专利名称：一种等电点测定用电泳槽的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及生物试验设备技术领域，更具体的讲是一种等电点测定用电泳槽。
背景技术：
等电点(pI)是两性电解质所带净电荷为零时的一种解离状态。一种两性电解质pI值的大小为该两性电解质所带净电荷为零时所在缓冲溶液的pH值。在两性电解质的分离和纯化操作中，等电点是一个重要参数。所以，创建一种合适的等电点测定方法具有重要意义。目前，通用的等电点测定方法是等电聚焦法，包括柱状凝胶等电聚焦法和薄层凝胶等电聚焦法两种，其原理是将人工合成的商品两性载体加到聚丙烯酰胺凝胶中，在电场中，两性载体形成一个pH梯度，两性电解质在等于其等电点处聚集，从而达到测定等电点或分离两性电解质的目的。等电聚焦法的不足之处在于凝胶形成时间长，一般需要较长时间的通电过程，分离的样品区带往往被两性载体所污染，最后尚需通过测量或估算才能求得近似pI值。
发明内容
为克服上述缺点，本实用新型的目的是设计一种等电点测定用电泳槽。它的技术方案为外槽壁7内设置有两列电极槽3，每列电极槽3共用一根铂金丝电极10，铂金丝电极10与接线柱8连接，每列电极槽3中的相邻电极槽由内槽外壁5、内槽间隔壁4和膜支撑壁2-1隔开，膜支撑壁2-1之间为间隔槽1，外槽壁7与内槽外壁5之间为冷却室6，自来水出口9-2和自来水进口9-1分别与冷却室6连接相通。该实用新型的优点是结构设计合理实用，构思巧妙新颖，本电泳槽的主要特点是本实用新型是由若干可盛放系列pH梯度缓冲液的电极槽对所组成，利用醋酸纤维薄膜作为样品支持物，根据两性电解质所带静电荷为零时在电场中静止不动的特点来确定其等电点。本设计可用于氨基酸、核苷酸、多肽、蛋白质和酶等多类两性电解质等电点的测定。测定等电点时不使用两性载体和不使用凝胶是本设计的另一特点。使用本设计测定等电点具有微量、简便、快速和精确等优点。
图1为去掉电泳槽盖的立体图，图2俯视图，图3为图2的具体尺寸图，图4为在图1A-A处剖视图并带有电泳槽盖，图5为图4的具体尺寸图，图6为电泳槽盖斜面坡度图，图7为绘图法求算等电点图例。附图中1、间隔槽，2-1、膜支撑壁，2-2、膜支撑壁凸起，3、电极槽，4、内槽间隔壁，5、内槽外壁，6、冷却室，7、外槽壁，8、接线柱，9-1、自来水进口，9-2、自来水出口，10、铂金丝电极。
具体实施方式
外槽壁7内设置有两列电极槽3，每列电极槽3共用一根铂金丝电极10，铂金丝电极10与接线柱8连接，每列电极槽3中的相邻电极槽由内槽外壁5、内槽间隔壁4和膜支撑壁2-1隔开，膜支撑壁2-1之间为间隔槽1，外槽壁7与内槽外壁5之间为冷却室6，自来水出口9-2和自来水进口9-1分别与冷却室6连接相通。使用该电泳槽时，分别将若干种一定离子强度的不同pH值的缓冲液按照pH大小顺次加入不同的电极槽对，将待测样品以线状或点状点样于醋酸纤维薄膜中间，点样后的醋酸纤维薄膜搭放于相对位置的膜支持壁凸起上，通过位于电极槽内的滤纸桥而形成闭合回路。若样品中某两性电解质的等电点小于相应槽室内缓冲液的pH值，则该两性电解质样品带负电荷，在电场中向正极泳动；若样品的等电点大于所处缓冲液的pH值，则带正电荷，在电场中向负极泳动；若等电点等于缓冲液的pH值，则该两性电解质样品所带静电荷为零而静止于点样处。本设计用于两性电解质等电点测定的原理是基于等电点的定义，即，根据两性电解质在电场中所带静电荷为零时静止于电场中(在此为静止于点样处)，此时，两性电解质的等电点等于其所处缓冲液的pH值。使用本设计所测定的等电点值可精确到pH0.1。首先使用本设计进行预实验，将待测样品的等电点限定于差值为1的两个pH值之间，配制差值为0.1的系列缓冲液(配制方法1)；或根据预实验已经基本确定的样品的等电点，配制差值在0.3至0.5之间的系列缓冲液5至6种，并尽量使样品等电点的预测值处于该系列缓冲液总pH梯度的中间值处(配制方法2)。通过如下所述方法进行操作。
(1)滤纸桥的制作裁剪合适尺寸的双层滤纸条，使其一端与膜支持壁凸起2-2的前沿对齐，另一端浸入电极槽3的缓冲液中，用缓冲液将滤纸全部润湿，驱除气泡，并使滤纸紧贴于膜支持壁2-1上；同法制作相对位置电极槽3的滤纸桥。根据需要来决定应制作的滤纸桥数。
(2)醋酸纤维膜的浸泡裁剪若干1-2×8cm大小的醋酸纤维膜条，在其无光泽面的两端用铅笔轻轻标注正、负极符号和用阿拉伯数字标明该膜条所代表的缓冲液pH值，在膜条中央位置轻轻地划一点样线，并使之与膜条纵长方向相垂直。注明电极槽3各个槽室所盛装缓冲液的序号，然后按序号将膜条分别浸入相应pH值的缓冲液中浸泡20分钟。
应根据需要来选择缓冲液的种类。离子强度的选择可参照一般的醋酸纤维薄膜电泳方法。缓冲液的pH值须是经由酸度计准确标定。可在若干适当大小的条形器皿内进行膜条浸泡，并先使膜条一端接触缓冲液，使缓冲液沿膜条向另一端扩展，然后轻轻荡动器皿，使漂浮在液面上的膜条浸入液面以下。
(3)点样选择浸泡均匀的醋酸纤维膜条，用滤纸吸去多余的缓冲液，用微量吸管或盖玻片将样品呈线状或点状点于膜条无光泽面的点样线处。
浸泡后的膜条上若出现深浅不一的条纹或斑点，说明质地不均匀，应弃之不用。应使用经透析除盐的样品。点样时不可用力过猛。点样量一般可控制在0.3至5μL之间，也可根据预实验来确定。点样后膜条上的样品宽度或点状样品直径以不超过4mm为宜。
(4)电泳按醋酸纤维膜上标注的序号和电极符号，使点样面朝下，将膜条搭放于相应电极槽3的滤纸桥上，驱除气泡，平衡10分钟左右，待膜条被来自滤纸桥的缓冲液均匀润湿后，加盖电泳。调节电流强度为0.4至0.5mA/厘米膜宽，通电10至30分钟。具体通电时间宜根据预实验结果来确定。
为防止电泳之前在缓冲液润湿薄膜过程中样品被缓冲液拖动而偏离点样线，也可先润湿薄膜，后点样，这样做很重要。
(5)染色关闭电源，取出醋酸纤维薄膜，将其浸入适当的染色液中，染色一定时间后，漂洗膜条，直至背景为无色。根据电泳图谱，判断待测两性电解质样品的等电点大小。
染色液不应是可溶解醋酸纤维薄膜的溶剂。染色液的种类以及染色时间，应根据样品的性质而定。对于某些可进行活性显色检测的酶类，可直接将电泳后的膜条浸入含有相应酶作用底物的反应缓冲液中进行显色。
特别需要说明的是，可利用绘图法进行样品等电点的求算(尤其适用于缓冲液配制方法2)以缓冲液pH值为横坐标，以样品迁移率为纵坐标(往正极迁移的标为正值，往负极迁移的标为负值)，将坐标上各个点连接起来，连线与横坐标的交点即为所要测定的样品的等电点。在一定的pH值范围内，迁移率与pH梯度呈正相关(见图7)。图7表明待测样品的等电点为pH4.7。
权利要求1.一种等电点测定用电泳槽，其特征是外槽壁(7)内设置有两列电极槽(3)，每列电极槽(3)共用一根铂金丝电极(10)，铂金丝电极(10)与接线柱(8)连接，每列电极槽(3)中的相邻电极槽由内槽外壁(5)、内槽间隔壁(4)和膜支撑壁(2-1)隔开，膜支撑壁(2-1)之间为间隔槽(1)，外槽壁(7)与内槽外壁(5)之间为冷却室(6)，自来水出口(9-2)和自来水进口(9-1)分别与冷却室(6)连接相通。
专利摘要一种等电点测定用电泳槽，属于生物试验设备技术领域。等电聚焦法的不足之处在于凝胶形成时间长，一般需要较长时间的通电过程，分离的样品区带往往被两性载体所污染。该实用新型的技术方案为外槽壁7内设置有两列电极槽3，每列电极槽3共用一根铂金丝电极10，铂金丝电极10与接线柱8连接，每列电极槽3中的相邻电极槽由内槽外壁5、内槽间隔壁4和膜支撑壁2－l隔开，膜支撑壁2－l之间为间隔槽1，外槽壁7与内槽外壁5之间为冷却室6，自来水出口9－2和自来水进口9－1分别与冷却室6连接相通。它的优点是本设计可用于氨基酸、核苷酸、多肽、蛋白质和酶等多类两性电解质等电点的测定。
文档编号G01N27/447GK2784927SQ20042000954
公开日2006年5月31日 申请日期2004年10月11日 优先权日2004年10月11日
发明者孙迅 申请人:菏泽学院