测和/或确定在上述检验样品中的所述被分析物。
85.一种用于检测和/或确定在含水检验样品中的一种被分析物的方法，包括(a)把所述样品施加给权利要求81的测定装置的样品制备区域；(b)培养所述样品制备区域中的上述样品，从而使至少一种用于处理所述样品的试剂与该样品反应，以产生一种被处理过的样品；(c)使上述被处理过的样品流动穿过共轭物区域，以再溶解在该共轭物区域中的被标记的特异性结合对；(d)使上述被处理过的样品和所述被再溶解的被标记的特异性结合对穿过导体进入层析介质，并至少流动穿过包括检测区域的所述层析介质的那个部分；(e)给涂药器加入一种含水液体，以再溶解可溶解的银盐和还原剂；(f)使第一和第二可相对的组件相对，以穿过屏障中的孔把上述被再溶解的银盐以及所述还原剂施加给上述层析介质，并使第二和第三吸收体与所述层析介质可操作地接触，以从所述层析介质中抽取流体；(g)使上述被再溶解的银盐和还原剂至少流动穿过包括上述检测区域的所述层析介质的那个部分，从而使银围绕在上述检测区域处所结合的上述被标记的特异性结合对的金标记物中的金而沉积，以增强该标记物所产生的信号；以及(h)通过观察和/或测定在上述检测区域处所结合的所述被标记的特异性结合对来检测和/或确定在上述检验样品中的所述被分析物。
86.一种用于检测和/或确定在检验样品中的被分析物的测定装置，包括(a)一个第一可相对的组件，该组件包括(i)一种层析介质，这种层析介质具有一个第一端、一个第二端、以及第一和第二表面，并且在一个检测区域中具有对于固定在其上的所述被分析物的一种特异性结合对；(ii)一个与上述层析介质的第二端可操作地接触的吸收体；(iii)一个与上述层析介质的第一端可操作地接触的导体；(iv)一个共轭物区域，这个共轭物区域以通过给共轭物区域加入一种含水液体而可以再溶解的形式含有对于用一种金溶胶标记的上述被分析物的一种特异性结合对，该共轭物区域直接与上述导体接触，并间接地与上述层析介质的第一端接触；(v)一个用于施加某种检验样品的样品制备区域，该样品制备区域直接与上述共轭物区域接触，所述导体、共轭物区域及样品制备区域这样定位，使得所述共轭物区域接通上述样品制备区域和导体；以及(vi)一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的屏障，该屏障有一个孔，用于把液体施加给所述层析介质，所述屏障至少部分地阻挡把液体施加给上述层析介质；以及(b)一个第二可相对的组件，该组件包括(i)一个涂药器，这个涂药器包括两个区段(A)一个用于容纳含水液体的第一区段；和(B)一个第二区段，这个第二区段以通过给所述涂药器的第二部分加入含水液体而可以再溶解的形式含有(1)一种可溶解的银盐，及(2)一种还原剂，这样定位上述涂药器，使得当把所述第一和第二可相对的组件相对时，上述涂药器的第一区段与所述屏障中的孔直接接触，而上述涂药器的第二区段与所述孔间接接触，从而使上述含水液体首先施加到所述层析介质，以便提供清洗，随后，把上述含水的银盐和还原剂施加给所述层析介质；以及(ii)第二和第三吸收体，这样定位该第二和第三吸收体，使得当把上述第一和第二可相对的组件相对时，该第二吸收体与在上述屏障和所述层析介质的第一端之间的所述层析介质的一部分可操作接触，而该第三吸收体与在上述屏障和所述层析介质的第二端之间的所述层析介质的一部分可操作地接触，从而使上述第二和第三吸收体从所述层析介质中去除流体。
87.如权利要求86所述的测定装置，其中所述样品制备区域至少包含一种用于处理所述样品的试剂。
88.如权利要求86所述的测定装置，其中所述可溶解的银盐是乳酸银，而所述还原剂是一种醌。
89.如权利要求86所述的测定装置，其中可把所述第一和第二可相对的组件相对放置，从而使压力便于把液体穿过上述孔施加给上述层析介质。
90.一种用于检测和/或确定在检验样品中的被分析物的方法，包括下述步骤(a)把所述样品施加给权利要求86的测定装置的样品制备区域；(b)使上述样品流动穿过共轭物区域，以再溶解在该共轭区域中的被标记的特异性结合对；(c)使上述样品和被再溶解的被标记的特异性结合对穿过导体进入层析介质，并且至少流动穿过包括检测区域的所述层析介质的一部分；(d)给涂药器的第一和第二区段加入一种含水液体，以便在该涂药器的第二区段中再溶解可溶解的银盐和还原剂；(e)使第一和第二可相对的组件相对，以把在上述涂药器的第一区段中的含水液体作为一种洗涤剂通过孔施加给上述层析介质，随后把上述被再溶解的银盐和所述还原剂施加给所述层析介质，并且使第二和第三吸收体与所述层析介质可操作地接触，以从所述层析介质中抽取流体；(f)使上述被再溶解的银盐和还原剂至少流动穿过包括检测区域的所述层析介质的那个部分，从而使银围绕在所述检测区域处所结合的上述被标记的特异性结合对的金标记物中的金而沉积，以增强由该标记物所产生的信号；和(g)通过观察和/或测定在上述检测区域所结合的所述被标记的特异性结合对来检测和/或确定在上述检验样品中的所述被分析物。
91.一种用于检测和/或确定在含水检验样品中的被分析物的方法，包括(a)施加所述样品给权利要求87的测定装置的样品制备区域；(b)在该样品制备区域中培养所述样品，从而使至少一种用于处理所述样品的试剂与该样品反应，以便产生一种被处理过的样品；(c)使所述被处理过的样品流动穿过共轭物区域，以再溶解在该共轭物区域中的被标记的特异性结合对；(d)使所述被处理过的样品和被再溶解的被标记的特异性结合对穿过导体进入层析介质，并且至少流动穿过包括上述检测区域的所述层析介质的那个部分；(e)给涂药器的第一和第二区段加入一种含水液体，以便在该涂药器的第二区段中再溶解可溶解的银盐和还原剂；(f)使第一和第二可相对的组件相对，以把在上述涂药器的第一区段中的所述含水液体穿过所述孔作为一种洗涤剂施加给所述层析介质，随后把所述被再溶解的银盐和所述还原剂施加给上述层析介质，并使第二和第三吸收体与所述层析介质可操作地接触，以便从所述层析介质中抽取流体；(g)使所述被再溶解的银盐和还原剂至少流动穿过包括上述检测区域的所述层析介质的那个部分，从而使银围绕在所述检测区域处所结合的上述被标记的特异性结合对的金标记物中的金而沉积，以增强由该标记物所产生的信号；和(h)通过观察和/或测定在上述检测区域处所结合的所述被标记的特异性结合对来检测和/或确定在上述检验样品中的所述被分析物。
92.一种用于检测和/或确定在检验样品中的被分析物的测定装置，包括(a)一个基板，此基板包括(i)一个第一可相对的组件，该组件包括(A)一种层析介质，这种层析介质具有一个第一端、一个第二端、以及第一和第二表面，且在一个检测区域中具有对于固定在其上的上述被分析物的一种特异性结合对；(B)一个共轭物区域，这个共轭物区域以通过给共轭物区域加入一种含水液体而可以再溶解的形式含有对于用一种金溶胶标记的上述被分析物的一种特异性结合对，该共轭物区域与上述层析介质的第一端可操作地接触；(C)一个与上述共轭物区域可操作地接触的导体，该共轭物区域接通上述层析介质的第一端和所述导体；以及(D)一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的屏障，该屏障有一个孔，用于给上述层析介质施加流体，所述屏障至少部分地阻挡把液体施加给所述层析介质；(ii)一个第二可相对的组件，该组件包括(A)一个用于含有检验样品的拭子的插座；(B)一个用于给所述拭子加至少一种试剂的井；和(C)一个与上述插座和井分开的第一吸收体；和(iii)一个第二插座，此第二插座用于使插入件稳定，避免插入件的那些表面的相对运动以及上述第一和第二可相对的组件的相对运动；这样成形上述基板的第一和第二可相对的组件，使得当把它们相对时，使上述第一吸收体与所述层析介质的一部分接触，并使上述插座与所述导体接触；以及(b)一个插入件，包括(i)一个涂药器，此涂药器以通过给涂药器加入一种含水液体而可以再溶解的形式含有(1)一种可溶解的银盐，和(2)一种还原剂；(ii)一个第二吸收体；(iii)一个第三吸收体；以及(iv)一个用于插入上述基板的第二插座的凸出物；这样成形所述插入件，使得当所述凸出物插入上述基板的第二插座中时，所述涂药器与上述孔可操作地接触，以使穿过所述孔把该涂药器的所含之物施加给上述层析介质，而上述第二和第三吸收体每一个都与所述层析介质的一部分可操作地接触，以便从所述层析介质中抽取流体。
93.如权利要求92所述的测定装置，其中上述可溶解的银盐是乳酸银，而所述还原剂是一种醌。
94.如权利要求92所述的测定装置，其中可把所述第一和第二可相对的组件相对放置，以使压力便于把所述液体穿过上述孔施加给所述层析介质。
95.一种用于检测和/或确定在含水检验样品中的被分析物的方法，包括下述步骤(a)把一个含有检验样品的拭子放入权利要求92的测定装置的第一插座中；(b)把至少一种萃取试剂施加给所述井，以便从上述拭子中萃取被分析物；(c)使第一和第二可相对的组件相对，从而使上述在插座中的拭子与导体接触，以便用该导体施加被萃取过的被分析物，并且以便第一吸收体与层析介质的一部分接触；(d)使被萃取过的样品流动穿过共轭物区域，以再溶解在该共轭物区域中的被标记的特异性结合对；(e)使所述被萃取过的样品和被再溶解的被标记的特异性结合对进入上述层析介质，并至少流动穿过包括检测区域的所述层析介质的那个部分；(f)给插入件的涂药器加入一种含水液体，以再溶解可溶解的银盐和还原剂；(g)把插入件的凸出物插入基板的第二插座，并定位该插入件，使上述涂药器与屏障中的孔接触，以便把该涂药器的所含之物穿过所述孔施加给上述层析介质，并且使第二和第三吸收体与所述层析介质接触，以从所述层析介质中抽取流体；(h)使上述被再溶解的银盐和还原剂至少流动穿过包括检测区域的上述层析介质的那个部分，从而使银围绕在所述检测区域处所结合的所述被标记的特异性结合对的金标记物中的金而沉积，以增强由该标记物所产生的信号；以及(i)通过观察和/或测定在上述检测区域处所结合的上述被标记的特异性结合对来检测和/或确定在上述检验样品中的所述被分析物。
96.一种用于检测和/或确定在检验样品中的被分析物的测定装置，包括(a)一个基板，此基板包括(i)一个第一可相对的组件，该组件包括(A)一种层析介质，这种层析介质有一个第一端、一个第二端、以及第一和第二表面，并且在一个检测区域中具有对于固定在其上的所述被分析物的一种特异性结合对，该检测区域实际上比所述层析介质的面积小；(B)一个与上述层析介质的第一端可操作地接触的导体；(C)一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的屏障，该屏障有一个孔，用于把液体施加给上述层析介质，所述屏障至少部分地阻挡把液体施加给所述层析介质；(ii)一个第二可相对的组件，此组件包括一个第一吸收体，这样成形所述第一和第二可相对的组件，使得当把它们相对时，使上述第一吸收体与所述层析介质的一部分可操作地接触，和(iii)一个插座，此插座用于保持插入件稳定，避免插入件的那些表面的相对运动以及上述第一和第二可相对的组件的相对运动；以及(b)一个插入件，此插入件包括(i)一个涂药器，此涂药器以通过给涂药器加入一种含水液体而可以再溶解的形式含有一种用于某种酶标记物的底物，这种酶标记物与对于上述被分析物的一种特异性结合对结合，该酶标记物通过催化一种涉及所述底物的反应来产生一种不溶解的、可检测的产物；(ii)一个第二吸收体；(iii)一个第三吸收体；以及(iv)一个用于插入上述基板的插座的凸出物；这样成形所述插入件，使得当上述凸出物插入所述基板的插座中时，上述涂药器与所述孔可操作地接触，以便穿过所述孔把该涂药器的所含之物施加给上述层析介质，而上述第二和第三吸收体每一个都与所述层析介质的一部分可操作地接触，以便从所述层析介质中抽取流体。
97.如权利要求96所述的测定装置，其中可把所述第一和第二可相对的组件相对放置，从而使压力便于把所述涂药器的所含之物穿过所述孔施加给上述层析介质。
98.一种用于检测和/或确定在检验样品中的被分析物的方法，包括下述步骤(a)向某种含水检验样品加入对于所述被分析物的一种被标记的特异性结合对，该被标记的特异性结合对的标记物是一种催化产生一种不溶解的可检测的产物的反应的酶，以便形成一种样品——标记物溶液；(b)把所述样品——标记物溶液施加给权利要求96的测定装置的导体；(c)使第一和第二可相对的组件相对，以便使第一吸收体与层析介质的一部分可操作地接触；(d)使上述样品——标记物溶液进入上述层析介质，并至少流动穿过包括检测区域的所述层析介质的那个部分；(e)给插入件的涂药器加入一种含水液体，以再溶解底物；(f)把所述插入件的凸出物插入基板的插座，并定位该插入件，从而能使上述涂药器与所述孔和屏障接触，以便把该涂药器的所含之物穿过所述孔施加给所述层析介质，并能使第二和第三吸收体放置得与所述层析介质接触，以从所述层析介质中抽取流体；(g)使上述被再溶解的底物至少流动穿过上述包括检测区域的层析介质的那个部分，从而使酶标记物的酶催化一种反应，这种反应涉及上述底物并沉积一种不溶解的产物作为上述标记物的一个信号；以及(h)通过观察和/或测定在基于上述作为一种信号而被沉积的不溶解的产物的所述检测区域处所结合的所述被标记的特异性结合对，检测和/或确定在上述检验样品中的所述被分析物。
99.一种用于检测和/或确定在检验样品中的被分析物的测定装置，包括(a)一个基板，此基板包括(i)一个第一可相对的组件，该组件包括(A)一种层析介质，这种层析介质具有一个第一端、一个第二端、以及第一和第二表面，并具有对于固定在其上的所述被分析物的一种特异性结合对；(B)一个共轭物区域，这个共轭物区域以通过给共轭物区域加入一种含水流体而可以再溶解的形式包含对于用一种酶标记的上述被分析物的一种特异性结合对，该共轭物区域与上述层析介质的第一端可操作地接触；(C)一个与上述共轭物区域可操作地接触的导体；该共轭物区域接通上述层析介质的第一端和所述导体；以及(D)一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的屏障，该屏障有一个孔，用于给上述层析介质施加液体，所述屏障至少部分地阻挡把液体施加给所述层析介质；(ii)一个第二可相对的组件，此组件包括(A)一个用于含有检验品的一个拭子的第一插座；(B)一个用于给所述拭子加入至少一种萃取试剂的井；以及(C)一个与上述井和所述插座分开的第一吸收体；以及(iii)一个用于使插入件稳定，避免插入件的那些表面的相对运动以及所述第一和第二可相对的组件的相对运动的第二插座；这样成形所述第一和第二可相对的组件，使得当把它们相对时，使得上述第一吸收体与所述层析介质的一部分接触，并使得上述插座与所述导体接触；以及(b)一个插入件，此插入件包括(i)一个涂药器，这个涂药器以通过给涂药器加入一种含水液体而可以再溶解的形式含有用于一种酶标记物的底物，这种酶标记物与对于上述被分析物的一种特异性结合对结合，所述酶标记物通过催化涉及上述底物的一种反应来产生一种不溶解的可检测的产物；(ii)一个第二吸收体；(iii)一个第三吸收体；以及(iv)一个用于插入上述基板的第二插座的凸出物；这样成形所述凸出物，使得当该凸出物插入上述基板的第二插座中时，上述涂药器与上述孔可操作地接触，以把该涂药器所含之物穿过所述孔施加给上述层析介质，且上述第二和第三吸收体的每一个都与上述层析介质的一部分可操作地接触，以便从所述层析介质中抽取流体。
100.如权利要求99所述的测定装置，其中可把所述第一和第二可相对的组件相对放置，从而使压力便于把所述涂药器的所含之物穿过上述孔施加给所述层析介质。
101.一种用于检测和/或确定在检验样品中的被分析物的方法，包括下述步骤(a)把一个含有检验样品的拭子放入权利要求99的测定装置的第一插座中；(b)给所述井施加至少一种萃取试剂，以便从所述拭子中萃取被分析物；(c)使第一和第二可相对的组件相对，从而使上述在第一插座中的拭子与导体接触，以使所述被萃取过的被分析物施加给所述导体，且使第一吸收体与所述层析介质的一部分接触；(d)使得被萃取过的样品流动穿过共轭物区域，以再溶解在该共轭物区域中的被标记的特异性结合对；(e)使得所述被萃取过的样品及被再溶解的被标记的特异性结合对进入所述层析介质，并至少流动穿过包括检测区域的所述层析介质的那个部分；(f)给插入件的涂药器加入一种含水液体，以再溶解底物；(g)把所述插入件的凸出物插入基板的第二插座并定位该插入件，从而使上述涂药器与所述孔和屏障接触，以把该涂药器的所含之物穿过所述孔施加给上述层析介质，并能使第二和第三吸收体与所述层析介质接触，以从所述层析介质中抽取流体；(h)使上述被再溶解的底物至少流动穿过包括检测区域的上述层析介质的一部分，从而使酶标记物的酶催化一种反应，这种反应涉及所述底物，并沉积一种不溶解的产物，这种不溶解的产物是所述标记物的一种信号；以及(i)通过借助作为一种信号而沉积的上述不溶解的产物，观察和/或测定在上述检测区域处所结合的所述被标记的特异性结合对，检测和/或确定在上述检验样品中的所述被分析物。
102.一种用于检测和/或确定在检验样品中的被分析物的测定装置，包括(a)一个第一可相对的组件，该组件包括(i)一种层析介质，这种层析介质具有一个第一端、一个第二端、以及第一和第二表面；并具有对于固定在其上的上述被分析物的一种特异性结合对；(ii)至少一个与上述层析介质的那些端子中的一个可操作地接触的吸收体；(iii)一个邻接上述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的第一屏障，且有一个第一孔贯穿所述屏障，用于把液体施加给所述层析介质；(iv)一个邻接上述基本上不能渗透流体的第一屏障的分配膜，以把流体引导到在所述基本上不能渗透流体的第一屏障中的所述第一孔；(v)一个邻接上述分配膜的中央部分的、基本上不能渗透流体的第二屏障；(vi)一个涂药器，这个涂药器以可以再溶解的形式含有对于所述被分析物的一种被标记的特异性结合对并邻接上述分配膜定位，从而使流体可从上述涂药器围绕所述第二屏障流动到上述分配膜的这样一个部分，所述基本上不能渗透流体的第二屏障并不直接邻接所述分配膜的那个部分；以及(vii)一个表面屏障，有一个第二孔贯穿这个表面屏障，用于把液体施加给上述涂药器；以及(b)一个第二可相对的组件，这个组件包括一个用于含有某种检验样品的拭子的插座。
103.如权利要求102所述的测定装置，其中所述被标记的特异性结合对的标记物是一种可目视检测的标记物。
104.如权利要求102所述的测定装置，其中可把所述第一和第二可相对的组件相对放置，从而使压力便于把液体穿过所述孔施加给所述层析介质。
105.一种用于检测和/或确定在检验样品中的被分析物的检验试剂盒，此试剂盒在一些独立的容器中包括(a)权利要求104的测定装置；以及(b)至少一种用于从所述拭子中萃取被分析物的试剂。
106.一种用于检测和/或确定在检验样品中的被分析物的方法，包括下述步骤(a)把一个含有检验样品的拭子放入权利要求104的测定装置的插座中；(b)给在上述插座中的拭子施加至少一种萃取试剂，以便从所述拭子中萃取被分析物；(c)使第一和第二可相对的组件相对，以将上述被萃取过的被分析物施加到上述表面屏障中的所述第二孔，且然后在绕过所述第二屏障通过分配膜后施加给涂药器和层析介质，由此再溶解在所述涂药器中的被标记的特异性结合对；(d)使所述样品和被再溶解的被标记的对于所述被分析物的特异性结合对至少流动穿过包括所述检测区域的上述层析介质的那个部分；以及(e)通过观察和/或测定在所述检测区域处所结合的被标记的检测试剂来检测和/或确定在上述检验样品中的所述被分析物。
全文摘要
一种用于检测和/或确定在某种检验样品中的一种被分析物的测定装置，采用了包含一个孔的屏障，以便控制将试剂施加给该装置的过程，以达到更好的结果再现性。最简单形式的这种装置包括(1)一种层析介质(12)，层析介质(12)具有一个第一端(14)，一个第二端(16)、以及第一和第二表面(18和20)，并在一个检测区域中具有对于固定到那里的所述被分析物的一种特异性结合对(2)；至少一个与第一端(14)和第二端(16)中的至少一个有效接触的吸收体(26)，以及(3)一个邻接所述层析介质的第一表面的、基本上不能渗透流体的屏障(30)，屏障(30)至少有一个孔(32)贯穿其中，用于把液体施加给层析介质(12)，屏障(30)至少部分阻挡液体施加给层析介质(12)。所述装置适于夹层或竞争性测定，并可用来进行放大了的测定，例如，那些采用银放大或酶放大的测定。可以对所述装置内的那些组件进行各种各样的配置，并可加入诸如过滤用多孔物质那样的一些组件。
文档编号B01L3/00GK1142868SQ94194972
公开日1997年2月12日 申请日期1994年12月6日 优先权日1993年12月7日
发明者H·M·昌德勒 申请人:史密丝克莱恩诊断公司