专利名称：数字图像转换的制作方法
背景技术：
本发明涉及组织学领域。
在当今实践中，为透射显微镜检查，既包括光学显微镜也包括电子显微镜，准备器官组织样本和其它材料，通常是通过对这些样本进行一系列化学处理并最终产生包埋有这些样本的实体块来实施。在产生了该块后，从该块中切割出该样本的薄切片(连同周围的包埋材料)然后放到载玻片或其它支持器上。然后用化学的方法去除包埋材料，在检验之前，使用各种的有色的或荧光性的染料、免疫组织化学的着色剂对该组织切片进行着色，或对该组织切片进行原位杂交。
传统病理组织学中，应用于临床的重要组织切片的最普通的明视野着色剂是苏木紫和曙红((H&E)制剂。这种方法导致组织切片中的核酸和其他的所谓“嗜碱”物质着兰紫色，而蛋白质及其他“嗜酸的”或“嗜曙红细胞”的组织成份着粉红色。这种着色在全世界使用，作为一种用于所有组织成份检验的普通筛选法，而在特定例子中还要使用对特定组织分子例如微生物或神经过程具有亲和力的特定的着色剂，从而增强他们在着色组织切片上的形态。
已经介绍了整块着色的方法，该方法中全部的样本在被浸透和包埋之前被浸入着色。然后从块中切出用于透射显微镜检查的切片，或者此块本身的切面通过块表面显微镜检查或表面成像显微镜检查过程形成图像。在后一种方法，包括在美国专利号NO.4960330中实施的方法中，使用接合或非接合的荧光染料整体着色过的样本随后被浸透并包埋在一种介质通常是一种塑料聚合体中，该介质被严重不透明化或是进行其它处理以便允许对来自块内超过数微米深处组织的图像的压缩。结果是产生了一个“虚拟切片”，与传统载玻片支持的组织切片十分相象。
块表面显微镜检查要比标准明视场显微镜检查占有优势，因为块表面方法允许生物学组织和其他材料生成高质量的显微镜检查图像，而不需要生产玻璃组织学载玻片。这种需求的消除允许了组织病理学处理的全自动化，减少了生产每一个附加的切片增加的成本，从而允许从每一个切片中采集更多的信息。
在块表面显微镜检查中，从块表面获取的未修改的数字虚拟切片是一个暗视野图像，是以黑色为背景由荧光-着色样本散发的有色光形成的，黑色背景表示的是内部渗透和嵌入了样本的不透明化聚合体。相比之下，传统光学透射电子显微镜检查，包括在大多数外科病理学实验室及其他与医学相关、基于显微镜检查的诊断设备的实际操作中，产生一个明视野图像，因为组织薄切片和其他材料是由标准非荧光染料着色然后使用一个白色或接近白色的光源进行透射照明，结果得到一个比组织的图像亮而不是暗的背景。
为了优化用于临床诊断和其他目的的块表面显微图像，最好是将从块表面获取的原始的暗视野图像进行变换并显示如在明视野显微镜检查中遇到的更熟悉的图像。
发明概要总的来说，本发明包括一个使用一种荧光染料对一个样本着色的方法，一个用于产生该荧光着色样本的暗视野图像的装置，一个用于将暗视野图像变换为用于在计算机监视器上检验的明视野图像的装置。该处理过程包括应用一个数字查找表或者其他计算装置，以便将暗视野数据转换为明视野形式，以及一个显示转换后信息的装置。最好是，该成象装置是一个块表面显微镜，而用于变换该图像的装置是一个数字计算机。
因此，在本发明的第一方面，其特征在于一种图像产生方法包括(a)使用一种荧光染料对一个样本着色；(b)产生所生成的荧光着色样本的第一图像；(c)使用一个数字处理器将第一图像转换为一个模拟一个用非荧光染料着色的样本图像的第二图像。
在一最佳实施例中，第一图像到第二图像的转换包括将一个查找表应用于第一图像。在最佳实施例中的修改包括转换该查找表，或是将第一图像或者第二图像的色彩范围调整到模拟用非荧光染料着色的样本的色彩范围。
该样本可以用一种、两种或多种染料来着色。最佳的样本是生物学样本。
本发明的特征还在于一种图像产生方法，包括(a)用第一和第二荧光染料对一个样本着色；(b)在样本中产生由第一染料着色的样本的第一图像和由第二染料着色的样本的第二图像；(c)使用一数字处理器将第一和第二图像转换为模拟由苏木紫和曙红着色的样本图像的第三图像。
本发明的特征在于一种图像产生方法，包括(a)使用一种荧光染料对一个样本着色；(b)产生由该种染料着色的样本的第一图像和由该种染料着色的样本的第二图像；(c)使用一数字处理器将第一和第二图像转换为模拟由苏木紫和曙红着色的样本图像的第三图像。
本发明的特征还在于一种图像产生方法，包括(a)使用若干种荧光染料对一个样本着色；(b)产生由这些染料中的一种着色的样本的第一图像；(c)使用一个数字处理器将第一图像转换为模拟一个被一种非荧光染料着色的样本的第二图像。
在另一方面，本发明特征在于一种图像产生方法，包括(a)使用若干种荧光染料对一个样本着色；(b)产生模拟使用诸荧光染料的一个子集进行着色的样本的第一图像；(c)使用一个数字处理器将第一图像转换为模拟一个被一种或多种非荧光染料着色的样本的图像的第二图像。
最好是，本发明中的第一和第二图像是使用一种包括块表面显微镜的装置来产生的。本发明中使用的染料可以包括一种异染性染料(如吖啶橙)。
“接合性”染料意思是一种染料，与具有组织成分特异性的分子相结合。典型的接合性染料包括荧光-偶联抗体和荧光脱氧核糖核酸探针。
“非接合性”染料意思是一种固有荧光性的染料。
“浸透”意思是用一种液体或一系列液体对组织处理，所述液体穿透该组织到分子水平，然后变为固体使该样本变硬。
“包埋”意思是将浸透后的组织放入一模子中，然后用一种物质(通常与浸透物质相同)包围它，然后将其硬化形成一个包埋块。因此包埋物质的作用就是提供强度支撑，和易于切割处理。
“切片“意思是从块中切割出薄片，然后该薄片可安放在载玻片或其它支持物上。
“着色”意思是使用有色或荧光物质对材料进行处理，这些有色或荧光物质与材料在分子水平上相结合。
“荧光”或“暗视野”着色是使用非接合性染料(即该染料在受到适当波长的光的激发时，天然就具有荧光性)或接合性染料(即与样本相结合并被直接或间接附着于荧光染料的分子)来完成的。接合性染料的例子包括但不局限于(i)与一个抗原相结合的一次抗体以及一个包含荧光染料与原发抗体相结合的二次抗体；(ii)一个具有一种与之共价键相结合的荧光染料的分子。荧光着色产生具有黑色背景的图像，而“标准”或“明视野”着色通常使用非荧光性染料来完成，产生具有明亮或白色的背景的图像。很清楚，同一染料对于荧光和标准显微镜检查都有用。
“异染性”染料构成了组织化学染色的一个子集，该种染料中很多是荧光性的。就象大多数荧光染料一样，这些混合物吸收特定波长的光并以更长的波长将这些光再发射出去。异染性染料的这种光谱属性很受它们与目标分子接近的影响，这会使它们的发射波长发生变化。因此，这些染料在它们与某些类型材料结合时会改变颜色。在一些情况，异染性染料可以只在它与目标结合时发光，其他情况时则不可见。典型的异染性染料是吖啶橙。本领域中技术人员知道的其他的异染性染料包括但不局限于列在Conn’s Biological Stains，Williams和Wilkens 9thEd.1977(这里引入做为参考)中的那些染料，以及Molecular Probes，Inc(Eugene，OR)中的那些可用染料。后一类染料中大部分是出版的美国专利中的主题，这里引入做为参考。Molecular Probes公司的易于标记蛋白质的异染性染料分为下述三类bezoxadiazole衍化物，萘衍化物和嵌二萘衍化物。
通过这种方法，可以利用块表面显微镜检查有效地产生有关生物组织和其他材料的图像数据，并以最有用和最熟悉的形式如明视野图像形式显示。
本发明的其他特征和优点将通过随后的最佳实施例的描述及其权利要求而清晰。
附图
的简单说明该图是本发明中方法的示意性图例，包括将一个查找表应用到第一图像以产生第二图像，得到修改后的颜色。
本发明的详细说明我们发现了一种方法，使用一种或多种暗视野染料形成样本如组织样本图像，并将该图像变换为模拟使用一种或多种明视野染料着色的样本的图像的第二图像。将第一图像转换为第二图像的方法可包括对第一图像应用一查找表。
查找表从第一图像到想要的第二图像的变换处理通常使用将一个转换值的集合归入为一个查找表。查找表包括一个描述一到一变换的色彩值关系列表，通常可能是由成像系统的用户根据某一准则集合计算。用于变换数字图像的装置包括一般方法如将一个数学公式应用到每一个数据元素的转换函数。例子包括图像颜色逆转转换，该转换可以通过从某一恒定值中减去所有的数据元素来实现。
此外也可以是，图像中的每一数据元素根据基于图像图案或其他特征的某一高阶计算结果进行变化。例如，求取图像中某一感兴趣区域的每一数据元素的值的总和，该总值用于确定该部分区域显示时的一般色彩。包括该高阶计算以确定着色仿真的方法在本发明中称为“计算着色”。
总的来说，一个查找表例如一个RGB(红，绿，蓝)查找表被应用到该暗视场图像的每一个通道(例如红色通道，绿色通道等)。在将该图像从暗视场图像转换为明视场图像的过程中，将每一个源暗视场样本值(例如每一个象素)作为参考该查找表的索引，以便确定明视场图像的对应值。然后将为每一个通道求得的值组合为RGB明视场图像。例如这里结合J.C.Russ(1995)The Image processing handbook. 2ndedition CRC Press Ann Arbor，MI中的描述的用于颜色映射的方法作为参考。
加法色彩空间换算在一个例子中，使用用于每一个可能暗视场值的入口构建RGB色彩表。例如，如果源(即暗视场图像)的范围为0-255(其中0是黑色，255是白色)则创建一个256个入口的表格。在表中每一个入口中填入一种可以如下求得的色彩H＝目标色调S＝目标色饱和度B＝目标亮度*I/最大样本值(例如8位＝255)其中I是计算的当前查找表的索引，范围从0-最大样本值(例如255)。结果得到的HSB色彩被转换到RGB色彩空间，并被插入到查找表I位置。
其结果是，每一个查找表入口是目标明视场图像色彩的一个亮度定标描述。表中的色彩跨越一个自黑色开始的范围，在亮度上递增直到最后一个入口，而该入口是没有修改的目标图像色彩。
例如，如果目标色彩是原色红色，那么该查找表将从黑色开始，逐渐从较暗的红色增加为较明亮的红色，直到最后一个入口成为原色红色。
对于每一组源通道，将从查找表获得的RGB色彩相加(例如红色加红色，绿色加绿色，蓝色加蓝色)以获得一个RGB色彩。该值是有限度的，以便不超出最大样本值(如8位的255)。然后将一个明亮值加到每一个RGB值。通过取用原始暗视场图像中的“暗度”并对其进行如下转换求得该明亮值最大样本值-maximum(源通道1，原通道2，...)从最大样本值中减去源样本值中的最大值获得一个暗度级。将该暗度级加到新的RGB色彩的每一个成份中，通过该结果来使该色彩明亮。其结果是本来非常暗的原样本值变得非常亮。
减法色彩空间转换在用于将一个暗视场图像转换为一个相象的明视场图像的第二种方法中，如上所述创建一个RGB查找表，除了在表中的每一个入口中填入一种可以如下求得的色彩H＝目标色调S＝目标色饱和度*I/最大样本值(例如8位＝255)B＝目标亮度结果得到的HSB色彩被转换到RGB色彩空间，并被插入到查找表I位置。
其结果是，每一个查找表入口是目标明视场色彩的一个饱和度标度形式。表中的色彩跨越一个自白色开始的范围，在饱和度上递增直到最后一个入口，而该入口是没有修改的目标图像色彩。
例如，如果目标色彩是原色红色，那么该查找表将从白色开始，逐渐从较淡的红色(粉红色)增加为更深的红色，直到最后一个入口成为原色红色。
因此，使用先前的方法，每一个源通道被转换为一个RGB色彩。这些色彩按如下混和。
该RGB色彩被转换为CMY(青色，洋红和黄色)色彩。CMY色彩是减法色彩空间。将这些CMY色彩相加(例如将每一源通道的青色值相加以产生一个单独的青色，将每一源通道的洋红色值相加以产生一个单独的洋红色等。)。如这里所述，值得做的是对这些值限制在允许的最大值(例如最大样本值)内。经过求和，获得的CMY色彩被重新转换到RGB色彩空间。
在将由吖啶橙着色的暗视场图像转换为由H&E着色的明视场图像的情况中，从黑色到目标色彩(在加法色彩空间的情况中)或从白色到目标色彩(在减法色彩空间的情况中)的增加是线性的。本领域的普通技术人员将意识到其他查找表包括非线性甚至是非连续的查找表也可用于本发明。
使用暗视野染料着色用于计算产生使用明视野染料或组合染料(例如H&E)着色的样本图像的一种方法是用与不同组织结构结合不同的荧光着色剂的混合物着色，也可以使用单一荧光染料着色剂，当这种着色剂应用于一个样本时将产生不止一种色彩(即一种异染性染料)。这里描述的这种图像转换方法允许将一个使用一种或多种暗视野染料着色的样本的暗视野图像转换为模拟一个使用一种或多种明视野染料着色的样本的图像。
在一个例子中，使用一组荧光染料化合物对一个包含霉菌的样本进行着色，荧光染料中的一种显示了与该霉菌生物的较高亲和力，而另一种显示了与组织成份的较高亲和力。采用这些染料着色的样本的暗视野图像可以显出以一种与组织明显不同的色彩标记的霉菌生物。经过到明视野图像的转换处理(使用如这里所描述的标准方法)，原始图象中不同的色彩属性被变换为包含霉菌生物的组织的明视野图像。
在第二个例子中，将一个已经由一种单色染料着色的含霉菌生物的样本的暗视野图像，通过对原始暗视野图像中的不同灰度级亮度值指定不同明视野色彩，变换产生一种多色明视野图像。例如，如果该霉菌生物对异染性染料显示出比该组织所显示的更大的亲和力，这种强度上的差异可以被用来产生一套用于明亮着色样本(即霉菌生物)的明视野色彩和另一套用于暗淡着色的样本(即组织)的明视野色彩。其他特殊属性例如尺寸也可以被用来计算指定明视野色彩。
在单一样本中的编码多重着色样本可以用多重染料着色，但这些染料中只有一个或一个子集被成像。在其他时候，同一样本中的其他染料可以使用不同的过滤立方体或其它激励方法被成像。一个样本可以包含比一次成像更多的染料。
同时成像的染料可以使用过滤立方体来彼此区分，该滤波立方体限制到达检测器的发射光的波长。此外个别染料还可以使用光谱分析或其它高级分析来区分。这些用于形成组织图像的方法在Levenson R.M.和Farkas，D.L.(1997)Proc.SPIE，2983123-135；Levenson R.M.和Farkas，D.L.(1991)InM.J.Dunn(Editor)，Proc.International Meeting on Two-Dimensional Electrophoresis，Dept.of CardiothoracicSurgery，National Heart and Lung Inst.(UK)，London，UK；和Levenson，R.m.，Brinckmann，U.G.，Androphy，E.，Schiller，J.，Turek，L.，Chin，M.，Broker，T.R.，Chow，L.T.and Young，D.A.(1987)InB.M.Steinberg，J.L.Brandsma and L.B.Tainchman(Edittors)，Cancer Cells V.Papillomaviruses.Cold Spring Harbor Press，New York，pp.137-144中被描述，这里结合所有这些文章作为参考。
下面的例子用来示例说明本发明。这无论如何并不意味着限制本发明。
例子例I用于H&E的单一着色方法异染性染料吖啶橙是一种荧光染料，该染料中在对组织和其他材料着色时产生的荧光色彩取决于它所结合的组织成份的化学组成。例如，核酸在用吖啶橙着色时散发一种黄色色彩，而同时胞浆蛋白在着色时散发一种绿色色彩。因此，除了产生了不同的特定色彩以及荧光着色剂吖啶橙产生一种暗视野而非明视野之外，对组织和其他材料使用吖啶橙着色后导致的组织成份色彩差别与用H&E看到的相同。
下面是用于形成显示数据的具体算法，该显示数据是来自使用先由吖啶橙着色、并由数码相机获取的的一个荧光样本，其形态就如同明视野H&E着色。输入图像是由该相机数字化，产生黑色或仅仅具有红色和绿色值的象素。输出像素表示一幅RGB图像，该图像看起来就像一个由苏木紫和曙红染色的明视野图像。
令Sr，Sg＝红色和绿色的源象素值Dr，Dg，Db＝红色、蓝色和绿色的目标象素值Pmax＝一个象素的最大值(即，8位＝2^8＝256，10位＝2…10＝1024，等)Hr，Hg，Hb＝苏木紫明视野色彩的RGB索引Er，Eg，Eb＝曙红明视野色彩的RGB索引Dr＝Pmax-max(Sr，Sg)+(Sr/Pmax)*Hr+(Sg/Pmax)*ErDg＝Pmax-max(Sr，Sg)+(Sr/Pmax)/Hg+(Sg/Pmax)*EgDb＝Pmax-max(Sr，Sg)+(Sr/Pmax)/Hb+(Sg/Pmax)*Eb因此本发明通过将一种色彩查找表或其色彩变换手段应用于吖啶橙着色组织的图像，使得将吖啶橙着色组织的图像转换为类似于H&E着色组织的图像成为可能。
H&E着色领域的普通技术人员将意识到，由于染色液的生产或存储方面的变化将引起的在对每一成份着色后的组织的色调和饱和度方面的变化性。因此，可以使用不止一个查找表来将一个吖啶橙着色的样本的暗视野图像转换为模拟一个用H&E着色的明视野图像。附录A列出了一个程序的计算机代码(以计算机C语言的形式)，该程序产生一个具体目标着色色彩的查找表，该查找表适合于将一个吖啶橙着色的样本的暗视野图像转化为一个用H&E着色的样本的明视野图像。
例IIH&E的多重着色方法对组织中嗜碱的和嗜酸的物质区别着色的荧光着色混合物可以被吖啶橙和为将获得的暗视野图像转换为相象的标准明视野H&E图像而创建的合适的查找表或其它装置代替。另一个可替换的制剂是一种碘化丙啶(PI)(用于对核酸着色)和黄色曙红(用于对蛋白质着色)的化合物。在一个例子中，使用碘化丙啶(PI)处理一种癌组织的活组织检查，该碘化丙啶(PI)是一种与核酸以定量方式结合的黄色荧光染色剂，通常用于在肿瘤细胞核酸含量的流式细胞光度研究中对DNA的定量。该组织也由黄色曙红着色，使组织中的非核成份变绿。根据本发明，从组织样本获得的暗视野图像被变换为一种明视野图像，该图像中背景颜色显示为白色，组织中的非核部分显示为粉红色，而核显示为蓝色。此外也可以是，每一个核的荧光强度被定量地测量以近似得出核中DNA含量，该量通过一个色彩查找表或其它装置与应用到每一个核的明视野图像的色彩相关联，这样每一个核将根据其中包含的DNA总量显示不同的色彩。从而得到与DNA含量相关的“计算着色”例III用于从一个单色染料中生成一个多色图像的方法通过本发明，在第三个例子中，将一个单色着色的图像转换为一个与使用多色染色剂或多种单色染色剂着色的样本的图像相象的多色图像。一个例子是将蓝—白染色剂荧光明亮剂28应用到含有霉菌生物的组织样本。荧光明亮剂28牢固地与霉菌体相结合，使它们在暗视野图像中显得比其他结构例如被感染生物的细胞更显著。因此，在具有表示256个灰度(其中象素值为0的是黑色，象素值为255的是白色)的象素的图像中，表示霉菌体的象素具有高的象素值。
在一个例子中，霉菌体具有大于X的象素值，而每个非霉菌结构具有小于X的象素值。一个色彩查找表为将更明亮着色的霉菌体(即所有的象素均大于X)变换为第一明视野色彩如暗紫色；该组织的其余结构(即0-X之间的所有像素)被变换为第二明视野色彩如浅绿。类似的，背景(即值为0的所有像素)被显示为白色，因此产生了明视野的形态。这种呈色组合产生了一个与Grocott乌洛托品银黄着色剂非常相象的图像，该着色剂通常被用于外科病理学实验室为组织切片中的霉菌着色。
其他实施例尽管本发明已经被具体显示并参照其最佳实施例进行了描述，本领域普通技术人员很容易理解在不脱离所附权利要求中定义的发明的范围和精神的情况下可以制造多种形式和细节上的变化。本领域的普通技术人员仅仅使用常规试验将意识到或者能够确定许多可以等效于这里具体描述的发明的具体实施例。这种等效被定为包括在权利要求的范围内。附录 /*叠加颜色概念性对减法色彩空间色彩相加rgb1-＞cmy1 rgb2-＞cmy2. Cmy1+cmy2-＞cmy3. cmy3-＞rgbout rgb-＞cmy仅仅是c＝1.0-r，g＝1.0-m，b＝1.0-y，而从cmy返回到rgb当然是r＝1.0-c，g＝1.0-m，b＝1.0-y.所以对rgb1&rgb2通道作减法空间的相加。我们这样做Out＝1.0-((1.0-in1)+(1.0-in2))作这个代数我们得到out＝1.0-(2.0-in1-in2)
out＝1.0-2.0+in1+in2out＝in1+in2-1.0然后是来自规格化色度空间的0-255的色度空间和增加范围检测，我们得到out＝max(0，in1-in2-255)同样加法通道以相同方式进行，但使用和被相加色彩的数目相对应的代数式。
对于3种色彩，我们使用下式相加；out＝in1+in2+in3-2.0out＝Max(0，in1+in2+in3-510)对于4种色彩，我们使用下式相加out＝in1+in2+in3+in4-3.0out＝Max(0，in1+in2+in3+in4-765)*/ ∥这是我们概念性的做的∥返回Invertcolor(AddColors(InvertColor(c1)，InvertColor(c2)))∥这是最佳化的代数的抽取 ∥这是我们概念性的做的∥返回Invertcolor(AddColors(InvertColor(c1)，InvertColor(c2)))∥这是最佳化的代数的抽取 ∥这是我们概念性的做的∥返回Invertcolor(AddColors(InvertColor(c1)，InvertColor(c2)))∥这是最佳化的代数的抽取 ∥这是默认值∥这应该在载入一个数据集后∥被重置∥该设置应当与∥处理(光学&化学)∥以及文件中所设置的∥色彩标志相关联 /***文件apsstain.cpp结束***/ /*该模块的全局实例句柄*/ /*实例数据指针(该模块只允许有一个)*/ /*模块中的可用插头列表*/ /*当OS载入该插头时保存模块句柄*/ /*保存全局实例句柄*/ ∥将该片标记为已经由LUT转换过 ∥设置该片标志，使之反映现在是3种色彩rgb的数据∥将该清除数据复制到片中，我们将该组请求下放∥我们必须总是发送我们得到的片而不是副本∥ /*插头的主消息句柄*/ ∥要调整的新数据 ∥如果这是第一个数据库∥或者我们没有在原始状态(我们没有正常从原始状态改变出来，一个尺寸适用于所有的)∥但我们以一原始模式开始，假设须要着色 ∥如果没有其他的着色设置任务，设置为原始 /*调用默认的窗口处理程序*/ /*对话框处理程序*/ /*不关闭该对话框*/ /***文件apslut.c结束***/ ∥包括由visual C产生的资源对话首部 ∥定义 ∥结构∥2D实例数据 ∥＜--你的所有的实例数据 ∥外部的∥模块句柄 ∥范例 ∥文件apslut.h_结束 ∥初始设定 ∥从U1种调整 ∥当前颜色(由滑动块扭曲) /***文件color结束***/ ∥然后为用户保存我们的窗口尺寸∥我们不必担心重新设置尺寸 ∥标记对话为常数大小∥窗口的淡出栏的类风格确定OWNDC∥该DC是指派给每一个实例的DC∥你只要DC一空闲就占有它∥保存绘制区间所有的获取或释放的DC ∥创建该栏左结束色的笔，选择它∥并保留旧笔(以后恢复) ∥绘制栏的第一条垂直线 ∥其他线循环 ∥当我们选择我们所创建的一支笔时，∥我们取回我们创建和选择的最后一次的句柄，删除它 ∥为下一条垂直线创建一支新笔∥为下一条垂直线创建一支新笔/*下一次创建适当的调色的笔*/ ∥移到前v行的顶部 ∥绘制我们的当前v_行到底部 ∥恢复旧笔，删除最后一个∥我们所创建的笔(从选择对象Deleteobject(Selectobject(fbs-＞hdc，x，fbs/＞h)返回的 ∥让窗口知道我们实际做了重新绘制 ∥设置一些必需成员∥总是和随时随地 ∥消息句柄 ∥窗口类名 ∥我们不必担心h或v重新绘制∥为每一个实例指定一个DC并保持直到消除∥在绘制时保存所有获取和释放的DCBS ∥设置实例 /***文件fadebar.h结束***/ ∥内部/外部宏，所以cellvue和插头都包括同一.h文件 ∥消息，空范围是WM_USER(1024)至32768 ∥在载入后向所有插头发送主消息句柄 ∥告诉插头创建一个实例 ∥当打开新的数据集时，将实例送往所有的插头 ∥要求一个3d立方体 ∥新的立方体数据 ∥要求一个2d片 ∥新的片 ∥当载入失败时，从输入头送往所有插头 ∥当进/出明视场模式时，送往所有插头 ∥如果有一条公用线时，送往所有插头 ∥当蚂蚁区域变化时从2d插头送往3d插头 ∥强迫3d区域重新分开 ∥告诉2d窗口不要让用户绘制蚂蚁 ∥告诉用户重新绘制蚂蚁 ∥从3d-＞2d的消息限制蚂蚁区域 ∥当用户选择新的标记，送往标记对话处理程序 ∥只送往输入插头，从数据设置字串表查找∥相关的值w/a var(WPARAM)∥返回const char*∥键盘加速消息(见cellvue.rc) ∥定义∥固定指针匹配 ∥在顶部而非底部放置标记 ∥所需的最小色彩深度 ∥用于主窗口的最小窗口尺寸 ∥3d窗口的硬编码尺寸 ∥任一标记控制id ∥用于APSCUBE’SRGVFIags的标志 ∥在上面任意地方划上线条，立方体是一个8位单体积 ∥结构∥色彩结构(用于win32) ∥不使用 ∥片需求/返回结构 ∥用于通知3D需求和返回的一般“立方体” ∥参考数∥ ∥param(全0用于指定满数据集)∥ ∥param(全0用于指定满数据集) ∥param(满足立方体中的合成体素) ∥载入正方体数据的范围 ∥大文件(没有在正方体内)的通道 ∥刚添加的新范围 ∥原始体素 ∥阴影表面 ∥分割缓冲区 ∥8位色彩容量的色彩调色盘 ∥原型 /***文件cellvue.h结束***/
权利要求
1.一种图像产生方法，包括a)用荧光染料对样本着色；b)产生得到荧光染料着色的样本的第一图像c)使用一数字处理器将所述第一图像转换为一个模拟一个用一种非荧光染料对所述样本着色的图像的第二图像。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述第一图像是使用块表面显微镜产生的。
3.如权利要求1所述的方法，其中所述将所述第一图像转换为第二图像包括将一个查找表应用到所述第一图像。
4.如权利要求1所述的方法，其中所述样本是用至少两种荧光染料着色的。
5.如权利要求1所述的方法，其中所述样本是生物学样本。
6.一种图像产生方法，包括a)用第一和第二荧光染料对一个样本着色；b)产生由所述第一染料着色的所述样本的第一图像和由所述第二染料着色的所述样本的第二图像；c)使用一数字处理器将所述第一和第二图像转换为一个模拟一个用苏木紫和曙红对所述样本着色的图像的第三图像。
7.权利要求6的方法，其中所述第一图像和第二图像是使用块表面显微镜产生的。
8.一种图像产生方法，包括a)用一种荧光染料对一个样本着色；b)产生由所述染料着色的所述样本的第一图像和由所述染料着色的所述样本的第二图像；c)使用一数字处理器将所述第一和第二图像转换为一个模拟一个用苏木紫和曙红对所述样本着色的图像的第三图像。
9.权利要求8的方法，其中所述第一图像和第二图像是使用块表面显微镜产生的。
10.权利要求8的方法，其中所述染料包括一种异染性染料。
11.权利要求10的方法，其中所述异染性染料包括吖啶橙。
12.一种图像产生方法，包括a)用所述若干的荧光染料对一个样本着色；b)产生所述样本中的所述染料中的一种染料的第一图像；以及c)使用一数字处理器将所述第一图像转换为一个模拟一个用一种非荧光染料对所述样本着色的图像的第二图像。
13.权利要求12的方法，其中所述第一图像是使用块表面显微镜产生的。
14.一种图像产生方法，包括a)用具有重叠激励和发射光谱的所述的若干荧光染料对所述的样本着色；b)产生一个模拟用所述若干荧光染料的一个子集对所述样本着色的第一图像；c)使用一数字处理器将所述第一图像转换为一个模拟用至少一种非荧光染料对所述样本着色的图像的第二图像。
15.权利要求14的方法，其中所述第一图像是使用块表面显微镜产生的。
全文摘要
总的来说,本发明包括一种用一种荧光染料对一个样本着色的方法,一种用于产生该荧光着色样本的暗视野图像的方法,和一种用于将使用一种或多种暗视野染料着色的样本的图像变换为一个用一种或多种个明视野染料着色图像的方法,以便在计算机上检验。该过程包括应用一个数字查找表或其它计算装置以便将暗视野数据转换为明视野图像形式,以及一个显示所述变换后信息的装置。最好是,该成像装置是一个块表面显微镜,而用于变换图像的装置为一个数字计算机。
文档编号G01N1/30GK1349633SQ00807036
公开日2002年5月15日 申请日期2000年5月12日 优先权日1999年5月13日
发明者R·L·凯尔施曼, A·亨德里克森, B·P·赫雷拉 申请人:分析科学公司