用于多元结合分析的寡核苷酸对的制作方法

专利名称：用于多元结合分析的寡核苷酸对的制作方法
与相关申请的交叉引用本申请与2004年4月18日提交的题目为“用于多元结合分析的寡核苷酸对”的美国专利申请No.10/419,020相关，其内容在此以其全文引为参考。
背景技术：
下面的描述提供了与本发明相关的信息的概要，但并不表明任何提供的信息或引用的文献是本发明的现有技术。
寡核苷酸杂交可广泛地用于多种分析和诊断分析方法中，例如分析物的分类、检测和鉴定。重要的是使非互补性的寡核苷酸在这样的分析中彼此不发生交叉杂交。寡核苷酸的交叉杂交部分是由于不同核苷酸之间碱基堆积能量的可变性和寡核苷酸中核苷酸序列的变化。另一组影响寡核苷酸交叉杂交的参数是杂交反应的条件。不幸的是，在基于寡核苷酸的分析、特别是在使用多个寡核苷酸对的分析中，这样的非特异性交叉杂交是常见的问题，是假阳性或假阴性信号的主要原因。
其它对使用多个寡核苷酸的分析系统的设计和执行带来问题的因素是需要基本上所有配对的寡核苷酸都具有基本上相同的熔点温度Tm，所有配对的寡核苷酸以基本上相同的速率并在同样的时间框架内杂交，以及需要寡核苷酸在室温下相对快速地杂交在一起而不发生显著的交叉杂交。
所需要的是用于检测多种分析物的基于寡核苷酸的分析系统，其中使用了一组寡核苷酸对，在不同的对之间没有明显的交叉杂交，从而不产生假阳性或阴性信号。还需要这样的基于寡核苷酸的分析系统，其中所有配对的寡核苷酸以基本上相同的速率杂交、具有基本上相同的Tm，而且其中互补的寡核苷酸对能够在室温相对快速地杂交在一起而不发生显著的交叉杂交。不幸的是，到目前为止这样的分析系统还没有获得。
发明简述本发明满足了这些需要。本发明是用于分类、检测和鉴定分析物的分析系统、试剂盒和方法。分析系统包括一对或多对互补的寡核苷酸，其中一对中的每个寡核苷酸与该对中的另一个寡核苷酸至少部分互补，并且寡核苷酸的系列经过设计以最小化不同对之间的交叉杂交。在优选情况下，不同的寡核苷酸对以基本上相同的速率杂交、具有基本上相同的Tm、在室温下相对快速地杂交到一起而没有可检测到的交叉杂交。每个寡核苷酸对含有第一寡核苷酸和第二寡核苷酸。分析物结合试剂被连接到寡核苷酸对的第一寡核苷酸上。寡核苷酸对的第二寡核苷酸被固定到固相支持物上。在优选实施方案中，寡核苷酸选自具有SEQ ID NOS1-188中的12个或以上连续核苷酸的序列组成。本发明还包括了产生用于分析系统、试剂盒和方法的互补寡核苷酸对的核酸序列的方法。
附图简述本发明的这些特点、特色和优点在参考了下面的描述、权利要求书和附图后将变得更好理解，其中

图1图示了具有本发明特征的夹心分析流程图。
序列表本发明随附了一张软盘，含有本文引用的核酸序列；软盘上的信息在此引为参考。
发明描述下面的讨论描述了本发明的实施方案和这些实施方案的几种变化。然而，这些讨论不应该被当作将本发明限制为这些特定的实施方案。本领域的专业技术人员也将会认识到大量的其它实施方案。在本文描述的被称为优选的或特别优选的所有实施方案中，这些实施方案并不是必需的，尽管它们可能是优选的。
定义术语“核酸”和“多聚核苷酸”在本文中可以互换使用，包括了自然发生的或合成的双链脱氧核糖核酸(在本文中后面称为“DNA”)、单链DNA或核糖核酸(在本文中后面称为“RNA”)。
本文使用的术语“寡核苷酸”是包含了天然的或修饰的单体、修饰的骨架或修饰的连接键的线性的寡聚物的核酸，包括脱氧核糖核苷、核糖核苷、它们的端基异构体(anomeric form)、肽核酸(PNAs)等，它们能够通过常规形式的单体-单体相互作用、例如Watson-Crick类型的碱基配对等方式，与寡核苷酸或多聚核苷酸进行特异性结合。单体通常是通过磷酸二酯键或其类似物连接，从而形成大小范围从几个单体单位例如3-4个到几十个单体单位的寡核苷酸。磷酸二酯键的类似物包括硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷酸苯胺酯(phosphoranilidate)、氨基磷酸酯等。替代的化学物质，例如硫代磷酸酯、氨基磷酸酯以及那些同样产生非天然骨架的基团，只要产生的寡核苷酸的杂交效能不受到负面影响，也可以被使用。寡核苷酸可以通过多种方法合成，例如Ozaki等，Nucleic Acids Research，205205-5214(1992)；Agrawal等，Nucleic Acids Research，185419-5423(1990)等。
术语“互补的”或“互补性”是指多聚核苷酸通过碱基配对的自然结合。例如序列5′-AGT-3′与互补序列3′-TCA-5′结合。两个单链分子之间的互补性可以是“部分的”，以至于只有一些核酸结合并形成双链体，或者互补性也可以是“完全的”以至于在单链分子之间存在完全的互补性。核酸链之间的互补性程度对于核酸链之间杂交的效率和强度具有重要的影响。
核酸“双链体”是通过DNA或RNA的互补链的碱基配对形成的，它们形成了反向平行的复合物，其中一条链的3′-末端定向结合到相对链的5′末端。这种碱基配对也包含了“核苷类似物”的配对，例如脱氧肌苷、具有2-氨基嘌呤碱基的核苷等也可以使用。在本文中使用的“核苷”包括天然的核苷、包括2′-脱氧和2′-羟基形式的核苷，例如在Kornberg和Baker，DNA Replication，2nd Ed.(Freeman，San Francisco，1992)中描述的那些。“类似物”在指核苷时包括具有修饰的碱基基团和/或修饰的糖基团的合成核苷，它们能够进行特异的杂交，例如Scheit，Nucleotide Analogs(John Wiley，New York，1980)；Uhlman和Peyman，Chemical Reviews，90543-584(1990)等中描述的那些。这些类似物包括被设计用来增强结合性质、减少简并度、增加特异性等的合成核苷。术语“杂交化”或“杂交”其目的包括了在一定条件下混合至少两种核酸分子，使得当存在至少两种互补的核酸序列时，它们将通过碱基配对形成双链结构。
本发明涉及用于分析物的分析系统。该分析系统包括一对或多对互补的寡核苷酸。每对互补的寡核苷酸含有第一寡核苷酸和第二寡核苷酸。分析物结合试剂被连接到寡核苷酸对的第一寡核苷酸上。在优选实施方案中，每对的第一寡核苷酸上连接了不同的分析物结合试剂，每个不同的分析物结合试剂对一个或多个样品中的不同分析物具有特异性。寡核苷酸对的第二寡核苷酸被固定到固相支持物上。
本发明的寡核苷酸被选择为具有能够使寡核苷酸与不同的寡核苷酸对的交叉杂交最小化的序列。每对互补的寡核苷酸一般含有相同总数量的核苷酸，或核苷酸的总数差别少于2到5个寡核苷酸，更典型的是差别为3个寡核苷酸或以下。每个寡核苷酸的鸟嘌呤和胞嘧啶含量，合称为“GC含量”，一般在大约35％和大约65％之间，每个寡核苷酸更典型的GC含量在大约50％和大约60％之间。优选情况下，每对互补的寡核苷酸在预先选定的杂交条件下具有基本上相同的Tm(熔点温度)。本发明的寡核苷酸包括SEQ ID NO1-SEQ ID NO188，以及它们的变异体或一部分，其中SEQ ID NO1与SEQ ID NO2互补，SEQ ID NO3与SEQ ID NO4互补，SEQ ID NO5与SEQ ID NO6互补，以此类推。SEQ ID NOS1-188表示的寡核苷酸显示在表1中。
含有上述序列的一部分的寡核苷酸一般从由下列序列组成的组中选择具有SEQ ID NOS1-188中12个或更多连续的核苷酸的序列；具有SEQ ID NOS1-188中14个或更多连续的核苷酸的序列；具有SEQID NOS1-188中16个或更多连续的核苷酸的序列；具有SEQ IDNOS1-188中18个或更多连续的核苷酸的序列；具有SEQ ID NOS1-188中20个或更多连续的核苷酸的序列；具有SEQ ID NOS1-188中22个或更多连续的核苷酸的序列；具有SEQ ID NOS1-188中24个或更多连续的核苷酸的序列；具有SEQ ID NOS1-188中26个或更多连续的核苷酸的序列；具有SEQ ID NOS1-188中28个或更多连续的核苷酸的序列；以及与SEQ ID NOS1-188一致的序列。连续的核苷酸是指那些在多聚核苷酸链中一般通过磷酸二酯键直接连接在一起的核苷酸。此外，寡核苷酸还可以从由下列序列组成的组中选择在SEQ IDNOS1-188的序列的任何核苷酸上具有1个核苷酸差异的序列；在SEQID NOS1-188的序列的任何2个或更少的核苷酸上具有2个或更少的核苷酸差异的寡核苷酸；在SEQ ID NOS1-188的序列的任何3个或更少的核苷酸上具有3个或更少的核苷酸差异的寡核苷酸；在SEQ IDNOS1-188的序列的任何4个或更少的核苷酸上具有4个或更少的核苷酸差异的寡核苷酸以及在SEQ ID NOS1-188的序列的任何5个或更少的核苷酸上具有5个或更少的核苷酸差异的寡核苷酸。可以选择的分析系统使用SEQ ID NO1-188中的一个或更多寡核苷酸对或本文描述的其变异体；SEQ ID NO1-188中的10个寡核苷酸对或本文描述的其变异体；SEQ ID NO1-188中的10个或更多寡核苷酸对或本文描述的其变异体；SEQ ID NO1-188中的14个或更多寡核苷酸对或本文描述的其变异体；以及SEQ ID NO1-188中的所有寡核苷酸对或本文描述的其变异体。
在特定的实施方案中本发明是用于含有10和14对互补寡核苷酸的分析物的分析系统。每对互补的寡核苷酸含有第一寡核苷酸和第二寡核苷酸，其中第一寡核苷酸上连接有分析物结合试剂，第二寡核苷酸被固定到固相支持物上。寡核苷酸从一组序列中选择，这些序列具有由下列序列组成的组中的12个或更多的连续的核苷酸SEQ IDNO11、SEQ ID NO57、SEQ ID NO59、SEQ ID NO.65、SEQ ID NO67、SEQ ID NO69、SEQ ID NO75、SEQ ID NO77、SEQ ID NO93、SEQID NO95、SEQ ID NO117、SEQ ID NO123、SEQ ID NO129、SEQ IDNO163、以及SEQ ID NO187和它们相应的互补寡核苷酸，表示为SEQID NO12、SEQ ID NO58、SEQ ID NO60、SEQ ID NO.66、SEQ IDNO68、SEQ ID NO70、SEQ ID NO76、SEQ ID NO78、SEQ ID NO94、SEQ ID NO96、SEQ ID NO118、SEQ ID NO124、SEQ ID NO130、SEQ ID NO164和SEQ ID NO188。
在某些实施方案中，寡核苷酸还含有一个或多个接头分子或接头核酸序列，它们共价结合到具有SEQ ID NOS1-188序列或其一部分的寡核苷酸上。接头分子或接头核酸序列一般位于寡核苷酸的5’-端或3’-端，因此扩展到超出了与寡核苷酸对中的另一个寡核苷酸进行碱基配对的寡核苷酸的区域之外。当存在接头分子或接头核酸序列时，一般将一对寡核苷酸中的第一寡核苷酸连接和结合到一个分析物结合试剂上，或将一对寡核苷酸中的第二寡核苷酸连接到固相支持物上。将寡核苷酸结合到不同固相支持物上的技术在本领域内是众所周知的，例如在Matson，R.等，Biopolymer Synthesis on Polypropylene SupportsOligonucleotide Arrays；Analytical Biochemistry 224，110-116(1995)；Milton，R.，美国专利No.6,146,833；Hermanson等，“ImmobilizedAffinity Ligand Techniques，”64-67页(1992 Academic Press Inc.)中所描述的那些，其内容以其全文引为参考。将寡核苷酸连接到蛋白和抗体上的方法在本领域内也是众所周知的，例如在Reddy等的美国专利No.5,648,213中所描述的那样。
在优选情况下，杂交反应的条件被预先选择以便在分析系统的寡核苷酸混合物中每个寡核苷酸只与其互补配对的寡核苷酸杂交。在本文中提到的只与其互补配对寡核苷酸杂交意味着交叉杂交不超过0.1％，在优选情况下交叉杂交不超过0.01％。进一步优选在温和反应条件下来自不同对的寡核苷酸的交叉杂交不超过0.1％，优选交叉杂交不超过0.01％。例如，这样的温和条件将包括在含有50-150mM NaCl的Tris盐缓冲液的反应混合物中于室温保温1小时。在这些条件下，本发明的寡核苷酸对杂交到一起，其交叉杂交不超过0.1％，在优选情况下交叉杂交不超过0.01％。室温一般被理解为包括一个大范围的自然发生的或通过气温控制达到的室内温度，一般在大约华氏50度到大约华氏100度的范围内，更典型的是从大约华氏65度到大约华氏85度，最典型的是在大约华氏68度到大约华氏80度之间。
通过选择核苷酸序列使得不同对的寡核苷酸具有非常低程度的互补性，可以使寡核苷酸对之间的交叉杂交得到部分最小化。此外，在优选情况下当将一个寡核苷酸的排列相对于另一个进行移动，包括引入间隙或形成环结构，其中含有至少一些不与配对的寡核苷酸进行碱基配对的核苷酸时，不同对的寡核苷酸具有非常低的互补性。
在分析系统中交叉杂交的测试使用一组SEQ ID NOS1-188中的第二寡核苷酸，以及连接了分析物结合试剂的单一的第一寡核苷酸。分析的进行使用相对高浓度的单一分析物(浓度接近该分析系统的最大可测量量)，交叉杂交被检测作为来自分析中任何其它的第二寡核苷酸位置的信号。通过估计对应于交叉杂交信号的分析物的量(通过平行地分析的分析物的校正曲线确定)对交叉杂交进行定量，它被表达为样品中分析物量的百分数。例如，分析一个含有10,000pg/ml单一分析物的样品，在不同的寡核苷酸位置给出了相应于1pg/ml该分析物的假阳性信号(由于第一寡核苷酸与非互补的第二寡核苷酸的交叉杂交)，将表示交叉杂交为0.01％(1pg/ml除以10,000pg/ml乘以100％)。
此外还提供了包含第二寡核苷酸和结合了分析物结合试剂的互补的第一寡核苷酸的阵列，例如在预先选择的杂交条件下通过第一和第二寡核苷酸的杂交分析物结合分子“自我装配”形成的阵列。术语“自我装配”意味着杂交将特定的寡核苷酸标记的结合分子定位于阵列中特定的位置，从溶液中形成或装配结合分子的阵列。
本发明还包括了产生适合使用于分析系统的的互补寡核苷酸对的核酸序列的方法。该方法包括下列步骤a)选择一个或多个具有预先选择的长度和GC含量的第一序列，例如显示于美国专利No.5,648,213中的序列，在优选情况下GC含量至少为35％；b)产生具有大约相同的长度、优选为基本上相同的长度和大约相同GC含量、优选为基本上相同GC含量的随机序列的文库，作为一个或多个第一序列；c)从随机序列文库中选择第二序列；d)舍弃部分第二寡核苷酸序列，其中对被舍弃的第二寡核苷酸的选择是通过将第二序列与第一序列进行比较，如果i)在两个序列的任何比对中在任何8个碱基的窗口中有超过5个匹配或ii)第二序列含有超过4个连续的相同的碱基，则这样的第二序列被否定和舍弃；e)将那些没有被舍弃的第二序列加入到第一序列中；以及任选f)还可以重复步骤c)、d)和e)以形成序列的集合。方法还可以包含使用计算机算法的步骤，例如来自PremierBiosoft International，3786 Corina Way，Palo Alto，CA 94303-4504的NetPrimer 2.0，来分析每个保留的序列的潜在可能的二级结构或自身互补性，其中具有明显的预测的二级结构或自身互补结构的序列被否定。保留的序列一般在相对温和的反应条件下测试其交叉杂交，例如在室温下在生理盐条件下，使用能够分辨互补的和非互补的配对的杂交并检测0.1％或更低的交叉杂交的灵敏的结合分析方法。在保留的组中，显示出与任何其它序列具有超过0.1％的交叉杂交的序列被否定。当两个序列的长度差别为5个或更少的核苷酸，被认为是具有大约相同的长度。当两个序列的长度差别是1个或0个核苷酸时，被认为是具有基本上相同的长度。当两个序列GC含量的差别不超过30％时被认为是具有大约相同的GC含量，而当差别不超过10％时被认为是具有基本上相同的GC含量。
分析物结合试剂一般含有能够与所需的分析物特异性结合的蛋白或多肽。在优选情况下，分析物结合试剂是分析物的单克隆或多克隆抗体，或其抗原结合片段(例如Fab′、F(ab′)2)。抗体或其抗原结合片段还可以被理解为包括了嵌合的、人源化的、重组的和其它这样形式的抗体。分析物结合试剂包含了与靶分析物特异性结合的各种免疫反应试剂(例如使用重组DNA技术产生的那些)的类似物和变异体。在本发明的范围内也考虑到了与抗体和抗原的结合具有可比性的特异性结合对的形成，它们是通过使用其它的特异性的基于蛋白、基于肽、基于核酸、基于糖或基于脂的结合系统形成的，例如受体蛋白或其片段与分析物配体、多聚核苷酸和多聚核苷酸结合对、多聚核苷酸核蛋白结合对、脂和蛋白结合对、酶和酶结合对、酶和底物结合对、酶和抑制剂结合对、酶和代谢物结合对、糖和蛋白结合对、糖和外源凝集素结合对、蛋白和药物结合对等。其它在本发明的范围内被考虑到的是与所需的分析物特异性结合的基于化学的分子受体系统。
在图1的实施方案中，分析系统使用了夹心分析方法。结合到第一寡核苷酸上的分析物结合试剂是特异性针对分析物的捕获抗体。对于每对寡核苷酸而言，第一寡核苷酸与直接结合在固相支持物上的第二寡核苷酸杂交。通过与第二寡核苷酸的杂交，每对中的第一寡核苷酸被固定到固相支持物上。捕获抗体特异性针对特定的分析物，该分析物通过与捕获抗体的结合连接到固相支持物上。捕获抗体一般对不同的分析物具有特异性，捕获抗体在固相支持物上的空间位置由固相底物上每对中的第二寡核苷酸的位置所确定。分析物通过在其上结合有检测基团的第二抗体、术语称为检测抗体来检测。在图1所示的实施方案中，检测基团是荧光标记PBXL-1(可以从Martek，6480 DobbinRoad，Columbia，Maryland 21045购买到)。可以用做检测基团的荧光团和荧光染料在本领域内是众所周知的。其它适用的检测基团包括例如基于酶法的检测的底物、放射性标记物等。其它检测被结合的分析物的方法也被设想包括在本发明的范围内，例如竞争性分析方法和引物延伸分析方法。
在某些实施方案中，固相支持物包含了二维的平面，其中每个不同的寡核苷酸被结合到基本上是平的表面的不同的预定区域。固相支持物一般包括微阵列底物，包括但不限于平的显微镜载玻片；由硝酸纤维素、尼龙和PVDF制成的有伸缩性的膜；以及由玻璃、聚苯乙烯、聚丙烯和聚碳酸酯制成的微孔板。
在可选择的实施方案中，固相支持物是珠子、颗粒、微粒等，术语珠子、颗粒和微粒在本文中可以互换使用。珠子的直径一般在从大约0.04到大约50微米的范围内。在本发明的一个实施方案中，珠子的大小在从大约0.1到大约20微米的范围内。珠子一般悬浮在液体中，以便它们的密度在大约0.5到大约2克/毫升之间的范围内。珠子悬浮液的大小和密度使得珠子能够在大多数液体转移器具中被当作简单的液体，例如移液管、泵和某些阀。被用来制备珠子的材料和方法在本领域内是众所周知的。
一般来说，通过分析系统检测的分析物选自多肽或蛋白、糖、配体、核酸、脂类，包括但不限于抗体及其结合片段、激素、外源凝集素、受体、类固醇、细胞表面抗原、细胞因子、病毒抗原、细菌抗原、cDNA和滥用药物。在优选实施方案中，分析系统以试剂盒的形式提供，用于检测一种或多种特定的分析物。
表1SEQ ID NO 15′-ATACTGACTGGCGATGCTGTCGAAGTAGCG-3′
SEQ ID NO 25′-CGCTACTTCGACAGCATCGCCAGTCAGTAT-3′SEQ ID NO 35′-AGTTAAATAGCTTGCAAAATACGTGGCCTT-3′SEQ ID NO 45′-AAGGCCACGTATTTTGCAAGCTATTTAACT-3′SEQ ID NO 55′-GAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACC-3′SEQ ID NO 65′-GGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTC-3′SEQ ID NO 75′-GCTTACCGAATACGGCTTGGAGAACCTATC-3′SEQ ID NO 85′-GATAGGTTCTCCAAGCCGTATTCGGTAAGC-3′SEQ ID NO 95′-GCGTGGTCCGCGATCTTCCTACGATTGATG-3′SEQ ID NO 105′-CATCAATCGTAGGAAGATCGCGGACCACGC-3′SEQ ID NO 115′-TTTGAGGTTTCGGAGCGTTCCGTGCATCGC-3′SEQ ID NO 125′-GCGATGCACGGAACGCTCCGAAACCTCAAA-3′SEQ ID NO 135′-AATCCTGTTGTGAGCCGACCAAGTGCCTCC-3′SEQ ID NO 145′-GGAGGCACTTGGTCGGCTCACAACAGGATT-3′SEQ ID NO 155′-GTATCTGACGCGTATGCCCAGGTTAGTGGC-3′SEQ ID NO 165′-GCCACTAACCTGGGCATACGCGTCAGATAC-3′SEQ ID NO 175′-CGGAGTCGTCCTCTGTAGGGATTTGCCCTT-3′SEQ ID NO 185′-AAGGGCAAATCCCTACAGAGGACGACTCCG-3′SEQ ID NO 195′-CAGGCTGTGGAGTGCTATTGTCATATGGGC-3′SEQ ID NO 205′-GCCCATATGACAATAGCACTCCACAGCCTG-3′SEQ ID NO 215′-TCTTCTCTCTGGTCTAAGGCATCGAGCGGA-3′SEQ ID NO 225′-TCCGCTCGATGCCTTAGACCAGAGAGAAGA-3′SEQ ID NO 235′-TGGCGTACTAGTGCTTAGGCGTACTGAAGC-3′SEQ ID NO 245′-GCTTCAGTACGCCTAAGCACTAGTACGCCA-3′SEQ ID NO 255′-TGCTGGCTTTACTGCGACGGTGACTCTCCT-3′SEQ ID NO 265′-AGGAGAGTCACCGTCGCAGTAAAGCCAGCA-3′SEQ ID NO 275′-CTATCAAAGCTGGTTCCAGGCGCTCCTGGA-3′SEQ ID NO 285′-TCCAGGAGCGCCTGGAACCAGCTTTGATAG-3′SEQ ID NO 295′-TGAGGCAAGTACATTAGTTCTCAGCCGGCG-3′SEQ ID NO 305′-CGCCGGCTGAGAACTAATGTACTTGCCTCA-3′SEQ ID NO 315′-GCTTGGGTTAGATTGTGTTTGCCGAGCCAA-3′
SEQ ID NO 325′-TTGGCTCGGCAAACACAATCTAACCCAAGC-3′SEQ ID NO 335′-CGTCCATTCCTATCGGGAGGTAACAGACTT-3′SEQ ID NO 345′-AAGTCTGTTACCTCCCGATAGGAATGGACG-3′SEQ ID NO 355′-CTAAGGAGTCCGAAGATGTACAATGGGTCG-3′SEQ ID NO 365′-CGACCCATTGTACATCTTCGGACTCCTTAG-3′SEQ ID NO 375′-AACTAGCCGCCTCCTGTCCCATGAATTCTA-3′SEQ ID NO 385′-TAGAATTCATGGGACAGGAGGCGGCTAGTT-3′SEQ ID NO 395′-AGCTTCTTGTAACGTTGAGTTGCAGGTCCG-3′SEQ ID NO 405′-CGGACCTGCAACTCAACGTTACAAGAAGCT-3′SEQ ID NO 4l5′-CACTGGATAATTGCGCCTTCCGTGCATGAA-3′SEQ ID NO 425′-TTCATGCACGGAAGGCGCAATTATCCAGTG-3′SEQ ID NO 435′-CCCGCGCAGAGCGTAGTTGTAATTTAGATC-3′SEQ ID NO 445′-GATCTAAATTACAACTACGCTCTGCGCGGG-3′SEQ ID NO 455′-CCTGGAAATAAGCAGCAGCACCAACTCTCA-3′SEQ ID NO 465′-TGAGAGTTGGTGCTGCTGCTTATTTCCAGG-3′SEQ ID NO 475′-GGCTCATGGTTCTTTGCTCAACCATAAGCC-3′SEQ ID NO 485′-GGCTTATGGTTGAGCAAAGAACCATGAGCC-3′SEQ ID NO 495′-CTTGCTCCTCACATGATGCGGAAACGCTAA-3′SEQ ID NO 505′-TTAGCGTTTCCGCATCATGTGAGGAGCAAG-3′SEQ ID NO 515′-ATCCTTCTGCACTTTCGCGTAGACATAGCC-3′SEQ ID NO 525′-GGCTATGTCTACGCGAAAGTGCAGAAGGAT-3′SEQ ID NO 535′-ATCGAACCCAAACTGAGGTTAAGAGCCGCT-3′SEQ ID NO 545′-AGCGGCTCTTAACCTCAGTTTGGGTTCGAT-3′SEQ ID NO 555′-AAGGACTGGACGTTGCATTCACAGTGGGTT-3′SEQ ID NO 565′-AACCCACTGTGAATGCAACGTCCAGTCCTT-3′SEQ ID NO 575′-CTCATGAAGGCCGTCGGGAAATTCCAAGTT-3′SEQ ID NO 585′-AACTTGGAATTTCCCGACGGCCTTCATGAG-3′SEQ ID NO 595′-TGGATTCCGTTATCACCATTTGGACCCTGC-3′SEQ ID NO 605′-GCAGGGTCCAAATGGTGATAACGGAATCCA-3′SEQ ID NO 615′-TAAGGGCTCTATCTACCACCTCCGACTTTC-3′
SEQ ID NO 625′-GAAAGTCGGAGGTGGTAGATAGAGCCCTTA-3′SEQ ID NO 635′-TACGCTCCCAGTGTGATCACCAAAGCTTAC-3′SEQ ID NO 645′-GTAAGCTTTGGTGATCACACTGGGAGCGTA-3′SEQ ID NO 655′-AGACTGAACTACCGGCGGTTGCACTACTAA-3′SEQ ID NO 665′-TTAGTAGTGCAACCGCCGGTAGTTCAGTCT-3′SEQ ID NO 675′-GCCAAACACGCCCAATCACTGTTACATGTC-3′SEQ ID NO 685′-GACATGTAACAGTGATTGGGCGTGTTTGGC-3′SEQ ID NO 695′-GCTTGACGTCTACCACCGTGAACATAAGGA-3′SEQ ID NO 705′-TCCTTATGTTCACGGTGGTAGACGTCAAGC-3′SEQ ID NO 715′-AAGAACCGTAATAGGCCCGGTTGGGAATTC-3′SEQ ID NO 725′-GAATTCCCAACCGGGCCTATTACGGTTCTT-3′SEQ ID NO 735′-CGGACTAACAAGACTCTTATAGCGTCTCGC-3′SEQ ID NO 745′-GCGAGACGCTATAAGAGTCTTGTTAGTCCG-3′SEQ ID NO 755′-TCGCCAACGTAGCTGTGCTACAGTTGATTC-3′SEQ ID NO 765′-GAATCAACTGTAGCACAGCTACGTTGGCGA-3′SEQ ID NO 775′-GCAGCGGCTAAACCTTGAGATCGAATGGAA-3′SEQ ID NO 785′-TTCCATTCGATCTCAAGGTTTAGCCGCTGC-3′SEQ ID NO 795′-GCAACCGTCAACGGTCTTAATGACACATCG-3′SEQ ID NO 805′-CGATGTGTCATTAAGACCGTTGACGGTTGC-3′SEQ ID NO 815′-GGGTAGAAACGGACGTTACCCATGATCTTG-3′SEQ ID NO 825′-CAAGATCATGGGTAACGTCCGTTTCTACCC-3′SEQ ID NO 835′-GGCGGCAACACCTACCTTCTAGATTGAAAC-3′SEQ ID NO 845′-GTTTCAATCTAGAAGGTAGGTGTTGCCGCC-3′SEQ ID NO 855′-CGCTAATAGTGGACCCTCTCATAGCTATGG-3′SEQ ID NO 865′-CCATAGCTATGAGAGGGTCCACTATTAGCG-3′SEQ ID NO 875′-CTGATGGAATCTACCACTGCTAAACGCAGC-3′SEQ ID NO 885′-GCTGCGTTTAGCAGTGGTAGATTCCATCAG-3′SEQ ID NO 895′-GCCTAGTCGGATGCTCGGATATCATACTAC-3′SEQ ID NO 905′-GTAGTATGATATCCGAGCATCCGACTAGGC-3′SEQ ID NO 915′-CTTTGAACGACATCTTAGTCTCGAACGCCG-3′
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SEQ ID NO 1665′-GCTTATGAGTATTCTAGAAGGCGCGCACAC-3′SEQ ID NO 1675′-CCAGCACAAACGCTGATCGTTGAAACGGAT-3′SEQ ID NO 1685′-ATCCGTTTCAACGATCAGCGTTTGTGCTGG-3′SEQ ID NO 1695′-AAGTGTGAGGTCGTTCACTTTCACACTGCC-3′SEQ ID NO 1705′-GGCAGTGTGAAAGTGAACGACCTCACACTT-3′SEQ ID NO 1715′-TAAATCAACGGCATTGGCGTCCGTTATCGC-3′SEQ ID NO 1725′-GCGATAACGGACGCCAATGCCGTTGATTTA-3′SEQ ID NO 1735′-TGCGCCCACACGTTACGATCTGTATAAAGC-3′SEQ ID NO 1745′-GCTTTATACAGATCGTAACGTGTGGGCGCA-3′SEQ ID NO 1755′-ATAATGCGTTTCCGGCCACCGCGTTATTAC-3′SEQ ID NO 1765′-GTAATAACGCGGTGGCCGGAAACGCATTAT-3′SEQ ID NO 1775′-TCAACGCGCGGTTTCTTGAGTAATTCAGCC-3′SEQ ID NO 1785′-GGCTGAATTACTCAAGAAACCGCGCGTTGA-3′SEQ ID NO 1795′-GCACCGGAGGTTTACATCATGCAGAAGTGT-3′SEQ ID NO 1805′-ACACTTCTGCATGATGTAAACCTCCGGTGC-3′SEQ ID NO 1815′-TGTCTCACTAGAGCTTCACCCATGCATGTG-3′SEQ ID NO 1825′-CACATGCATGGGTGAAGCTCTAGTGAGACA-3′SEQ ID NO 1835′-GCCAAACATAGTTGGAATCCTCGGGAGGAA-3′SEQ ID NO 1845′-TTCCTCCCGAGGATTCCAACTATGTTTGGC-3′SEQ ID NO 1855′-GCACTATAAACTTCCTAGCCTTCTCGTCGC-3′SEQ ID NO 1865′-GCGACGAGAAGGCTAGGAAGTTTATAGTGC-3′SEQ ID NO 1875′-GGTTTGCAAGAAGCAGAAGCCATTCCGACA-3′
SEQ ID NO 1885′-TGTCGGAATGGCTTCTGCTTCTTGCAAACC-3′在对本发明进行了描述之后，很显然可以采取大量的修改和改编而不偏离本发明在此前提出的和此后的权利要求中描述的范围和准确含义。
尽管对本发明已经进行了相当详细的描述，并引用了其某些优选的方案，但仍可能有其它的方案。因此，附加的权利要求的精神和范围不应该被局限于本文描述的优选方案的描述。
在本说明书、包括权利要求、摘要和图表中公开的所有特点，以及在公开的任何方法或过程中的所有步骤，都可以被整合成任何的组合方式，除了那些至少某些这样的特点和/或步骤是互不相容的组合之外。在本说明书、包括权利要求、摘要和图表中公开的每种特点，除非特别陈述，都可以被其它服务于同样的、相当的或相似的目的的可替换的特点所代替。因此，除非特别陈述，每种被公开的特点都仅仅是通用等同或相似特点的一个例子。
在权利要求中任何没有明确地陈述用于执行特定的功能的“方法”或用于执行特定功能的“步骤”的要素，不应该被解释为35U.S.C.§112中定义的“方法”或“步骤”条款。
序列表<110>贝克曼考尔特公司(BECKMAN COULTER，INC.)<120>用于多元结合分析的寡核苷酸对(OLIGONUCLEOTIDE PAIRS FOR MULTIPLEXED BINDING ASSAYS)<130>SCT054331-47<140>
<141>
<150>US 10/149,020<151>2003-04-18<160>188<170>PatentIn Ver.2.1<210>1<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
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<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>55aaggactgga cgttgcattc acagtgggtt 30<210>56<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>56aacccactgt gaatgcaacg tccagtcctt 30<210>57<211>30<212>DNA
<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>57ctcatgaagg ccgtcgggaa attccaagtt 30<210>58<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>58aacttggaat ttcccgacgg ccttcatgag 30<210>59<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>59tggattccgt tatcaccatt tggaccctgc 30<210>60<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide
<400>60gcagggtcca aatggtgata acggaatcca 30<210>61<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>61taagggctct atctaccacc tccgactttc 30<210>62<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>62gaaagtcgga ggtggtagat agagccctta 30<210>63<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>63tacgctccca gtgtgatcac caaagcttac 30
<210>64<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>64gtaagctttg gtgatcacac tgggagcgta 30<210>65<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>65agactgaact accggcggtt gcactactaa 30<210>66<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>66ttagtagtgc aaccgccggt agttcagtct 30<210>67<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence
<220>
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<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>68gacatgtaac agtgattggg cgtgtttggc 30<210>69<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequenee<220>
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tccttatgtt cacggtggta gacgtcaagc 30<210>71<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>71aagaaccgta ataggcccgg ttgggaattc 30<210>72<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>72gaattcccaa ccgggcctat tacggttctt 30<210>73<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>73cggactaaca agactcttat agcgtctcgc 30<210>74<211>30
<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>74gcgagacgct ataagagtct tgttagtccg 30<210>75<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>75tcgccaacgt agctgtgcta cagttgattc 30<210>76<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>76gaatcaactg tagcacagct acgttggcga 30<210>77<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSynthetic
oligonucleotide<400>77gcagcggcta aaccttgaga tcgaatggaa 30<210>78<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
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<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>79gcaaccgtca acggtcttaa tgacacatcg 30<210>80<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
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<210>81<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
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<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>83ggcggcaaca cctaccttct agattgaaac 30<210>84<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence
<220>
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<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>86ccatagctat gagagggtcc actattagcg 30<210>87<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide
<400>87ctgatggaat ctaccactgc taaacgcagc 30<210>88<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
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<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
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<210>98<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
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<213>Artificial Sequence<220>
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<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide
<400>104caaagtccca tcgttataac acacgaggcg 30<210>105<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
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<210>108<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
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<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>110aagcgttttg cgcagtgacc tagaaacgag 30<210>111<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence
<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>111tgctcttctc gtgcccgtta aaggatcgat 30<210>112<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>112atcgatcctt taacgggcac gagaagagca 30<210>113<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
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gtatacgaag tgctttgtat acctgccggg 30<210>115<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>115gtagaagcct gtggttaaaa ctatggcccg 30<210>116<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>116cgggccatag ttttaaccac aggcttctac 30<210>117<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>117catcggtcga acccgtgtca acaagattct 30<210>118<211>30
<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
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<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>119tggaggagac ttgtcaggat ttgctctgag 30<210>120<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>120ctcagagcaa atcctgacaa gtctcctcca 30<210>121<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSynthetic
oligonucleotide<400>121agcccaagga atagtcaata cttcctcagc 30<210>122<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
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<210>125<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
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<220>
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<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>130gcataaccag gtcagagcaa tacccaaagg 30<210>131<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide
<400>131aggcaggtcc ctagtcacaa cttaatctgc 30<210>132<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>132gcagattaag ttgtgactag ggacctgcct 30<210>133<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>133ccgacagtac tttactcatt gtggcgcagt 30<210>134<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
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<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
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<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>138agcttagata cccgtttctc gtgtacgtgc 30<210>139<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>139tccagctgca gacaaagacc tatgcgttac 30<210>140<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>140gtaacgcata ggtctttgtc tgcagctgga 30<210>141<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>141atccgactca tctaggtgca cctctatgtg 30
<210>142<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>142cacatagagg tgcacctaga tgagtcggat 30<210>143<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>143ctggacgact ttctagatgc cctgagttac 30<210>144<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>144gtaactcagg gcatctagaa agtcgtccag 30<210>145<211>30<212>DNA
<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>145ctaagacaca tcctattatc ctgcccgagc 30<210>146<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>146gctcgggcag gataatagga tgtgtcttag 30<210>147<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>147agaattgcgc acaagaagtc tctgcggcaa 30<210>148<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide
<400>148ttgccgcaga gacttcttgt gcgcaattct 30<210>149<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>149ccgagcacta taggagttat aatcgagggg 30<210>150<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>150cccctcgatt ataactccta tagtgctcgg 30<210>151<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>151ctagttaccc acacttagtc acttgcagcg 30
<210>152<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>152cgctgcaagt gactaagtgt gggtaactag 30<210>153<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>153gcaaatcagt aaagatggac aggcctaccc 30<210>154<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>154gggtaggcct gtccatcttt actgatttgc 30<210>155<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence
<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>155atggtcgcat gatttagtac ggatggcgtg 30<210>156<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>156cacgccatcc gtactaaatc atgcgaccat 30<210>157<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>157aacattcttc tcgggttaca aaccgcgcga 30<210>158<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>158
tcgcgcggtt tgtaacccga gaagaatgtt 30<210>159<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>159ggcaagactc gttctgggct gcttattaga 30<210>160<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>160tctaataagc agcccagaac gagtcttgcc 30<210>161<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>161ccatatcacg tgatgccgga attgtcacgt 30<210>162<211>30
<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>162acgtgacaat tccggcatca cgtgatatgg 30<210>163<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>163tgcgatatac tccatgcctc tcttggcgga 30<210>164<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSyntheticoligonucleotide<400>164tccgccaaga gaggcatgga gtatatcgca 30<210>165<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
<223>Description of Artificial SequenceSynthetic
oligonucleotide<400>165gtgtgcgcgc cttctagaat actcataagc 30<210>166<211>30<212>DNA<213>Artificial Sequence<220>
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权利要求
1.一种分析物的分析系统，包括a)固相支持物；以及b)10对或更多对寡核苷酸，对中的每个寡核苷酸与对中的另一个寡核苷酸至少部分互补，每对都含有第一寡核苷酸和第二寡核苷酸，第一寡核苷酸在其上连接有分析物结合试剂，第二寡核苷酸被固定在固相支持物上，其中第一和第二寡核苷酸含有选自SEQ ID NOS1-188的寡核苷酸组的12个或更多的连续核苷酸。
2.权利要求1的分析系统，其中第一和第二寡核苷酸含有选自SEQ ID NOS1-188的寡核苷酸组的20个或更多的连续核苷酸。
3.权利要求1的分析系统，其中第一和第二寡核苷酸含有选自SEQ ID NOS1-188的寡核苷酸组的24个或更多的连续核苷酸。
4.权利要求1的分析系统，其中第一和第二寡核苷酸含有选自SEQ ID NOS1-188的寡核苷酸组的28个或更多的连续核苷酸。
5.权利要求1的分析系统，其中的10对或更多对寡核苷酸选自SEQ ID NOS1-188的序列。
6.权利要求1的分析系统，其中有12对或更多对寡核苷酸含有选自SEQ ID NOS1-188的寡核苷酸组的12个或更多的连续核苷酸。
7.权利要求1的分析系统，其中有14对或更多对寡核苷酸含有选自SEQ ID NOS1-188的寡核苷酸组的12个或更多的连续核苷酸。
8.权利要求1的分析系统，其中有15对寡核苷酸含有选自SEQ IDNOS1-188的寡核苷酸组的12个或更多的连续核苷酸。
9.权利要求1的分析系统，其中的寡核苷酸选自下列序列SEQ IDNO11、SEQ ID NO57、SEQ ID NO59、SEQ ID NO.65、SEQ ID NO67、SEQ ID NO69、SEQ ID NO75、SEQ ID NO77、SEQ ID NO93、SEQID NO95、SEQ ID NO117、SEQ ID NO123、SEQ ID NO129、SEQ IDNO163、SEQ ID NO187和它们的互补序列。
10.权利要求1的分析系统，其中每对的第一寡核苷酸上连接有不同的分析物结合试剂，每种不同的分析物结合试剂对一个或多个样品中的不同的分析物具有特异性。
11.权利要求1的分析系统，其中来自一个或多个寡核苷酸对的一个或两个寡核苷酸在其上还连接有接头分子或接头核酸序列。
12.权利要求11的分析系统，其中的接头核酸序列被共价结合到一个或多个寡核苷酸对的一个寡核苷酸上，接头核酸被共价结合到固相支持物上，接头核酸将寡核苷酸连接到固相支持物上。
13.权利要求1的分析系统，其中的寡核苷酸对在室温一起杂交，交叉杂交不超过0.1％。
14.权利要求1的分析系统，其中第一寡核苷酸的分析物结合试剂选自抗体及其抗原结合片段。
15.权利要求1的分析系统，其中每个不同的寡核苷酸被结合到固相支持物表面上不同的预定区域。
16.权利要求1的分析系统，其中的固相支持物是珠子。
17.权利要求1的分析系统，其中分析物选自多肽或蛋白、糖类、配体、核酸、脂类、类固醇、代谢物、滥用药物、病毒抗原和细菌抗原。
18.权利要求14的分析系统，其中的分析物是选自抗体及其结合片段、激素、外源凝集素、受体、类固醇、细胞表面抗原、细胞因子、生长因子、cDNA、mRNA、疾病标记物和癌基因标记物的蛋白或多肽。
19.权利要求1的分析系统，以试剂盒的形式提供，用于一种或多种特定分析物的检测。
20.一种分析物的分析系统，含有一对或多对互补的寡核苷酸，每对互补的寡核苷酸含有第一寡核苷酸和第二寡核苷酸，第一寡核苷酸在其上连接有分析物，第二寡核苷酸被固定在固相支持物上，寡核苷酸选自具有下列序列中的12个或更多个连续核苷酸的序列SEQ IDNO11、SEQ ID NO57、SEQ ID NO59、SEQ ID NO.65、SEQ ID NO67、SEQ ID NO69、SEQ ID NO75、SEQ ID NO77、SEQ ID NO93、SEQID NO95、SEQ ID NO117、SEQ ID NO123、SEQ ID NO129、SEQ IDNO163、SEQ ID NO187以及它们的互补序列。
21.一种分析物的分析系统，含有至少10对互补的寡核苷酸，每对互补的寡核苷酸含有第一寡核苷酸和第二寡核苷酸，第一寡核苷酸在其上连接有分析物，第二寡核苷酸被固定在固相支持物上，寡核苷酸选自具有下列序列中的12个或更多个连续核苷酸的序列SEQ IDNO11、SEQ ID NO57、SEQ ID NO59、SEQ ID NO.65、SEQ ID NO67、SEQ ID NO69、SEQ ID NO75、SEQ ID NO77、SEQ ID NO93、SEQID NO95、SEQ ID NO117、SEQ ID NO123、SEQ ID NO129、SEQ IDNO163、SEQ ID NO187以及它们的互补序列。
22.一组寡核苷酸，具有选自具有SEQ ID NOS1-188中的12个或更多个连续核苷酸的序列的核酸序列。
23.一组一个或多个互补的寡核苷酸对，其核酸序列组成为选自具有SEQ ID NOS1-188中的12个或更多个连续核苷酸的序列中的一个或多个寡核苷酸。
24.一种检测样品中的分析物的方法，该方法包括下列步骤a)选择一个或多个互补的寡核苷酸对，每对含有第一寡核苷酸和第二寡核苷酸，第一寡核苷酸在其上连接有分析物结合试剂，第二寡核苷酸被固定在固相支持物上，寡核苷酸对的第一寡核苷酸或第二寡核苷酸的核酸序列选自具有下列序列中的12个或更多个连续核苷酸的序列SEQ ID NO1、SEQ ID NO3、SEQ ID NO5、SEQ ID NO7、SEQ ID NO9、SEQ ID NO11、SEQ ID NO13、SEQ ID NO15、SEQ IDNO17、SEQ ID NO19、SEQ ID NO21、SEQ ID NO23、SEQ ID NO25、SEQ ID NO27、SEQ ID NO29、SEQ ID NO31、SEQ ID NO35、SEQID NO37、SEQ ID NO39、SEQ ID NO41、SEQ ID NO43、SEQ IDNO45、SEQ ID NO47、SEQ ID NO49、SEQ ID NO51、SEQ ID NO53、SEQ ID NO55、SEQ ID NO57、SEQ ID NO63、SEQ ID NO73、SEQID NO75、SEQ ID NO81、SEQ ID NO83、SEQ ID NO85、SEQ IDNO87、SEQ ID NO89、SEQ ID NO91、SEQ ID NO93、SEQ ID NO95、SEQ ID NO97、SEQ ID NO99、SEQ ID NO101、SEQ ID NO103、SEQID NO105、SEQ ID NO107、SEQ ID NO109、SEQ ID NO111、SEQ IDNO113、SEQ ID NO115、SEQ ID NO117、SEQ ID NO119、SEQ IDNO121、SEQ ID NO123、SEQ ID NO125、SEQ ID NO127、SEQ IDNO129、SEQ ID NO131、SEQ ID NO133、SEQ ID NO135、SEQ IDNO136、SEQ ID NO137、SEQ ID NO138、SEQ ID NO139、SEQ IDNO140、SEQ ID NO141、SEQ ID NO142、SEQ ID NO143、SEQ IDNO144、SEQ ID NO145、SEQ ID NO146、SEQ ID NO147、SEQ IDNO148、SEQ ID NO149、SEQ ID NO150、SEQ ID NO151、SEQ IDNO152、SEQ ID NO153、SEQ ID NO154、SEQ ID NO155、SEQ IDNO156、SEQ ID NO157、SEQ ID NO158、SEQ ID NO159、SEQ IDNO160、SEQ ID NO161、SEQ ID NO162、SEQ ID NO163、SEQ IDNO164、SEQ ID NO165、SEQ ID NO166、SEQ ID NO167、SEQ IDNO168、SEQ ID NO169、SEQ ID NO170、SEQ ID NO171、SEQ IDNO172、SEQ ID NO173、SEQ ID NO174、SEQ ID NO175、SEQ IDNO176、SEQ ID NO177、SEQ ID NO178、SEQ ID NO179、SEQ IDNO180、SEQ ID NO181、SEQ ID NO182、SEQ ID NO183、SEQ IDNO185、SEQ ID NO187以及与上述的一个或多个中的每个互补的寡核苷酸；b)提供含有一种或多种分析物的样品；c)将一种或多种分析物与第一寡核苷酸在分析物结合试剂能够结合它们相应的分析物的条件下混合，并将一个或多个寡核苷酸对在便于互补的寡核苷酸进行选择性杂交以形成带有被结合的分析物的杂交的寡核苷酸的条件下混合；以及d)检测一种或多种被结合的分析物。
25.一种产生核酸序列集合的方法，包括下列步骤a)选择具有选定的长度和GC含量的第一核苷酸序列；b)产生具有与第一核苷酸序列大约相同的长度和大约相同的GC含量的核苷酸序列文库；c)从文库中选择第二序列以加入到集合中；d)确定选择的第二寡核苷酸是否含有4个以上相同的连续碱基，如果有，将该选择的第二序列舍弃；e)在步骤(d)之前或之后，确定选择的第二寡核苷酸序列在与第一核苷酸序列比对时任何8个碱基的窗口中是否具有5个以上的配对，如果有，将该选择的第二序列舍弃；以及f)如果在步骤(d)和(e)中没有被舍弃，将该第二序列加入到集合中。
26.权利要求25的方法，含有至少另外一轮重复的步骤(c)、(d)、(e)和(f)。
27.权利要求25的方法，还包括测试集合中的序列的交叉杂交，并从集合中舍弃任何与集合中其它的序列发生超过0.1％的交叉杂交的序列的额外步骤。
28.权利要求25的方法，其中的产生步骤包括产生长度的差别不超过5个核苷酸的核苷酸序列的文库。
29.权利要求25的方法，其中的产生步骤包括产生具有基本上相同长度的核苷酸序列的文库。
30.权利要求29的方法，其中的产生步骤包括产生长度的差别不超过1个核苷酸的核苷酸序列的文库。
31.权利要求25的方法，其中的产生步骤包括产生GC含量的差别不超过30％的核苷酸序列的文库。
32.权利要求25的方法，其中的产生步骤包括产生具有基本上相同的GC含量的核苷酸序列的文库。
33.权利要求32的方法，其中的产生步骤包括产生GC含量的差别不超过10％的核苷酸序列的文库。
34.一种分析物的分析系统，包括a)固相支持物；以及b)10对或更多对寡核苷酸，对中的每个寡核苷酸与对中的另一个寡核苷酸至少部分互补，每对都含有第一寡核苷酸和第二寡核苷酸，第一寡核苷酸在其上连接有分析物结合试剂，第二寡核苷酸被固定在固相支持物上，其中第一和第二寡核苷酸含有选自权利要求26的方法产生的集合的寡核苷酸组中的12个或更多个连续寡核苷酸。
35.通过权利要求26的方法产生的至少20个寡核苷酸的集合。
全文摘要
本发明是一种用于分析物的分类、检测和鉴定的基于寡核苷酸的分析系统和试剂盒。系统使用了互补的寡核苷酸对，其中每对寡核苷酸中的一个寡核苷酸被固定到固相支持物上，另一个寡核苷酸在其上结合了分析物结合试剂。不同的寡核苷酸对以基本上相同的速率杂交，具有基本上相同的Tm，具有设计成使不同寡核苷酸对之间的交叉杂交最小化的核苷酸序列，并且在室温下相对快速地杂交到一起而没有可检测的交叉杂交。
文档编号G01N33/543GK1777684SQ200480010458
公开日2006年5月24日 申请日期2004年4月16日 优先权日2003年4月18日
发明者丹尼尔·A·基斯, 帕拉梅斯瓦兰·梅达·雷迪, 雅基·S·博德纳尔, 菲尔杜斯·法欧奎 申请人:贝克曼考尔特公司