专利名称：多功能高效液相色谱柱后衍生分析仪的制作方法
技术领域：
本实用新型提供一种多功能高效液相色谱柱后衍生分析仪，属于分析化学仪器设备技术领域。
背景技术：
高效液相色谱柱后衍生技术是高效液相色谱(High PerformanceLiquid Chromatography，HPLC)分离技术的发展。高效液相色谱鉴别技术所采用的检测器一般是紫外检测器，但是有很多的物质在紫外光谱波段没有吸收，或者紫外光的吸收能量很低，限制了紫外检测器的应用。
柱后衍生技术是将高效液相色谱柱分离出的物质，再通过一种特殊的装置进行化学反应使之衍生为具有可见/紫外光(UV/Vis)吸收效应的物质或者生成荧光基团，实现可见/紫外光(UV/Vis)检测器或者荧光检测器鉴别。
现有一种柱后衍生技术是将高效液相色谱柱分离出的物质与恒流泵输入的溶液汇合，并经加热反应后，再经荧光检测器鉴别。虽然，这种装置可以实现某些化合物的鉴别例如氨基酸，但是荧光检测器具有很大的局限性，许多化合物并不能实现鉴别，而且检测灵敏度很低。
紫外检测器(VWD)是HPLC系统中最常用的检测器，在所有的微量物质直接的色谱鉴别中，紫外检测器(VWD)检测灵敏度最高；但是紫外检测器(VWD)不能承受酸或者碱性溶液的侵蚀，不能承受温度变化，不能承受脉冲溶液的干扰。
发明内容
本实用新型提供一种多功能高效液相色谱柱后衍生分析仪，其的目的将高效液相色谱柱分离的物质经过酸或者碱衍生溶液衍生反应以后，实现紫外(VWD)检测器鉴别，而且也适用于DAD数字检测器、可见-紫外光(UV-Vis)检测器或者荧光检测器。
本实用新型的技术解决方案如下由HPLC泵、压力传感器、过滤器、进样器、色谱柱、精密恒温箱、压力传感器、单向阀、二相切换阀按顺序通过管路连接构成进样装置，由柱塞泵、压力传感器、过滤器、单向阀按顺序通过管路连接构成衍生液注入装置，通过三通与进样装置连接，混合器和衍生反应箱、单向阀、二相切换阀按顺序通过管路连接构成衍生液反应装置；由柱塞泵、压力传感器、过滤器、单向阀、截止阀按顺序通过管路连接构成中和液装置，与三通、衍生液反应装置连接，混合器、恒温槽、单向阀、三通、过滤器按顺序通过管路连接构成恒温装置，最后接检测器输入端，检测器的输出端连接到废液池。其中，HPLC泵与流动相池连接；柱塞泵与衍生液池连接；柱塞泵与中和液池连接；柱塞泵与中和液池连接；二相切换阀的另端接废液池，二相切换阀接三通，截止阀连接在废液池与单向阀之间。
所述的检测器可以是紫外检测器(VWD)或DAD数字检测器、可见-紫外光(UV-Vis)检测器或者荧光检测器。
上述的衍生反应箱的中部为加热器，其上均匀缠绕有耐腐蚀材料制成的反应管，也可以在耐腐蚀的反应池外设有加热装置，加热器通过数字温度传感器与恒温调节装置连接；恒温槽由半导体恒温器、反应管或反应池连接构成恒温装置。
混合器由直径φ0.1mm～φ1mm不等直径的陶瓷球填充的柱状体装置。
所述的压力传感器、单向阀、二相切换阀、截止阀作为系统保护部件连接在本系统中。
压力传感器陶瓷电容压力变送器进样器HPLC系统专用进样器色谱柱HPLC系统专用分析柱过滤器孔径φ0.4μm聚四氟乙烯材料滤膜单向阀耐腐蚀材料制成二相切换法耐腐蚀材料制成截止阀耐腐蚀材料制成三通耐腐蚀材料制成并且无死点HPLC泵HPLC系统专用输液泵柱塞泵耐腐蚀材料制成双柱塞杆泵流动相池、废液池、衍生液池、中和液池为通用玻璃瓶精密恒温箱采用数字温度传感器、PID调节的精密恒温装置检测器紫外检测器(VWD)、DAD数字检测器、可见-紫外光(UV-Vis)检测器或者荧光检测器本实用新型的工作过程如下待分析样品依据HPLC分析条件经进样器注入；依据HPLC分析条件，HPLC泵1输入流动相经压力传感器2、过滤器4由进样器3、过滤器4注入色谱柱5；样品经色谱柱5分离后经压力传感器7单向阀8、二相切换阀9在三通14和衍生反应液汇合，经混合器20进入衍生反应箱21进行化学反应，衍生反应液经单向阀22、二相切换阀23与中和反应液在三通24汇合经混合器25、恒温槽26、单向阀27、三通28、过滤器29进入检测器30再进入废液池；使用UV-Vis检测器30或荧光检测器检测，关闭截止阀19，样品经色谱柱5分离经单向阀8、二相切换阀9和衍生反应液汇合于三通14、经混合器20、衍生反应箱21、单向阀22、三通24、混合器25、恒温槽26、单向阀27、三通28、过滤器29进入检测器30后进入废液池；关闭截止阀19，样品经色谱柱5分离后经单向阀8、二相切换阀9、三通14、混合器20、衍生反应箱21、单向阀22、二相切换阀23、三通24、过滤器29进入检测器30再进入废液池是经典的HPLC分析系统；衍生液经柱塞泵10、压力传感器11、过滤器12、单向阀13在三通14与色谱柱分离物会合；
中和液经柱塞泵15、压力传感器16、过滤器17、单向阀18、截止阀19在三通24与柱后衍生液分汇合；检测工作结束后，清洗液经HPLC输液泵注入色谱柱5经单向阀8、二相切换阀9，洗液进入废液池；检测工作结束后，衍生液池盛装清洗液，经柱塞泵10注入过滤器12、单向阀13、三通14、混合器20、衍生反应箱21、单向阀22、二相切换阀23、三通24并经过滤器29、检测器30，洗液进入废液池；检测工作结束后，关闭截止阀31，中和液池盛装清洗液经柱塞泵15注入，清洗过滤器17、单向阀18、截止阀19、三通24、混合器25、恒温槽26、单相阀27、三通28、过滤器29、检测器30，洗液进入废液池；关闭截止阀19，中和液池盛装清洗液经柱塞泵15注入，清洗过滤器17、单向阀18、截止阀31，洗液进入废液池；本实用新型的优点在于高效液相色谱柱分离的物质经过酸或者碱衍生液反应后能够得到中和处理，使其衍生液的pH值达到pH4～pH8范围内，更适于紫外检测器(VWD)鉴别。
本实用新型的优点还在于高效液相色谱柱分离的物质与酸或者碱性衍生液汇合后能够获得混匀处理，使其色谱柱分离的物质能够完全参与化学反应；并且这种混合器还起到了缓冲作用，减少了柱塞泵输入的酸或者碱性衍生溶液的流动脉冲，减少了柱塞泵输入的中和溶液的流动脉冲，衍生反应液进入紫外检测器更平稳。
本实用新型的优点还在于衍生反应液能够进行温度控制处理，使其衍生化学反应彻底，而且衍生液以其合适的温度进入检测器，避免了温度过高或者过低对检测器检测池的影响，消除了温度变化对检测灵敏度的干扰。
本实用新型的优点还在于衍生化学反应系统采取的诸多的单向阀、截止阀控制措施，避免人为或者其他因素造成酸或者碱性衍生溶液反冲对色谱柱的破坏和衍生反应的干扰。
本实用新型的优点还在于采用了非接触性的压力传感器，自动对系统中HPLC输液泵、衍生液柱塞输液泵、中和液柱塞输液泵压力控制，保证衍生反应平和、流速稳定。
本实用新型的优点还在于系统中采用了耐腐蚀的在线过滤器，避免大颗粒杂质堵塞系统和检测器。
本实用新型的优点还在于当检测工作结束后可以便捷的实现色谱柱、管路和检测器等各自独立的清洗。
本实用新型的优点还在于检测液和清洗液都能够实现集中回收，不构成环境污染。
图1为本实用新型结构原理图。
具体实施方式
根据图1所示，由HPLC泵1、压力传感器2、过滤器4、进样器3、色谱柱5、精密恒温箱6及压力传感器7、单向阀8、二相切换阀9按顺序通过管路连接构成进样装置，由柱塞泵10、压力传感器11、过滤器12、单向阀13按顺序通过管路连接构成衍生液注入装置，通过三通14与进样装置连接，混合器20和衍生反应箱21、单向阀22、二相切换阀23按顺序通过管路连接构成衍生液反应装置；由柱塞泵15、压力传感器16、过滤器17、单向阀18、截止阀19按顺序通过管路连接构成中和液装置，与三通24、衍生液反应装置连接，混合器25、恒温槽26、单向阀27、三通28、过滤器29按顺序通过管路连接构成恒温装置，最后接检测器30输入端，检测器30的输出端连接到废液池；其中，HPLC泵1与流动相池连接；柱塞泵10与衍生液池连接；柱塞泵15与中和液池连接；二相切换阀9的另端接废液池，二相切换阀23接三通28；截止阀31连接在废液池与单向阀18之间；以下实施例对本实用新型进一步说明(1)前列地尔的质量鉴别精密称取前列地尔10mg，用乙腈-磷酸盐缓冲液(pH6.3)(3∶2)的流动相溶液配制含前列地尔20μg/ml溶液，取20μl注入进样器，HPLC输液泵输入流动相溶液，流速1ml/min，前列地尔样品经色谱柱分离；配制1M氢氧化钾溶液，氢氧化钾溶液经柱塞泵1注入，流速1.5ml/min，调节衍生反应箱温度并恒温控制在45℃；配制0.2N盐酸溶液，将稀盐酸溶液经柱塞泵2注入，流速0.5ml/min，调节恒温槽温度并恒温控制在25℃；设定紫外检测器(VWD)检测波长278nm，记录色谱曲线。
(2)前列腺素A1的质量鉴别
精密称取前列腺素A15mg，用乙腈-磷酸盐缓冲液(pH6.3)(3∶2)的流动相溶液配制含前列腺素A12μg/ml溶液，取50μl注入进样器，HPLC输液泵输入流动相溶液，流速1ml/min，前列腺素A1样品经色谱柱分离；配制1M氢氧化钾溶液，将氢氧化钾溶液经柱塞泵1注入，流速0.85ml/min，调节衍生反应箱温度并恒温控制在60℃；配制0.2N盐酸溶液，将稀盐酸溶液经柱塞泵2注入，流速0.5ml/min，调节恒温槽温度并恒温控制在25℃；设定紫外检测器(VWD)检测波长278nm，记录色谱曲线。
(3)脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯单钾盐残余内酯的测定精密称取穿心莲内酯琥珀酸半酯单钾盐10mg，用甲醇-水(3∶2)的流动相溶液配制含穿心莲内酯琥珀酸半酯单钾盐200μg/ml溶液，取50μl注入进样器，HPLC输液泵输入流动相溶液，流速1ml/min，穿心莲内酯琥珀酸半酯单钾盐样品经色谱柱分离；配制1M碳酸氢钠溶液，将碳酸氢钠溶液经柱塞泵1注入，流速1ml/min，调节衍生反应箱温度并恒温控制在65℃；配制0.2N盐酸溶液，将稀盐酸溶液经柱塞泵2注入，流速1ml/min，调节恒温槽温度并恒温控制在25℃；设定紫外检测器(VWD)检测波长254nm，记录色谱曲线。
(4)氨基酸鉴别色谱柱硅胶填充柱流动相甲醇-水(3∶2)衍生反应试剂1M氢氧化钠溶液或者邻苯二甲醛(OPA)溶液检测器荧光检测器，激发波长λex330nm，发射波长λem465nm
氨基酸样品由进样器注入，HPLC输液泵输入流动相，流速1ml/min，色谱柱恒温控制在40℃；衍生反应液经柱塞泵1注入，流速0.5ml/min，调节衍生反应箱温度并恒温控制在100℃；关闭截止阀1，衍生液经二相切换阀2进入恒温槽，调节恒温槽温度并恒温控制在25℃；设定荧光检测器激发波长λex330nm；发射波长λem465nm，记录色谱曲线。
权利要求1.一种多功能高效液相色谱柱后衍生分析仪，其特征在于由HPLC泵(1)、压力传感器(2)、过滤器(4)、进样器(3)、色谱柱(5)、精密恒温箱(6)及压力传感器(7)、单向阀(8)、二相切换阀(9)按顺序通过管路连接构成进样装置，由柱塞泵(10)、压力传感器(11)、过滤器(12)、单向阀(13)按顺序通过管路连接构成衍生液注入装置，通过三通(14)与进样装置连接，混合器(20)和衍生反应箱(21)、单向阀(22)、二相切换阀(23)按顺序通过管路连接构成衍生液反应装置；由柱塞泵(15)、压力传感器(16)、过滤器(17)、单向阀(18)、截止阀(19)按顺序通过管路连接构成中和液装置，与三通(24)、衍生液反应装置连接，混合器(25)、恒温槽(26)、单向阀(27)、三通(28)、过滤器(29)按顺序通过管路连接构成恒温装置，最后接检测器(30)输入端，检测器(30)的输出端连接到废液池；其中，HPLC泵(1)与流动相池连接；柱塞泵(10)与衍生液池连接；柱塞泵(15)与中和液池连接；二相切换阀(9)的另端接废液池，二相切换阀(23)接三通(28)；截止阀(31)连接在废液池与单向阀(18)之间；所述的检测器(30)选自紫外检测器或DAD数字检测器、可见-紫外光检测器或者荧光检测器。
2.根据权利要求1所述的分析仪，其特征在于衍生反应箱的中部为加热器，其上均匀缠绕有耐腐蚀材料制成的反应管，或在耐腐蚀的反应池外设有加热装置，加热器通过数字温度传感器与恒温调节装置连接。
专利摘要本实用新型提供为多功能高效液相色谱柱后衍生分析仪，由HPLC泵、进样器、色谱柱、精密恒温箱构成进样装置，柱塞泵1、过滤器2、单向阀2构成衍生液注入装置，通过三通1与进样装置连接，混合器1和衍生反应箱、单向阀3、二相切换阀2构成衍生液反应装置；柱塞泵2、过滤器3、单向阀5、截止阀1构成中和液装置，与三通2、衍生液反应装置连接，混合器2、恒温槽、单向阀4、三通3、过滤器4构成恒温装置，最后接检测器输入端，检测器的输出端连接到废液池。将高效液相色谱柱分离的物质经过酸或者碱衍生溶液衍生反应以后，实现紫外(VWD)检测器鉴别，而且也适用于DAD数字检测器、可见－紫外光(UV－Vis)检测器或者荧光检测器。
文档编号G01N30/62GK2852130SQ20052002845
公开日2006年12月27日 申请日期2005年4月1日 优先权日2005年4月1日
发明者侯琬实, 腾利明, 侯文阁 申请人:侯文阁